实时荧光定量PCR技术在食源性细菌检测中的应用效果评价

【目的】探讨应用实时荧光定量PCR技术在食源性细菌检测中应用效果。【方法】分别应用细菌培养法,PCR检测法,实时荧光定量PCR方法对987例群体食源性食物中毒腹泻患者和疑似患者的粪便或呕吐物2084份样品进行食源性病原体检测。【结果】检测2084个感染性腹泻标本,细菌培养法阳性检出率45.2%,普通PCR检测法阳性检出率63.4%;采用实时荧光PCR技术阳性检出率90.1%。实时荧光定量PCR检测法阳性检出率显著高于细菌培养检测法和普通PCR检测法,相比较均有显著性差异（P〈0.05）。【结论】实时定量荧光定量PCR技术准确、快速、简便、特异性强,在食源性细菌检测中,能为突发食源性食物中毒事件提供更早的控制措施并争取时间。     

基因微阵列分型与实时荧光定量PCR检测人乳头瘤病毒

目的评价基因微阵列分型方法与实时荧光定量PCR技术检测人乳头瘤病毒及其对宫颈癌患者诊断的意义。方法基因微阵列检测人乳头瘤病毒21种亚型;实时荧光定量PCR技术定量检测人乳头瘤病毒6/11型和16/18型。结果基因微阵列检测人乳头瘤病毒较实时荧光定量PCR技术阳性检出率更高(P<0.05),而在特异性上无显著差异(P>0.05)。两种方法联合检测可以提高检测特异性和敏感度。结论基因微阵列分型方法可用于宫颈癌筛查,而实时荧光定量PCR技术对宫颈癌患者疗效判断和预后更有意义。     

实时荧光定量PCR技术研究及其在医学领域的应用

实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,FQ-PCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR过程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。本文综述了FQ-PCR技术的原理特点及其在医学领域中的应用和研究进展。     

实时荧光定量PCR技术研究进展及应用

实时荧光定量PCR(rea-l time fluorescent quantitative polymerase chain react ion,FQ-PCR)是是20世纪90年代中期发展起来的一种新型核酸定量技术。,它具有特异性强、PCR污染少、自动化程度高等特点。作者就实时荧光定量PCR技术的研究进展及目前肿瘤诊断、细胞因子分析及病毒感染的监测等方面进行了概述。     

实时荧光定量PCR的研究进展及其应用

随着PCR(聚合酶链反应)技术的飞速发展,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)技术以其特异性强、灵敏度高、自动化和重复性好、定量准确、污染少等优点,成为分子生物学和其它领域的重要技术工具,并广泛应用于遗传病、病原体和肿瘤等方面的检测和诊断.本文就实时荧光定量PCR技术的主要原理、定量方法及目前在研究领域中主要的应用进行了概述.     

荧光定量PCR在医学诊断中的应用

实时荧光定量PCR(Real time fluorescent quantitative PCR)是在PCR技术基础上发展起来的一种高度灵敏的核酸定量技术。该技术通过荧光信号的积累来实时监测整个PCR进程,使PCR扩增和终产物检测全部处在封闭的条件下进行,从而具有实时监测、无污染、快速、灵敏、精确、特异等特点,极大地克服了原有PCR技术的不足。目前该技术已经广泛应用于肿瘤学、遗传学、免疫学、微生物学、寄生虫学和基因治疗等领域。     

荧光定量PCR在医学诊断中的应用

实时荧光定量PCR(Real time fluorescent quantitative PCR)是在PCR技术基础上发展起来的一种高度灵敏的核酸定量技术。该技术通过荧光信号的积累来实时监测整个PCR进程,使PCR扩增和终产物检测全部处在封闭的条件下进行,从而具有实时监测、无污染、快速、灵敏、精确、特异等特点,极大地克服了原有PCR技术的不足。目前该技术已经广泛应用于肿瘤学、遗传学、免疫学、微生物学、寄生虫学和基因治疗等领域。     

实时荧光定量PCR法检测转基因小鼠拷贝数

目的利用实时荧光定量PCR法鉴定转基因小鼠外源基因插入拷贝数。方法以TG-CARK转基因首见鼠为研究对象,选取小鼠的高度保守基因Fabpi为内参,利用绝对定量的实时荧光PCR法鉴定转基因小鼠拷贝数,并与传统的Southern blot方法的定量结果进行比较。结果实时定量PCR鉴定的转基因拷贝数与Southernblot法完全一致,三只TG-CARK首见小鼠的拷贝数分别为1,7,45。结论实时定量PCR技术具有高准确性、高稳定性、高通量和低成本的优点,是比传统杂交技术更好的鉴定小鼠转基因拷贝数的方法。     

荧光定量PCR检测手足口病患者血浆循环DNA及其临床意义

目的：利用实时荧光定量PCR技术检测手足口病患者血浆循环DNA水平。方法分别收集健康人和手足口病患者的血浆样本,用实时荧光定量PCR方法检测样本中的血浆循环DNA。结果手足口病患者的血浆循环DNA的CT值为（23.58±1.18）,显著低于健康对照组的（35.66±1.32）（P<0.001）。结论实时荧光定量PCR技术检测血浆循环DNA可以作为诊断手足口病的一种方法。     

Satb2基因实时荧光定量聚合酶链反应标准品的制备及应用研究

目的:制备用于Satb2基因实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)的标准品。方法:提取胚胎上颌突组织总RNA,行逆转录反应获得第一链的cDNA,再通过PCR回收获得预期Satb2基因片段;通过T-A克隆将该片段插入pGMT质粒载体;大量提取质粒,定量后进行标准曲线的制作和实时荧光定量PCR。结果:重组质粒经PCR扩增及序列测定表明,pGMT/Satb2基因已成功克隆。结论:所构建的pGMT/Satb2基因实时荧光定量PCR检测标准品应用Taqman荧光探针技术建立的标准曲线线性关系好,灵敏度和特异性高,准确可靠,此法可作为实时荧光定量PCR检测Satb2基因的标准方法。     

实时荧光定皇PCR的研究进展及其应用

随着PCR（聚合酶链反应）技术的飞速发展，实时荧光定量PCR（real—time quantitative PCR）技术以其特异性强、灵敏度高、自动化和重复性好、定量准确、污染少等优点，成为分子生物学和其它领域的重要技术工具，并广泛应用于遗传病、病原体和肿瘤等方面的检测和诊断。本文就实时荧光定量PCR技术的主要原理、定量方法及目前在研究领域中主要的应用进行了概述。     

肺炎衣原体实时定量PCR检测方法的建立

目的:探讨实时定量PCR检测肺炎衣原体(chlamydia pneumonia,Cpn)的方法.方法:根据GenBank提供的肺炎衣原体基因序列,选取高特异性和保守型的区域进行引物设计,并建立实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)的检测方法.同时用肺炎支原体、肺炎双球菌、流感病毒、副流感病毒以及腺病毒对Cpn引物的特异性进行分析.对呼吸道感染患者200个咽拭子样本和68个肺泡冲洗液样本进行检测,以荧光抗体检测法作对照,评价实时定量PCR检测Cpn的准确性.结果:Cpn PCR引物对肺炎支原体、肺炎双球菌、流感病毒、副流感病毒以及腺病毒均显示阴性,对Cpn显示为阳性,特异性良好;荧光实时定量PCR技术检测的准确性优于荧光抗体检测法.结论:荧光实时定量PCR技术检测Cpn体灵敏度高、周期短,可作为临床诊断Cpn的手段.     

荧光探针定量PCR技术

PCR技术是通过对基因的选择性片段进行体外高效扩增,实现目的基因的检测。荧光探针定量PCR(FQ-PCR)是一种新的基因定量检测技术,国外文献多用“实时定量PCR(real time quantitative PCR)”或“TaqMan PCR(以美国PE公司商标命名)”。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针,巧妙地把核酸扩增(PCR)、杂交及光谱技术结合在一起,从而实现了对目的基因的准确定量检测,正发展成为临床实验诊断的常规技术。     

实时荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌femA表达水平

目的探讨实时荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌乒,以表达的方法。方法以BB270femA基因表达为标准,建立实时荧光定量PCR方法,对实验菌株femA表达进行相对定量。结果建立的实时荧光定量PCR方法所得结果标准曲线线性关系好,熔解峰单一。随MIC变化,金黄色葡萄球菌femA表达水平也随之变化。结论用实时荧光定量PCR方法研究金黄色葡萄球菌femA表达量结果可靠、敏感、重复性好。     

荧光定量PCR检测病毒性心肌炎患者血浆循环DNA及其临床意义

目的:利用实时荧光定量PCR技术来检测病毒性心肌炎患者血浆循环DNA水平。方法:分别收集健康人和病毒性心肌炎患者的血浆样本,用实时荧光定量PCR方法检测样本中的血浆循环DNA。结果:病毒性心肌炎患者的血浆循环DNA的CT值为25.22±1.26,明显低于健康人30.66±1.52,有显著性差异(P<0.01)。结论:实时荧光定量PCR技术检测血浆循环DNA可以成为诊断病毒性心肌炎的一种方法。     

Sybr greenⅠ实时定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的探讨

目的　选择以SybrgreenⅠ作为荧光指示剂做实时PCR (SYBR法 ) ,检测乙肝病毒 (hepatitisBvirus ,HBV )DNA ,并与国产TaqMan荧光实时定量PCR方法比较。 方法　对 189例临床血清标本DNA分别进行常规PCR和SybrgreenⅠ荧光PCR检测。 结果　使用国产TaqMan荧光实时定量PCR方法测得 10 6例HBVDNA阳性 ,67例阴性 ,16例判断困难。使用SybrgreenⅠ实时定量PCR方法测得 117例HBVDNA阳性 ,72例阴性 ,使用SybrgreenⅠ实时定量PCR方法测得HBVDNA阳性熔解曲线Tm值为 83 .67± 0 .95℃。其中 10 6例阳性和 67例阴性与使用国产TaqMan荧光实时定量PCR方法所测阴阳性一致 ,二者定量的回归系数为 0 .941。使用国产TaqMan荧光实时定量PCR方法判断困难的 16例中 ,11例SybrgreenⅠ实时定量PCR方法判断为阳性 ,但定量拷贝数很低 ,其中最大值为 1.68× 10 3 拷贝/ml,最小值为 4.3 7× 10 2 拷贝 /ml ,平均值为 83 9拷贝 /ml ;另 5例判断为阴性。结论　使用SybrgreenⅠ荧光素进行实时定量PCR检测HBVDNA的敏感度要高于国产TaqMan的荧光实时定量PCR方法 ,能够适合目前临床上及时有效准确检测标本的要求。     

实时荧光定量PCR在高危型HPV感染检测中的应用价值

目的分析实时荧光定量PCR检验在高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染检测中的应用价值。方法选取2018年2月至2019年12月新野县人民医院收治的198例高危型HPV感染患者,均行实时荧光定量PCR检验、第二代杂交捕获试验(HC-Ⅱ)检测,比较实时荧光定量PCR检验、HC-Ⅱ检测阳性检出率和符合率,统计不同病变类型检出情况。结果实时荧光定量PCR检验HPV阳性检出率[75.25%(149/198)]较HC-Ⅱ检测[62.63%(124/198)]高,差异有统计学意义(P<0.05);实时荧光定量PCR检验、HC-Ⅱ检测符合率为83.33%(165/198)(Kappa值=0.618,P<0.001);实时荧光定量PCR检验鳞状上皮病变和慢性宫颈炎检出率[62.50%(40/64)]较HC-Ⅱ检测[32.81%(21/64)]高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论实时荧光定量PCR检验、HC-Ⅱ检测应用于高危型HPV感染患者中一致性较好,但实时荧光定量PCR检验HPV阳性、鳞状上皮病变和慢性宫颈炎检出率较高,对促使临床制定针对性的治疗方案,改善患者预后有积极意义。     

实时荧光定量PCR应用及实验条件优化

实时荧光定量PCR是在普通PCR基础上发展起来的新技术,在保持了PCR技术灵敏、快速、特异特点的基础上增加了定量的特点.在检测微小残留病变,肿瘤标志性基因及病毒负荷量等方面为临床医生判断病情,了解预后发挥着不可替代的作用.荧光定量PCR为科学发挥着巨大作用的同时,人们也不断对其实验条件进行优化,保证定量结果的准确.     

定量PCR分析仪的临床应用前景——AG-9900 Robo Master全自动荧光定量PCR分析仪

荧光探针杂交定量PCR技术和全自动定量PCR分析仪的出现,使PCR扩增和产物分析整个过程完全在同一个封闭系统下完成,并在分析软件支持下实现对PCR扩增产物进行实时动态监测和自动得出定量结果。彻底解决了PCR技术中扩增产物污染和不能定量的问题,为PCR技术作为常规检测技术应用于临床开辟了广阔的前景。     

新型MGB探针特异性检测变形链球菌

目的:设计一种新型TaqManMGB探针,利用实时荧光定量PCR检测变形链球菌,提高PCR法检测变形链球菌的特异性,减少检测的假阳性。方法:提取6种不同链球属细菌的DNA,分别进行巢式PCR和TaqManMGB实时荧光定量PCR,比较两种PCR方法检测变形链球菌的特异性。巢式PCR第1轮扩增的引物是细菌16S rRNA基因通用引物,第2轮扩增使用变形链球菌16S rRNA基因可变区序列的特异性引物。TaqManMGB实时荧光定量PCR的引物与第2轮巢式PCR特异性引物相同,设计的MGB探针序列与变形链球菌16S rRNA基因中特异性序列相匹配,不与其他细菌的基因序列匹配。将变形链球菌标准株的DNA样本从2.5 mg/L至0.16μg/L按5倍梯度稀释,制备出实时荧光定量PCR的标准曲线。结果:变形链球菌和格氏链球菌在巢式PCR中均扩增出282 bp的DNA片段,出现假阳性结果。TaqManMGB实时荧光定量PCR能定量检出变形链球菌标准株和临床株,不检出其他链球菌,比巢式PCR特异性更好。TaqManMGB实时荧光定量PCR对变形链球菌DNA的最低检出浓度为20μg/L。结论:本研究设计出一种针对变形链球菌的TaqManMGB探针,建立利用TaqManMGB实时荧光定量PCR特异性检测口腔中变形链球菌的方法。