人γ-干扰素基因修饰的结肠癌细胞株的建立

目的建立人γ-干扰素(IFN-γ)基因修饰的结肠癌细胞株方法用逆转录病毒质粒pL(IFN-γ)SN将人IFN-γ基因转导入人结肠癌细胞株Lovo中,用G418进行筛选结果筛选得到抗性克隆Lovo/IFN-γ,能在0 6 g.L1GG418中稳定生长;Lovo/IFN-γ生长曲线与野生型Lovo无异;RT-PCR证实IFN-γ基因在Lovo/IFN-γ中表达;Lovo/IFN-γ能分泌人IFN-γ,细胞内水平为3.0fg.d-1.结论成功建立了人IFN-γ基因修饰的结肠癌细胞株,为进一步研究奠定了基础.     

人大肠癌细胞株的转移潜能及其相关特性的比较

目的比较两种人大肠癌细胞株的转移潜能及其相关性．方法利用裸鼠实验性肝转移模型比较人大肠癌ＨＴ２９与ＬｏＶｏ细胞株的转移潜能；定量检测两种细胞株层粘连蛋白受体（ＬＮＲ）、上皮性钙调蛋白（Ｅｃａｄ）及Ⅳ型胶原酶的表达；用原位分子杂交及免疫组化检测两细胞株ＣＤ４４Ｖ６在蛋白质水平及ｍＲＮＡ水平的表达．结果ＬｏＶｏ细胞株为人大肠癌高转移株，裸鼠实验性肝转移率为１００％；ＨＴ２９细胞株转移相对较低，裸鼠肝内转移率为４２９％．定量检测发现，ＬｏＶｏ细胞几乎不表达Ｅｃａｄ，ＨＴ２９细胞膜上弱表达Ｅｃａｄ．ＬｏＶｏ表达ＬＮＲ与Ⅳ型胶原酶高于ＨＴ２９．ＬｏＶｏ细胞内ＣＤ４４Ｖ６的表达在蛋白质水平与ｍＲＮＡ水平均高于ＨＴ２９细胞．结论ＬｏＶｏ细胞株为人大肠癌高转移株，ＨＴ２９细胞株转移力相对较低；ＬＮＲ、Ｅｃａｄ、Ⅳ型胶原酶及ＣＤ４４Ｖ６可作为大肠癌细胞转移潜能的相关指标．     

三氧化二砷对人肝癌细胞株的影响

三氧化二砷是中药砒石的主要成分,治疗急性早幼粒细胞白血病已获得满意疗效,其完全缓解率在初治患者达73%,复发患者也达52%,最长缓解期超过10 a.本药静脉给药为宜,不产生明显毒副作用[1],并且在治疗白血病时与其他化疗药之间无交叉耐药性[2].为进一步拓展药用价值,扩大其肿瘤谱及临床治疗应用谱,我们探讨三氧化二砷对人肝癌细胞株生长的抑制作用及其机制,为其用于肝癌治疗提供理论依据.     

p16INK4α重表达对人食管癌细胞系EC109生长的抑制作用

目的探讨用腺病毒介导野生型的p16基因在食管癌细胞系表达,研究重表达野生型p16基因对食管癌细胞系EC109生长的抑制作用,为寻找食管癌致癌机制的研究及其基因治疗提供理论基础.方法用基因重组技术,将pcDNA3-p16中的野生型p16基因用Kpn I/BamH I进行双酶切,克隆入腺病毒表达载体pAdCMV中,将重组质粒pad-CMV-p16与腺病毒质粒JM17用Lipofectamime 2000共转染293细胞,产生重组腺病毒.用重组腺病毒感染人食管癌细胞系EC109,在感染后的不同时段,用免疫荧光、打点杂交方法检测p16基因在细胞中的表达用MTT法及流式细胞仪观察p16基因的表达对食管癌细胞株生长的影响.结果经酶切鉴定野生型p16基因克隆入腺病毒表达载体中,与JM17共转染293细胞后,可产生具有感染活性的重组腺病毒,用重组腺病毒感染食管癌细胞株EC109细胞后,可抑制食管癌细胞的生长,同对照组相比其最大抑制率可达52.7%.Multipcycle分析软件分析对细胞周期影响表明,处于G0～G1期的细胞为41%～63%感染后的细胞经Dot blot和Westernblot杂交证实,有外源的p16mRNA及蛋白的表达.结论重组腺病毒可将野生型p16基因导入人食管癌细胞系EC109中,野生型p16基因在p16基因功能缺失的细胞中重表达能抑制癌细胞恶性生长.p16基因功能缺失是食管癌致癌因素之一     

p16-INK4alpha重表达对人食管癌细胞系EC109生长的抑制作用

目的探讨用腺病毒介导野生型的p16基因在食管癌细胞系表达,研究重表达野生型p16基因对食管癌细胞系EC109生长的抑制作用,为寻找食管癌致癌机制的研究及其基因治疗提供理论基础.方法用基因重组技术,将pcDNA3-p16中的野生型p16基因用Kpn I/BamH I进行双酶切,克隆入腺病毒表达载体pAdCMV中,将重组质粒pad-CMV-p16与腺病毒质粒JM17用Lipofectamime 2000共转染293细胞,产生重组腺病毒.用重组腺病毒感染人食管癌细胞系EC109,在感染后的不同时段,用免疫荧光、打点杂交方法检测p16基因在细胞中的表达用MTT法及流式细胞仪观察p16基因的表达对食管癌细胞株生长的影响.结果经酶切鉴定野生型p16基因克隆入腺病毒表达载体中,与JM17共转染293细胞后,可产生具有感染活性的重组腺病毒,用重组腺病毒感染食管癌细胞株EC109细胞后,可抑制食管癌细胞的生长,同对照组相比其最大抑制率可达52.7%.Multipcycle分析软件分析对细胞周期影响表明,处于G0～G1期的细胞为41%～63%感染后的细胞经Dot blot和Westernblot杂交证实,有外源的p16mRNA及蛋白的表达.结论重组腺病毒可将野生型p16基因导入人食管癌细胞系EC109中,野生型p16基因在p16基因功能缺失的细胞中重表达能抑制癌细胞恶性生长.p16基因功能缺失是食管癌致癌因素之一     

结肠息肉与结肠癌的关系

目的探讨结肠腺瘤样息肉与结肠癌的关系．方法本文回顾性总结分析我院1985／1998间进行结肠镜2037例，其中检出腺瘤样息肉86例，检出率为4．22％．息肉高频电切除41例，切除率为47．6％．86例腺瘤样息肉中，男64例，女22例，年龄17岁～81岁结果息肉分布：直肠15例，占17．4％，乙状结肠32例，占37．20％，为多发，与结肠癌好发部位相一致．86例腺瘤样息肉13例癌变，癌变率为15．11％．息肉大小、形态及病理与癌变有明显的关系．腺瘤直径越大，癌变率越高，直径2cm以上的癌变率为61．11％，而1cm～2cm仅占6．06％在形态上无蒂息肉癌变率比例高，占18．6％．表面不光滑呈桑椹式分叶状，癌变率明显增高，达35％，是光滑息肉的四倍．病理上绒毛状腺瘤癌变率高，占35．7％，管状腺瘤癌变率仅占11．26％．腺瘤伴非典型增生与癌变成正相关，重度非典型增生癌变占87．5％．另外，息肉电切后送检病理不容忽视，4例腺瘤样息肉电切后病理为癌变；2例炎性增生性息肉电切后为腺瘤样息肉，1例为直肠类癌．结论结肠腺瘤样息肉与结肠癌有密切的关系，结肠腺瘤的大小、形态、病理类型及异型性增生是癌变的潜在因素，绒毛成分越多，异型性增生越重，体积越大，基底越宽，形态分叶其癌变危险性越高，应及早切除．同时注意电     

γ-干扰素对人结肠癌细胞增殖的影响

目的观察γ-干扰素(IFN-γ)对结肠癌细胞HT29增殖的影响,并探讨其作用机制。方法采用MTT法测定人结肠癌细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测凋亡,并定量检测对癌基因蛋白表达的影响。结果浓度≥100U/ml的IFN-γ能抑制HT29细胞增殖,作用呈时间依赖性,在24、48和72小时,抑制率分别为13%、32%和44%;IFN-γ可诱导细胞凋亡,降低癌基因蛋白c-myc、bcl-2表达而促进bax表达(P<0.01)。结论IFN-γ对HT29细胞的抑制作用可能是通过抑制癌基因蛋白c-myc、bcl-2表达,促进bax表达而诱导了凋亡及产生细胞周期阻滞。     

热疗联合MMC诱导LoVo细胞凋亡和bcl-2表达

近年来许多学者逐渐认识到凋亡与肿瘤关系是当今肿瘤研究的热点,因为恶性肿瘤的产生和发展,不但是由于细胞的无限增殖,还由于细胞内部控制细胞死亡通道即凋亡(apoptosis)的机制障碍或二者失去平衡所致。我们应用流式细胞仪、电镜和琼脂糖DNA电泳,研究热疗联合MMC对诱导LoVo细胞凋亡和bcl-2基因表达的作用,并初步探讨其机制。 1 材料和方法 1.1 材料人大肠癌细胞株(LoVo)由第一军医大学病理教研室提供。丝裂霉素C为日本东京协和发酵工业株式会社产品。碘化丙锭(propidium iodide,PI)是美国Sigma公司的产品。RNA酶为中国科学院生物化学研究所产品。 1.2 方法 LoVo细胞常规贴壁于37℃,50mL·L~(-1)CO_2孵箱     

小鼠结肠癌完整组织块原位种植及肝转移模型的建立方法

[目的]研究快速建立模拟临床过程的小鼠结肠癌原位移植瘤及肝转移模型方法。[方法]采用小鼠结肠癌细胞CT26接种于裸鼠皮下,形成稳定传代的皮下种植瘤。再取该肿瘤组织块,用原位医用胶黏合法种植于BALB/c小鼠盲肠壁,建立模拟于临床的结肠癌肝转移模型,定时观察小鼠全身情况,分不同时期处死,观察其生长及转移特性。[结果]原位种植成瘤率100%,术后3周肝转移率100%,4周后动物消瘦,萎靡,行动迟缓,反应迟钝,部分可见腹水形成,濒临死亡。中位生存期29d。[结论]小鼠结肠癌完整组织块通过"生物胶黏贴法"原位种植BALB/c小鼠盲肠壁,速度快,方法简便,能较好的重现结肠癌临床转移的过程,为人类结肠癌生长、肝转移机制及干预肝转移治疗的研究提供一种较理想的动物模型。     

DPC4/SMAD4基因与结肠癌

DPC4/SMAD4是一种新的肿瘤抑制基因,定位于第18号染色体长臂18q21.1的位置.它编码的蛋白SMAD4参与了转移生长因子β(TGF-β)超家族细胞内信号传导.SMAD4是信号传递蛋白SMADS的功能活动中心.本文就DPC4/SMAD4基因及其编码的蛋白的结构、功能、在信号传导途径中的作用和在结肠癌中的改变进行了综述.     

CD44在胃癌中异常表达的临床意义

胃癌的转移和扩散是依靠细胞与细胞外间质及其他细胞的一系列的相互作用,其中肿瘤细胞表面的粘附分子在这一过程中起着重要作用。细胞粘附分子CD_(44)是一种存在于细胞表面的跨膜糖蛋白,能介导淋巴细胞归巢并参与细胞—细胞间粘附,在肿瘤的发生、发展和转移中起重要的作用。人类CD44基因位干第11号染色体短臂上,由20个高度保守的外显子构成,它包括10个组成型外显子和10个V区变异性拼接外显子。组成型外显子的转录片段存在于所有CD_(44)转录子中,仅含有组成型外显子的CD_(44)转录子称作标准型CD_(44s)转录子。V区外显子在转录时可以随机拼接,也可以跳跃的方式拼接,这些有变异型拼接外显子插入的CD_(44)转录子称为变异型CD_(44v)转     

表皮生长因子受体单克隆抗体抗人结肠癌LST174的作用

结肠癌在我国不断增多,其晚期治疗仍极困难。我们探讨表皮生长因子受体单克隆抗体(EGFRmAb)抗人结肠癌作用的实验研究,为探索肿瘤治疗提供新途径。     

VEGF165正反义表达载体的构建及其对人胃癌细胞VEGF表达的调节

目的构建VEGF165(vascular endothelial growth factor,血管内皮生长因子)正、反义表达载体,将其转染人胃癌细胞,观察其对胃癌细胞VEGF在mRNA和蛋白质水平表达的调节作用.方法用限制性内切酶将VEGF165 cDNA从pGEM-hVEGF165克隆载体上切下来,以正、反方向插入质粒pCDNA3中,构建VEGF165正、反义真核表达载体;用限制性内切酶和Sanger双脱氧终止DNA测序法证明VEGF165正、反义表达载体目的基因的序列和方向的正确性;用脂质体将VEGF165正、反义表达载体转染人胃癌细胞,用RNA斑点杂交及免疫荧光流式细胞仪检测VEGF mRNA和蛋白质的表达水平.结果酶谱分析及DNA测序表明VFGF165正、反义真核表达载体目的基因的序列及方向正确;转染正义表达载体后VEGF mRNA和蛋白质表达水平增加(蛋白免疫强度为75.4%;P＜0.05vs对照组,31.6%),转染反义表达载体后VEGF mRNA和蛋白表达水平降低(蛋白免疫强度为8.9%;P＜0.05vs对照组).结论成功地构建了VEGF165正、反义真核表达载体;构建的载体能在胃癌细胞内有效表达,调节血管内皮生长因子的水平.     

人结肠癌羟基喜树碱耐药细胞株SW1116/HCPT的建立与鉴定

背景：肿瘤细胞的多药耐药性是造成化疗失败的主要原因，其机制是多种耐药相关基因表达的改变。目的：探讨消化道肿瘤的多药耐药机制和逆转策略。方法：应用药物浓度递增诱导法建立羟基喜树碱（HCPT）耐药结肠癌细胞株SW1116／HCPT；细胞计数法测定细胞生长曲线；流式细胞仪测定细胞周期分布；细胞染色体染色进行核型分析；四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法进行药物敏感实验；聚合酶链反应（PCR）-酶联免疫吸附测定（ELISA）检测细胞端粒酶活性；肿瘤药物耐受功能分类基因芯片筛选差异表达的耐药相关基因。结果：与亲代细胞相比，SW1116／HCPT细胞生长曲线无明显改变；对HCPT的耐药倍数增加120．0倍，并与阿霉素（48．2倍）、氧化苦参碱（2．1倍）、阿糖胞苷（2．0倍）、5．氟尿嘧啶（1．8倍）、顺铂（1-3倍）存在交叉耐药现象；细胞周期分布明显改变，G1期细胞增加，S期细胞减少；细胞染色体无明显变化，核型为非整倍体54-69；细胞端粒酶活性无明显改变；功能分类基因芯片显示，耐药细胞株表达改变的基因有30个。其中表达下调10个，上调20个。结论：SW1116／HCPT是研究消化道肿瘤多药耐药现象的模型之一。     

大肠癌粪便脱落细胞及其基因的检测

随着人们生活水平的提高和医疗条件的改善,诸多急性传染病均得到了有效的控制.然而,一些与环境因素密切相关的慢性非传染性疾病,如心、脑血管疾病和恶性肿瘤的发病率有了明显上升.大肠癌便是一个突出的例子.欧美和日本等大肠癌高发国家的研究证明,长年的高蛋白、高脂肪和低纤维素饮食习惯是促发大肠癌的重要环境因素(外因),患者遗传上的缺陷,如多种病相关基因的突变又是大肠癌发病的内在因素,这些相关的内外因素结合在一起可能也是近年我国大肠癌发病率上升的重要原因之一.预防为主是我国一贯的卫生工作方针,也是大肠癌防治工作的重点,纠正不良的饮食习惯,深入研究大肠癌发病的分子机制,从病因上着手防病是大肠癌预防工作的一级预防,而提高早癌和癌前疾病的检出率则是大肠癌的二级预防.众所周知,大肠癌有两个特点:一是有明确的癌前病变(93％的大肠癌来源于腺瘤);二是从癌前病变发展为癌有一较长的过程(平均7a).我们可以利用这些特点,通过普查发现癌前病变和早期癌,经过内镜的微创治疗,预防大肠癌的发生,提高早癌治愈率.下面几篇论文将围绕大肠癌早诊、早治的问题进行初步讨论,希望能引起同行专家的兴趣,提出更深入的见解.     

莪术黄芪超滤膜提取物对人肝癌细胞株HepG2凋亡的诱导作用

目的观察莪术黄芪超滤膜提取物对人肝癌细胞株HepG2是否具有凋亡诱导作用。方法四氮唑蓝比色（MTT）法观察莪术黄芪超滤膜提取物对人肝癌细胞株HepG2细胞的抑制率;应用流式细胞术,DNA凝胶电泳方法检测细胞凋亡的发生。结果 （1）莪术黄芪超滤膜提取物对人肝癌细胞株HepG2的生长有明显的抑制作用,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.01）,抑制作用与剂量及时间呈显著性正相关;（2）莪术黄芪超滤膜提取物诱导人肝癌细胞株HepG2发生凋亡,1.6 g/L处理,72 h效果最佳。结论莪术黄芪超滤膜提取物抑制人肝癌细胞株HepG2生长并促其凋亡。     

L-精氨酸在实验性大鼠结肠癌形成过程中的作用

二甲基联肼(DMH)可引起啮齿类动物的结肠粘膜隐窝细胞增殖和癌变。DMH引起的大鼠结肠癌分布特点与人相似,是研究人结肠癌的理想动物模型。L-精氨酸在一些致癌物引起肿瘤模型及移植肿瘤模型中可抑制肿瘤的发生。在实验性大鼠结肠癌模型中,已确定结肠癌的形成可分为始发阶段和促发阶段,L-精氨酸在始发和促发阶段可能起着不同的作用。我们采用溴脱氧脲嘧啶(Brdurd)免疫组化技术测定DMH引起Wistar大鼠结肠隐窝细胞增殖程度,并观察结肠肿瘤形成情况,探讨L-精氨酸在大鼠结肠癌形成中的作用。     

舒林酸抑制人胃腺癌细胞增殖及诱导凋亡

目的在体外对舒林酸抗人胃腺癌细胞增殖和凋亡诱导作用及其机制进行初步研究.方法采用人胃腺癌细胞株MKN45,MKN28作为研究对象.体外药物敏感试验(MTT)检测不同浓度和作用时间的舒林酸对细胞的增殖抑制效应;分别用Hoechst33258细胞核荧光染色、透射电镜和DNA琼脂糖凝胶电泳观察舒林酸诱导的细胞凋亡改变;应用Western斑点免疫印迹法观察经舒林酸2mmol·L-1和4mmol·L-1作用24 h后细胞内环氧化酶-2(COX-2)和凋亡抑制蛋白Bcl-2表达程度的变化.结果舒林酸对人胃腺癌细胞MKN45,MKN28的杀伤率随着剂量的增大和作用时间的延长而增加,舒林酸对不同类型的细胞杀伤率不同.舒林酸能够诱导人胃腺癌细胞MKN45,MKN28产生凋亡,凋亡诱导作用的强弱同样具有时间和剂量依赖性,而且对不同类型胃癌细胞的凋亡诱导效应有显著差异.经舒林酸2 mmol·L-1和4 mmol·L-1作用24 h后,MKN45细胞内COX-2和Bcl-2蛋白比未经舒林酸作用的细胞表达明显减少,而MKN28细胞内COX-2和Bcl-2蛋白的表达未出现明显变化.结论舒林酸在体外对人胃腺癌细胞株MKN45和MKN28有良好的增殖抑制作用,诱导凋亡是其抑制胃癌细胞增殖的重要作用机制.舒林酸对人胃腺癌细胞的抑制和凋亡诱导作用与其抑制细胞内环氧化酶-2,并进而抑制Bcl-2的表达有关,并可能与胃癌细胞的分化状态有关.