埃本膦酸钠对肺癌H446细胞体外粘附、移动和侵袭的影响

目的 :研究埃本膦酸钠 (BM 2 1 0 95 5 )对人小细胞肺癌细胞系H4 4 6在体外的粘附、移动及侵袭能力的影响。方法 :经BM 2 1 0 95 5体外诱导的H4 4 6细胞 ,应用SRB比色法测定其在重构基膜Matrigel胶上的粘附 ,使用Millicell PCF培养系统计数测定细胞的移动力和侵袭力。　结果 :BM2 1 0 95 5诱导的H4 4 6细胞在 2 4 0min粘附实验中的粘附率下降 32 .1 1 % (P <0 .0 5 ) ,而其移动和侵袭能力在 4～ 72h内均有显著下降 (P <0 .0 5 )。　结论 :BM 2 1 0 95 5可抑制人小细胞肺癌H4 4 6的体外粘附、移动和侵袭作用     

白藜芦醇抑制人黏液表皮样癌细胞黏附、移动和侵袭作用的研究

目的 研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对人黏液表皮样癌细胞系MEC-1体外黏附、移动和侵袭的影响.方法 用MTT比色法测定Res对MEC-1细胞粘附能力的影响,用Millicell-PCF培养系统测定Res对MEC-1细胞的移动性和侵袭性的影响.结果 在1h和2h的粘附实验中,100μmol/L Res诱导的MEC-1细胞粘附率分别下降了23.42%和34.31%(P＜0.05).100μmol/L Res对MEC-1细胞体外移动和侵袭的抑制率分别为47.92%和47.25%(P＜0.05).结论 Res对人黏液表皮样癌细胞MEC-1具有抗侵袭作用,Res可作为一种潜在的抗肿瘤转移药物或化学预防剂.     

HMBA对K562巨噬细胞样分化过程中细胞周期的影响

0　引言　 K6 5 2细胞系建立于慢性髓性白血病患者胸水 ,它可在多种分化诱导剂的诱导下向红细胞系 [1 ] 和巨核细胞系[2 ]分化 .最近有人 [3 ] 报道 K5 6 2细胞在诱导剂 Hexamethylenebisacetamide(HMBA)诱导下可向巨噬细胞样分化 .但在分化中 HMBA对 K5 6 2细胞增殖的影响如何 ,尚未见文献报道1　材料和方法1.1　诱导方法　白血病细胞系 K5 6 2由本校免疫学教研室金伯泉主任惠赠 .HMBA购自 Sigma公司 ,水溶后配制为0 .5 mol· L- 1 .培养 K5 6 2细胞至对数生长期 ,加 HMBA至培养液中 ,作用浓度为 5 mmol·L- 1 ,继续培养 7d后用…     

人脊索瘤细胞的体外侵袭性

目的 观察人脊索瘤细胞在体外侵袭性的大小,探讨与肿瘤侵袭性密切相关的尿激酶型纤维酶原激活物（uroki-nase-type plasminogen activator,uPA）在侵袭中的作用。方法 利用体外球体侵袭模型观察人脊索瘤细胞的侵袭特性和侵袭过程;应用免疫组化SABC法检测脊索瘤细胞中uPA的表达情况,并且观察用uPA抗体后肿瘤细胞侵袭性的变化。结果 肿瘤细胞球体在接触预培养的鸡胚心肌块（preculture heart fragment,PHF）后3d即包绕PHF,并有部分侵袭,接触培养5d,每个PHF即有一半左右被侵袭,10d左右,PHF即完全被侵袭,免疫组化染色,阳性细胞占63％,为uPA高表达,在培养液中加入uPA抗体后,肿瘤细胞侵袭性减低。结论 人脊索瘤细胞具有一定的侵袭性;该细胞uPA高表达;uPA抗体可使脊索瘤细胞的侵袭性减低。     

N-乙酰氨基葡萄糖诱导白血病细胞K562向巨噬细胞分化

目的 :研究N 乙酰氨基葡萄糖对白血病细胞K5 6 2的诱导分化效果 .方法 :利用hexamethylenebisacetamide(HMBA)和N 乙酰氨基葡萄糖 ,分别用不同浓度对白血病K5 6 2细胞进行诱导分化实验 ,通过联苯胺、萘酚AS D氯醋酸酯酶及吉姆萨 瑞氏染色、电镜观察、流式细胞仪证实其分化方向 .结果 :化学诱导剂N 乙酰氨基葡萄糖对K5 6 2细胞在0 .5mmol·L-1浓度作用 2d后有良好的诱导分化效果 ,诱导K5 6 2向巨噬细胞分化 .与HMBA相比 ,N 乙酰氨基葡萄糖在作用浓度和作用时间上都有明显优势 .结论 :N 乙酰氨基葡萄糖可能诱导K5 6 2细胞向巨噬细胞方向分化     

六亚甲基二乙酰胺对粘液表皮样癌细胞增殖的影响

目的：探讨分化诱导剂六亚甲基二乙酰胺（HMBA）对人粘液表皮样癌细胞的增殖抑制作用。方法：用2mmol/L HMBA对培养的粘液表皮样癌细胞体外诱导后,分别采用MTT比色试验、光学显微镜、免疫组织化学、图像分析等方法对处理与未处理细胞的增殖活性进行检测。结果：MTT比色试验显示,HMBA处理的粘液表皮样癌细胞较未处理的细胞增殖活性明显降低。增殖细胞核抗原（PCNA）的表达HMBA处理组明显低于对照组（P＜0.01)。结论：HMBA能够明显抑制粘液表皮样癌细胞的增殖。     

与小鼠囊胚共培养后人子宫内膜癌细胞侵袭、粘附和运动性的变化

目的:了解小鼠囊胚体外对人子宫内膜癌细胞RL95 2侵袭力及粘附、运动性的影响作用.方法:建立小鼠囊胚与人子宫内膜癌细胞RL95-2共培养模型,分别采用Matrigel人工重建基底膜侵袭实验、MTT法粘附实验和Transwell小室趋化性运动模型,来研究与小鼠囊胚共培养后,人子宫内膜癌细胞RL95 2体外侵袭能力、粘附性和运动性的改变.结果:小鼠囊胚与人子宫内膜癌细胞RL95-2共培养后,RL95 2细胞穿过Matrigel人工基底膜的细胞数明显减少(14±5.66 vs 38.08±13.43,P＜0.01),30min和60min的粘附率均降低(P＜0.01),穿过Transwell小室聚碳酸脂微孔的细胞数也显著减少(24.69±1.57 vs 59.19±2.39,P＜0.01).结论:小鼠囊胚可降低恶性肿瘤细胞的侵袭能力,及侵袭相关的粘附性和趋化运动性.     

六亚甲基二乙酰胺诱导MEC—1细胞角蛋白染色的变化

目的:观察人粘液表皮样癌细胞系MEC—1细胞分化后角蛋白的变化,以及角蛋白含量与细胞分化的关系。方法:用六亚甲基二乙酰胺(HMBA)为分化诱导剂,对人粘液表皮样癌细胞系MEC—1细胞进行体外诱导,应用ABC染色技术对MEC—1细胞中角蛋白进行染色。结果:发现高分子量角蛋白在诱导细胞中含量明显增高,分光光度仪检测角蛋白含量,诱导组X±s为21.8±5.1,对照组为14.9±4.7,两组有显著差异(P<0.01)。结论:这可能与细胞分化有关,是细胞向成熟分化所致。     

六亚甲基二乙酰胺体外诱导HL-60 细胞分化的机制

目的探讨六亚甲基二乙酰胺(HMBA)体外诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞分化的分子机制。方法HL-60细胞与HMBA体外培养3d；运用流式细胞仪测定细胞分化抗原CD11b、CD14及细胞内Cyclin D、Cyclin E、p27抗原；半定量PT-PCR分析c-myc、Rb基因 mRNA的表达。结果HL-60细胞经HMBA处理后显示CD11b表达显著增高；胞内抗原Cyclin E表达显著下降，Cyclin D、p27表达显著增高，并呈剂量依赖关系；RT-PCR反应显示c-myc mRNA表达显著下调，Rb mRNA表达显著增高。结论HMBA能体外诱导HL-60细胞分化，其机制可能是通过下调Cyclin E、上调p27；同时使得增殖分化相关基因c-myc mRNA表达下调、Rb mRNA表达上调而使细胞阻滞于G1期，抑制细胞增殖，诱导细胞分化。     

全反式维甲酸体外诱导分化对人骨肉瘤MG-63细胞侵袭转移的影响

目的观察全反式维甲酸（alltrans retinoic acid，ATRA）诱导分化对人骨肉瘤MG-63细胞侵袭转移的抑制作用。方法体外用ATRA诱导MG-63细胞分化，通过电镜观察瘤细胞的超微结构；3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑嗅盐（MTT）检测细胞的增殖能力；软琼脂集落形成实验、侵袭和运动实验观察MG-63细胞生长和侵袭能力的变化；Westernblot检测细胞增殖核抗原（proliferation cell nuclear antigen，PCNA）、细胞黏附分子44（cell differentiation44，CD44v6）蛋白的表达。结果经诱导剂处理后．细胞的生长明显受到抑制，细胞形态呈良性分化；肿瘤细胞的软琼脂集落形成率、穿膜运动能力均被显著抑制（P〈0．01）；与对照组相比随着作用时间的增加CD44v6和PCNA的表达均降低（P〈0．01）。结论ATRA对人骨肉瘤MG-63细胞有诱导分化作用，并且从细胞的黏附、运动、降解等多环节抑制肿瘤细胞的侵袭转移能力。     

RNA干扰技术对SKOV3细胞EGFR表达的抑制作用

目的探讨RNA干扰(RNAi)技术对卵巢腺癌细胞株SKOV3表皮生长因子受体(EGFR)表达的抑制作用。方法体外化学合成EGFR序列特异性双链RNA(dsRNA),用lipofectamin 2000转染SKOV3细胞,采用RT-PCR和Western blotting技术检测EGFR mRNA和蛋白水平的变化,通过水溶性四唑盐(WST-1)比色法检测细胞增殖力,采用细胞黏附和移动实验检测细胞体外黏附和移动能力,通过细胞侵袭重建基底膜实验检测细胞体外侵袭能力。结果序列特异性dsRNA-EGFR对SKOV3细胞EGFR mRNA和蛋白的抑制率分别为73.65%和58.94%。dsRNA-EGFR组在转染后24、48、72 h细胞增殖抑制率分别为22.54%、35.76%、31.07%;dsRNA-EGFR组在30 min和90 min黏附实验中的黏附率分别下降12.11%和18.66%;转染dsRNA-EGFR后细胞体外移动和侵袭能力的抑制率分别为25.47%和22.08%。结论化学合成的dsRNA可抑制卵巢癌SKOV3细胞EGFR表达,抑制细胞增殖、移动、黏附和侵袭力。     

六亚甲基二乙酰胺体外对白血病细胞株的抗增殖作用及其机理研究

目的　研究抗肿瘤药物六亚甲基二乙酰胺 (HMBA)在体外对人白血病细胞株U937,K5 6 2增殖和凋亡的作用 ,初步从细胞周期调控的角度探讨其作用机理。方法　应用MTT比色法和锥虫蓝拒染法观察HMBA对细胞增殖的抑制作用。用细胞周期素A/DNA双染色法检测不同浓度HMBA(1、2、4mmol/L)实验组细胞胞浆内细胞周期素A蛋白表达水平 ,并进行DNA含量分析。用异硫酸盐荧光素标记的膜联蛋白V/碘化丙啶双染色法 ,DNA片段变化和亚G1峰检测细胞凋亡。结果　 (1)HMBA能明显地抑制K5 6 2 ,U937细胞增殖 ,呈剂量依赖性 (K5 6 2细胞经HMBA干预后第六天 ,对照组、1、2、4mmol/L组MTT法的 5 95nm吸光度值分别为 1 0 3、0 81、0 5 8、0 36 )。 (2 )HMBA能剂量依赖性地下调胞浆内细胞周期素A表达水平 ,(K5 6 2细胞经HMBA干预后 ,对照组 ,1、2、4mmol/L组细胞周期素A阳性率分别为 34 4 %± 5 2 % ,16 1%± 2 5 % ,9 9%± 1 7% ,7 6 %± 2 0 % ) ,S期细胞比例与细胞周期素A的改变趋势是一致的。 (3)各实验组均未检测到有凋亡发生。结论　HMBA通过下调S G2期周期素A表达而打破了K5 6 2 ,U937细胞增殖的环节 ,是其发挥抑制白血病细胞增殖的机理之一     

TIMP-3对前列腺癌PC-3M细胞株增殖和侵袭能力的影响

目的：观察TIMP-3对前列腺癌细胞PC-3M增殖和侵袭能力的影响。 方法：实验分为前列腺癌细胞PC-3M组、转染空质粒PCDNA3.1的PCDNA-PC-3M组和转染 TIMP-3的PCDNA-TIMP-3-PC-3M组。采用黏附实验、MTT比色法对比观察稳定转染的PCDN A-TIMP-3-PC-3M与PCDNA-PC-3M的黏附能力和增殖活力。采用单层细胞侵袭和Boyden 小室侵袭实验,对比观察TIMP-3对PC-3M细胞体外侵袭能力的影响。 结果：稳定转染TIMP-3的PC-3M细胞的黏附率和细胞增殖速度明显低于空质粒组和未 转染 组(P<0.05),稳定转染TIMP-3的PC-3M细胞的侵袭指数明显低于空质粒组和未转染 组（P<0.05）,空质粒组和未转染组间细胞增殖速度和细胞侵袭指数比较差异无显著 性（P>0.05）。 结论：TIMP-3对前列腺癌PC-3M细胞增殖和侵袭能力具有抑制作用。     

逆转录病毒介导shRNA抑制Mig-7基因对人肝癌细胞血管生成拟态及体外侵袭转移的抑制作用

目的探讨逆转录病毒介导的短发夹RNA（shRNA）干扰迁移诱导基因7（Mig-7）对肝细胞癌（HCC）细胞血管生成拟态 （VM）形成及体外侵袭转移能力的影响。方法设计2条Mig-7 mRNA寡核苷酸序列（Mig-7 shRNA-1,Mig-7 shRNA-2）和1条 作为负对照的无关序列（Mig-7 shRNA-N）。构建Mig-7shRNA 逆转录病毒表达载体质粒,并将要接受转染的人肝癌细胞 MHCC-97H分为6组：转染Mig-7 shRNA-1组;转染Mig-7 shRNA-2组;转染Mig-7 shRNA-N组;转染空载质粒组（Vector）;重 组人血管内皮抑素（ES,商品名：恩度）组;MHCC-97H细胞对照组（Control）。半定量PCR、Western blot检测其对Mig-7表达的 影响;三维细胞培养观察其对VM形成的影响;细胞间粘附实验、Transwell侵袭实验及迁移实验观察其对细胞粘附、侵袭及迁移 能力的影响。结果转染后,Mig-7 shRNA-1组与Mig-7 shRNA-2组中Mig-7 mRNA与蛋白的表达、MHCC-97H细胞形成VM 能力、细胞侵袭、迁移能力明显减低（P<0.05）,细胞间粘附能力明显增加（P<0.05）;Mig-7 shRNA-N 组、Vector 组、ES 组中 MHCC-97H细胞Mig-7的表达、VM形成、细胞间粘附、迁移、侵袭能力较MHCC-97H细胞组均无明显变化。结论逆转录病毒 介导的shRNA能够有效下调Mig-7的表达并明显抑制HCC细胞VM形成能力及侵袭转移能力,增加细胞间的粘附作用;ES对 HCC细胞的Mig-7表达、VM形成、侵袭转移及粘附能力无明显影响。     

健脾化瘀方对肝癌HepG2细胞生物行为学的影响

目的：本研究旨在探讨：①健脾化瘀方体外对人肝癌细胞株HepG2增殖、黏附和侵袭的生物行为学影响;②健脾化瘀方体外对人肝癌细胞株HepG2凋亡的影响。方法：①采用MTT法、黏附实验、Transwell小室侵袭迁移实验,观察不同浓度的健脾化瘀方对人肝癌细胞株HepG2增殖、黏附和侵袭的影响;②利用流式细胞仪,AnnexinV/PI双染色法,研究不同浓度健脾化瘀方对人肝癌细胞株HepG2早期凋亡的诱导作用。结果：①健脾化瘀方有抑制人肝癌细胞株HepG2增殖的作用,并呈一定的浓度依赖性：同一时间不同浓度各组细胞的生长抑制率有明显差异（P〈0.01）。②健脾化瘀方高、中浓度（2、1mg/mL）作用HepG 2细胞40、60和120min时,细胞的黏附能力明显降低（P〈0.01）。健脾化瘀方作用HepG 2细胞24h后,侵袭的细胞数减少（P〈0.05）。③健脾化瘀方对人肝癌细胞HepG2作用48h后,有诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的作用（P〈0.05）。结论：①健脾化瘀方对人肝癌细胞株HepG2的增殖具有抑制作用;②健脾化瘀方能抑制人肝癌细胞株HepG2的黏附能力和侵袭能力;③健脾化瘀方有诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的作用。     

菝葜皂苷元对结肠癌细胞Lovo黏附和侵袭能力的影响

目的:本研究旨在探讨菝葜皂苷元体外对人结肠癌细胞Lovo增殖、黏附、侵袭的影响。方法:采用MTT法、黏附实验、Transwell小室侵袭实验,观察菝葜皂苷元对人结肠癌细胞Lovo增殖、黏附和侵袭能力的影响。结果:①菝葜皂苷元有抑制人结肠癌细胞Lovo增殖的作用,与对照组比较,随着药物浓度的增大,其对细胞的抑制率也明显增大(P<0.01)。②菝葜皂苷元作用人结肠癌细胞Lovo后,细胞的黏附能力明显降低(P<0.01)。③菝葜皂苷元作用人结肠癌细胞Lovo 24h后,侵袭的细胞数较对照组明显减少(P<0.01)。结论:菝葜皂苷元对人结肠癌细胞Lovo的增殖具有抑制作用;菝葜皂苷元能抑制人结肠癌细胞Lovo的黏附能力和侵袭能力。     

HSP90在乳腺癌细胞株ZR-75-30中的表达及对粘附侵袭能力的影响

目的:研究热休克蛋白(HeatShockProtein,HSP)90在乳腺癌细胞株ZR-75-30中的表达及对该细胞粘附侵袭能力的影响,并探讨相关机制及意义。方法:体外培养ZR-75-30乳腺癌细胞株,以HSP90抑制剂Geldanamycin(GA)作用处理;免疫印迹技术(Western-blot)检测GA处理前后HSP90在乳腺癌细胞株ZR-75-30中的表达情况;噻唑兰比色(MTT)法检测GA对ZR-75-30细胞的增殖抑制作用;噻唑兰比色(MTT)法检测细胞对人工基底膜(Matrigel)的粘附能力变化;TranswellCham-ber法观察癌细胞侵袭、迁移能力的改变。结果:HSP90抑制剂GA对ZR-75-30细胞具有增殖抑制作用,呈时间剂量依赖关系;GA作用后HSP90在乳腺癌细胞株ZR-75-30中表达明显下降;HSP90抑制剂GA处理的乳腺癌细胞ZR-75-30的粘附率较未加GA的对照组下降明显(P<0.01);在GA未处理对照组侵袭、迁移实验穿膜细胞数分别为95.4±5.2,103±15.4与GA处理实验组穿膜细胞数46.2±4.9,52.4±8.4相比具有显著性差异(P<0.01)。结论:通过抑制HSP90在乳腺癌细胞株ZR-75-30中的表达,GA能明显减弱乳腺癌细胞株ZR-75-30增殖粘附侵袭能力,HSP90与乳腺癌细胞增殖侵袭转移能力相关。