胃癌相关成纤维细胞及人胃黏膜成纤维细胞生物学特性比较

目的 观察胃癌相关成纤维细胞(GCAF)及人胃黏膜成纤维细胞(HGMF)生物学特性的差异.方法 植块法原代培养和鉴定GCAF及HGMF.选择第3代的GCAF及HGMF,观察两种细胞光镜和透射电镜下的形态特点;CCK-8法检测细胞增殖活性;BCA法检测细胞总蛋白;流式细胞术检测细胞周期.每组实验重复3次,计算平均值进行比较.结果 与HGMF对比,光镜下GCAF胞体变大,细胞不规则,多见大胞体细胞、双核及多核细胞;电镜下可见畸形核,多个核仁,核浆比增加,线粒体、滑面内质网增多.GCAF增殖活性在第2、4、5、6、7天明显增强(P＜0.05);1×106个GCAF和HGMF蛋白浓度分别为(1.0018±0.0940)g/L和(0.7688±0.0441)g/L(P＜0.01);GCAF和HGMF的增殖指数分别为(42.0200±2.7314)%和(35.2520±4.4368)%(P＜0.05);两种细胞的SPF分别为(19.5040±2.7944)%和(9.3180±2.2068)%(P＜0.01).结论 HGMF和GCAF不仅在形态学上存在较大差异,GCAF的增殖能力、蛋白合成能力以及细胞周期活性均高于HGMF.     

树突状细胞与肝癌免疫治疗进展

树突状细胞 (dendritic cells,DC)是指具有树枝状形态 ,膜表面高表达 MHC 和 类分子以及多种辅助分子 (如CD5 4、CD80、CD86等 ) ,能有效摄取、加工和处理抗原并激活初始型 T细胞的一类细胞。作为目前发现的功能最强的专职抗原提呈细胞 (antigen presenting cells,APC) ,DC是抗原特异性免疫应答的始动者 ,在调控机体的免疫应答以及抗肿瘤过程中发挥重要作用。肝细胞癌 (HCC)是高度恶性肿瘤之一 ,目前尚缺乏有效的治疗。以 DC为基础的肝癌免疫治疗日益受到重视 ,取得了初步成果。本文就 DC在肿瘤免疫中的作用机制及其应用于 HCC…     

人结肠癌相关成纤维细胞对结肠癌Lovo细胞生物学行为的影响

目的探讨人结肠癌相关成纤维细胞（CAF）对结肠癌Lovo细胞增殖、黏附、迁移和侵袭等生物学行为的影响。方法收集人结肠CAF及正常成纤维细胞（NF）条件培养基,建立结肠CAF、NF与Lovo细胞间的共培养模型,以无血清培养基处理的Lovo细胞作为空白组．进行细胞增殖、黏附、迁移及Transwell侵袭能力检测。结果Lovo细胞与结肠CAF共培养后。增殖48和72h反映细胞增殖的吸光度（A）值分别为（0．667±0．059）和（0．709±0．030）,明显高于空白组[（0．574±0．031）和（0．593±0．031）]和NF组[（0．597±0．036）和（0．652±0．029）],差异均有统计学意义（P〈0．01）;黏附细胞的A值为（0．588±0．067）,也明显高于空白组（0．226±0．039）和NF组（O．375±0．059）,差异也均有统计学意义（P〈O．01）;12h和24h细胞迁移率分别为（35．2±8．7）％和（64．6±7．1）％,明显高于空白组[（14．7±3．6）％和（26．3±10．3）％]和NF组[（14．1±7．3）％和（35．2±9．8）％]（P〈O．01）;透膜细胞数为（56．2±4．8）个,多于空白组的（14．6±2．2）个和NF组的（22．9~4．5）个（P〈O．01）。结论人结肠CAF具有增强结肠癌Lovo细胞增殖、黏附、迁移和侵袭的能力。     

树突状细胞治疗大鼠肝癌的实验研究

目的 通过负载癌抗原的树突状细胞（DC）治疗大鼠原发性肝癌（HCC）模型的实验,探讨其临床生物治疗的可行性。方法 用大鼠HCC细胞株CBRH－7919细胞匀浆粗提物,刺激Wistar大鼠骨髓衍化的DC,按不同途径（静脉、腹腔、癌内注射）、低中高不同剂量（10^6、10^7、10^8）静脉流利多次治疗CBRH－7919接种的大鼠HCC模型,并设予治疗组、细胞因子加CBRH－7919细胞匀浆粗提物治疗组和生理盐水组作对照,用X^2检验比较其疗效和生存期。结果 比较和组获得长期生存（生存大于100d）的大鼠数,细胞因子加CBRH－7919细胞匀浆粗提物治疗组、腹腔治疗组及高剂量静脉治疗组与生理盐水组相比较无显著意义（P＞0．05）;中低剂量静脉治疗组、预治疗组内癌内注射组与生理盐水组比较有显著意义（P＜0．05、P＜0．001、P＜0．001和P＜0．01;预治疗组成癌率与其余各组相比有显著意义（P＜0．001）。结论 中、低剂量负载癌抗原DC经静脉和癌内多次注射,对大鼠HCC有一定的疗效,并能有效地抵抗HCC细胞的再接种,提示负载癌抗原的DC治疗HCC具有潜在的临床应用前景。     

癌相关成纤维细胞对雄激素非依赖性前列腺癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨前列腺癌微环境中癌相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)对非雄激素依赖性前列腺癌细胞株Du-145生物学行为的影响.方法:原代培养前列腺癌CAFs并制备CAFs条件培养基(CAFs-CM).通过增殖实验、平板集落形成实验、侵袭实验等体外实验,观察CAFs对前列腺癌细胞生物学行为的影响.结果:由从人新鲜前列腺癌组织中分离培养CAFs制备的CAFs-CM剂量依赖性地提高了Du-145细胞的增殖能力,与SFM相比,0.5 g/L的CAFs-CM明显增强了Du-145细胞的增殖能力,两者比较差异有统计学意义[(290.6±25.2)vs(88.4±12.1),P<0.05],其细胞增殖指数Ki-67明显提高(80%vs 20%);在CAFs-CM中培养的Du-145细胞与在DMEM中培养的细胞相比,其平板形成集落的能力明显提高,差异有统计学意义[(0.42±0.09)vs(0.23±0.03),P<0.05];在CAFs-CM中培养的前列腺癌Du-145细胞的变形迁徙破坏能力比在DMEM中培养的Du-145细胞明显增强[(162.12±9.13)vs(112.34±8.45),P<0.01].结论:前列腺癌间质微环境中的CAFs促进了前列腺癌细胞的浸润与转移,是抗前列腺癌治疗药物设计的新靶点.     

抗雄激素条件下癌相关成纤维细胞对前列腺癌LNCaP细胞增殖的影响

目的体外研究抗雄激素条件下癌相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts,CAFs)对雄激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞增殖能力的影响。方法体外原代培养源于人前列腺癌基质的CAFs,并用抗雄激素制剂氟他胺(Flutamide)进行处理,制备出条件培养液CAFs-Flu-CM。CAFs原代培养液制备出另一条件培养液CAFs-CM作为对照研究。观察LNCaP细胞在RPMI-1640培养液、CAFs-CM培养液和CAFs-Flu-CM培养液中的生长增殖能力和差异性。结果与RPMI-1640培养液培养的LNCaP细胞相比,10-6mol/L Flutamide可抑制其生长(76.55±7.1 vs 114.51±9.8,P<0.05);浓度为0.75g/L的CAFs-CM却可显著提高LNCaP细胞的增殖能力(237.26±18.3 vs 114.51±9.8,P<0.05)。经10-6mol/L Flutamide处理后,CAFs-Flu-CM刺激LNCaP细胞增殖的能力明显减弱(32.73±5.6 vs 237.26±18.3,P<0.05)。结论源于人前列腺癌基质的CAFs可提高LNCaP细胞的增殖能力,但经抗雄制剂处理后,CAFs功能受到干扰,刺激LNCaP细胞增殖的能力明显减弱。联合靶向CAFs的肿瘤治疗策略可能会提高前列腺癌内分泌治疗的有效性,可作为临床治疗前列腺癌新的靶点。     

树突状细胞激活的肿瘤浸润性淋巴细胞体外特异性抗小鼠肝癌研究

目的树突状细胞(DC)是目前已知的功能最强的抗原提呈细胞(APC),可以向包括肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)在内的T淋巴细胞提呈抗原,并诱发细胞毒T淋巴细胞(CTL)反应。本文旨在探讨H22细胞和B16细胞全细胞性抗原致敏的树突状细胞激活的肿瘤浸润性淋巴细胞体外抗小鼠肝癌活性。方法从小鼠四肢长骨骨髓中获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)和肿瘤全细胞性抗原致敏DC,然后用DC激活TIL,观察TIL在体外对H22细胞、Hepal-6细胞和B16细胞的杀伤活性。结果经H22细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL具有很高的对H22细胞杀伤活性,杀伤率为(71·31±3·11)%,明显高于其对Hepal-6和B16细胞的杀伤活性[杀伤率分别为(50·11±3·03)%,(30·31±2·89)%];也明显高于未经H22细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL、DC激活的脾淋巴细胞和未经DC激活的脾淋巴细胞对H22细胞杀伤活性[杀伤率分别为(49·80±3·21)%,(48·76±3·60)%和(19·23±2·71)%]和对Hepal-6细胞杀伤活性[杀伤率分别为(39·4±3·21)%,(38·62±2·87)%和(18·73±2·40)%]以及对B16细胞杀伤活性[杀伤率分别为(26·38±2·51)%,(25·82±2·70)%和(18·34±3·01)%],同时经B16细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL(来源于H22瘤体)也可诱导相对较低的对B16细胞的特异性细胞杀伤活性。结论来源于H22瘤体的TIL经H22细胞全细胞性抗原致敏的DC激活后可产生很强的针对H22细胞的特异性杀伤活性,明显高于其他各组,说明DC能诱导TIL产生高效而特异的体外抗小鼠肝癌免疫。     

转染肝癌总RNA的树突状细胞疫苗对肝癌的抑制作用及其机制

目的探讨转染肝癌细胞总RNA转染的树突状细胞(DC)疫苗抑制肝癌作用及其机制。方法采用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素(IL)-4联合培养6 d成小鼠骨髓来源不成熟DC(iDC),质脂体转染肝癌细胞系Hepa1-6 RNA入iDC,用LPS刺激后成为Hepal-6 RNA/DC疫苗,对照组为iDC组、LPS/DC组Saline组,以每只2×10~6个细胞腹腔注射免疫小鼠每周1次共3次,然后接种5×10~5 Hepal-6细胞,观察肿瘤生长情况、特异性CTL活性的测定以及抗体阻断实验。结果实验组Hepal-6 RNA/DC组肿瘤在第8周为(8．5±3．6)mm,而iDC组、LPS/ DC组、Saline对照组分别为(36．6±3．6)、(31．3±4．7)、(32．2±4．0)mm,与实验组比较差异均有统计学意义(P＜0．05)。实验组脾细胞对Hepal-6细胞有特异性杀伤效应,而对肺癌LLC细胞无杀伤活性。所诱导的抗肿瘤效应细胞包括CD~(8+)、CD~(4+)T淋巴细胞。结论肝癌细胞的总RNA转染的DC肿瘤疫苗能诱导CD~(8+)、CD~(4+)T细胞免疫,是较有临床应用前景的肝癌免疫治疗方法。     

肝癌组织内树突状细胞及淋巴细胞浸润的临床意义

目的 探讨肝细胞性肝癌（HCC）组织内树突状细胞及淋巴细胞浸润的临床意义。方法 收集1995年1月－1996年8月在本院接爱肿瘤根治性切除术的44例HCC患者的临床病理资料,采用免疫组织化学方法检测HCC组织内树突状细胞浸润的数目,同时评估淋巴细胞的浸润情况,分析两者与肝癌切除术后肿瘤复发时间及生存率之间的关系。结果 发现肿瘤组织内树突状细胞数≥20、同时伴淋巴细胞浸润（＋）者（A组,n=17）术后肿瘤复发时间显著晚于不同时具备上述两项条件者（B组,n=27）,两者复发的中位期分别为21.6个月和4.1个月（U值＝105.5,P＝0.009）。A组术后1、3、4年生存率分别为83.5%、61.8%和48.7%,B组分别为42.2%、28.4%和23.0%,A组均显著高于B组（Log rank=7.68,P=0.006）。结论 HCC组织内树突状细胞及淋巴细胞浸润情况与临床预后密切相关,是直接影响预后的独立因素。     

癌相关成纤维细胞及其在胃肠道肿瘤演进中的作用

目的了解癌相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts,CAFs）及其在胃肠道肿瘤演进中的作用。方法查阅国内外近年来有关CAFs及其在胃肠道肿瘤演进中作用的文献并做综述。结果CAFs是肿瘤微环境中最多且最重要的基质细胞,在胃肠道肿瘤中,CAFs通过分泌各种细胞因子使细胞微环境稳态失衡,促进肿瘤代谢的重构和细胞外基质（extracellular matrix,ECM）的重塑,进而促进肿瘤细胞生成、增殖、侵袭和转移。结论CAFs在胃肠道肿瘤生成演进中的重要作用使得其自身及其分泌的众多具有相对特异性的分子物质成为预后判断及靶向治疗的新目标,这为胃肠道肿瘤及其他肿瘤的综合诊疗提供了新思路。     

慢性粒细胞白血病患者的骨髓间充质干细胞对树突状细胞功能的调控

目的 探讨慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓间充质干细胞(MSC)对单个核细胞来源的树突状细胞(DC)的功能的调控及其机制.方法 采用细胞贴壁法获取CML患者骨髓MSC,在低血清培养液中培养和扩增.获取正常成人志愿者外周血单个核细胞,直接在体外诱导生成DC(正常DC组),另加入正常志愿者MSC(正常诱导组)或CML患者骨髓MSC(CML诱导组)以诱导生成DC.用流式细胞仪检测各组收获DC的免疫表型及MSC对DC吞噬功能的影响;用酶联免疫吸附试验检测各组DC白细胞介素12(IL-12)的分泌;混合淋巴细胞反应检测MSC对DC介导的异体T淋巴细胞增殖能力的抑制作用.结果与正常DC组相比较,正常诱导组和MSC诱导组培养7 d后未成熟DC的共刺激分子CD1a、CD80、CD83、CD86、CD40和HLA-DR的表达量较低(P＜0.05);与正常DC组相比较,诱导9 d后,正常诱导组和MSC诱导组成熟DC的CD40、CD86和CD83的表达量较低(P＜0.05).与正常DC组相比较,CML诱导组的不成熟DC的吞噬功能显著降低(P＜0.05),CML诱导组DC IL-12的分泌量显著下降(P＜0.05).CML诱导组的DC对T淋巴细胞增殖的刺激作用有所下降(P＜0.05).结论 CML患者骨髓MSC对DC的分化成熟以及其免疫调控能力有一定的抑制作用.

Abstract：

Objective To study the effects and mechanisms of mesenthymal stem cells (MSCs)derived bone marrow of patients with chronic myelogenous leukemia (CML) on function of monocytederived dendritic cells in vitro. Methods Bone marrow mononuclear cells from CML patients were obtained and cultured. Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) derived from normal volunteers were isolated and cultured in DC differentiational condition. Moreover, PBMCs were co-cultured with CML bone marrow-derived MSCs (CML-MSC) or normal volunteers' bone marrow-derived MSC (normal-MSC) in DC differentiational condition. Immunophenotype and the endocytosis of monocytederived DCs were investigated by FACS. The level of IL-12 was evaluated by enzyme linked immunosorbant assay (ELISA). The immunoregulatory ability was detected by mixed lymphocyte culture assay. Results CML-MSCs or normal-MSC inhibited the up-regulation of CD1a,CD40,CD80,CD86,and HLA-DR during DC differentiation and reduced CD40,CD86,and CD83 expression during DC maturation. CML-MSCs inhibited the endocytosis of DCs and decreased their capacity to secret IL-12. CML-MSC could significantly suppress the function of DCs stimulating proliferation of T lymphocytes. Conclusion CML-derived MSCs harbored effect on the differentiation and maturation of DCs in vitro ; CML-MSC could inhibit the immunregulation of DCs.     

重组腺病毒介导白细胞介素-18和甲胎蛋白基因修饰的树突状细胞体外诱导抗肝癌免疫活性的研究

目的 探讨甲胎蛋白(AFP)、白细胞介素(IL)-18基冈修饰树突状细胞(DC)较以往AFP基因修饰DC作为肝癌免疫治疗瘤苗是否更具优势.方法 分离外周血单个核细胞定向诱导为DC,以Ad-IL-18和Ad-AFP共感染DC,感染后细胞通过噻唑蓝(MTT)比色法检测其激活的T细胞对HepG2的杀伤活性.结果 检测结果显示目的 基因能够表达于DC细胞中.流氏细胞仪(FCM)结果显示共感染的DC细胞均高表达CD1a(73.4%)、CD11c(84.3%)、CD80(89.5%)、CD86(87.9%)和HLA-DR(91.7%).CTL结果显示IL-18/AFP-DC-T对HepG2的杀伤率(67.49±3.24)%明显高于对SMMC7721细胞(27.32±1.75)%和K562细胞(17.31±1.56)%的杀伤率,另外共感染IL-18/AFP-DC-T组对HepG2的杀伤率与AFP-DC-T、IL-18-DC-T组比较,其差异有统计学意义.结论 AFP和IL-18基因修饰DC,能够在体外诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)效应,而_且对HepG2细胞杀伤率大于AFP转染DC组.     

转染肿瘤mRNA的树突状细胞疫苗诱导抗肝癌免疫研究

目的探讨转染原发性肝癌(HCC)mRNA的树突状细胞(DC)能否诱导抗肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。方法采用HCC患者外周血单核细胞(PBMC)体外刺激分化为DC细胞；从人肝癌HepG-2细胞和3例HCC患者的肝癌组织中体外扩增mRNA。以mRNA转染DC细胞，并与PBMC混合培养诱导扩增CTL。流式细胞计数仪检测培养细胞中CD3^ 、CD4^ 、CD8^ 细胞的比例。^51Cr释放法测定CTL的杀瘤活性。结果经扩增人肝癌HepG-2mRNA和2例AFP( )患者的AFP( )HCCmRNA诱导3周后，CD3^ 、CD8^ 细胞占淋巴细胞总数由诱导前的27．8％、26．5％、29．6％升高至89．3％、73．6％、86．8％；而经扩增AFP(-)HCCmRNA诱导3周后，CD3^ 、CD8^ 细胞占淋巴细胞总数由诱导前的25．4％升高至53．6％。转染HepG-2细胞和AFP( )的患者HCCmRNA的DC诱导的CTL对HepG-2细胞杀瘤活性明显高于AFP(-)的患者，其杀瘤特性由MHC-I限制的CD8^ T细胞所介导。结论HCCmRNA体外转染DC能诱导肿瘤特异性CTL，可为肝癌的免疫治疗提供新的有效手段。     

逆转录病毒携带白细胞介素-12转染树突状细胞体外诱导特异免疫杀伤肝癌细胞

目的探讨逆转录病毒携带白细胞介素(IL)12转染树突状细胞(DC)体外诱导免疫杀伤肝癌细胞的效能及其机制。方法感染指数(MOI)为100,含IL12的重组逆转录病毒修饰肝癌患者外周血DC(DCIL12),酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测DCIL12(5×103个/ml)培养上清中IL12和γ干扰素(IFNγ)水平,以冻融肝癌细胞株HepG2(1×107个/ml)所获得的肿瘤相关抗原(TAA)刺激DCIL12,MTT法检测TAA负载的DCIL12刺激同源T淋巴细胞(1×105个/ml)增殖分化能力,细胞毒试验检测DCIL12诱导的细胞毒T淋巴细胞(CTL)及其上清液对HepG2肝癌细胞株杀伤作用,ELISA法检测CTL上清液IFNγ水平。结果DC经IL12基因修饰后48h分泌高水平IL12(24.35±5.40)ng/L及IFNγ(725±30)ng/L,均显著高于未转染DC组(P<0.01及P<0.05)。DCIL12诱导的CTL及其上清液对HepG2均有显著杀伤作用,杀伤率显著高于未转染DC组,分别为(82.43±8.70)%vs(57.4±4.3)%(P<0.01)和(76.45±8.50)%vs(18.23±5.30)%(P<0.01),DCIL12诱导的CTL上清液IFNγ水平显著高于未转染DC组,分别为(1125.0±32.7)ng/Lvs(281.3±14.7)ng/L(P<0.01)。结论IL12基因修饰增强DC体外诱导自体T淋巴细胞产生特异性抗肝癌免疫,其机制与IL12基因修饰促进DC分泌IL12、增强T淋巴细胞活化及分泌IFNγ密切相关。     

微波消融灭瘤联合瘤内接种树突状细胞诱导特异性抗肝癌免疫

目的 探讨微波消融(MWA)灭瘤联合瘤内接种树突状细胞(DCs)诱导特异性抗肝癌免疫的效能.方法 采用GM-CSF联合IL-4体外培养C57BL/6小鼠骨髓来源的DCs,于第6天收集使用.建立C57BL/6小鼠皮下Hepa1-6肝癌模型,随机分为对照组、瘤内接种DCs组(DC组)、肿瘤微波消融组(MWA组)及肿瘤微波消融+瘤内接种DCs组(MWA+DC组).免疫组织化学法检测肿瘤组织内CD4+和CD8+T细胞的浸润,MTT法检测小鼠脾脏细胞对Hepa1-6的特异性杀伤活性,观测各组小鼠肿瘤生长情况.结果 免疫组织化学法检测显示MWA+DC组肿瘤组织内有大量的CD4+和CD8+T淋巴细胞浸润,显著高于其它组(P<0.05).MwA+DC组脾细胞对Hepa1-6细胞有特异性杀伤效能,在E/T=40和100时,MWA+DC组脾细胞对Hepa1-6细胞的特异性杀伤力显著高于对照组、DC组及MWA组(P<0.05).MWA+DC组小鼠肿瘤完全消退率显著高于其它各组(P<0.05).结论 MWA联合瘤内接种DCs可有效诱导机体产生特异性抗肝癌免疫,是预防MwA治疗后肝瘤复发的一种有效方法 .     

DHA对人肝癌细胞增殖与凋亡的影响及其机制的研究

目的：探讨二十二碳六烯酸（DHA）对人肝癌细胞株Bel-7402增殖和凋亡的影响及其机制。方法：用不同浓度的DHA（0,25,50,100,200 μmol/L）分别作用人肝癌Bel-7402细胞24,48,72 h后,用MTT法检测细胞的增殖情况、Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白的表达,并分别用流式细胞仪、real-time PCR和caspase-3活性检测试剂盒检测上述梯度浓度的DHA作用 Bel-7402细胞48 h后的凋亡情况、Bim基因表达和caspase-3活性。结果：不同浓度、不同时间DHA作用后,Bel-7402细胞增殖明显抑制,呈浓度和时间依赖性（均P<0.05）;细胞Bax蛋白表达增加、Bcl-2蛋白表达降低,呈明显浓度依赖性（均P<0.05）,但无明显时间依赖性（均P>0.05）。不同浓度DHA作用48 h后,Bel-7402细胞凋亡率、Bim基因表达和caspase-3的活性均明显增加,且均呈浓度依赖性（均P<0.05）。结论：DHA可抑制人肝癌Bel-7402细胞的增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与激活线粒体凋亡通路有关。     

大鼠胰腺癌微环境诱导未成熟树突状细胞功能的变化

目的 观察胰腺癌微环境对树突状细胞(DC)成熟的影响及功能变化并探讨胰腺肿瘤细胞免疫逃逸的机制.方法 培养树突状细胞,加入粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)40μg/L、白细胞介素(IL)-4 40μg/L,培养到第6天时得到大量的未成熟树突状细胞(imDC),加入大鼠胰腺癌细胞(AR42J cell)培养上清液诱导,流式细胞术检测DC的表面分子CD86、CD80的表达(n=6),观察能否延缓或阻断imDC的成熟及其在脂多糖(LPS)刺激后这种作用能否被逆转.并观察AR42J细胞培养上清诱导的Dc对同种异体混合淋巴细胞增殖.结果 加入胰腺癌癌细胞上清液培养的DC,与正常成熟的DC比较,CD80+CD86+阳性率由(70.88±3.60)%降至(7.15±0.71)%,LPS刺激后DC细胞的表面分子CD80+CD86+表达仍然较低(7.43±1.05)%,表明胰腺癌细胞培养上清液对DC的成熟有阻断作用.AR42J细胞上清诱导培养的imDC组刺激同种异体混合淋巴细胞增殖的强度显著低于正常培养的imDC组刺激同种异体混合淋巴细胞增殖的强度.结论 体外大鼠胰腺癌细胞培养上清液可以诱导DC处于不成熟状态,且这种不成熟状态不容易被逆转.     

树突状细胞负载不同转移潜能肝癌的蛋白质谱变化

目的 了解负载不同转移潜能肝癌细胞裂解物和正常肝细胞裂解物后树突状细胞蛋白质表达谱的差异.探索肝癌转移机制.方法 以不同转移潜能人肝癌细胞株(HCCLM6-高转移、MHCC97L-低转移、Hep3B-不转移)制备裂解物与正常肝细胞株(ChangLiver)制备裂解物分别负载DC,并以无裂解物负载DC为对照,对DC全蛋白进行双向电泳、银染、电喷雾质谱分析,Pdquest软件查询IPI上人的非冗余蛋白数据库鉴定差异蛋白.结果 双向电泳图谱匹配率>80%,相关因子平均>0.8;发现最大和最小差异大于3倍的蛋白质点21个,初步鉴定其中的12个.发现这些蛋白涉及细胞骨架(3号点:Ⅰ型角蛋白CK10;16号点:TPMsk3家族蛋白;21号点:β-中心体肌动蛋白)、信号传导(8号点:钙黏蛋白家族成员;11号点:膜联蛋白A2异构体;17号点:内涵体/溶酶体MP1作用蛋白前体)、细胞动力和能量代谢(6号点:细胞色素辅酶Q还原酶复合体核心蛋白;9号点:胆绿素还原酶A前体;13号点:苹果酸脱氢酶;20号点:线粒体前体)等方面及一些未归类蛋白(10号点:抗结直肠癌重链;18号点:Transgelin2).结论 负载不同转移潜能肝癌裂解物后DC蛋白质谱的变化涉及细胞骨架、信号传导、细胞质内物质运输和能量代谢等方面.其中部分蛋白可能与DC2功能和肝癌转移潜能相关.     

白细胞介素-2基因修饰树突状细胞体外增强其诱导的抗肝癌免疫反应

目的探讨腺病毒介导的白细胞介素(IL)-2基因修饰能否使抗原冲击的树突状细胞(DC)在体外诱导出更强的抗肝癌免疫反应。方法IL-2的重组腺病毒载体体外转染经肝癌细胞株HepG2冻融抗原致敏的DC(AdIL-2-HepG2/DC),FACS分析AdIL-2-HepG2/DC表面分子的表达,酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测IL-2水平,3H-TdR掺入法检测T淋巴细胞增殖分化能力,噻唑蓝(MTT)法检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)效应。结果AdIL-2-HepG2/DC能高水平的表达CD1a(61.7±8.1)%,CD11c(72.9±6.2)%,CD80(81.1±7.1)%,CD86(76.4±6.8)%以及HLA-DR(90.6±6.4)%,并分泌较高水平的IL-2(6.78±0.18)mq/L。AdIL-2-HepG2/DC能非常显著地刺激自体T细胞增殖(CPM值为21 878±1089),当靶细胞为HepG2时,其诱导的CTL杀伤活性(74.5±3.8)%显著高于其他各组,并且其杀伤能力与效应细胞数量成正比。结论AdIL-2- HepG2/DC可以增强体外诱导的特异性抗肝癌免疫反应。