CTLA4-Ig基因对大鼠肝移植后免疫细胞浸润及细胞凋亡的影响

目的研究腺病毒介导的细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4-Ig(cytolyticT-lymphocyteassociatedantigen4-Ig,CTLA4-Ig)基因对大鼠肝移植后移植物中免疫细胞浸润和细胞凋亡的影响。方法将大鼠原位肝移植模型分为排斥对照组、环孢素A(CsA)组和CTLA4-Ig组。分别于术后1,3,5,7,12d,用免疫组织化学法和缺口末端标记技术(TUNEL法)分别测定移植物中CTLA4-Ig基因的表达和巨噬细胞、CD8 T细胞浸润及细胞凋亡,并以病理形态学变化作参照。结果静脉注射重组CTLA4-Ig基因腺病毒7d后,大鼠肝脏CTLA4-Ig稳定表达,在肝移植60d后仍呈阳性;CTLA4-Ig组汇管区巨噬细胞、CD8 T细胞浸润明显较排斥对照组少;细胞凋亡指数在术后3、5和7d明显低于排斥对照组(P<0·01),汇管区巨噬细胞、CD8 T细胞浸润数和凋亡指数与排斥反应分级均显著相关。结论重组CTLA4-Ig基因腺病毒经静脉一次给药后能在大鼠肝脏稳定表达,并通过抑制移植物中免疫细胞浸润及移植物细胞凋亡,抑制移植后急性排斥反应。     

输注受者骨髓间充质干细胞对肝移植大鼠免疫功能的影响

目的 观察肝移植同时输注受者骨髓间充质干细胞(MSCs)对受者肝移植免疫功能的影响.方法 实验分为4组:A组SD大鼠只行剖腹探查;B、C、D组各组行Wistar-SD大鼠肝移植同时,C组提取受者MSCs同期经门静脉输注给受者,D组给予肌注CsA,B组给予门静脉输注生理盐水.观察术后第1、7、14天肝功能的变化、病理改变和细胞因子变化.结果 肝移植同时输注受者MSCs,谷氨酸转移酶、血清总胆红素较对照组显著降低,病理改变仅呈急性轻度排除反应,与肌注CsA组相似,而单纯移植组呈急性重度排除反应.术后第7天,白细胞介素(IL)-2和干扰素(IFN)-γ浓度,C组分别为(443.89±2.39)、(347.55±3.35)ng/L,B组分别为(600.36±2.98)、(373.77±1.81)ng/L,而IL-4和IL-10浓度,C组分别为(126.99±1.18)、(147.40±1.07)ng/L,B组分别为(102.02±0.94)、(111.03±1.15)ng/L,C组和B组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 肝移植同时输注MSCs,可通过抑制Th1细胞因子的表达,减轻受者对移植肝的排斥反应.     

CTLA4-Ig和抗CD40L单克隆抗体抑制大鼠胰腺移植急性排斥反应的机制

目的探讨细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白（CTLA4-Ig）和抗CD40L单克隆抗体对异基因大鼠胰腺移植后急性排斥反应的作用及其相关机制。方法建立大鼠的胰十二指肠移植模型，供者为F344大鼠，受者为经链尿佐菌素诱导为糖尿病模型的Lewis大鼠，受者移植后分为4组，每组12只。A组：为应用生理盐水对照组；B组：应用CTLA4-Ig200μg；C组：应用抗CD40L单克隆抗体200μg；D组：联合应用CTLA4-Ig和抗CD40L单克隆抗体各200μg。各组分别于术后第2d腹腔注射相应的药物。术后1、4、7、10d分别取各组的移植胰腺，进行常规病理检测；采用逆转录聚合酶链（RT-PCR）法检测移植物白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素10（IL-10）、γ干扰素（IFN-γ）的表达；术后第1、4、7、10d取受者外周血，采用流式细胞术计数T细胞亚群CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋；术后第4d取移植胰计数CD4^＋CD25^＋T细胞。结果病理检测显示：与A组相比，B、C组排斥反应明显减弱，D组几乎未发生排斥反应；B、C、D组IL-2的表达高峰延迟，且表达水平较A组有不同程度的降低，D组又较B、C组表达水平下降，差异有统计学意义；B、C、D组IFN-γ的表达水平较A组有不同程度的降低，但D组与B、C组的差异不显著；B、C组IL-4的表达水平较A组有不同程度的升高，D组较A、B、C组表达水平下降，差异有统计学意义；B、C组IL-10的表达水平较A组有不同程度的升高，D组与A组差异不显著；B、C、D组CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋T细胞数均相对减少，CD4^＋CD25^＋T细胞数有不同程度升高，与A组比较，D组的差异最为显著。结论联合应用CTLA4-Ig和抗CD40L单克隆抗体能更有效地抑制大鼠胰腺移植后排斥反应，其机制可能与Th1／Th2型细胞因子偏移及CD4^＋CD25^＋调节性T细胞增多等有关。     

同种肝移植大鼠转染融合基因人CTLA4-Ig抑制急性排斥反应

目的观察同种肝移植大鼠转染融合基因人CTLA4-Ig(huCTLA4-Ig)对急性排斥反应的抑制作用。方法供者为BN大鼠,受者为Lew大鼠。将受者分为三组,A组(5只):为空白对照组,供肝冷保存时不感染腺病毒;B组(4只):为阴性对照组,供肝冷保存时感染携带报告基因GFP 的重组腺病毒;C组(5只):为基因治疗组,供肝冷保存时,先体外后体内感染携带融合基因huCT- LA4-Ig的重组腺病毒;观察该治疗基因在受者体内的表达及其对急性排斥反应的抑制作用。结果(1)A组与B组受者均在3周内死亡,A、B组平均生存时间分别为(16.6±2.5)d和(15.5±3.1)d,C 组受者均能获得长期生存(>150 d);C组与A、B组生存期比较,差异有统计学意义(P<0.01)。(2) 移植肝病理学检查发现:术后8 d,A组与B组移植肝均发生严重的细胞性排斥。C组术后8 d,可见移植肝轻、中度的汇管区炎症,但组织损伤程度显著减轻;术后150d,可发现单核细胞浸润,但胆管保存完好,无血管损伤证据。(3)术前大鼠血清白细胞介素2(IL-2)浓度为(362.09±45.84)ng/L;肝移植术后,A、B组血清IL-2的浓度即升到较高水平(约为术前的1.5-2.5倍),而C组却始终维持在一个较低水平(接近或低于术前水平);术后3、7 d,C组血清IL-2的浓度与A、B组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论建立了简便有效的针对血管     

CTLA4-Ig抗大鼠肝移植排斥反应及诱导免疫耐受的实验研究

目的 建立大鼠原位肝移植（ROLT）急性排斥反应模型．探讨细胞毒淋巴细胞抗原4免疫球蛋白（CTLA4-Ig）抗排斥反应和诱导免疫耐受的作用。方法采用“二袖套管”法建立Wistar→SD大鼠配对组合的肝移植后排斥反应模型．并于术后第2天腹腔内一次性注射CTLA4-Ig（75pg／只大鼠）．与未给药的相同组合的排斥反应模型鼠对照研究．观察移植术后7d2组动物的一般情况、肝功能变化、移植肝病理改变及血清TNF-α水平的变化，同时观察CTLA4-Ig组动物术后4个月时的上述情况．以了解CTLA4-Ig抗排斥及诱导免疫耐受的作用。结果①对照组动物于肝移植术后6～14d内相继死亡；移植肝出现明显的排斥反应的病理改变征象。②CTLA4-Ig组动物于术后7d及4个月均未见明显的排斥反应表现．移植肝无明显的排斥反应的病理改变征象．血清TNF-α、ALT、AST、TBIL及DBIL水平均明显低于对照组（P〈0．05）．TP及A1b水平则明显高于对照组（P〈0．05）。结论CTLA4-Ig有抗排斥反应及诱导免疫耐受功能的作用；血清TNF-α水平作为观察ROLT后排斥反应的指标，可能有一定的参考价值。     

联合免疫治疗对肝移植大鼠移植肝组织学和外周血Th1/Th2细胞因子的影响

目的用抗CD-40L单抗加小剂量CsA联合免疫治疗肝移植大鼠受体,观察其生存时间?移植肝组织学和Th1/Th2细胞因子谱的变化。方法建立大鼠肝移植模型后,将动物随机分为4组。A组为同基因移植组,SD→SD;B组为同种异体移植组,SD→Wistar,不用任何免疫抑制治疗措施;C组,SD→Wistar,采用CsA处理;D组,SD→Wistar,采用CsA加抗CD-40L(CD-154)单抗处理。观察各组肝移植受体生存期和移植肝病理变化;用ELISA法检测外周血细胞因子水平。结果A,D组均可长期存活,B,C组生存时间分别为(13.8±2.4)d,(29.8±4.1)d;B,C组病理组织切片见中/重度急性排斥反应,D组移植肝组织损伤程度显著减轻,A组基本无排斥反应。B组血清IL-2和IFN-γ高于其余各组(P<0.05),C,D组IL-4,IL-10水平较B组有所升高(但P>0.05),尤其D组IL-10表达水平显著高于B组(P<0.05)。结论联合免疫治疗可有效抑制其急性排斥反应,延长大鼠肝移植受体的生存时间。Th2类细胞因子IL-4和IL-10的高水平表达与诱导移植耐受、抑制排斥反应有重要关系,它有助于大鼠肝移植受体和移植肝的长期存活。     

不同品系大鼠之间肝移植排斥反应的比较研究

目的比较不同品系大鼠之间肝移植排斥反应特点。方法依据大鼠不同品系分成对照组SD→SD(A组),实验组Wistar→SD(B组)、Lewis→BN(C组)以及DA→Lewis(D组)4个组,采用Kamada双袖套法建立大鼠原位肝移植模型。比较各组受体大鼠术后10 d血清肝功能指标[丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆红素(TB)和白蛋白(Alb)]、血清白细胞介素(IL)-2和IL-10水平、急性排斥反应组织病理学分级和术后平均生存时间。结果与A、B组比较,C组和D组的血清ALT和TB明显升高,Alb明显降低,差异均有统计学意义(均为P0.05)。与C组比较,D组的TB明显升高,Alb明显降低,差异均有统计学意义(均为P0.05)。与A组比较,B、C、D组大鼠血清IL-2和IL-10水平均明显升高,C组和D组的IL-2/IL-10亦明显升高,差异有统计学意义(均为P0.05)。与B组比较,C组和D组大鼠血清IL-2水平明显升高,D组的IL-2/IL-10亦明显升高,差异有统计学意义(均为P0.05)。与C组比较,D组大鼠血清IL-2水平明显升高,D组的IL-2/IL-10亦明显升高,差异有统计学意义(均为P0.05)。肝组织病理学检查显示,A组大鼠肝组织未见明显排斥反应,排斥活动性指数(RAI)评分(1.8±0.7)分;B组RAI评分(3.1±1.3)分,属轻度或不明确性排斥反应;C组RAI评分(6.9±0.8)分,属中~重度排斥反应;D组RAI评分(8.8±0.5)分,属重度排斥反应。各组间RAI评分比较以及组间两两比较,差异均有统计学意义(均为P0.05)。A组、B组、C组、D组受体大鼠术后平均生存时间分别为(119.3±1.9)d、(116.9±8.3)d、(53.4±6.1)d、(12.1±2.4)d,A组与B组的生存时间比较差异无统计学意义,余各组两两比较差异均有统计学意义(均为P0.05)。结论 4种组合中,大鼠DA→Lewis模型排斥反应最剧烈,Lewis→BN次之,而Wistar→SD最轻,接近于免疫耐受。     

CTLA4-Ig融合蛋白诱导猕猴同种异体肝移植免疫耐受的实验研究

目的探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA4-Ig)融合蛋白对同种异体肝脏移植免疫耐受的诱导作用及机理。方法利用大型哺乳动物猕猴作为研究对象,建立同种异体原位肝脏移植模型。同种异体原位肝脏移植对照组及CTLA4-Ig组各5只。观察术后生存时间,检测肝功能、IL-2、IL-10、排斥反应的病理学分级和术后肝脏细胞凋亡指数。结果对照组平均存活时间为6.57 d,CTLA4-Ig组平均存活时间为14.92 d(P0.05)。肝功能变化:对照组术后ALT明显升高,Alb则明显降低;CTLA4-Ig组ALT及Alb均维持于正常稳定水平。细胞因子变化:术后3 d起,对照组循环血中IL-2表达水平相对较高,而CTLA4-Ig组IL-10的表达水平较对照组高。移植物病理排斥反应分级:在移植术后CTLA4-Ig组排斥反应程度明显比对照组轻。对照组术后3 d起肝脏细胞凋亡指数较CTLA4-Ig组明显升高。结论CTLA4-Ig融合蛋白可诱导移植后免疫耐受,延长受体生存时间。细胞因子IL-2或者IL-10可作为监测移植排斥反应或者免疫耐受的实验室指标之一。     

大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植后排斥反应

目的研究大鼠供心转染CTLA4-Ig基因抑制心脏移植术后排斥反应的可行性。方法以BN大鼠为供者,Lewis大鼠为受者,建立心脏移植模型。将实验分为2组。对照组:供心获取过程中不给予任何干预处理;实验组:在供心获取的过程中,以质粒载体携带CTLA4-Ig(pUF1-CTLA4-Ig)经过冠状动脉灌注供心。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测供心组织中CTLA4-IgmRNA的表达,观察移植心存活时间;酶联免疫法(ELISA)检测血清γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)水平;观察移植心的组织学改变;用免疫组织化学SABC法检测移植心组织中CD4 和CD8 T细胞的浸润。结果实验组移植心存活时间较对照组明显延长[(11.70±1.24)dvs(5.62±0.74)d,P<0.05]。移植后5d,实验组移植心组织中可见CTLA4-IgmRNA的表达;对照组病理学检查可见心肌间质出现弥漫性的炎性细胞浸润,伴有局部的心肌坏死,组织间质水肿,实验组仅有局灶性血管外周及心肌间质内炎性细胞浸润,未见坏死;对照组移植心组织中浸润的CD4 和CD8 T细胞数量明显高于实验组(P<0.01);实验组血清IFN-γ水平明显低于对照组(P<0.01),但血清IL-4水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论经冠状动脉灌注转染CTLA4-Ig基因,可以抑制心脏移植后排斥反应。     

不同免疫治疗方案诱导大鼠原位肝移植免疫耐受的实验研究

目的 观察抗CD-40L单抗加小剂量CsA联合免疫治疗对肝移植大鼠受体免疫耐受诱导的作用.方法 在建立稳定大鼠肝移植模型的基础上,将肝移植模型分为5组.A组为SD→SD对照组;B组为SD→Wistar对照组,A,B组术后不用任何治疗措施;C组为SD→Wistar,术后用CsA1～5 d;D组为SD→Wistar,术后用CsA 1～5 d加抗CD-40L(CD-154)单抗0～2d;E组为D组+术前供体特异性输血(DSBT).观察受体存活时间、移植肝病理改变以及术后外周血中细胞因子的变化.结果 A,D,E组受体大鼠存活时点(均>60 d)均明显长于B组和C组.D,E组移植肝急性排斥反应明显减轻.B组IL-2和IFN-γ的血清水平显著高于其余各组(P＜0.05).B,C,D,E 4组IL-4和IL-10较A组均有明显增加,尤其D,E组的IL-10表达较B组显著增高(P＜0.05). 结论 抗CD-40L单抗加小剂量CsA(伴或不伴DSBT)联合免疫治疗,可有效延长肝移植大鼠受体生存时间、减轻急性排斥反应并诱导Th2类细胞因子的高水平表达,有助于受体和移植肝的长期存活.     

基因转移CTLA4-Ig和抗CD154抗体在异种胰岛移植排斥反应中的作用

目的 探讨基因转移细胞毒性T细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA4-Ig)和抗T细胞分化群154(CD154)抗体在异种胰岛移植排斥反应中的作用及机理.方法 建立人-大鼠异种胰岛移植模型,用携带CTLA4-Ig基因的重组腺病毒感染移植胰岛细胞,并用抗CD154抗体进行治疗,观察糖尿病大鼠胰岛移植后血糖变化、生存情况及移植物病理形态学改变,检测移植物CTLA4-Ig、胰岛素的表达和移植大鼠白细胞介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平变化.结果 (1)糖尿病大鼠移植后2 d血糖降至正常,对照组血糖平均在移植后8 d升高,抗体治疗组、转染组和联合治疗组血糖分别在18、25和36 d升高.(2)对照组、抗体治疗组、转染组和联合治疗组的移植物存活时间分别为(10.0±2.1)d、(22.0±8.2)d、(28.0±6.5)d和(37.0±9.3)d,各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);移植大鼠生存时间分别为(21.0±5.7)d、(35.0±6.5)d、(48.0±8.5)d和(65.0 ±12.5)d,各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).(3)对照组在移植后1周内,IL-2、TNF-α的水平均急剧上升,较移植前显著升高(P＜0.01).(4)各治疗组移植物见成片的胰岛细胞团,未见淋巴细胞浸润,转染组和联合治疗组移植物可见CTLA4-Ig和胰岛素的表达.结论 基因转移CTLA4-Ig和抗CD154抗体均可抑制异种胰岛移植排斥反应,二者联合效果优于单独使用.     

Transplantation of islets transduced with CTLA4-Ig and TGFbeta using adenovirus and lentivirus vectors

BACKGROUND: A major problem facing islet transplantation is immune destruction of grafts by transplant rejection and autoimmunity. Some success in prolonging graft rejection has been obtained by transducing islets prior to transplantation with adenoviral (Ad) vectors containing CTLA4-Ig and TGFbeta. The purpose of this study was to see if lentiviral (LV) vectors would provide superior results compared with adenoviral vectors. METHODS: Islets were isolated from Sprague-Dawley rats and transduced with Ad or LV vectors containing LacZ, CTLA4-Ig, CTLA4, and TGFbeta1 using various MOIs. Islets transduced with LV were healthy as judged by DNA and insulin content, and insulin secretion. Using the kidney capsule transplant site, 500 transduced rat islets were transplanted into streptozotocin diabetic B6AF1 mice. RESULTS: Maintenance of normoglycemia was prolonged in recipient mice carrying islets transduced with Ad vectors containing CTLA4-Ig, CTLA4, and TGFbeta1. Return of hyperglycemia in controls was 17-18 days while loss of function for the experimental groups occurred at 20-27 days. For the lentivirus transduced islets, rejection of controls was 20+/-1.6 days, for CTLA4-Ig was 42+/-21 days and for TGFbeta was 28+/-3.2 days. CONCLUSIONS: Although islets transduced with either adenovirus or lentivirus containing CTLA4-Ig, CTLA4, and TGFbeta1 could prolong graft survival in a rat to mouse transplantation model, with the conditions of this study lentivirus provided no advantage over adenovirus vectors.     

腺病毒介导的hCTLA4-Ig和FasL基因转移诱导大鼠同种异体肾移植长期存活的作用

目的 探讨腺病毒介导hCTLA4-Ig和FasL基因转移延长异基因大鼠肾移植物存活时间及其相关机制.方法 供、受者分别为SD系大鼠和Wistar系大鼠,建立大鼠肾移植模型.实验分为4组:对照组、空载病毒Ad-EGFP处理组、Ad-CTLA4-Ig处理组、Ad-CTLA4-Ig+Ad-FasL处理组.对照组不予处理,其他各组在供肾冷保存时,经供肾动脉灌注(1×10~9-5 ×10~9)PFU/ml Ad-EGFP、Ad-CTLA4-Ig、Ad-CTLA4-Ig+Ad-FasL.术后比较各组的存活时间、移植肾组织学、肾功能和免疫组织化学等的改变.结果 肾移植受者平均存活时间Ad-CTLA4-Ig+Ad-FasL处理组(64.67±6.41)d、Ad-CTLA4-Ig处理组(31.33 ±6.77)d与对照组(8.17±1.17)d,空载病毒Ad-EGFP处理组(8.00±1.55)d比较明显延长(P均＜0.01),并且Ad-CTLA4-Ig+Ad-FasL处理组优于Ad-CTLA4-Ig处理组(P＜0.01);对照组和空载病毒Ad-EGFP处理组术后血清肌酐浓度迅速上升,其余两组移植肾功能保持稳定.结论 Ad-CTLA4一Ig和Ad-FasL介导的基因转移能够诱导异基因肾移植物长期存活;该效应为供体特异性,与调节性T细胞和同种反应性T细胞的删除有关.     

小剂量环孢素A联用细胞毒T淋巴细胞A4-Ig治疗器官移植排斥反应

目的　研究小剂量环孢素A(CsA)联用细胞毒T淋巴细胞A4 Ig(CTLA4 Ig)治疗器官移植排斥反应的效果。　方法　采用Ono′s方法建立大鼠心脏移植排斥反应动物模型 ,将实验动物分为 4组。A组 :对照组 ,未给予任何治疗 ;B组 :腹腔内注射CsA ,10mg·kg-1·d-1,连续 7d ;C组 :术后第 2天 1次性注射CTLA4 Ig 10 0 μg ;D组 :术后 1～ 7d连续腹腔内注射CsA ,2mg .kg-1.d-1,术后第 2天加用CTLA4 Ig 5 0 μg。观察移植心脏存活天数及术后IL 2含量和组织学变化。　 结果　A、B、C、D 4组大鼠移植心脏存活时间分别为 ( 7 2± 0 7)、( 19 4± 2 1)、( 3 1 6± 1 8)和 ( 2 4 6± 2 1)d ,与对照组相比 ,各治疗组大鼠心脏存活时间明显延长 ,差异有显著性意义 (q =3 2 7 83 ,P <0 0 5 ) ,D组与C组相比差异无显著性意义 (q =1 86,P >0 0 5 ) ;各治疗组术后IL 2含量明显减低 ,与对照组相比差异有非常显著性意义 (q=9 82 ,P <0 0 1) ;A、B、C和D组排斥反应分级分别为Ⅳ、Ⅲ、Ⅰ和Ⅰ级。　结论　CTLA4 Ig抗排斥反应能力比CsA强 ,小剂量CsA联合使用CTLA4 Ig能增强治疗排斥反应疗效 ,两者具有正协同作用。     

Prolonged survival of xenograft fetal cardiomyocytes by adenovirus-mediated CTLA4-Ig expression.

BACKGROUND: Experimental allografting of fetal cardiomyocytes has been performed successfully. In this study, we attempted to transplant rat fetal cardiomyocytes into the hearts of mice by blocking the CD28/B7 costimulatory pathway via CTLA4-Ig gene transfer. METHODS: Fetal cardiomyocytes derived from Dark Agouti rat were infected with CTLA4-Ig-expressing adenovirus vectors (AdCTLA) and injected directly into the normal myocardium of C3H/He mice (n=15). For control, cells infected with beta-Gal-expressing adenovirus vector (AdRL) and cells without infection were injected into additional mice (n=30). Mice were killed at 2 (n=5), 4 (n=5), and 8 (n=5) weeks after xenotransplantation. Transplanted fetal cardiomyocytes were examined for survival by immunostaining with anti-rat atrial natriuretic peptide and anti-CTLA4-Ig antibodies. RESULTS: Fetal cardiomyocytes were successfully infected by AdCTLA and AdRL. The cardiomyocytes infected with AdCTLA expressed CTLA4-Ig and survived to 8 weeks after xenotransplantation in all of these mice. However, cardiomyocytes infected with AdRL and noninfected cells were not detected even 2 weeks after xenotransplantation. CONCLUSION: Survival of xenografted fetal cardiomyocytes is prolonged by adenovirus-mediated CTLA4-Ig expression.     

大鼠边缘性体积供肝肝移植模型的实验研究

目的通过建立不同体积供肝的大鼠肝移植模型,探索边缘性体积供肝大小的适宜范围,为研究小肝综合征的发病机理及防治措施提供一种易于复制的小动物模型。方法将192只大鼠随机分为全肝移植组、半肝移植组、小体积供肝移植组及超小体积供肝移植组,每组48只,分别建立全肝、半肝、小体积供肝和超小体积供肝的大鼠肝移植模型。移植术后,4组各抽取24只大鼠用于观察存活率;抽取12只大鼠于移植术前,移植术后5、15、30、45及60min测定门静脉压力;另12只大鼠于术后24h测定谷丙转氨酶（ALT）水平。结果全肝移植组的7d累积生存率为100％（24／24）,半肝移植组为87．5％（21／24）,小体积供肝移植组为37．5％（9／24）,超小体积供肝移植组均于术后48h内死亡。全肝移植组术中开放门静脉后,60min内其门静脉压力稳定;半肝移植组大鼠在开放门静脉后,其门脉压力虽有小幅升高,但仍保持相对稳定;而小体积供肝移植组和超小体积供肝移植组开放门静脉后,其门静脉压力均显著升高,15min时均达到高峰,之后该2组的门静脉压力开始回落,至45～60min时逐渐稳定。供肝的体积大小与开放门静脉后5（r=-0．942）、15（r=-0．947）、30（r=-0．900）、45（r=-0．825）和60min（r=-0．705）时的门静脉压力均呈负相关关系（P〈0．001）。肝移植术后24h,全肝移植组和半肝移植组ALT水平均低于小体积供肝移植组及超小体积供肝移植组（P〈0．05）,且小体积供肝移植组ALT水平低于超小体积供肝移植组（P〈0．05）。供肝体积的大小与大鼠移植术后的ALT水平呈负相关关系（r=-0．685,P〈0．001）。结论大鼠部分肝移植模型中,供肝与受体标准肝脏体积比（Gv／sLV）的安全界限为50％,GV／SLV为30％～35％的供肝可视为边缘性体积供肝,小于30％的供肝可视为超小体积供肝。     

肝硬化大鼠原位肝移植模型的制作及术后排斥反应的观察

目的 制备肝硬化大鼠的原位肝移植模型,观察术后排斥反应发生情况,为进行其它研究创建一个平台.方法 以皮下注射CCl4联合饮用苯巴比妥钠和乙醇溶液的方法制备大鼠肝硬化模型,应用改良的"二袖套"法建立大鼠原位肝移植模型,同系移植者的供、受者均为SD大鼠(SD实验组),以接受肝移植的正常SD大鼠为对照(SD对照组);同种移植者的供者为Lewis大鼠,受者为BN大鼠(BN实验组),以接受肝移植的正常BN大鼠为对照(BN对照组).术后观察受者的存活情况以及移植肝的组织学变化.结果 肝硬化大鼠门静脉压力为(182.0±10.7)mm H2O,显著高于正常大鼠的(70.8±5.5)mm H2O(P＜0.01),移植后7 d降至(82.7±10.7)mm H2O.同种移植组术后5～12 d,移植肝组织中均可见中、重度急性排斥反应病理改变.同系移植者存活时间中位数均＞100 d;同种移植者中,BN对照组和BN实验组受者肝移植后存活时间中位数均为10 d.结论 以Lewis大鼠为供者、肝硬化BN大鼠为受者制备的肝移植模型术后排斥反应的发生率较高,可作为肝移植后排斥反应相关研究的平台.     

CTLA4-Ig对肝细胞移植大鼠免疫耐受的作用及其机制

目的 探讨细胞毒性淋巴细胞相关抗原4融合蛋白(CTLA4-Ig)诱导肝细胞移植大鼠免疫耐受的作用及机制.方法 10%D-氨基半乳糖(D-gal)一次性腹腔注射建立大鼠急性药物性肝衰竭模型;采用肝脏原位灌注法分离纯化肝细胞,经脾脏移植后随机分为两组.实验组腹腔一次性注射CTLA4-Ig,对照组不予处理.两组均分别于术后第1、3、5、7天采外周血观察白细胞介素(IL)-2、肿瘤坏死因子(TNF)及肝功能变化;术后1周测两组大鼠外周血T细胞亚群,处死大鼠后取脾脏苏木素-伊红(HE)染色.结果 实验组谷丙转氨酶(ALT)、血清总胆红素(TBil)于术后第7天分别为(6.5±7.3)IU/ml、(5.1±1.6)mmol/L,低于对照组.术后治疗组IL-2含量明显下降,第7天达到(1. 3138±0.8508)ng/L,两组差异有统计学意义(P＜0.05);术后TNF含量两组之间差异无统计学差异(P＞0.05).外周血CD4+T细胞、CD4+/CD8+T细胞实验组分别为(37.3±7.2)%、(1.5±0.1)%,低于对照组(P＜0.05),CD8+T细胞两组差异无统计学意义(P＞0.05).术后第7天治疗组脾内仍可见肝细胞或肝细胞团,对照组见大量淋巴细胞浸润,但很少见肝细胞.结论 CTLA4-Ig能诱导经脾同种异体肝细胞移植大鼠免疫耐受,使急性肝衰大鼠肝功能得到改善.可能是抑制T淋巴细胞亚群,且主要是抑制CD4+T细胞,使CD4+/CD8+T细胞比值下降;抑制IL-2的分泌.

Abstract：

Objective To investigate the immunosuppressive effect of cytotoxic T Iymphocyte associated antigen 4 Ig fusion protein (CTLA4-Ig) in rat allograft hepatocyte transplantation model and the mechanisms. Methods Acute liver failure (ALF) model was established by intraperitoneal injection of 10% D-gal solution to SD rates. Collagenase perfusion was performed on SD rats to separate liver cells. SD rats with ALF were subjected to intrasplenic hepatocyte transplantation and randomly divided into two groups. The experimental group received intraperitoneal injection of CTLA4-Ig. The concentrations of interleukin (IL)-2 and tumor necrosis factor (TNF), liver function and histologicy were observed at the 1st,3rd, 5th, 7th day after operation and the T lymphocyte subsets were detected by using immunohistochemistry at the 7th day after operation. Results The levels of ALT and TBil were respectively (6. 5 ±7.3) IU/ml and (5.1 ± 1.6) mmol/L at the 7th day after operation and significantly decreased after injection of CTLA4-Ig ( P ＜ 0. 01 ). IL-2 concentration in the experimental group was ( 1.3138 ± 0. 8508 ) ng/L at the 7th day after operation and significantly decreased (P ＜0. 05). TNF had no significant difference between two groups after operation ( P ＞ 0. 05 ). T lymphocyte subsets, mainly CD4 + , in the experimental group was significantly decreased as compared with control group ( P ＜ 0. 05 ), so did the CD4 +/CD8 +. Histological changes: At the 7th day after operation, there were some hepatocytes in the spleen of the experimental group. But in the control group, the changes in the spleen were characterized by severe lymphocyte infiltration. There were no hepatocytes both groups. Conclusion CTLA4-Ig can induce rat allogeneic hepatocytes intrasplenic transplantation immune tolerance. It may improve the liver function of rats with ALF.CTLA4-Ig can decrease T lymphocyte subsets, mainly CD4 + and concentrations of IL-2.