抗日本血吸虫碱性磷酸酶单克隆抗体的研究(简报)

日本血吸虫成虫具有明显的碱性磷酸酶活力。研究该酶在血吸虫生命过程中所起的作用将可能为寻找新药、防治血吸虫病提供线索。本研究从成虫体内分离提取了碱性磷酸酶,并用它免疫BALB/C小鼠,然后取免疫小鼠的脾淋巴细胞与缺陷型小鼠骨髓瘤细胞NSI进行杂交。以 HAT培养基选择培养杂交瘤细胞。10天后采用间接法免疫荧光抗体试验测定杂交瘤细胞培养上清。挑选阳性孔的杂交瘤细胞作2～3次克隆化培养,获得了抗血吸虫的单克隆杂交细胞株。单克隆杂交瘤细胞的培养液及单克隆杂交瘤细胞接种同种小鼠所取得的腹水,经成虫冰     

日本血吸虫McAb的初步研究

用BALB/C小鼠骨髓瘤细胞X63-Ag8-653与感染日本血吸虫尾蚴20条后25～80天的同种小鼠脾细胞进行细胞杂交,获得了能产生特异性抗体的杂交瘤;杂交的成功率达到50％～100％。实验表明,童虫或成虫冰冻切片的间接荧光抗体试验是筛选杂交瘤分泌的特异抗体的简易而有效的方法。童虫的荧光反应类型不明显;但在成虫切片上,发现至少有3种不同     

人白细胞介素2单克隆抗体的制备

作者采用自行制备ＩＬ─２纯品及免疫ＢＡＬＢ／Ｌ小鼠，将脾细胞与ＮＳ─１细胞融合，获得具有分泌稳定性抗体的高效价杂交瘤细胞株，细胞连续传４２代仍稳定分泌单克隆杭体，该抗体与ＩＬ─２有特异吸附，杂交瘤核型呈双亲染色体特点。连续传代未见变异。     

BXSB小鼠胸腺内单克隆免疫球蛋白分泌细胞的分离与鉴定

用杂交瘤技术从成年雄性BXSB小鼠胸腺细胞随机制备出1株分泌Ig的单克隆杂交瘤细胞,并对它们所产生的单克隆Ig类别及对自身抗原的反应性进行了鉴定。结果表明,杂交瘤细胞产生的单克隆Ig中,IgG类别的多于IgM类别,显示BXSB小鼠胸腺内产生各类Ig的浆细胞比例与正常小鼠胸腺内以产生IgM的浆细胞为主的情况不同。此外,BXSB小鼠胸腺内浆细胞产生的Ig仅少数为自身抗体。     

用杂交瘤技术产生对结肠癌表面抗原的单克隆抗体的初步研究

用人结肠癌细胞株L_s174T免疫小鼠,通过杂交瘤技术获得两株单克隆。所产生的抗体均属小鼠IgM(μ,x)。用各种癌细胞株与成纤维细胞株鉴定,对胃肠癌的表原抗原有一定特异性;进一步用免疫萤光组织化     

抗人B型红细胞单克隆杂交瘤细胞株建立

将正常人B型红细胞悬液免疫BALB/C小鼠,取其脾脏细胞与FO骨髓瘤细胞融合,获得能分泌抗B型红细胞的单克隆杂交瘤细胞株。该株能分泌抗B抗体,与B型红细胞发生凝集,对鉴定ABO血型有一定价值。     

分泌抗马来丝虫成虫单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

应用杂交瘤枝术,以小鼠骨髓瘤 SP~z/O 与用马来丝虫成虫免疫成功的BALB/C 小鼠脾细胞融合后,成功地建立了一株名 XM—H_7的杂交瘤细胞。间接免疫荧光试验检测其上清中特异性抗体的存在,用有限稀释法2次克隆化。XM—H_7的核型,染色体为85—104条,40%为92条。细胞生长良好,至今持续培养6个月以上仍不失其分泌特异抗体的效应。     

具有中和功能的抗单体C-反应蛋白单克隆抗体的制备及其初步应用

目的:制备单体C-反应蛋白(monomeric C-reactive protein,mCRP)的单克隆抗体。方法:用合成的人C-反应蛋白末端八肽氨基酸,与牛血清白蛋白偶联后免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0按5∶1的比例融合,间接竞争ELISA法和有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞的筛选;制备腹水抗体;采用Protein G亲和层析法纯化抗体,用间接ELISA和Western blot方法测定抗体特异性,并采用该单抗研究其对mCRP干预的乳大鼠心肌细胞的保护作用。结果:得到1株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,纯化后的单克隆抗体纯度达98%,抗体活性良好,并且该抗体可以降低mCRP导致的心肌细胞TGF-β的表达。结论:成功获得1株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞,并对其初步应用进行了鉴定,并证实其可以中和mCRP引起的心肌细胞的损伤作用。     

BXSB小鼠胸腺内单克隆免疫球蛋白分泌细胞的分离与鉴定

用杂交瘤技术从成年雄性ＢＸＳＢ小鼠胸腺细胞随机制备出４株分泌Ｉｇ的单克隆杂交瘤细胞，并对它们所产生的单克隆Ｉｇ类别及对自身抗原的反应性进行了鉴定。结果表明，杂交瘤细胞产生的单克隆Ｉｇ中，ＩｇＧ类别的多于ＩｇＭ类别，显示ＢＸＳＢ小鼠胸腺内产生各类Ｉｇ的浆细胞比例与正常小鼠胸腺内以产生ＩｇＭ的浆细胞为主的情况不同。此外，ＢＸＳＢ小鼠胸腺内浆细胞产生的Ｉｇ仅不少数自身抗体。     

分泌抗hCG-抗HRP双特异单克隆抗体的二次杂交瘤细胞株E_4和E_7

用分泌抗人绒毛膜促性腺激素(hCG)单克隆抗体的6-巯基鸟嘌呤抗性杂交瘤突变株BAH_1-TG细胞与用辣根过氧化物酶(HRP)免疫的小鼠脾细胞进行二次杂交。二次杂交瘤细胞的培养上清用双抗原夹心放射免疫测定法和双抗原夹心酶联免疫测定法检测抗hCG-抗HRP双特异抗体。经多次克隆和筛选,获得两株分泌抗hCG-抗HRP双特异单克隆抗体的二次杂交瘤株E_4和E_7。     

乙型肝炎表面抗原亚型决定簇“a”单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本研究中用纯化乙型肝炎表面抗原(HBsAg)“adr”免疫Balb/c小鼠的脾细胞与SP 2/0骨髓瘤细胞在PEG作用下融合。以ELISA和RIA法检测抗体,获得9孔抗-HBs阳性的杂交瘤,经过5次有限稀释,建立4株单克隆细胞。选其中一株SH_1D_9杂交瘤细胞进行体外连续传代,接种小鼠腹腔,抗-HBs滴度在组织培养上清液中为1∶10,000,小鼠腹水为1∶50,000。经特异性、稳定性鉴定,证明其抗-HBs对HBsAg具有持续的和良好的亲和性,正常人血清无交叉反应,经亚型及Ig亚类鉴定为抗-HBs“a”亚型决定簇,IgG型单克隆抗体,杂交瘤细胞染色体平均为104个。本文并对HBsAg免疫Balb/c小鼠采取的不同方案及建立单克隆抗体杂交瘤细胞株的实验方法加以讨论。     

人转铁蛋白受体特异性单克隆抗体的研制及其初步鉴定

目的 建立能分泌人转铁蛋白受体(TfR)特异性抗体的杂交瘤细胞株,并对其分泌的抗体进行初步鉴定. 方法 将人肝癌细胞株HepG2分离纯化的TfR蛋白,采用常规法免疫BALB/C小鼠;采用间接ELISA法测定免疫血清抗体效价;采用常规聚乙二醇(PEG)介导法,将免疫小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞株SP2/0融合,用含HAT培养基筛选杂交瘤细胞;采用间接ELISA和Cell-ELISA法筛选TfR抗体阳性的杂交瘤细胞;采用有限稀释法进行克隆和多次亚克隆以建立稳定分泌TfR抗体的杂交瘤细胞株;将杂交瘤细胞注射经石蜡油致敏的小鼠腹腔以产腹水抗体,采用硫酸-辛酸法纯化腹水抗体;采用秋水仙素处理,计数细胞染色体数以进行杂交瘤细胞鉴定;采用免疫荧光染色法和Western blot法初步鉴定抗体与细胞表面或细胞总蛋白中TfR的结合. 结果 提取纯化的人TfR蛋白免疫小鼠获得成功,其1∶5 000稀释的血清抗体光吸收值(A490)是对照小鼠血清(1∶200稀释)的16倍以上;细胞融合率为42.22%,其中TfR抗体阳性孔20个,抗体阳性率为13.16%;抗体阳性孔B6和孔E8中杂交瘤细胞经克隆和亚克隆后建立起稳定分泌抗体的细胞株;B6杂交瘤细胞染色体数量位于56~60条之间,应为B细胞和SP2/0细胞融合而来;腹水抗体染色使HepG2细胞表面出现明亮荧光,并且能使HepG2细胞提取的总蛋白电泳图谱在95 000处出现清晰条带,表明该杂交瘤细胞分泌的抗体能特异性结合TfR蛋白.结论 分泌抗人TfR抗体的小鼠杂交瘤细胞株已被筛选和建立;其分泌的抗体能与HepG2细胞的TfR特异性结合.     

分泌抗体的杂交瘤细胞株的制备

目的应用杂交瘤技术制备出分泌抗肺癌抗体杂交瘤细胞株,为肺癌的早期诊断和免疫治疗提供可能靶点．方法用肺癌细胞株作免疫原免疫健康BALB／C小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,获得分泌高滴度抗肺癌抗体的杂交瘤细胞株,用间接ELISA和检测单抗体的特异性,双抗体夹心法测定免疫球蛋白同种型．结果通过细胞融合,筛选出2株持续分泌抗肺癌抗体的杂交瘤细胞株C5、B8,其分泌的抗体为IgM亚类,κ亚型,并和肺癌细胞发生特异性反应．结论成功完成细胞融合,制备了分泌抗体的杂交瘤细胞株．     

抗人心肌肌凝蛋白轻链Ⅰ单克隆抗体的制备和鉴定

以人心肌肌凝蛋白轻链I免疫Balb/c小鼠,取其脾淋巴细胞与NS-1细胞融合,经过筛选、克隆化和再克隆已获得3-D_3、2-D_9、1-E_(10)和2-E_(10)等4个分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经免疫酶标和放免方法测定抗体工作滴度为1:1万。流动式荧光密度计检测NS-1、小鼠脾和杂交瘤细胞DNA的含量,结果表明杂交瘤细胞的DNA含量相当于NS-1和小鼠脾细胞DNA含量之和。杂文瘤细胞传代半年以上稳定地分泌特异性的单克隆抗体。用两个单抗进行了抗原双决定簇的放免測定,并制备了高效价的小鼠腹水。     

分泌抗白喉类毒秦单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

我们用白喉类毒素免疫小鼠的脾细胞与NS-1小鼠骨髓瘤细胞缸合,获得一株分泌抗白喉类毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。检测此杂交瘤细胞培养上清液中特异性抗体效价:间接血凝法为1:640～1280,ELISA法为1:800～1600。细胞注入同系小鼠可诱生含高效价抗体的腹水(高于培养液1000倍)。用免疫双扩散法鉴定此单克隆抗体属小鼠I。GI亚类。杂交瘤细胞染色体数为86～102。此细胞株经连续传代六个月和在液氮中冻存复苏后仍保持稳定的分泌抗体能力。     

人OX40单克隆抗体的制备、纯化及初步鉴定

目的 应用杂交瘤技术,制备鼠抗人OX40单克隆抗体.方法 以本室纯化的OX40胞外段融合蛋白免疫6～8周龄的雌性BalB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,筛选分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞阳性克隆.用杂交瘤细胞接种小鼠腹腔诱生腹水,腹水经饱和硫酸铵纯化沉淀后用间接ELISA法测定抗体的Ig类别.SDS-PAGE分析抗体的纯化程度,用免疫组化技术鉴定单克隆抗体与表达有OX40分子的组织及细胞特异性结合的情况.结果 获得1株能稳定分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞,细胞株诱生的小鼠腹水纯化后抗体纯度较高,Ig类别为IgG,蛋白浓度为6.129g/L.制备的单抗经淋巴细胞免疫组化及炎性淋巴组织免疫组化技术初步鉴定结果表明,该抗体与OX40单克隆抗体标准品制剂相比具有类同的特异性.结论 成功获得能稳定分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备的单克隆抗体具有较高的纯度和活性.     

粒细胞集落刺激因子及其McAb的研究

利用B细胞杂交瘤技术,用rhG-CSF免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,成功地建立了3株能持续分泌特异抗rhG-CSF McAb的杂交瘤细胞。取其中2D_4-B_4杂交瘤细胞进行染色体数目测定,并将2D_4-B_4瘤细胞注入小鼠腹腔,获得抗体阳性腹水,测定提纯抗体IgG亚型、特异性、稳定性和亲和力,证实该McAb可以和hG-CSF及小鼠G-CSF特异结合。为进一步研究hG-CSF和人工合成G-CSF打下良好的基础。     

抗食管癌单克隆抗体及食管癌细胞膜抗原的初步研究

以食管癌“109”细胞株免疫 BALB/C 小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞株SP2/0 融合,经三次克隆化,获得稳定分泌抗食管癌“109”细胞株单克隆抗体的杂交瘤细胞系2GF3。其分泌的单克隆2GF3抗体与外周血淋巴组胞、ABO 型红细胞、癌胚抗原以及3/5胃癌细胞株无反应,与2/5胃癌细胞株有弱(+)反应。与2GF3抗体对应的抗原为2GF3抗原,荧光标记检测表明后者主要表达在细胞膜上。用去污剂提取膜抗原进行电泳后转移至硝酸纤维素膜上进行酶标分析,2GF3抗原是分子量53KD 的糖蛋白,在还原及非还原条件下均显示相同的区带。它与抗癌胚抗原抗体及抗甲胎蛋白抗体均无反应,表明它不同于癌胚抗原和甲胎蛋白。     

抗斯氏肺吸虫单克隆抗体的制备和检定

作者用斯氏肺吸虫成虫抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞杂交,获得成功。融合率64％,抗体阳性率19％。经克隆化获得分泌抗免疫用抗原的单克隆抗体的杂交瘤细胞5株。对其中2E_5诱生的腹水进行了检测,显示腹水中含高效价特异性单克隆抗体;PAGE揭示一明显特异区带;并经检定,属IgG_1亚类。     

分泌抗人C反应蛋白单克隆抗体杂交瘤的建立

应用C反应蛋白免疫的Balb/c小鼠脾细胞与P_3V_1C_2小鼠骨髓瘤细胞在聚乙二醇4000作用下融合,并经克隆后获得了3株抗人CRPMcAbs的杂交瘤细胞抗CRPI—2—3—1、2—3—4、2—6—1.用ELISA法测定培养的其杂交瘤细胞上清,及腹水,含有较高滴度的抗体含量,用琼脂免疫双扩散法证明它仅与人CRP及CRP阳性血清出现透明沉淀反应.用山羊抗鼠Ig亚类血清鉴定,其McAbs均属小鼠1gG.