白三烯B4受体1拮抗剂U75302对脓毒症小鼠细胞免疫与炎症反应的影响

目的 观察白三烯B4受体1（leukotriene B4 receptor 1,LTB4-BLT1）拮抗剂U75302对脓毒症小鼠免疫功能的影响,探讨阻断白三烯B4受体1在脓毒症治疗中的意义。方法 采用盲肠结扎穿孔术（cecal ligation and puncture,CLP）致脓毒症小鼠模型,将18只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组（n=6）、 CLP组（n=6）、CLP+腹腔注射U75302组（n=6）。手术后24 h检测3组小鼠外周血中肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）及白介素10（interleukin-10,IL-10）的水平,利用流式细胞术检测3组小鼠腹腔灌洗液中Gr-1⁺细胞的计数以及胸腺T淋巴细胞的凋亡情况。结果 与CLP组相比,CLP+腹腔注射U75302组小鼠外周血中的TNF-α水平降低约43%（P<0.05）,IL-10水平升高约88%（P<0.05）,腹腔Gr-1⁺细胞计数降低（P<0.05）,胸腺T淋巴细胞凋亡比例减少（P<0.01）。结论 LTB4-BLT1拮抗剂U75302可降低外周血TNF-α水平、提高IL-10水平、改善细胞免疫,可能干预脓毒症的炎症反应。     

白三烯B4受体1拮抗剂U75302对脓毒症小鼠细胞免疫与炎症反应的影响

目的 观察白三烯B4受体1（leukotriene B4 receptor 1,LTB4-BLT1）拮抗剂U75302对脓毒症小鼠免疫功能的影响,探讨阻断白三烯B4受体1在脓毒症治疗中的意义。方法 采用盲肠结扎穿孔术（cecal ligation and puncture,CLP）致脓毒症小鼠模型,将18只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组（n=6）、 CLP组（n=6）、CLP+腹腔注射U75302组（n=6）。手术后24 h检测3组小鼠外周血中肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）及白介素10（interleukin-10,IL-10）的水平,利用流式细胞术检测3组小鼠腹腔灌洗液中Gr-1⁺细胞的计数以及胸腺T淋巴细胞的凋亡情况。结果 与CLP组相比,CLP+腹腔注射U75302组小鼠外周血中的TNF-α水平降低约43%（P<0.05）,IL-10水平升高约88%（P<0.05）,腹腔Gr-1⁺细胞计数降低（P<0.05）,胸腺T淋巴细胞凋亡比例减少（P<0.01）。结论 LTB4-BLT1拮抗剂U75302可降低外周血TNF-α水平、提高IL-10水平、改善细胞免疫,可能干预脓毒症的炎症反应。     

针刺人中穴对MCAO大鼠中枢神经系统神经干细胞增殖影响的研究

[目的] 探讨针刺人中穴治疗缺血性脑卒中的神经发生机制。[方法] 用BrdU⁺/nestin⁺免疫荧光双标和蛋白免疫印迹法观察针刺对线栓法大鼠大脑中动脉阻断实验模型（MCAO）大鼠大脑新生神经细胞及皮质、海马、纹状体nestin 蛋白表达量的变化的影响。[结果] 针刺组MCAO 大鼠BdrU⁺、nestin⁺和BrdU⁺/nestin⁺细胞数均高于正常组、假手术组和模型组（P<0.05）,模型组高于正常组和假手术组（P<0.05）;针刺组nestin在海马和皮质的表达量高于其他组别（P<0.05）。[结论] 缺血缺氧能引起MCAO大鼠脑神经干细胞的增殖,而针刺人中穴能增强神经干细胞增殖作用,促进大脑功能的修复。     

支气管哮喘患者外周血CD3+T细胞趋化因子受体表达的研究

目的 探讨支气管哮喘患者外周血CD3⁺T细胞趋化因子受体表达情况。方法 选取2017年1月—2017年12月山东省立第三医院就诊的40例支气管哮喘患者及同期该院体检的27例健康志愿者，采用流式细胞仪检测所有受试者外周血CD3⁺CD8⁺和CD3⁺CD8^-T细胞上趋化因子受体CXCR1、CXCR2、CXCR3、CCR3、CCR4、CCR5、CCR7、CCR8的表达。比较轻、中度支气管哮喘患者、重度支气管哮喘患者及健康志愿者，以及不同剂量糖皮质激素使用者趋化因子受体表达的差异。结果 轻、中度支气管哮喘组、重度支气管哮喘组、对照组受试者CD3⁺CD8⁺T细胞上CXCR1、CCR7阳性表达率差异有统计学意义（P <0.05）。重度支气管哮喘组CD3⁺CD8⁺T细胞上CXCR1阳性表达率低于轻、中度支气管哮喘组和对照组（P <0.05）。重度支气管哮喘组CD3⁺CD8⁺T细胞上CCR7阳性表达率低于对照组（P <0.05）。轻、中度支气管哮喘组、重度支气管哮喘组、对照组受试者CD3⁺CD8^-T细胞上CXCR1、CXCR2阳性表达率差异有统计学意义（P <0.05）。重度支气管哮喘组CD3⁺CD8^-T细胞上CXCR1、CXCR2阳性表达率低于轻、中度支气管哮喘组和对照组（P <0.05）。3组吸入不同剂量糖皮质激素患者CD3⁺CD8⁺和CD3⁺CD8^-T细胞上CXCR1的阳性表达率差异有统计学意义（P <0.05）。每天吸入>800 μg/g布地奈德组的患者CD3⁺CD8⁺和CD3⁺CD8^-T细胞上CXCR1阳性表达率低于每天吸入< 400 μg/g布地奈德组的患者（P <0.05）。结论 重度支气管哮喘组患者外周血CD3⁺T细胞部分趋化因子表达减少，轻、中度哮喘患者Th1和Th2相关的趋化因子受体参与免疫应答，而重度支气管哮喘患者Th1/Th2应答下降。     

HIF-1信号通路在介导DMOG动员MSCs中的作用

目的探讨HIF-1及下游SDF-1α/CXCR4和VEGF/VEGFR通路在介导DMOG动员MSCs中的作用机制。方法将雄性SD大鼠,随机分为五组:生理盐水对照组、DMOG组、YC-1组、AMD3100组、SU5416组。分别采用CFU-F法与流式细胞术检测大鼠骨髓和外周血中MSCs的数量;ELISA法检测骨髓上清及外周血清中SDF-1α及VEGF蛋白浓度;Western blotting法检测骨髓细胞中HIF-1α、SDF-1α及VEGF蛋白表达水平。结果同NS组比较,DMOG组CFU-Fs数量显著增加,且CD45-CD90+细胞群比例增加(P<0.05);同DMOG组比较,YC-1组、AMD3100组、SU5416组CFU-Fs数量均显著减少,且CD45-CD90+细胞群比例降低(P<0.05);同DMOG组比较,YC-1组HIF-1α浓度及蛋白表达显著降低(P<0.05),AMD3100组SDF-1α浓度及蛋白表达显著降低(P<0.05),SU5416组VEGF浓度及蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论 DMOG可能通过上调HIF-1α,从而调控其下游SDF-1α/CXCR4通路与VEGF/VEGFR通路诱导MSCs的动员。     

脾气虚大鼠肝组织三磷酸腺苷酶活性和CaMKII通路CaM、CaMKII蛋白表达的变化

目的 观察脾气虚大鼠肝组织三磷酸腺苷酶活性和CaMKII通路关键分子[Ca²⁺]i 以及CaM、CaMK II、p-CaMK II蛋白表达水平的变化。方法 受试动物随机分为4组,即空白对照组,脾气虚模型7 d、14 d、21 d组,每组12只。除空白对照组外,其余受试动物采用复合法(苦寒破气法、游泳力竭法及饥饱失常法)成功建立脾气虚证大鼠模型,在观测各组大鼠一般生存状态和肝组织ATP酶活性的基础上,采用激光共聚焦技术检测肝组织细胞内[Ca²⁺]i浓度,蛋白免疫印迹技术检测肝组织CaM、CaMK II和p-CaMK II的表达变化。结果 与空白组比较,脾气虚大鼠随着造模时间的延长,一般生存状况渐差,肝组织Na⁺-K⁺-ATPase和Ca²⁺-Mg²⁺-ATPase活性均降低(P<0.05,P<0.01);肝组织[Ca²⁺]i浓度和CaM、CaMK II、p-CaMK II蛋白表达量显著降低(P<0.01);且脾气虚模型7 d、14 d、21 d组之间比较,以脾气虚21 d组变化更为显著。结论 脾气虚大鼠肝组织Na⁺-K⁺-ATPase、Ca²⁺-Mg²⁺-ATPase活性和[Ca²⁺]i浓度降低,并且CaMK II信号通路关键分子CaM、CaMK II和p-CaMK II蛋白表现为低表达。     

异氟烷预处理对大鼠肝缺血再灌注时脑线粒体钙及线粒体转运通道的影响

目的 通过观察在体大鼠肝部分缺血再灌注损伤后脑线粒体游离钙、线粒体转运通道（mitochondrial permeability transition pore,MPTP）及外周血中S-100β蛋白含量的变化,明确异氟烷预处理对大鼠肝部分缺血再灌注时脑损伤是否具有保护作用及可能的机制。方法 SD大鼠75只随机分成假手术组（S组）;缺血再灌注组（I/R组）：肝缺血60 min,再灌注120 min;异氟烷预处理组（ISO组）：肝I/R前60 min ISO预处理30 min,后用空气洗脱30 min：CsA+ISO组,CsA50 mg/kg 静脉内注射,30 min后同ISO组;CsA组,I/R前30 min CsA50 mg/kg静脉内注射。再灌注24 h迅速断头取前脑,分离线粒体进行线粒体游离钙、MPTP含量检测,各组分别于缺血前及再灌注120 min后抽取静脉血采用双抗体夹心-ELAISA法测定S-100β蛋白含量。结果 I/R组（287.32±26.17）线粒体游离Ca²⁺浓度明显增加,高于S组（198.54±21.02）和ISO组（209.74±29.49）（P< 0.05）;CsA+ISO（267.31±37.52）明显高于ISO组（P< 0.05）;CsA（288.63±23.15）组与I/R组间比较差异无显著意义（P< 0.05）;I/R组（1.73±0.24）的ΔS与S组（2.36±0.35）和ISO组（2.11±0.32）相比明显减少（P< 0.05）,既MPTP大量开放,而后两组的差异无统计学意义（P< 0.05）;I/R组与CsA+ISO组（1.72±0.34）和CsA组（1.77±0.35）△S之间差异无统计学意义（P< 0.05）;CsA+ISO组的ΔS值与ISO组相比明显降低（P< 0.05）。外周血液S-100β蛋白I/R组明显高于S组和ISO组（P< 0.05）;CsA+ISO组与ISO组比较显著升高（P< 0.05）,I/R组,CsA+ISO组和CsA组与缺血前比较明显升高（P< 0.05）,缺血前S-100β蛋白含量五组无显著性差异（P< 0.05）。结论 大鼠肝部分缺血再灌注后对脑组织造成了一定程度损伤,而异氟烷预处理对此损伤具有一定保护作用;其作用的机制可能与异氟烷抑制MPTP开放,降低线粒体游离Ca²⁺浓度,防止了线粒体Ca²⁺超载有关。     

脂多糖干预对大鼠周围神经损伤后瓦勒变性的影响

目的 探讨脂多糖对于大鼠坐骨神经损伤瓦勒变性早期髓鞘碎片清除的影响。 方法 将50只Wistar大鼠随机分成假手术组（10只）,模型组（20只）和脂多糖LPS组（20只）,LPS组及模型组横断大鼠右侧坐骨神经后,行神经外膜端端吻合;假手术组仅游离出坐骨神经,然后关闭切口。LPS组大鼠在神经断端显微注射LPS （2 g/ L） 1 μL,模型组及假手术组大鼠注射同等体积生理盐水。于术后1.5、24 h和7 d 取术侧坐骨神经。实时定量PCR（qRT-PCR）检测坐骨神经中白介素1β（IL-1β）mRNA、单核细胞趋化蛋白-1 （MCP-1） mRNA水平;免疫荧光法检测坐骨神经中CD68⁺巨噬细胞的表达;HE染色观察坐骨神经的病理变化;油红O染色观察坐骨神经脱髓鞘程度;LFB染色观察坐骨神经髓鞘变化;坐骨神经功能指数（SFI）评价大鼠运动功能的恢复情况。结果 实时定量PCR显示,与假手术组相比,术后1.5 h模型组IL-1β mRNA和MCP-1 mRNA的表达均明显升高（P < 0.001,P < 0.001）,与模型组相比,术后1.5 h LPS组IL-1β mRNA和MCP-1mRNA的表达明显升高（P < 0.001,P < 0.001）。术后24 h模型组IL-1β mRNA和MCP-1m RNA的表达均明显升高（P < 0.001,P < 0.001）,与模型组相比,术后24 h LPS组IL-1β mRNA和MCP-1 mRNA的表达明显升高（P < 0.01,P < 0.01）。免疫荧光可见,与模型组相比,术后7 d LPS组中CD68⁺细胞表达显著上调（P < 0.05）。术后7 d坐骨神经HE染色可见,LPS组坐骨神经断端较多炎性细胞浸润,许旺细胞增殖活跃,模型组神经断端炎性细胞和许旺细胞较少。术后7 d坐骨神经ORO染色可见,与模型组相比,LPS组断端远侧脱髓鞘程度较高。术后7 d坐骨神经LFB染色可见,模型组和LPS组坐骨神经断端均出现脱髓鞘反应,但与模型组相比,LPS组神经断端残余髓鞘碎片明显减少（P < 0.05）。SFI显示,与模型组相比,LPS组大鼠在术后10、20、30、40和50 d分别不同程度升高,术后20 d明显增高,差异有显著性（ P < 0.05）。结论 脂多糖通过激活固有免疫系统加快大鼠坐骨周围神经损伤后瓦勒变性早期髓鞘碎片的清除。     

极度低氧条件下基质细胞衍生因子-1α过表达对间充质干细胞迁移的影响

目的 研究极度低氧条件下基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)过表达对间充质干细胞（MSCs）迁移的影响。方法 将来源于两只普通级雄性日本大耳白兔[2周龄,体重（250±30）g]的MSCs分为空白组（不进行干预）,AMD3100组[加入SDF-1α受体（CXCR4）特异性抑制剂AMD3100],SDF-1α腺病毒（Ad-SDF-1α）组（进行AdSDF-1α转染）和Ad-SDF-1α+AMD3100组（进行Ad-SDF-1α转染并添加AMD3100）。四组在极度低氧（1%）条件下培养48 h,通过Transwell实验检测其迁移能力,采用实时荧光定量PCR及Western blot检测迁移信号轴缺氧诱导因子-1(HIF-1α)、血管内皮生长因子（VEGF）、CXCR4的mRNA及蛋白表达情况。结果 MSCs贴壁后为梭形、多角形,呈克隆式生长,Ad-SDF-1α转染后可观察到均一且明亮的绿色荧光。AMD3100组光密度（OD）值低于空白组,Ad-SDF-1α组OD值高于空白组,Ad-SDF-1α+AMD3100组OD值高于AMD3100组且低于Ad-SDF-1α组,差异均有统计学意义（...     

心复康联合骨髓间充质干细胞对心脏干细胞CD31和VEGFR2蛋白表达的影响

[目的] 观察心复康联合骨髓间充质干细胞(BMSC)调节心脏干细胞(CSC)内皮细胞标记物CD31(CD31)和血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)的蛋白表达。[方法] 原代获取BMSC,制备并鉴定心复康含药血清,酶联免疫吸附法(ELISA法)检测心复康对BMSC分泌基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)的影响。组织块贴壁法分离CSC,并行流式细胞分选及免疫荧光鉴定。利用Transwell小室建立细胞共培养体系,实验分为对照组、心复康组、抑制剂组,蛋白质印迹法(Western Blot)分析各组CSC的CD31和VEGFR2蛋白表达情况。[结果] 与另两组相比,心复康组CSC的CD31和VEGFR2蛋白表达显着增高,差异有统计学意义(P<0.05).[结论] BMSC经心复康干预后,可促进CSC的CD31和VEGFR2蛋白表达,提示SDF-1α/CXCR4轴为其作用机制之一。