D-半乳糖诱导小鼠免疫衰老的体外研究

目的建立和评价小鼠体外细胞及器官水平D-半乳糖致免疫衰老体系,探讨D-半乳糖对于免疫衰老的作用机制。方法建立细胞水平的D-Gal作用体系：设置不同浓度的D-Gal处理体外培养的小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞,3H-TdR掺入实验检测增殖活性;建立器官水平的D-Gal作用体系：设置D-Gal注射处理组和对照组进行小鼠胸腺器官培养,检测方法为HE染色法观察组织切片和PI染色流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果D-Gal对于小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞的增殖都有明显抑制作用,并且呈剂量相关效应;胸腺器官培养15 d后,HE染色结果显示：对照组的胸腺皮髓质分界清晰,细胞形态清晰,状态良好。而D-Gal组胸腺皮髓质分界混乱,细胞形态异常;D-Gal处理后,进行器官培养的胸腺3、7、11、15 d的亚二倍体峰的百分率分别为9.19±0.41、21.65±2.68、28.59±0.93、46.36±2.20,较对照组差异显著。结论D-Gal显著抑制了T淋巴细胞的增殖活性,可以诱导细胞免疫功能的衰退,诱导细胞水平的免疫衰老;切片结果表明,胸腺器官培养15 d后,D-Gal组胸腺发生组织退化。另外,胸腺器官培养中,对照组和D-Gal组的细胞凋亡率差异显著,D-Gal组的凋亡率随时间的增加而显著上升,证实D-Gal可在胸腺内诱导细胞的凋亡,破坏胸腺微环境,在体外器官水平诱导免疫衰老。     

D-半乳糖建造老年性聋动物模型

目的研究D-半乳糖建造老年性聋模型的理想方式。方法健康wistar大鼠50只,随机分为5组,即对照组和四个不同剂量D-半乳糖(50、100、200、500mg/kg)建造的老年性聋模型组。观察各组动物行为检测(兴奋性实验)、ABR反应阈、血清中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性、听皮层中的神经元形态和数量。结果各模型组较对照组探究能力明显下降,但紧张度无明显改变。血清中MDA含量和SOD活性与对照组比较有显著性升高(P0.05),但ABR阈值和Ⅰ、Ⅲ波潜伏期仅500mg/kg组显著升高延长,其他模型组与对照组均无显著性差异。并且模型组中仅500mg/kg组听皮层出现明显的神经细胞稀少、肿胀,尼氏小体减少的现象。结论 D-半乳糖(500mg/kg)腹腔注射每天一次持续10周造模是建造老年性聋动物模型的有效方法。     

D-半乳糖致肾虚多尿动物模型研究

[目的]探索D-半乳糖(D-Gal)致肾虚多尿动物模型的合适剂量,为该种模型应用于衰老所致肾虚多尿证的研究提供参考.[方法]将筛选后的SD大鼠随机分为4组,分别为正常对照组,D-半乳糖125、150、175 mg·kg-1·d-1剂量组;采用D-半乳糖连续注射8周,停止注射后继续观察1周,以24 h总尿量及水负荷5h后尿量为直接观测指标,同时采用尿动力仪检测膀胱储尿及排尿功能以探索D-Gal致肾虚多尿动物模型的合适剂量.[结果]从各组大鼠24 h总尿量及水负荷5h后尿量观察,D-Gal 150 mg·kg-1·d-1剂量组增加尿量作用更显著.从尿动力参数观察,D-Gal 150 mg·kg-1·d-1剂量组对大鼠膀胱漏尿点压(BLPP)、腹压漏尿点压(ALPP)、顺应性(BC)、最大膀胱排尿压(MVP)、残余尿量(PVR)、排尿效率(Ev)的影响更显著,且其改变趋势与衰老动物尿动力学的变化相符.[结论]D-Gal 150 mg·kg-1·d-1剂量组在对尿液的生成、膀胱储存及排泄功能的影响方面更符合衰老所致肾虚多尿动物模型的制备.     

D-半乳糖致衰老动物模型的建立及其检测方法

D-半乳糖衰老动物模型是由我国学者龚国清等在1991年构建的。与其它几种衰老动物模型如SAMP系小鼠衰老模型,臭氧损伤衰老模型,去胸腺衰老模型,自然衰老模型等相比,该模型简便易行,价格低廉,结果稳定,因而得到广泛运用。鉴于该模型近年来的运用和发展,且众文献中的检测指标各有侧重,本文拟对该模型构建方法和原理以及检测指标从行为学水平,生化水平,形态学水平,分子生物学水平等方面由浅入深进行综述。     

D-半乳糖诱导衰老动物模型的机制及其在中医药方面的应用

利用D-半乳糖特殊的代谢机制,诱导衰老动物模型是常用的揭示衰老机制的实验工具。造模方法上,D-半乳糖诱导剂量具有靶向器官的选择性,比较合适的诱导剂量是100mg·kg^-1·d^-1;其作用机制与氧化应激损伤、钙稳态失调、线粒体老化、非酶糖基化反应、端粒短缩及端粒酶的活性下降,以及免疫功能减退有关。D-半乳糖诱导衰老的动物模型体现了现代系统生物学的观点,有特定的应用价值,然而对该模型衰老机制的整体研究还不够全面。中医药具有整体治疗的优势,在抗衰老多脏器、多靶点研究方面有积极的作用,因而中药对D-半乳糖诱导衰老治疗作用影响的研究越来越多,占所有报道的2／3;但中医药作用可重复性低,未来应集中于全面合理的实验设计,并应用标准化中药干预模型,以及充分考虑诱导衰老与自然衰老的差异。     

注射D-半乳糖致大鼠衰老效应的评价

目的评价注射D-半乳糖（D—galactose）的致衰老效应。方法30只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型1组和模型2组。每组各10只。模型1组每天皮下注射D一-乳糖50mg／kg：模型2组每天腹腔注射D-半乳糖500mg／kg;对照组每天颈部皮下注射等量（50mg／kg）生理盐水。各组大鼠均连续给药6周。观察各组体重增加比例、胸腺指数、脾指数、超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量。结果与对照组比较,模型1组和模型2组体重增加比例降低,胸腺明显萎缩,胸腺指数降低（P〈0．01）;胸腺组织出现明显病理变化;血清中SOD活性明显下降（P〈0．01）。MDA含量明显升高（P〈0．01）。结论皮下注射和腹腔注射D-半乳糖诱导的衰老效应基本相似。     

铁皮石斛总黄酮对D-半乳糖所致小鼠衰老模型的影响

目的:观察铁皮石斛总黄酮对D-半乳糖所致小鼠衰老模型的影响.方法:将昆明小鼠随机分为空白组,模型组,抗坏血酸(100 mg·kg-1)组,铁皮石斛总黄酮高、低剂量(400 mg·kg-1、200 mg · kg-1)组.空白组除外,其余各组颈背部皮下注射5％的D-半乳糖连续6周,建立小鼠亚急性衰老模型.采用ELISA法...     

阿魏酸钠对D-半乳糖衰老模型小鼠抗氧化活性的研究

目的　探讨阿魏酸钠 (sodiumferulate ,SF)对D -半乳糖诱导衰老模型小鼠抗氧化能力的影响。方法 :D -半乳糖 (15 0mg·kg-1)诱导衰老模型小鼠为实验对象 ,造模同时及造模第 5周始同时ipSF (2 5、 5 0mg·kg-1) ,以体重、免疫器官重量 ,血清、脑SOD ,血清、肝脏MDA ,全血GSH -Px活力和脑MAO含量为指标 ,全面考察SF抗衰老作用。结果 :造模同时注射SF高低剂量组均能显著对抗D -半乳糖所致小鼠血清、肝脏MDA、脑MAO的增加 ,提高血清、脑SOD的活力 ,对抗小鼠体重、胸腺指数下降 ;SF高剂量组显著抑制脾指数降低 ,提高GSH -Px活力。造模第 5周开始同时给药高剂量组显著抑制血清MDA的增加。结论 :SF具有良好的抗氧化能力 ,预防性给药能在一定程度上延缓D -半乳糖引起的小鼠体内的拟衰老变化 ,而治疗性给药抗衰老作用不明显。     

D-半乳糖诱导间充质干细胞衰老的研究

目的 利用D-半乳糖诱导建立间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）体外衰老模型,并探讨其潜在机制。方法 以正常培养的MSCs做对照组,以分别用1、10、100g/L D-半乳糖诱导的MSCs作为处理组,培养48h后,采用免疫蛋白印迹法（Western blot）检测细胞内AKT与mTOR蛋白磷酸化水平以及衰老相关蛋白p16^Ink4a的变化。同时使用β-半乳糖苷酶试剂盒检测MSCs中β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）表达量的变化。最后用AKT抑制剂预处理D-半乳糖诱导组以明确AKT/mTOR信号通路在MSCs衰老中的作用。结果 与对照组相比,10g/L D-半乳糖作用48h后MSCs中β-半乳糖苷酶表达和衰老相关蛋白p16^Ink4a含量明显增加,同时p-AKT与p-mTOR含量也较对照组增加,加入AKT抑制剂后,衰老组β-半乳糖苷酶表达和衰老相关蛋白p16^Ink4a含量皆有所下降。结论 D-半乳糖能成功诱导构建MSCs体外衰老模型,AKT/mTOR信号通路参与了这一过程。     

还少丹对D-半乳糖致衰小鼠的抗衰老作用

目的探讨还少丹对D-半乳糖(Dgalactose,D-gal)诱导的衰老模型小鼠的抗衰老作用。方法采用D-gal建立小鼠衰老模型,用还少丹水煎剂灌胃6周;分光光度法检测小鼠脑、肝脏组织谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxidase dismutase,SOD)活性;观察小鼠肝脏、脾脏指数的改变。结果衰老模型组小鼠肝脏指数、脾脏指数以及脑和肝脏组织的SOD、GSH-Px活性均明显降低。还少丹能显著提高衰老模型小鼠的肝脏指数和脾脏指数;显著升高脑和肝组织的SOD、GSH-Px活性。结论还少丹的抗衰老作用与其影响器官指数、升高GSH-Px和SOD活性有关,其作用机制可能通过清除体内自由基,提高免疫功能以实现延缓衰老的进程。     

促卵泡生成素、黄体生成素和胰岛素对多囊卵巢病人颗粒细胞甾体激素分泌的影响

目的研究在促卵泡生成素（ＦＳＨ）、促黄体生成素（ＬＨ）和胰岛素（ＩＮＳ）刺激作用下多囊卵巢综合症（ＰＣＯＳ）病人与正常卵巢的颗粒细胞甾体激素产生的异同。方法对１８例月经周期正常妇女卵泡期的３３个卵泡和８例ＰＣＯＳ的１００个卵泡的颗粒细胞行体外培养，利用放射免疫法测定培养液中的甾体激素水平，比较了两组颗粒细胞在ＦＳＨ、ＬＨ和ＩＮＳ刺激作用下雌二醇（Ｅ２）和孕酮（Ｐ）的产生。结果ＰＣＯＳ病人的颗粒细胞在基础状态下，ＦＳＨ和ＩＮＳ刺激作用下Ｅ２产生量明显高于对照组（Ｐ＜００５～００１），在ＦＳＨ、ＬＨ和ＩＮＳ刺激作用下ＰＣＯＳ组产生的Ｐ量明显高于对照组（Ｐ＜００５～００１）；ＩＮＳ能明显的增强ＦＳＨ和ＬＨ对颗粒细胞的刺激作用；外周胰岛素拮抗的ＰＣＯＳ病人的颗粒细胞对ＩＮＳ刺激仍然敏感。结论ＰＣＯＳ病人的颗粒细胞甾体激素合成酶在体内时可能已被活化，ＰＣＯＳ病人的高ＩＮＳ和高ＬＨ血症可能起关键作用     

多囊卵巢综合征的遗传学研究进展

多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）不仅仅属于生殖系统疾病,同时被认为是一种累及全身、危害女性终生健康的内分泌代谢性疾病。因此,对PCOS的认识已远远超出了生殖健康的范畴。本文综述PCOS的分子遗传学和表观遗传学方面的研究及其现阶段遇到的问题和未来的发展,为其治疗提供依据。     

多囊卵巢综合征患者甲状腺激素研究

目的探讨甲状腺激素在多囊卵巢综合征（PCOS）患者中的分布情况。方法112例育龄期PCOS患者作为观察组,100例健康育龄期女性作为对照组,比较两组患者甲状腺激素（TSH、T3、T4、FT3、FT4）的分布差异,同时根据有无甲状腺功能异常将观察组分为甲减组和非甲减组,比较两组患者PCOS主要症状发生情况。同时甲状腺激素与PCOS的主要症状指标进行线性回归。结果观察组中43．8％（49／112）的患者伴有甲状腺功能减退,对照组13．O％（13／100）的患者伴有甲状腺功能减退,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。观察组TSH、T3、T4、FT3、Fr4水平均明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。伴甲减的PCOS患者中伴高雄激素血症、高胰岛素血症、肥胖、月经紊乱者比例分别是65．3％、71．4％、42．9％、53．1％,均明显高于非甲减组（P〈0．05）。线性回归分析结果显示：TSH、T4、FT4与PCOS患者的T呈正相关（r=0．612、0．473、0．581,P〈0．05）,TSH、T4、FT4与PCOS患者的FINS呈正相关（r=0．449、0．352、0．533,P〈0．05）。结论PCOS患者伴有明显的甲状腺激素分泌失常,甲状腺激素与多囊卵巢综合征之间有着密切的关系。     

多囊卵巢综合征雄激素的变化

对１２０例多囊卵巢综合征（ＰＣＯＳ）患者测定血清中睾酮（Ｔ），雄烯二酮（Ａ），硫酸去氢表雄酮（ＤＨＥＡＳ）及１７α－羟孕酮（１７α－ＯＨＰ）含量，并与对照组相比较，观察ＰＣＯＳ患者几种雄激素水平的变化及其间的相互关系，结果显示：ＰＣＯＳ患者血清Ｔ，Ａ，ＤＨＥＡＳ值均明显高于正常组，且在ＬＨ／ＦＳＨ≥的ＰＣＯＳ组中表现更为明显，ＰＣＯＳ患者中５５．５％有Ｔ高于正常范围，３３．３％有Ａ的异常，２４．２     

血清双酚A水平与多囊卵巢综合征相关性的初步研究

采集43例多囊卵巢综合征（PCOS）患者与37例正常女性的血清,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测双酚A的含量.PCOS组血清双酚A的含量明显高于正常对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;双酚A含量与肥胖和基础黄体生成素均呈正相关（P ＜0.05）;PCOS组中高雄激素组与非高雄激素组之间,双酚A含量差异无统计学意义;胰岛素抵抗组（PCOS-IR）与非胰岛素抵抗组（PCOS-NIR）之间,双酚A含量差异无统计学意义,但PCOS-IR稍低于PCOS-NIR.双酚A在PCOS患者中含量高,其可能与PCOS的肥胖和基础黄体生成素相关.     

维生素D与多囊卵巢综合征并超重患者的相关性研究

目的研究多囊卵巢综合征（PCOS）患者血清维生素D浓度同内分泌紊乱的相互关系。方法选取我院78例PCOS患者作为病例组,另选20例健康育龄期妇女作为对照组,计算体重指数（BMI）,测定血清睾酮（T）、雌二醇（E2）、LH、FSH及血清25-（OH）D3的浓度,并进行OGTT和胰岛素释放试验,计算QUICKI指数。结果病例组25-（OH）D3浓度与BMI、T、LH/FSH呈一定的负相关,与QUICKI值呈正相关。结论维生素D缺乏与PCOS内分泌紊乱密切相关,且维生素D的紊乱可能同时与患者肥胖具有一定的相关性。     

多囊卵巢综合征高雄激素血症特性研究

目的 探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者多项雄激素检测指标的意义及各生化参数间的相关性.方法 按ESHRE/ASRM诊断标准,选择40例PCOS为研究组,研究组依据体重指数分为肥胖组和非肥胖组,胰岛素敏感指数分为胰岛素抵抗和非胰岛素抵抗,40例正常育龄妇女为对照组,检测FSH、LH、PRL、E2、T、A4、DHEAS、FG、FIN、SHBG等指标,计算Homa-IR、ISI、FAI.结果 ①研究组中LH、LH/FSH、T、A4、FAI、FIN,Homa-IR均较对照组高,FSH、SHBG、ISI均较对照组低,P<0.05.两组间值FG、PRL、E2、DHEAS比较,P>0.05.②两组中T、FAI、A4值增高例数比较,P>0.05,DHEAS增高例数比较P<0.05.③多毛组和无多毛组T、FAI、A4值比较差异有统计学意义,P<0.05.④PCOS肥胖组与非肥胖组T、A4、DHEAS比较,P<0.05;PCOS肥胖组的FAI、Homa-IR比非肥胖组高;PCOS肥胖组的SHBG、ISI、LH/FSH明显低于非肥胖组.⑤高雄激素组胰岛素抵抗例数高于低雄激素组.⑥A4、DHEAS在PCOS胰岛素抵抗组和非胰岛素抵抗组间比较,P<0.05,FAI、T在胰岛素抵抗组较非胰岛素抵抗组高.⑦PCOS组FAI与BMI、Homa-IR统计值呈正相关,BMI与LH/FSH统计值呈负相关.结论 FAI比T、A4、DHEAS诊断PCOS敏感性更高.肥胖型PCOS患者较非肥胖型PCOS患者存在更严重的内分泌及代谢紊乱.高雄激素血症与胰岛素抵抗密切相关.     

多囊卵巢综合征性激素变化与认知功能的临床观察

目的:研究多囊卵巢综合征(PCOS)患者认知功能的变化,并探讨其与雄激素的关系. 方法:选择PCOS患者(PCOS组)及健康自愿者(对照组)各25例,放射免疫测定其血浆睾酮(T)、硫酸脱氢表雄酮(DHEAS)、性激素结合蛋白(SHBG)、雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH). 认知功能测定包括词语学习及延迟回忆、言语流畅性、符号数字替代模式、连线测验A、数字广度和积木测验. 结果:PCOS组患者血中T、 LH、 SHBG 与对照组比较差异有显著性统计学意义(P＜0.01);其动物言语流畅性测验和连线测验A较对照组显著性下降(P＜0.05). 结论:PCOS患者存在认知功能损害,这可能与其血中雄激素增高有关.     

多囊卵巢综合征患者代谢综合征的发生及临床特征的相关性

目的：应用2004年中华医学会糖尿病学分会（Chinese Diabetes Society, CDS）代谢综合征的诊断标准探讨多囊性卵巢综合征（polycystic ovary syndrome, PCOS）患者中代谢综合征(metabolic syndrome, MS)的发生及临床特点。方法： 对232例PCOS患者进行检测血脂、75 g葡萄糖耐量（oral glucose tolerance test, OGTT）及胰岛素释放实验;应用生化法检测血清中总胆固醇（total cholesterol, TC）、甘油三酯（triglycerides, TG）、低密度脂蛋白-胆固醇（low density lipoprotein cholesterol, LDL-C）及高密度脂蛋白 胆固醇（high density lipoprotein cholesterol, HDL-C）含量;应用酶氧化方法检测空腹及餐后1 h和2 h血糖含量;应用化学发光方法检测空腹及餐后1 h和2 h胰岛素含量。用SPSS 10.0软件对结果进行统计学分析。结果：PCOS患者中MS的发生率为31.9%（74/232）、高血糖发生率为30.6%(71/232)、高血压发生率为5.6%(13/232)、肥胖的发生率以及血脂代谢紊乱的发生率均为48.3%(112/232)。肥胖PCOS患者中MS的发生率及所有代谢异常参数的发生率均明显高于非肥胖者;具有MS的PCOS患者中所有代谢异常参数均高于不具有MS的患者。结论：本研究结果可能提示,根据CDS诊断标准,PCOS患者中MS的发生率低于欧美国家,与亚洲一些国家基本相似;随着年龄及体重指数（body mass index, BMI）的增加,MS的发生率明显增加。     

多囊卵巢综合征的病因病理

多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是临床常见难治性妇科疾病。近年来临床上PCOS的发病率逐渐上升。PCOS病因繁多,病理生理机制复杂,由此所表现出来的临床症状及生化特征已超出妇科内分泌范畴,不仅涉及月经、生育问题,还包括远期代谢并发症、甚至恶性肿瘤。所以,深入了解并掌握其病因、病理生理机制对PCOS的预防及诊治是关键。