过表达CD82对植入期小鼠子宫内膜整合素αV、β3、E-cadherin和β-catenin表达的影响

目的 探讨CD82对着床窗口期小鼠子宫内膜上皮细胞内整合素αV、β3、E-cadherin以及β-catenin蛋白表达的影响. 方法 将构建的CD82腺病毒转染原代培养的小鼠子宫内膜上皮细胞.检测妊娠小鼠子宫内膜上皮细胞转染CD82腺病毒后,细胞内整合素αV、β3、E-cadherin和β-catenin的表达变化情况.结果 提取的上皮细胞纯度为（93.2±0.6）%.构建的CD82腺病毒转染效率达到（92.0±4.5）%,转染原代培养的小鼠子宫内膜上皮细胞24 h后,RT-PCR检测发现CD82基因表达明显升高.转染48 h后,Western blot检测CD82蛋白水平明显升高.免疫细胞化学检测妊娠第4天的小鼠子宫内膜上皮细胞转染CD82腺病毒后,整合素αV、β3以及β-catenin的表达较未转染组均有明显上升（P<0.05）,但E-cadherin的表达量无明显变化（P>0.05）.结论 胚胎植入前,CD82可能影响小鼠子宫内膜上皮细胞内整合素αV、β3和β-catenin的蛋白表达.     

重组腺病毒CD82/KAI1对小鼠子宫基质细胞内α5、β3、MMP-9、E-cadherin和β-catenin蛋白表达的影响

目的 研究CD82/KAI1对着床窗口期小鼠子宫基质细胞内整合素α5、β3、MMP-9、E-cadherin和β-catenin蛋白表达的影响.方法 采用基因工程技术,构建CD82/KAI1腺病毒;用免疫细胞化学技术观察妊娠小鼠子宫基质细胞感染CD82/KAI1腺病毒后,细胞内α、β3、MMP-9、E-cadherin和β-catenin的表达变化情况.结果 ①构建的小鼠重组腺病毒的滴度达到6.5×1012pfu/ml,感染原代培养的小鼠子宫基质细胞48 h后,CD82/KAI1蛋白有明显表达.②妊娠4 d的小鼠子宫基质细胞中E-cadberin、β-catenin、α5、MMP-9均有表达,没有检测到β3的表达;对照组未妊娠小鼠细胞中均没有检测到E-cadherin、β-catenin、α5、MMP-9和β3的表达.③与导空腺病毒组相比,妊娠4 d的小鼠子宫基质细胞感染CD82/KAI1腺病毒后,β-catenin和MMP-9表达显著上升(P<0.05),α5表达显著下降(P<0.05),E-cadherin的表达量没有显著变化(P>0.05),未检测到β3的表达.结论 成功构建含小鼠CD82/KAI1全基因的重组腺病毒.胚胎植入前小鼠子宫基质细胞内整合素α5、MMP-9、E-cadherin和β-catenin的表达可能受CD82/KAI1的影响.     

整合素β3反义寡核苷酸抗小鼠妊娠的作用

目的探讨整合素β3反义寡核苷酸(ASODN)活体转染假孕小鼠子宫内膜抗早孕的可能性。方法将整合素β3反义寡核苷酸注入假孕1d小鼠子宫,同时同侧输卵管植入2细胞期受精卵10枚,小鼠正常饲养,5d天取小鼠子宫内膜进行Western Blotting检测整合素β3蛋白表达情况;19d进行小鼠子代出生率评估。结果Western blotting检测5d小鼠子宫内膜整合素β3蛋白强表达,10pmol整合素岛反义寡核苷酸转染假孕小鼠子宫内膜后5d小鼠子宫内膜整合素β3蛋白减弱表达,100pmol整合素β3反义寡核苷酸转染时弱表达,单纯脂质体轻度影响其表达;19d进行小鼠子代出生率评估,受孕鼠转染整合素β3反义寡核苷酸后子代小鼠出生抑制率为85％。结论整合素β3反义寡核苷酸可能整合到假孕小鼠子宫内膜抑制其蛋白表达,阻止胚胎着床。由于例数较少,其整合素β3反义寡核苷酸后抑制子代小鼠出生率需进一步研究。     

整合素β3反义寡核苷酸抗小鼠妊娠的作用

目的：探讨整合素β3反义寡核苷酸(ASODN)活体转染假孕小鼠子宫内膜抗早孕的可能性。方法：将整合素β3反义寡核苷酸注入假孕1d小鼠子宫,同时同侧输卵管植入2细胞期受精卯10枚,小鼠正常饲养,5d天取小鼠子宫内膜进行Western Blotting检测整合素β3蛋白表达情况;19d进行小鼠子代出生率评估。结果：①Western Blotting检测5d天小鼠子宫内膜整合索艮蛋白强表达,10pmol整合素β3反义寡核苷酸转染假孕小鼠子宫内膜后5d天小鼠子宫内膜整合素β3蛋白减弱表达,100pmol整合素β3反义寡核苷酸转染时弱表达,单纯脂质体轻度影响其表达;②19d进行小鼠子代出生率评估,受孕鼠转染整合素β3反义寡核苷酸后子代小鼠出生抑制率为85％。结论：整合素陆反义寡核苷酸可能整合到假孕小鼠子宫内膜抑制其蛋白表达,阻止胚胎着床。由于例数较少,其整合素β3反义寡核苷酸后抑制子代小鼠出生率需进一步研究。     

牛体内胚胎体外诱导其子宫内膜 上皮细胞整合素αvβ3基因差异表达的研究

【摘要】 目的 通过利用牛体内胚胎与其子宫内膜上皮细胞体外共培养的方式，探究共培养前、后子宫内膜上皮细胞中整合素αv，β3基因差异表达的变化,为今后建立快捷有效的牛子宫容受态预判方法提供参考。方法 将体内冲出的牛囊胚与原代培养并传代纯化至第5代的牛子宫内膜上皮细胞进行24h体外共培养，利用RT-PCR技术对共培养前、后的子宫内膜上皮细胞进行αvβ3基因的表达检测。结果 RT-PCR检测结果显示，共培养前、后均有整合素αv，β3的表达；共培养I组(未孵化囊胚组)，其共培养后整合素αv，β3的表达变化与未共培养对照组二者之间差异不显著（P＞0.05）；共培养II,III组为孵化囊胚，其共培养后整合素αv，β3的表达显著高于未共培养组和共培养I组（P < 0.05）。结论 牛体内孵化囊胚体外诱导其子宫内膜上皮细胞表达整合素的效果明显优于早期囊胚；整合素αvβ3具有作为牛子宫容受态体外检测标志的潜力。     

调经助孕胶囊对促排卵周期小鼠子宫内膜αvβ3、MMP9及TIMP1表达的影响

目的:探讨调经助孕胶囊对促排卵周期小鼠子宫内膜整合素αvβ3、基质金属蛋白酶(MMP-9)及其抑制物(TIMP-1)表达的影响。方法:60只8～9 w龄昆明种小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、实验组各20只。给予相应药物灌胃10 d后,造模,雌雄合笼。于妊娠第5天获取子宫内膜,检测小鼠子宫内膜整合素αvβ3蛋白表达及MMP9/TIMP1 mRNA表达。结果:模型对照组小鼠着床期子宫内膜MMP9及TIMP1的表达低于空白对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。实验组小鼠着床期子宫内膜MMP9、TIMP1及其比值均高于模型对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。模型对照组小鼠着床期子宫内膜整合素αvβ3表达明显低于空白对照组,差异具有统计学意义(P0.05);实验组小鼠着床期子宫内膜αvβ3表达明显高于模型对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:促排卵可导致着床期子宫内膜MMP9及TIMP1mRNA表达下降,影响MMP9/TIMP1比值,整合素αvβ3蛋白表达下降,可能是促排卵影响子宫内膜容受性的机制之一。调经助孕胶囊可增加促排卵周期着床期小鼠子宫内膜整合素αvβ3蛋白表达,MMP9、TIMP1 mRNA表达,调节MMP9/TIMP1平衡。     

整合素αv和β3在小鼠胚胎着床中的作用

目的观察整合素亚单位αv和β3在小鼠不同时期子宫内膜和孕早期人子宫内膜中的表达,探讨整合素αv和β3在胚胎着床中的作用。方法取小鼠月经周期和妊娠1～4.5 d的子宫及孕早期经人工流产得到的人子宫内膜,用免疫组化ABC法检测整合素αv、β3的表达。在小鼠妊娠第4天,经子宫角注射5μL整合素αv和β3抗体原液(每侧),第16天处死小鼠,统计子宫中胚胎数和卵巢中黄体数,计算着床率。结果整合素αv、β3在小鼠子宫和人孕早期的子宫中均有表达,在小鼠其表达主要分布在子宫内膜上皮和子宫腺上皮,表达强弱不等;而在人子宫中期表达主要分布在蜕膜细胞上;整合素αv和β3抗体子宫角注射后小鼠胚胎着床率明显下降。结论整合素αv和β3可能与受精卵在输卵管中的趋化运动有关,推测其参与胚卵对母体子宫内膜的识别以及胚卵在输卵管中向子宫运动以及维持胚胎的着床状态。     

肝细胞生长因子对体外培养的人子宫内膜细胞增殖的影响

目的观察肝细胞生长因子对体外培养的人子宫内膜腺上皮细胞的影响及其最佳剂量,并检测该因子对子宫内膜细胞白血病抑制因子、整合素αVβ3表达的影响。方法用MTT法检测肝细胞生长因子对腺上皮细胞的增殖影响,并用免疫组化方法检测白血病抑制因子,整合素αVβ3的表达。结果肝细胞生长因子能促进体外培养的腺上皮细胞增殖,在浓度为20 ng/mL时为峰值。且加药组白血病抑制因子,整合素αVβ3的表达为强阳性。结论 10 ng/mL的HBF即能促进腺上皮细胞的增殖,20 ng/mL时增殖水平较对照组上调3.1倍,用免疫组化检测加药组白血病抑制因子,整合素αVβ3的表达呈强阳性。     

牛体内囊胚经体外共培养诱导子宫内膜上皮细胞整合素αv,β3基因差异的表达

目的 利用牛体内胚胎与其子宫内膜上皮细胞体外共培养的方式,探究共培养前、后子宫内膜上皮细胞中整合素αv,β3基因差异表达的变化,为今后建立快捷有效的牛子宫容受态预判方法提供参考。方法 将体内冲出的牛囊胚与原代培养并传代纯化至第5代的牛子宫内膜上皮细胞进行24 h体外共培养,利用RT-PCR技术对共培养前、后的子宫内膜上皮细胞进行αv,β3基因的表达检测。结果 RT-PCR检测结果显示,共培养前、后均有整合素αv,β3的表达;共培养I组(囊胚组),其共培养后诱导整合素αv,β3基因的表达与未共培养对照组二者之间差异无显著性(P > 0.05);共培养Ⅱ组(孵化囊胚组),其共培养后整合素αv,β3基因的表达显著高于对照组和共培养I组(P < 0.05)。结论 牛体内孵化囊胚经体外共培养诱导牛子宫内膜上皮细胞表达整合素αv,β3的效果,明显优于早期囊胚;整合素αv,β3基因具有作为牛子宫容受态体外检测标志的潜力。     

输卵管性和内异症性不孕患者黄体中期子宫内膜整合素αvβ3表达的差异

目的：探讨输卵管性和内异症性不孕患者黄体中期子宫内膜整合素 αvβ3表达的差异。方法：收集行手术治疗的9例内异症性不孕患者和进行IVF/ICSI-ET的20例输卵管阻塞患者黄体中期子宫内膜应用免疫组化方法检测整合素αvβ3的表达。结果：子宫内膜腔上皮细胞中整合素αvβ3表达H-score平均分内异症组较输卵管组低,差异有统计学意义（P<0.05）,而两组间腺上皮细胞中整合素αvβ3表达H-score平均分比较差异无显著性（P>0.05）。结论：内异症不孕患者和输卵管阻塞不孕患者黄体中期子宫内膜整合素αvβ3表达的差异,可能提示内异症对子宫内膜容受性存在不利影响。     

肿瘤转移抑制因子CD82/KAI1在延迟着床小鼠子宫内膜组织的表达

目的:研究肿瘤转移抑制因子CD82/KAI1在延迟着床小鼠子宫中的表达规律。方法:RT-PCR及免疫组化法检测CD82/KAI1蛋白质及mRNA在延迟着床小鼠子宫的表达。结果:延迟着床小鼠子宫CD82/KAI1蛋白含量在延迟着床第5天较少,第6~8天无表达,E2激活后则明显增多。CD82/KAI1 mRNA表达从妊娠第4~8天呈下降趋势,雌二醇(E2)激活后mRNA表达显著上升(P<0.05)。结论:CD82/KAI1参与了小鼠胚胎着床过程,其表达可能受雌激素调节。     

shRNA干扰β-catenin对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化的作用

目的构建特异性针对β-catenin基因的shRNA干扰载体,转染TGF-β1诱导的人近端肾小管上皮细胞株HKCs,研究其对肾小管上皮细胞转分化的影响。方法将构建的shRNA-β-catenin干扰载体转染TGF-β1诱导的HKC细胞,RT-PCR、Western blot检测β-catenin的mRNA及蛋白表达水平,筛选抑制效果最佳载体;RT-PCR、细胞免疫荧光、Western blot检测肾小管上皮细胞转分化相关蛋白E-cadherin、α-SMA的mRNA及蛋白表达水平。结果经酶切和测序鉴定,成功构建的shRNA-β-catenin表达载体转染HKC细胞,β-catenin在mRNA及蛋白表达水平均低于转染空白载体组(P<0.05),并筛选shRNA-β-catenin-1进入实验组;转染shRNA-β-catenin-1组细胞β-catenin在mRNA及蛋白表达水平均低于TGF-β1诱导组和空载体组(P<0.05),且β-catenin转核显著减弱(P<0.05);E-cadherin的mRNA及蛋白表达水平较TGF-β1诱导组和空载体组显著上调(P<0.05)、α-SMA的mRNA及蛋白表达水平较TGF-β1诱导组和空载体组显著下调(P<0.05)。结论运用shRNA-β-catenin干扰载体转染TGF-β1诱导的HKC细胞,能够抑制肾小管上皮细胞-间充质转分化。     

β-连环素与E-钙粘素在子宫异位内膜、子宫内膜癌和正常子宫内膜中的表达对比研究

目的 比较E-cadherin和β-catenin作为细胞间重要的黏附分子在子宫内膜异位症和子宫内膜癌的表达差异.方法 采用免疫组织化学SP法检测20例子宫内膜异位症、20例子宫内膜癌和10例正常子宫内膜中E-cadherin和β-catenin的表达情况.结果 β-catenin在子宫内膜异位症组织中的表达及E-cadherin在子宫内膜癌中的表达均较在增生期子宫内膜中的表达低,和子宫内膜癌相比,子宫内膜异位症组织中E-cadherin表达明显增强,β-catenin表达明显降低.结论 β-catenin在子宫内膜异位症的发病机制中起重要作用,E-cadherin的低表达是子宫内膜癌发展的重要变化.子宫内膜异位症和子宫内膜癌中E-cadherin和β-catenin的表达不同,有助于两者的区别.     

控制性超排卵对小鼠着床期子宫内膜整合素αvβ1表达的影响

目的观察GnRHa长周期辅助超排卵对小鼠子宫内膜组织整合素αv、β1表达的影响,探讨提高IVF—ET妊娠率的方法。方法将36只小鼠随机分成3组。对照组：生理盐水（NS）组;单纯促排卵组：HMG加HCG：GnRHa加促排卵组：GnRHa加HMG加HCG。促排卵和排卵后24、48h,采用免疫组织化学技术检测子宫内膜整合素αv、β1的表达。结果子宫内膜整合素αv、β1表达对照组呈现强阳性。单纯促排卵组稍弱于对照组．2组比较无显著性差异（P〉0．05）;GnRHa加促排卵组弱于前2组,与前两组分别比较有显著性差异（P〈0．05）。结论控制性超排卵药物可以影响着床期子宫内膜整合素αv、β1的表达,从而影响子宫内膜容受性．导致临床妊娠率偏低。     

益气血补肝肾方对子宫内膜整合素αvβ3表达的影响

目的:观察益气血补肝肾方对子宫内膜整合素αvβ3表达的影响,探讨益气血补肝肾方提高妊娠率的机制。方法:600只小鼠随机分为超促排卵组、促排卵组、自然排卵组各200只,每组小鼠中又分为中药干预组与对照组各100只,分别用免疫组织化学、RT-PCR和Western blot法检测整合素αvβ3的表达。结果:超促排卵组和促排卵组小鼠中,中药干预组妊娠率显著高于对照组(P<0.05)。但自然排卵组中药干预后妊娠率与对照组无统计学差异(P>0.05)。免疫组织化学、RT-PCR和Western blot法均显示,超促排卵组和促排卵组小鼠中,中药干预后整合素αvβ3的表达显著升高(P<0.05),而对自然排卵组则无明显影响(P>0.05)。结论:益气血补肝肾可能通过上调超促排卵及促排卵小鼠子宫内膜整合素αvβ3表达,改善子宫内膜容受性,从而提高妊娠率。     

nm23-H1与整合素α3、β1在子宫内膜异位症中的表达及其临床意义

目的:探讨nm23-H1与整合素α3、β1在子宫内膜异位症(EMS)中的表达及其临床意义.方法:收集35例正常子宫内膜组织和32例EMS患者的异位子宫内膜组织.采用qRT-PCR技术检测nm23-H1与整合素α3、β1的mRNA表达水平;同时采用Western blot技术检测nm23-H1与整合素α3、β1的蛋白表达...     

整合素β1在妊娠输卵管粘膜与子宫内膜的表达及其临床意义

目的 研究整合素β1在输卵管妊娠患者输卵管粘膜及相应子宫内膜的表达及其与输卵管妊娠的关系.方法 应用免疫组化法(SP方法)检测正常早孕蜕膜组织、正常输卵管粘膜组织及输卵管妊娠患者子宫蜕膜组织及其输卵管粘膜组织中整合素β1的表达情况.结果 整合素β1在四种组织中均有阳性表达,在输卵管妊娠粘膜组织中上皮中的阳性表达强于正常输卵管粘膜组织中的表达,但弱于正常早孕蜕膜组织中上皮细胞膜的阳性表达,均有显著性差异(P＜0.05),而整合素β1在输卵管妊娠患者子宫内膜上皮细胞的表达弱于正常早孕子宫蜕膜上的表达.结论 整合素β1可能参与胚泡着床,在输卵管妊娠的发生、发展过程中起着一定的作用.     

整合素β3在围植入期小鼠子宫内膜中的表达

目的 检测整合素β3在围植入期小鼠子宫内膜中的表达,明确整合素β3表达规律.方法 将清洁级性成熟期昆明小鼠44只,雌性24只,雄性20只,雌性小鼠阴道涂片检查为动情前期,在此期注射PMSG和HCG,4只雌鼠不合笼,用颈椎脱臼法处死,剪取子宫组织(孕D0,对照组),直接液氮保存和福尔马林固定保存,其余的雌:雄小鼠1∶1合笼,次日检查阴栓,发现阴栓计为妊娠第1天.分别于妊娠第4、5、6、7和8天用颈椎脱臼法处死,迅速剖腹,剪取子宫组织予以保存(实验组),采用免疫组化方法和Western-blotting技术分析围植入期小鼠子宫内膜中的整合素β3表达规律,采用RT-PCR技术半定量分析围植入期小鼠子宫内膜整合素β3 mRNA表达特征.结果 小鼠整个围植入期子宫内膜中均有整合素β3表达,但表达的高峰在着床窗口期,即孕D5.孕D0(非孕)子宫内膜的整合素β3表达较弱,孕D4时表达增强,孕D5时表达最强,孕D6时表达突然回落,孕D7、孕D8时表达减弱,降至非孕水平.结论 整合素β3在围植入期小鼠子宫内膜中的表达随着孕龄的增加逐渐增强,但表达的高峰在孕D5,与植入窗的开放相吻合,是子宫内膜接受性的客观标志,提示整合素β3在胚泡着床过程中起重要作用,该研究为阐明胚泡着床机制提供实验依据.     

子宫内膜雌、孕激素受体及整合素β_3表达与胚胎移植异位妊娠的关系

目的探讨子宫内膜雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、整合素β3表达与体外受精/卵母细胞单精子显微注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)后异位妊娠的相关性。方法选择2010年7月至2012年1月深圳市第五人民医院收治的因男方因素、不明原因不孕实施IVF/ICSI-ET的患者106例,根据其助孕结局分为未孕组46例、宫内孕组39例、异位妊娠组21例,测定IVF/ICSI-ET治疗前周期黄体期子宫内膜ER、PR、整合素β3的表达。结果宫内孕组整合素β3子宫内膜上皮细胞的阳性表达最强,未孕组最弱;异位妊娠组和未孕组ER、PR表达强于宫内孕组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ER、PR、整合素β3在子宫内膜异常表达,可导致子宫内膜容受性下降,可能增加异位妊娠的发生风险。     

植入前小鼠子宫内膜整合素α4的表达及超微结构特点

目的观察植入前小鼠子宫内膜整合素α4的表达分布状况及超微结构。方法用免疫化SP法检测妊娠1~4d小鼠子宫内膜整合素α4的表达;用透射电镜观察植入前小鼠子宫内膜的超微结构。结果整合素α4主要表达于子宫内膜腔上皮及腺上皮,表达强弱不等,于妊娠第4天表达最强。透射电镜观察妊娠第4天子宫内膜腔上皮和腺上皮内线粒体、粗面内质网、分泌颗粒等丰富,内膜间质水肿,基质细胞肥大变圆,胞质内富含糖原、脂滴。结论妊娠1~4d小鼠子宫内膜持续表达整合素α4;妊娠第4天子宫内膜腔上皮、腺上皮和基质细胞处于植入前分泌功能旺盛阶段。提示整合素α4可能参与小鼠胚泡植入过程,其表达强弱与植入前子宫内膜的发育同步化。