嗜肺巴斯德杆菌选择性培养基研制及应用

目的　研制一种对嗜肺巴斯德杆菌表现出强选择作用的选择性培养基,用于该菌的常规检测。方法　药敏试验及抗生素最小抑菌浓度测定。结果　研制了嗜肺巴氏杆菌选择性培养基(PPSM培养基)及嗜肺巴斯德杆菌增菌液(PP肉汤)。嗜肺巴斯德杆菌在PPSM培养基上,37℃48h培养,形成1mm左右,凸起、湿润、灰黑色并有金属光泽的特殊菌落;对表皮葡萄球菌和大肠埃氏菌的抑制率为100%,对变形杆菌的抑制率为76%,并能抑制其迁徙生长;通过PP肉汤增菌培养,PPSM培养基使SPF小鼠粪便中嗜肺巴斯德杆菌检出率从0增至67.2%;用小鼠咽拭子接种该培养基,其初代培养物几乎为纯培养物。结论　该培养基对嗜肺巴氏杆菌具有较强的选择作用,使用该培养基对嗜肺巴氏杆菌进行检测可以简化检测程序、防止漏检、在不处死动物的情况下对嗜肺巴斯德杆菌进行常规监测。     

嗜肺巴斯德杆菌基因分型及在分子流行病学中的意义

目的　探讨我国部分地区嗜肺巴斯德杆菌分子流行病学特征。方法　随机多态扩增PCR(RAPD -PCR) ,两条单一随机引物S1和S3 ,对分离来自北京和南京不同实验动物饲养单位的大鼠、小鼠、野鼠的 1 5株嗜肺巴斯德杆菌及参考株共 1 6株菌基因组随机扩增 ,比较DNA多态性图谱。结果　 1 5个流行株可分成 4种基因型 :来自相同饲养单位的小鼠株、大鼠株及野鼠株基因型亦不相同 ;野鼠株与部分小鼠分离株基因型相同。结论　同一地区嗜肺巴斯德杆菌流行株呈明显的多态性 ;野鼠有可能成为实验动物嗜肺巴斯德杆菌的传染源     

北京地区实验动物中嗜肺巴斯德杆菌的表型分析

目的对北京地区实验动物中的嗜肺巴斯德杆菌分离株进行表型分析,提高检测的准确性。方法通过生化鉴定和16S rDNA测序,对306株嗜肺巴斯德杆菌可疑菌株进行鉴定。结合分离株在血琼脂平皿上的菌落特征和生化特性,组成53个特征数据谱,进行表型特征的聚类分析。结果 306株分离株中,BD自动细菌鉴定系统和16S rDNA测序鉴定出嗜肺巴斯德杆菌的阳性率分别为164/306和227/306。227株嗜肺巴斯德杆菌真阳性的表型特征共有140种,Heyl型106种,Jawetz型23种。结论北京地区实验动物中嗜肺巴斯德杆菌主要为Heyl型感染,Jawetz型较少,表型特征多样,分布广泛。     

应用聚合酶链式反应快速检测嗜肺军团杆菌

嗜肺军团杆菌(LP)所引起的肺炎病死率高,易暴发流行,早期病原诊断困难。本研究应用聚合酶链式反应技术对嗜肺军团杆菌血清1、3、5型中巨噬细胞感染潜能基因(mip基因)的部分编码区域进行特异性扩增,经琼脂糖凝胶电泳、溴乙锭染色检测扩增产物。结果3型LP均出现650bp特异性阳性条带。检测灵敏度为80ng,本研究结果对嗜肺军团杆菌肺炎的早期诊断、及时治疗、降低病死率及控制暴发流行有重要意义。     

应用套式PCR检测嗜肺军团杆菌的实验研究

应用套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测１￣６型嗜肺军团杆菌，两轮ＰＣＲ都分别出现了９９６ｂｐ和６５０ｂｐ的特异性扩增产物；而金黄色葡萄球菌等七种细菌均未出现特异性扩增。两轮ＰＣＲ分别可以检测１０ｐｇ和１０ｆｇ的模板ＤＮＡ。８份嗜肺军团杆菌含量分别为１￣１０＾７ｃｆｕ／ｍｌ的痰感染模拟标本均出现了特异性扩增产物。提示该方法可用于临床，特别是检测含微量嗜肺军团杆菌的临床标本。     

嗜肺军团杆菌肺炎合并肺部空洞5例临床分析

军团杆菌肺炎 (ＬＰ)是一种以肺炎为主 ,可合并肺外多系统损害的感染性疾病 ,其胸部Ｘ线主要表现为肺野内多发性、多形性、多变性实变影[1] ,少数可形成空洞。现收集本院自 1992～ 2 0 0 0年符合ＬＰ诊断标准[2 ] 的 78例病例 ,其中 5例胸部Ｘ线示肺野内有空洞形成 ,分析报告如下。1　临床资料病例 1:男 ,2 7岁 ,化验员 ,发热、咳嗽 2 0天 ,胸痛 10天入院。体温 38℃～ 39℃ ,痰量少 ,偶有血丝 ,外院多次痰培养(包括细菌培养、真菌培养及结核菌培养 )阴性 ,用头孢他啶治疗 3周无效 ,既往体健。入院检查 :血ＷＢＣ 9 7× 10 9/Ｌ ,Ｎ80 %。丙…     

嗜肺军团菌病

嗜肺军团菌病(Legionnaire disease,LD)是由嗜肺军团杆菌(Legionella pneumophila,LP)所引起的以肺部感染为主,可合并肺外多系统损伤的一种细菌性传染病,军团菌病最初是在1976年7月在美国费城召开的退伍军人会议期间暴发了221例肺炎,其中34例死亡,死亡率15.4%主要症状有发热、咳嗽、咳痰、呼吸困难及腹泻等,90%的病例胸部X线片显示肺炎征象.6个月后从死者肺组织中分离鉴定出一种新的革兰氏阴性杆菌,于1978年在国际学术会议上正式命名为嗜肺军团杆菌(LP),其所致疾病则为嗜肺军团菌病(LD)我国在1982年由康晓明首次报告一例,此后国内已证明多起LD的暴发或散发,但是,迄今为止人类对军团菌的认识仍十分有限.     

嗜肺军团菌分子生物学检测及流行病学分型方法

军团菌病主要由嗜肺军团菌引起。与传统的军团菌检测方法相比,分子生物学检测技术灵敏度高、特异性强、快速有效。分子分型对军团菌流行病学调查及监控具有非常重要的意义。本文对嗜肺军团菌分子生物学检测及流行病学分型方法作一综述。     

嗜肺巴氏杆菌L型的诱导及其流行病学意义初探

目的 探讨L型嗜肺巴氏杆菌在诊断学及流行病学上的意义。方法 青霉素液体法诱导，并对嗜肺巴氏杆菌L型的生物学特性进行系统观察。结果 嗜肺巴氏杆菌L型具有典型的“煎蛋状”（L型）和“丝状”（F 型）菌落，扫描电镜观察，L型菌体呈球状、杆状、长丝状；革兰染色呈阴性、缠绕的长丝体，并具有圆球体及巨型体，细胞壁染色显示细胞壁缺失；对紫外线、新洁尔灭抵抗力较原菌增强5~10倍；自然干燥环境中，原菌2 d死亡，而L型可存活12 d；能透过0.45μm滤膜；回复的最初几代，其菌体形态较原菌大数倍。结论 L型嗜肺巴氏杆菌在形态学方面有较大变化，对理化因素及外界环境抵抗力增强，有可能透过胎盘屏障垂直传播。本研究提示L型嗜肺巴氏杆菌在该菌诊断学及流行病学上有重要意义。     

16S rRNA在肉毒梭菌分型鉴定中的应用

目的建立一种快速、可靠的对肉毒梭菌进行分型鉴定的手段。方法以从LCL063、830110、LC175、LCL155、66418、N153、61082、ALASKA、IWANAI共9株梭菌中提取的基因组DNA为模板,利用16SrRNA特异性引物分别进行PCR扩增并进行T-A克隆转化、测序。通过Clustal和Mega软件分析16SrDNA序列,以NJ法和MP法构建进化树,分析其种属特异性。结果 16SrRNA分型结果可判断出LCL063、830110、LCL175为产E型毒素的酪酸梭菌。IWANAI与ALASKA株为E型肉毒梭菌。与传统分型鉴定得到的结果一致。结论 16SrRNA在肉毒梭菌分型鉴定中具有快速、准确的优势,随着核糖体库的不断完善,有望成为细菌分型鉴定的标准依据。     

香附对川芎中阿魏酸在正常及偏头痛模型大鼠体内药代动力学的影响

目的：研究香附对川芎中阿魏酸（FA）在正常及偏头痛模型大鼠体内的药代动力学影响。方法：用硝酸甘油制作偏头痛大鼠模型,给正常及模型大鼠灌服川芎和川芎-香附合煎液,采用HPLC法检测给药后不同时间大鼠血浆中FA的浓度,DAS2.0软件计算药代动力学参数。结果：正常组中川芎配伍香附后FA的吸收半衰期t1/2Ka明显缩短（P<0.05）,达峰时间tmax提前（P<0.05）,但其他参数与配伍前并无差异。模型组中川芎配伍香附后FA的Cmax、药时曲线下面积AUC(0-t)、分布半衰期t1/2α、表观分布容积V1/F 显著增大（P<0.01）,达峰时间tmax提前,清除率CL/F显著降低（P<0.01）。结论：在正常大鼠体内,香附加快了FA的吸收,而在偏头痛模型大鼠体内,香附能减慢FA在体内的分布和代谢,延长药物成分在体内的作用时间,从而提高了FA的生物利用度。     

裸项栉鰕虎鱼感染创伤弧菌初报

目的 分离及鉴定感染实验用鰕虎鱼的病原菌。方法 将病料分离培养,纯化培养后,用16s rRNA及生理生化方法鉴定病原菌。结果 分离到了革兰阴性弧菌,命名为：GDLAMI-1210株,显微镜下观察为逗点样形态,电镜下可看到菌的一端钝圆,一端长杆弯曲的鞭毛,生理生化鉴定结果与弧菌一致,16s rRNA测序结果与创伤弧菌标准菌株（ATCC27562T）等聚为一类菌,回归实验证实该菌对裸项栉鰕虎鱼有一定的致病性。结论 裸项栉鰕虎鱼感染创伤弧菌初报。     

鼠三毛滴虫新疆灰仓鼠分离株形态学观察及其16S rRNA基因分析

目的 对从新疆实验动物研究中心饲养的封闭群灰仓鼠体内分离到的1株鞭毛虫进行形态学鉴定及基因鉴定。方法 取灰仓鼠回盲部内容物进行直接涂片和常规姬姆萨染色后镜检观察,提取虫体总DNA,PCR扩增该鞭毛虫的16S rRNA基因,测序后与国外已报道的鞭毛虫进行核酸同源性分析,并应用MEGA5.22软件绘制系统发育进化树。结果 形态学观察表明分离到的鞭毛虫为鼠三毛滴虫。测序后核酸同源性分析表明鼠三毛滴虫新疆灰仓鼠分离株16S rRNA序列与国外已报道的三毛滴虫高度同源。系统发育进化树表明鼠三毛滴虫新疆灰仓鼠分离株序列与已报道的鼠三毛滴虫16S rRNA（序列号AY886846.1） 位于同一进化分支,与其他相关三毛滴虫亲缘关系较远。结论 形态学鉴定和16 S rRNA基因分析表明,此次从新疆实验动物研究中心饲养的封闭群灰仓鼠体内分离到的鞭毛虫为鼠三毛滴虫。     

白芷、川芎药对配伍挥发油成分的GC-MS分析

目的 研究白芷、川芎单味药及其药对的挥发油成分,并考察白芷、川芎药对配伍对挥发油成分的影响。方法 采用水蒸气蒸馏法提取白芷、川芎单味药及其药对的挥发油,运用气相色谱-质谱联用技术,结合计算机检索,并与文献资料比对,进行化学成分的分离和鉴定。色谱条件：TR5-MS毛细管色谱柱（30 m× 0.25 mm,0.25 μm）;载气为高纯氦气;进样口温度250℃;进样量1 μL,分流比50：1;恒流模式,载气流速1.00 mL/min;程序升温：起始温度50℃,保持1 min,以5℃/min 的速率升至240℃,保持1 min,然后以5℃/min 升至280℃,并保持1 min。质谱条件：电子轰击（EI）离子源,电子能量70 eV,离子源温度220℃,传输线温度280℃,质量范围（m/z）：50～650 amu,数据采集扫描模式为全扫描,溶剂延迟5 min。结果 在白芷、川芎、药对（1：1）、药对（4：1）的挥发油及白芷、川芎等浓度挥发油混合物（药对等浓度挥发油）中分别鉴定出69、59 、59、60、78 种化合物,其中共有成分19种。结论 从挥发油的组分及含量来看,不同配伍比例药对挥发油的成分有很大的不同,单味药挥发油组分的含量在药对中都发生了变化。     

精子特异性Sleeping Beauty转座酶转基因小鼠模型的建立

目的建立精子特异性表达Sleeping Beauty(SB)转座酶转基因小鼠模型,为研究SB转座子在小鼠中的应用提供工具。方法克隆精子特异性启动子用以驱动SB转座酶基因的表达,建立精子特异性表达SB转座酶的载体,利用显微注射方法建立以C57BL/6J为背景的精子特异性表达SB转座酶的转基因小鼠。PCR鉴定首建鼠的基因型,western blot(WB)和免疫组织化学(IHC)检测SB转座酶基因在小鼠生殖腺睾丸中的表达情况,筛选睾丸中高表达SB转座酶的转基因小鼠。结果显微注射方式获得了5只首建小鼠,其中3只能稳定传代,利用WB和IHC成功的筛选出一株在精子中高表达SB转座酶的转基因小鼠。结论成功建立了精子特异性高表达SB转座酶转基因小鼠模型,为将SB转座子作为一种基因工程工具应用于小鼠基因修饰模型的建立提供非常重要的工具资源。