小鼠高低转移性肝癌微卫星不稳定性的研究

目的：了解小鼠高、低转移性肝癌细胞系Ｈｃａ／１６Ａ３－Ｆ（Ｆ）和Ｈｃａ／Ａ２－Ｐ（Ｐ）发生微卫星不稳定性（ＭＳＩ）情况,探讨它们与肝癌发生及转移之间的关系。方法：随机选择３号和１６号染色体上１５个多态微卫星标记,采用聚合酶链式反应－简单重复序列多态性（ＳＳＬＰ）和单链构象多态性（ＳＳＣＰ）方法对Ｆ和Ｐ细胞系进行分析。结果：Ｆ和Ｐ细胞系有信息的微卫星位点其等位基因与Ｃ３Ｈ相同,且存在多位点ＭＳＩ。结     

鼻咽癌微卫星不稳定性初步研究

目的：探讨鼻咽癌的微卫星不稳定性。材料与方法：２２例Ⅱ￣Ⅳｂ期鼻咽低分化鳞癌。均为ＥＢＶＣＡ－ＩｇＡ（＋）。取鼻咽部癌组织和外周血有核细胞，分离基因组ＤＮＡ。用ＰＣＲ方法扩增其染色体３Ｐ２４和３Ｐ１４－２１的Ｄ３Ｓ１１两上位点的微卫星（ＣＡ）ｎ，将扩增的微卫星ＤＮＡ作变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，用银染法显带。比较第一对标本（正常－肿瘤）的微卫星ＤＮＡ带型、泳动速率、强度的差异。结果：２２例鼻咽癌中的５     

微卫星不稳定性与肺癌

微卫星（ＭＳ）是指以少数几个核苷酸为单位多次串联重复的ＤＮＡ序列。由于微卫星在肿瘤及相关疾病中表现出的不稳定性（ＭＳＩ），因而使之成为肿瘤研究的一个热点。本文综述了近年来有关微卫星和肺癌发病的关系以及在肺癌诊治中的作用。大多数学者认为微卫星不稳定性和杂合性丢失在肺癌发生、发展中起重要作用；选择适当的位点可显著提高ＭＳＩ检测阳性率，在肺癌的早期诊断及预后判断上具有巨大的潜在应用价值。     

微卫星不稳定性与胃癌的发展

DNA错配修复(MMR)缺陷与许多癌症的发生有关。细胞MMR缺陷会导致广泛的遗传突变及肿瘤的发生和发展。MMR缺陷肿瘤的一项重要诊断学特征为核苷酸重复区域高突变率的累积,这些突变即微卫星不稳定性(MSI)。现就近年来国内、外关于MSI与胃癌发生、发展的研究进展综述如下。     

人胃癌组织DNA微卫星不稳定性分析

目的 探讨微卫星不稳定性（MSI）与胃癌的关系。方法 采用PCR聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染技术，检测30例胃癌肿瘤组织DNA D2S123位点及D3S1067位点的MSI。结果 30例胃癌2个位点MSI检出率分别为：D2S123位点26．7％（8／30），D3S1067位点33．3％（10／30）。结论 MSI是胃癌发生过程中的分子标志，在胃癌的发生中起着重要作用。     

肺癌线粒体DNA拷贝数改变和微卫星不稳定性

目的 了解和分析肺癌中线粒体基因组拷贝数的改变及微卫星不稳定性(mitochondrial microsatellite instability, mtMSI).方法 采用PCR-单链构象多态性(PCR Single-stranded conformation polymorphism,PCR-SSCP)分析、序列测定和实时荧光定量PCR等方法,对37例肺癌组织线粒体DNA的拷贝数和线粒体DNA控制区内的微卫星不稳进行检测.结果 肺癌组织线粒体DNA的拷贝数/细胞为(395±125),显著低于相对应的正常肺组织(733±196)(P<0.01).37例肺癌样本中共检出mtMSI 12例(32.4%).肺癌组织线粒体基因组拷贝数的改变与控制区内的微卫星不稳定性有关(P＜0.05).结论 肺癌组织中线粒体DNA的拷贝数显著降低,可能与控制区内的微卫星不稳定性有关.     

人卵巢恶性肿瘤组织染色体微卫星DNA序列的不稳定性及其临床意义

目的：检测人卵巢恶性肿瘤组织染色体微卫星DNA序列的不稳定性并探讨其与临床病理特征的关系。方法：应用PCR－聚丙烯酰胺凝胶电泳－硝酸银染色技术，检测60例原发卵巢恶性肿瘤组织染色体微卫星DNA序列的不稳定性。结果：21例卵巢恶性肿瘤组织存在微卫星的不稳定（35．0％），微卫星的不稳定与肿瘤的病理分级，淋巴结转移及组织学类型有关，与患者的年龄、临床分期无关。结论；微卫星DNA序列的不稳定性可能在卵巢癌恶性肿瘤尤其是特殊类型肿瘤的发生过程中起较为重要的作用，并且与卵巢恶性肿瘤的不良预后有关。     

乳腺癌微卫星不稳定性研究

目的　探讨微卫星不稳定性（MSI）在乳腺癌发生中的作用及其意义。方法　收集40例乳腺癌新鲜标本,分离基因组DNA,通过PCR法扩增12个微卫星位点;银染方法显色,采用JEDA801E专业数码凝胶成像分析软件进行片段分析,观察12个位点重复序列长度的变化,确定乳腺癌MSI状态。结果　乳腺癌MSI发生率为35％,良性增生均表现微卫星稳定;乳腺癌MSI发生率与分化程度有关,低分化乳腺癌MSI发生率明显高于高中分化组;乳腺癌中微卫星异常主要分布于D3S1766、D2S2739和TP533个位点。结论　MSI是乳腺癌多步骤发展过程的早期事件;D3S1766、D2S2739和TP533个位点可能是检测乳腺癌MSI较敏感的位点。     

乳腺癌微卫星不稳定性研究

目的探讨乳腺癌的微卫星不稳定性及其与临床资料的关系。方法选取6个微卫星位点及40例正常组织和其对应的自身肿瘤对照组织,提取DNA后用PCR扩增,电泳,银染显色后进行微卫星不稳定性分析。用免疫组化观察p53、PR、ER在乳腺癌中表达情况。结果在40例乳腺癌中有9例至少1个位点出现MSI。MSI和病人年龄、肿瘤大小、p53之间没有明显的相关性。但ER、PR阴性和淋巴结转移的病例出现MSI的比例远远高于ER和PR阳性病例。结论在乳腺癌的发生、发展过程中出现MSI,并可能和ER、PR的表达降低有关。     

胃癌组织微卫星不稳定性的研究

目的：探讨微卫星不稳定性(MSI)在胃癌中的发生规律及其与胃癌临床病理的关系。方法：对30例胃癌及癌旁正常组织石蜡切片提取DNA，应用银染PCR-SSCP技术检测5个MSI。结果：胃癌组织MSI的发生率为23．3％，其中高频MSI(MSI-H)3例，低频MSI(MSI-L)4例。5个位点中以BAT-26的阳性率最高，为13．3％。胃窦癌MSI的发生率显著高于贲门癌(P＜0．05)，MSI与性别、年龄、细胞分化程度、淋巴结转移、肿瘤TNM分期无关。结论：MSI的发生率与所选位点有关，MSI更多见于胃窦癌，MSI在胃癌的发生发展中可能具有重要作用。     

中国人散发性大肠癌中微卫星DNA不稳定的研究

目的：探讨中国人散发性大肠癌中微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 不稳定及复制差错与大肠癌生物学行为的关系。方法：选择１０ 个微卫星位点, 应用 Ｐ Ｃ Ｒ－ 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对３９ 例散发性大肠癌组织进行检测。结果：在多个位点上发现了较高的微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 不稳定（ Ｍ Ｉ） ,其中 Ｄ３ Ｓ１３１７ 位点上 Ｍ Ｉ为４４ ％ , Ｄ３ Ｓ９６６ 上 Ｍ Ｉ为２６ ．６ ％ , Ｄ２ Ｓ１２３ 和 Ｄ２ Ｓ１１９ 上 Ｍ Ｉ分别为３６ ％ 和２５ ．７ ％ 。结论： Ｍ Ｉ阳性率和肿瘤组织学分类无明显相关性,而与肿瘤组织的分化程度、浸润程度等有显著的相关关系,因而微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 可以为肿瘤的早期诊断及患者预后判断提供帮助。同时,在散发性结肠癌中也存在较高的微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 不稳定,这可能与某种 Ｄ Ｎ Ａ 错配修复基因发生突变有关。     

具有家族背景大肠癌微卫星不稳定性研究

目的探讨微卫星不稳定性（MSI）在具有家族背景的大肠癌和散发性大肠癌中的发生及其与临床病理参数之间的关系。方法采用聚合酶链反应单链构象多态性（PCR—SSCP）结合银染显色技术，通过位于5条染色体上的5个不同的微卫星位点，对29例具有家族背景的大肠癌及30例散发性大肠癌病例进行MSI检测。结果有家族背景大肠癌中MSI阳性率（MSI—H）为48．28％（14／29），与散发性大肠癌MSI阳性率的13-3％（4／30）相比，差异显著（P〈0．05）。各位点在两组中的检出率不同，其顺序为BAT-26〉D2S123〉D5S346〉BAT-25〉D17S250。微卫星不稳定性阳性病例与阴性相比，其临床病理特点为右半结肠癌多、年轻病人中发生率高，而在性别、大小、组织分化程度、有无转移、浸润深度方面无明显差别。结论MSI在具有家族背景的大肠癌中阳性率明显高于散发性大肠癌，MSI阳性的大肠癌具有某些临床病理特点；     

胃癌及肠化组织的微卫星不稳定性

目的 :探讨微卫星不稳定性 (MSI)在胃癌及肠化组织中的发生规律及其在胃癌发生过程中的作用。方法 :对 30例胃癌、4 0例肠上皮化生的石蜡标本分别提取病变及相应正常组织的DNA ,应用银染PCR SSCP技术检测 5个微卫星位点的不稳定性。结果 :胃癌组织MSI的发生率为2 3 3% ,胃窦癌MSI的发生率显著高于贲门癌 (P =0 0 4 4 )。肠化组织MSI发生率 2 0 % ,MSI全部出现在中度以上肠化组织中 (P =0 0 13) ,且更多见于女性 (P =0 0 4 4 )。结论 :MSI是胃癌多步骤发生过程中的早期分子事件 ,在胃癌的发生中可能具有重要作用。     

胃腺癌微卫星不稳定性与VEGF蛋白表达关系的研究

目的：探讨胃癌微卫星不稳定性(MSI)与胃腺癌中皿管内皮生长因子(VEGF）之间的关系。方法：应用PCR—SSCP技术检测30例胃腺癌5个位点的微卫星不稳定性，同时应用免疫组织化学的方法检测肿瘤皿管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达。结果：MSI阳性率为43．4％(13／30)。VEGF阳性率为60％(18／30）。MSI—H胃癌VEGF的表达显著减少。结论：MSI—H的胃癌与MSS胃癌可能存在两种不同的胃癌及肿瘤血管新生形成的途径。MSI—H肿瘤较低的VEGF表达可能可以解释为何MSI-H胃癌有较低的侵袭性。     

膀胱癌微卫星不稳定及hMSH2基因突变研究

目的：研究膀胱癌微卫星不稳定及ｈＭＳＨ２基因突变情况。方法：应用Ｄ２Ｓ１１９及Ｄ２Ｓ１２３两个微卫星位点标记,ＰＣＲ法检测４５例膀胱癌标本微卫星不稳定;ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法分析ｈＭＳＨ２基因外显子７、８、１５突变情况。结果：４５例膀胱癌中微卫星不稳定者有７例,微卫星不稳定发生率为１５．６％;在这７例微卫星不稳定标本中有３例同时检测出ＤＮＡ错配修复基因ｈＭＳＨ２突变,占微卫星不稳定总数的４２．９％,且均为体细胞突变。结论：微卫星不稳定和错配修复基因ｈＭＳＨ２突变可能参与膀胱癌癌变过程。     

CMV43CT转基因小鼠心血管发育的形态学研究

目的研究CMV43CT转基因小鼠心血管发育,探讨其用作先天性心脏畸形动物模型的可能性.方法 选用胚胎期(ED)12.5～17. 5 d的CMV43CT胎鼠,经HE染色,观察心脏的形态学变化.对生后不久死亡的CMV43CT纯合转基因小鼠在显微镜下进行大体解剖,观察心脏外形的变化并切片行HE染色.通过FCR方法鉴定基因型,普通C57BL6/SJ小鼠作为对照组.结果所有对照组胎鼠和CMV43CT杂合胎鼠均未见心脏畸形.见62只纯合胎鼠中有14只心脏畸形,占22.6%,主要为圆锥干发育畸形和室间隔缺损.其他畸形包括:心管环化异常及心室肌发育不良.12只生后不久死亡的CMV43CT纯合转基因小鼠大体解剖后发现均有室间隔裂和流出道囊等心脏畸形.切片染色发现左、右室流出道梗阻、房间隔缺损、室间隔缺损、心肌异常肥厚及心肌发育不良等畸形.结论 CMV43CT转基因小鼠存在以圆锥干发育异常为主的心血管畸形,可作为研究先天性心脏病的动物模型.     

Clinicopathological Features of Non-familial Colorectal Cancer with High-frequency Microsatellite Instability

Objective To explore the clinicopathological features of non-familial colorectal cancer with high-frequency microsatellite instability （MSI-H）. Methods One hundred and fifty patients with colorectal cancer who had no family history were enrolled in this study from June 2006 to June 2008. Five standard microsatellite loci including BAT25, BAT26, D2S123, D5S346, and D17S250 were amplified with immunofluorescent polymerase chain reaction. The patient information including age, sex, and tumor location was recorded. Pathological features including differentiation, mucinous differentiation, histological heterogeneity, and Crohn＇s-like reaction were observed under light microscope. The presence of tumor-infiltrating lymphocytes （TLs, CD4＋ and CD8＋） was detected by means of immunohistochemistry. A regression equation was obtained by stepwise logistic regression analysis to evaluate the relationship between MSI-H phenotype in colorectal cancer ands pathological features. Results MSI-H phenotype occurred in 13.33% of the 150 patients with non-familial colorectal cancer. Poor differentiation, histological heterogeneity, Crohn＇s-like reaction, and presence of TLs were found to be independent factors to identify MSI-H non-familial colorectal cancer. Logistic regression equation showed an overall sensitivity of 70.0%, specificity of 99.2%, and accuracy of 95.3% in identifying MSI-H non-familial colorectal cancer. Conclusion MSI-H non-familial colorectal cancer manifests specific pathological features, which may be relied upon for effective identification of that disease.     

卵巢粘液性肿瘤hMLH1启动子甲基化及微卫星不稳定性

目的观察卵巢粘液性肿瘤中错配修复基因hMLH1启动子甲基化,及与微卫星不稳定性(MSI)间的关系。方法1995～2001年浙江大学医学院附属妇产科医院卵巢粘液性肿瘤组织块共107例(恶性49例,交界性35例和良性23例)。选取BAT-25、BAT-26、BAT-40、D5S346、D17S250和D2S1236个位点用PCR法进行MSI分析;限制性内切酶聚合酶链反应(PCR)法分析hMLH1启动子甲基化。结果良性、交界性和恶性肿瘤的hMLH1启动子甲基化阳性率分别为4.3%(1/23)、14.3%(5/35)和36.7%(18/49)。其中恶性组与交界性、良性组之间存在显著性差异(P=0.023和P=0.004),交界性和良性组之间无显著性差异(P=0.438);良性、交界性和恶性肿瘤的MSI表型阳性率分别为4.3%(1/23)、8.6%(3/35)和16.3%(8/49),有上升趋势,但无统计学意义;75%(9/12)MSI表型阳性的肿瘤存在hMLH1启动子甲基化,MSI表型阴性的肿瘤中84.2%(80/95)不存在hMLH1启动子甲基化,MSI表型阳性和hMLH1启动子甲基化之间显著相关(P=0.000),在恶性组和交界性组中两者均存在相关性(P=0.004,P=0.047)。结论卵巢粘液性肿瘤存在hMLH1启动子甲基化,且可能是造成MSI表型阳性的主要因素,两者可能在卵巢粘液性囊腺癌发生过程中起关键作用。     

D3S1289、D5S406、D6S277微卫星不稳定性与子宫颈癌的相关性

目的: 探讨微卫星不稳定性(microsatellite instability, MI)与子宫颈癌的相关性.方法:22例子宫颈浸润性鳞癌石蜡标本,选取3、5和6号染色体上的3个微卫星位点D3S1289、D5S406、D6S277进行MI分析.结果:在子宫颈癌标本中3个位点均未发现MI和杂合性缺失(LOH)的改变.结论:3个微卫星位点未见MI和LOH的改变,可能与病例少、位点少、种族及取样有关.