MicroRNA-134在缺氧预处理新生大鼠缺氧缺血脑组织中的表达及意义

目的：观察microRNA-134（miR-134）在缺氧预处理新生大鼠缺氧缺血后不同时期脑组织中的表达差异及其表达的特点及意义。方法：采用7日龄SD大鼠制备新生大鼠缺血缺氧性脑损伤动物模型。完全随机分为单纯缺血缺氧组、假手术对照组、缺氧预处理组（各18只）。3组又各分为处理后0h、1d、7d组（n=6）。每组6只用于荧光实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）观察miR-134转录量的差异。结果：miR-134在各组脑组织转录的表达量,单纯缺血缺氧组0h（5．061±0．761）、1d（4．120±0．685）、7d（2．873±0．397）;缺氧预处理组0h（3．341±0．575）、1d（2．769±0．351）、7d（1．658±0．290）;假手术组0h（6．617±1．988）、1d（5,798±1．116）、7d（5．984±1．879）。miR-134在单纯缺血缺氧组及缺氧预处理组脑组织的表达显著比假手术组减少（P〈0．01）,在同一时间段上,缺氧预处理组比单纯缺血缺氧组miR-134的表达明显减少（P〈0．01）。同样在缺血缺氧后,无论是单纯缺血缺氧组还是缺氧处理组,miR-134的表达随着0h、1、7d的推移表达渐减少（P〈0．05）。结论：miR-134的表达在调控神经系统发育中可能起着重要作用,缺氧预处理对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤存在保护作用。     

二肽基肽酶6在难治性颞叶癫痫患者中的表达

目的 探讨难治性癫痫患者颞叶皮质中二肽基肽酶6(DPP6)的表达情况。方法 在重庆医科大学建立的脑组织库中,按照随机化原则抽取27例癫痫患者的脑组织(癫痫组)和15例脑外伤患者的脑组织(对照组),应用免疫组织化学染色、蛋白质印迹杂交、RT-PCR法检测DPP6的表达水平。结果 DPP6表达于两组大脑神经元的细胞膜,蛋白质印迹杂交结果显示,癫痫组和对照组DPP6的平均光密度(OD)值分别为0.86±0.04和0.37±0.02,差异有统计学意义(P<0.001)。癫痫组和对照组脑组织DPP6 mRNA的相对表达量分别为0.74±0.03和0.35±0.03,差异有统计学意义(P<0.001)。结论 异常表达的DPP6可能参与了难治性癫痫的形成。     

FBXL20在颞叶癫痫患者及癫痫大鼠模型中的表达变化

目的 通过研究E3泛素连接酶FBXL20及其下游蛋白-神经元突触膜胞外分泌调节蛋白1 (regulating synaptic membrane exocytosis 1,RIM1)在颞叶癫痫患者皮质及匹鲁卡品癫痫大鼠模型皮质、海马组织中的表达变化,探讨FBXL20在癫痫形成中的作用.方法 以颞叶癫痫患者手术切除病灶标本(n=25)为癫痫组,以脑外伤减压手术所切皮质标本(n=10)为对照组.另取40只健康雄性SD大鼠腹腔注射氯化锂(127 mg/kg),20 h后腹腔注射匹鲁卡品(50 mg/kg),每30分钟重复给予1次匹鲁卡品(10 mg/kg),直到大鼠癫痫发作.2周后出现癫痫自发性发作的大鼠纳入癫痫组;2个月后仍未出现癫痫自发性发作的大鼠纳入对照组.采用免疫荧光对FBXL20的表达进行定位;免疫组化检测FBXL20的表达水平;Westem blot检测FBXL20、RIM1的表达水平.结果 免疫荧光检测结果显示FBXL20主要表达于神经元;免疫组化及Western blot检测结果均显示癫痫患者皮质、癫痫大鼠模型皮质与海马中FBXL20表达较对照组明显下降(P＜0.05);同时Western blot检测结果显示RIM1表达较对照组明显升高(P＜0.05).结论 FBXL20在癫痫患者及大鼠模型中的表达水平明显降低,RIM1表达明显升高,提示FBXL20可能通过调控RIM1参与了癫痫的形成.     

脂肪基质细胞脂向分化过程中MicroRNA-134的表达变化

目的 了解脂肪基质细胞（ADSCs）脂向分化过程中miR-134表达变化情况,深入了解ADSCs脂向分化的分子调控机制,为脂肪组织工程的研究和发展奠定基础。 方法 实验于四川大学口腔疾病研究国家重点实验室完成：(1)采取出生30d的雄性体健SD（Sprague-Dawley）幼鼠的腹股沟脂肪组织, 用密度梯度离心结合贴壁培养法分离、纯化后诱导培养大鼠脂肪基质细胞(ADSCs)7d,设置未诱导组以对照。 (2)应用miRNA芯片技术比较诱导组和未诱导组的miR-134表达差异。(3)用实时定量PCR定量验证ADSCs脂向分化前后miR-134表达差异。 结果 (1)成功分离、纯化、培养ADSCs,诱导组培养7d后观察到典型脂肪细胞特征,细胞形态学上表现为细胞相互融合,成片生长,呈细长纺锤形,大量脂滴形成;PPARγ免疫细胞化学染色呈阳性;油红O染色脂滴被染成橙红色。(2)成脂诱导前后miR-134表达明显下调,其中诱导修正值205 4.5与无诱导修正值285 5.25。 (3)实时定量PCR结果亦显示miR-134表达显著下调,与miRNA芯片结果一致。 结论 miR-134在ADSCs脂向分化过程中miR-134表达显著下调,可能参与调控ADSCs的脂向分化。     

SIRT1在癫痫患者及大鼠脑组织中的表达与活性

目的研究沉默信号调控因子1（SIRT1）在难治性癫痫患者及癫痫大鼠颞叶脑组织中的表达与活性,探讨其与癫痫发生发
展的关系。方法在难治性癫痫患者及氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠颞叶脑组织中,应用蛋白免疫组织化学、免疫印迹技术检测其
表达情况,应用SIRT1去乙酰化活性检测试剂盒检测其活性。结果蛋白免疫组化结果显示：SIRT1 主要表达于人与大鼠神经
元细胞浆中,且癫痫组SIRT1的表达明显强于对照组。蛋白免疫印迹及活性检测结果显示：相对于非癫痫患者脑组织,SIRT1
表达及活性在难治性癫痫患者颞叶脑组织中均明显升高（P<0.05）;相对于正常对照组大鼠,SIRT1 表达在癫痫动物模型中点
燃后的6 h、24 h、72 h、7 d、14 d、30 d、60 d均显著升高（P<0.05）,SIRT1活性在6 h、24 h、72 h、7 d、14 d显著升高（P<0.05）,其表
达与活性的峰值同时出现在72 h。结论癫痫患者及动物颞叶脑组织中上调的SIRT1的表达与活性提示其可能在难治性癫痫
发病机制中起重要作用。
     

难治性癫痫患儿血清lncRNA NKILA、miR-124表达及临床意义

目的探究难治性癫痫(RE)患儿血清lncRNA NKILA、miR-124的表达水平变化及临床意义。 方法选取收治的61例RE患儿作为RE组,63例可控性癫痫(CE)患儿为CE组,另选取同期本院体检健康儿童66例作为对照组。采用qRT-PCR法测定各组血清lncRNA NKILA、miR-124的表达水平;采用ROC分析血清lncRNA NKILA、miR-124对RE的诊断价值;采用多因素Logistic回归分析影响RE的危险因素。 结果与对照组比较,CE组患儿和RE组患儿血清lncRNA NKILA、miR-124水平明显升高(P＜0.05)。与CE组比较,RE组患儿血清lncRNA NKILA、miR-124水平明显升高(P＜0.05)。ROC曲线分析显示,lncRNA NKILA、miR-124诊断RE患儿的ROC曲线下面积分别为0.781、0.783。多因素Logistic回归分析表明,lncRNA NKILA、miR-124是RE发生的独立危险因素(P＜0.05)。 结论lncRNA NKILA、miR-124的表达升高与RE的发生有关,可作为RE患儿诊断的血清学标志物。 [     

棘突形态及功能重塑在癫痫形成中的研究

目的 研究癫痫形成过程中棘突形态、功能变化以及棘突重塑在癫痫形成过程中的可能作用.方法 ①20只SD大鼠随机数字表法分为癫痫组及对照组,建立锂-匹罗卡品慢性癫痫模型,高尔基染色观察大鼠海马齿状回棘突形态变化,qRT-PCR及Western blot检测海马PSD95及SYP表达变化.②选择SD胎鼠海马神经元进行原代培养,建立无镁癫痫模型.检测细胞内钙离子浓度及神经元棘突数量变化情况统计两者相关性.结果 ①与对照组相比,癫痫模型组大鼠齿状回(dentate gyrus,DG)区棘突平均密度增加,但正常功能棘突数量减少,PSD95及SYP表达增加(P＜0.01)②癫痫组细胞内钙离子浓度增加(P＜0.01),且与神经元棘突密度变化呈正相关(r=0.613,P＜0.05).结论 癫痫形成过程中突触重塑活跃.但形态及功能异常,为癫痫形成提供基础,可作为棘突重塑的重要标志.     

ERK/CREB/BDNF信号通路在抑郁症中的作用及中药干预研究进展

抑郁症作为严重影响人类身心健康的常见心理疾病,其发病机制复杂多样,其中包括调节因子细胞外信号调节激酶（ERK）、环磷腺苷反应元件结合蛋白（CREB）及脑源性神经营养因子（BDNF）,三者相互作用形成的ERK/CREB/BDNF信号通路主要通过调控神经元兴奋、发育、凋亡及再生过程,促进神经发生,抑制细胞凋亡,从而改善抑郁症情绪低落、兴趣减退、精力不足等核心症状。抑郁症隶属中医之郁病范畴,由于情志不舒、气机郁滞所致,治疗原则当以理气开郁、调畅气机为主,目前中药治疗抑郁症效果显著,与西药相比存在诸多优势,本文就ERK/CREB/BDNF信号通路在抑郁症中的作用及中药干预进行综述。     

波形蛋白在癫痫大鼠心肌中的表达及意义

目的：检测波形蛋白（vimentin,VIM）在癫痫大鼠心肌中的表达,探讨癫痫发作致心肌损伤的特点。方法：通过腹腔注射戊四氮建立癫痫模型,运用组织病理学、免疫组化及Western blot方法检测癫痫大鼠心肌VIM的表达。结果：癫痫各组心肌呈出血、缺血缺氧性改变;随癫痫的病程延长,发作次数增多、发作时间增加,心肌有不同程度的变性坏死,成纤维细胞增生,VIM表达逐渐升高。结论：癫痫发作可引起心肌损伤,促进心肌中VIM表达。     

MicroRNA-29c在单侧输尿管梗阻大鼠中的表达及意义

目的:观察microRNA-29c(miR-29c)在大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾组织中的表达变化,探讨其是否参与肾间质纤维化及其可能机制.方法:高通量测序技术和实时荧光定量PCR检测miR-29c在UUO大鼠术后1d和3d肾脏组织中的表达情况.使用生物信息学预测miR-29c靶mRNA,对其靶mRNA进行Gene Ontology和pathway分析.结果:UUO大鼠术后1 d和术后3d手术侧肾组织miR-29c表达下调,Co1 I mRNA和FN mRNA的表达升高.预测靶mRNA经分析后获得miR-29c有统计学意义的10个靶mRNA,其中6个编码细胞外基质蛋白.结论:miR-29c在大鼠UUO模型早期的肾组织中表达下调,可能通过促进细胞外基质堆积参与肾间质纤维化的发生发展.     

肝癌组织miR-146b-5p和miR-134的表达下调及临床意义

目的 探讨微小RNA(miR)-146b-5p和miR-134在肝癌组织中的表达及其临床病理意义.方法 选取2017年6月～2018年12月我院收治的原发性肝癌患者73例,取患者的原发肿瘤组织为观察组,同时选取相对应的癌旁正常组织标本为对照组.采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测癌组织和癌旁正常组织中miR-...     

颞叶内侧癫痫患者颞叶皮层致痫灶中Nogo-A信号通路的表达

目的研究Nogo-A及其下游信号通路在MTLE患者颞叶皮层的表达,探讨其在癫痫后异常神经环路形成过程中的作用。方法收集本科MTLE患者颞叶皮层标本12例与正常颞叶皮层标本12例,采用RT-PCR、Western blot、免疫组化方法检测Nogo-A、NgR、P75(NTR)、Lingo-1、Troy表达情况。结果MTLE患者颞叶皮层致痫灶中出现神经元丢失、细胞排列结构紊乱、极性消失和胶质增生等病理改变。与正常对照相比,MTLE患者颞叶皮层Nogo-A mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01),NgR mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01);Nogo-A蛋白在神经元中表达显著升高(P<0.01),而在胶质细胞中表达显著降低(P<0.01);NgR、P75(NTR)、Troy、Lingo-1蛋白主要表达于神经元中,其中前三者表达均显著升高(P<0.05,P<0.01),而Lingo-1蛋白表达降低不显著(P>0.05)。结论Nogo-A及其下游信号通路在MTLE患者颞叶皮层中的表达发生改变,提示其非常可能参与了异常神经环路的形成过程。     

AQP4在癫(癎)大鼠海马区的表达及意义

目的探讨AQP4与癫发作的关系,并将水的跨膜转运问题引入癫的研究领域。方法健康成年SD大鼠,随机分为对照组(n=6)和戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)组(n=20)。PTZ组以PTZ亚抽搐剂量(35 mg/kg)每天对SD大鼠进行腹腔注射,连续注射28 d;观察癫点燃率。应用逆转录PCR(RT-PCR)方法对比分析对照组、未点燃组和点燃组大鼠脑组织中的AQP4表达的变化。结果SD大鼠总点燃率为50%。RT-PCR结果显示,点燃组大鼠脑组织中AQP-4mRNA的表达水平为(0.85±0.11)明显高于未点燃组(0.38±0.08)和生理盐水组(0.33±0.08),差异有统计学意义(P<0.05),而未点燃组和生理盐水组间AQP4的表达未见明显的差异(P>0.05)。结论AQP-4可能通过水的转运调节了细胞的神经兴奋性,介导癫活动。     

脓毒症患者血浆miR-223表达水平及其临床意义

目的：探讨脓毒症患者血浆miR-223表达水平及其诊断价值。方法选取克拉玛依市中心医院2013年3月至2016年2月收治的脓毒症患者31例(病例组)和同期健康查体者33例(对照组)为研究对象,分别采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)法和免疫比浊法检测两组患者血浆miR-223和C反应蛋白(CRP)表达水平,并应用受试者工作特征曲线(ROC曲线)计算miR-223和CRP诊断脓毒症的价值。结果病例组患者的血浆miR-223和CRP表达水平分别为(19.56±5.78)×10-4copy和(48.61±12.88) mg/L,对照组分别为(12.22±4.75)×10-4copy和(8.63±3.21) mg/L,病例组患者的miR-223和CRP均明显著高于对照组,差异均有显著统计学意义(P<0.01);血浆miR-223、CRP及两者联合诊断脓毒症的敏感性分别为83.3%、60.9%和80.6%,特异性分别为71.9%、53.1%和81.3%,ROC曲线下面积AUC分别为0.82,0.67和0.90。结论脓毒症患者血浆微小miR-223和CRP均显著升高,可作为脓毒症诊断的生物学参考指标。     

miR-195在乳腺癌患者血浆中的表达及其临床意义

目的：探讨mtR-195在乳腺浸润性导管癌患者术前、术后2周血浆中的表达及其与乳腺癌临床病理特征的相关性。方法：以miR-16为内参,采用茎环RT-qPCR方法检测48例术前、术后2周乳腺浸润性导管癌患者及35例健康对照者血浆中miR-195的表达,并分析其表达与乳腺浸润性导管癌临床病理指标的关系。结果：乳腺浸润性导管癌患者血浆中miR-195的表达较健康对照者明显升高（P〈0．05）,术后2周表达明显降低至健康对照者水平。ROC曲线显示,血浆miR-195评价乳腺浸润性导管癌的敏感性和特异性可达94．4％和68．8％。与临床特征相关性分析统计未见血浆miR-195表达与乳腺浸润性导管癌肿块大小、雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、人类表皮生长因子受体-2（Her-2）状态及淋巴结转移状态等临床病理特征有明显相关（P〉0．05）。结论：血浆中miR-195的异常表达可作为乳腺癌诊断的新的肿瘤标志物。     

Ⅲ期NSCLC患者血浆中miR-21表达及其临床意义

目的：探讨化疗前血浆中microRNA-21(miR-21)表达对Ⅲ期非小细胞肺癌（NSCLC)新辅助化疗疗效的影响以及对指导Ⅲ期肺癌患者临床治疗的意义。方法以80例确诊为Ⅲ期的NSCLC患者(病例组)和30例健康志愿者(对照组)为研究对象,病例组患者化疗前采取外周血标本,通过荧光定量PCR方法观察血浆中miR-21表达与正常对照组中的表达差异;两个周期铂类药物化疗后观察化疗前血浆中miR-21表达与其化疗疗效的关系。结果病例组患者血浆中miR-21表达水平显著高于正常对照组(P<0.01);病例组患者化疗前血浆中miR-21在（PD+SD）组的表达量高于(CR+PR)组(P<0.05)。结论血浆miR-21在Ⅲ期非小细胞肺癌中高表达,其表达水平与铂类药物化疗的疗效相关,提示非小细胞肺癌Ⅲ期患者化疗前血浆中miR-21表达检测可成为预测新辅助化疗敏感性指标,为指导Ⅲ期肺癌患者临床治疗方案,为个体化治疗提供新的思路。     

慢性牙周炎患者唾液中miR-146a的表达及临床意义

目的 通过检测慢性牙周炎患者唾液中miR-146a的表达,以探讨miR-146a在慢性牙周炎发病中的作用及意义.方法 选取2012年1月至2013年8月期间第三军医大学西南医院口腔科收治的48例慢性牙周炎患者(其中男性28例,女性20例,平均年龄42岁).同时选择20名性别、年龄匹配的健康志愿者作为对照组.采用实时荧光定量PCR技术检测上述人员唾液上清中miR-146a的表达水平.对治疗组患者(32例)进行牙周基础治疗,分别记录治疗前和治疗6周后患者的探诊深度(probing depth,PD)、临床附着丧失(attachment loss,AL)及菌斑指数(plaque index,PLI),并检测治疗后唾液上清液标本中miR-146a的表达.结果 慢性牙周炎患者唾液上清液中miR-146a的表达水平(2.52±0.87)显著高于健康对照组(0.81±0.58)(P＜0.01).治疗组患者经过治疗后的牙周临床指数、唾液中miR-146a表达水平均显著降低(P＜0.05).唾液中miR-146a水平与PD(r=0.574,P＜0.05)、AL(r =0.629,P＜0.01)及PLI(r=0.758,P＜0.01)均呈正相关.结论 慢性牙周炎患者唾液上清中miR-146a表达水平明显高于正常人,并在牙周基础治疗后显著下降,提示唾液miR-146可作为牙周病防治及疗效评估的潜在靶分子.     

miR-221/miR-222在乳腺浸润性导管癌中的表达及临床意义

目的：探讨miR-221/miR-222在乳腺浸润性导管癌中的表达及与临床病理特征的相关性。方法：应用茎环Real-time RT-PCR方法检测36例乳腺浸润性导管癌及癌旁非肿瘤乳腺组织中成簇分布的miR-221和miR-222表达,分析miR-221和miR-222表达与乳腺癌常用的临床病理指标的关系。结果：乳腺癌组织miR-221和miR-222表达明显高于其对应的正常乳腺组织（P值均小于0.05）,但miR-221和miR-222两者比值差异无显著性（P=0.176）。miR-221和miR-222的表达和雌激素受体状态及Her-2表达有关。低雌激素受体表达和高Her-2表达的乳腺癌组织的miR-221和miR-222表达均明显高于高雌激素受体和低Her-2表达的标本（P值均小于0.05）。miR-221和miR-222的表达与月经状况、肿块大小、孕激素受体状态、淋巴结转移及TMN分期无关。结论：miR-221/miR-222不但是乳腺癌重要的标记,而且可能成为内分泌治疗抵抗的预兆性标记物和靶向治疗潜在作用靶点。