GW843682X对鼻咽癌细胞中PLK1和p53表达的影响

[目的]研究Polo样激酶（PLK）抑制剂GW843682X对鼻咽癌5-8F细胞中PLK1和p53表达水平的影响。[方法]用不同浓度的GW843682X处理鼻咽癌5-8F细胞,在不同时间点倒置显微镜下观察细胞形态,RT-PCR及Western blot分别检测PLK1和p53的mRNA和蛋白表达水平的变化。[结果]GW843682X能够显著抑制5-8F细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性。RT-PCR结果表明GW843682X可下调PLK1和p53的mRNA表达水平。Western blot结果显示GW843682X降低PLK1和p53的蛋白表达水平。[结论]GW843682X抑制鼻咽癌5-8F细胞中PLK1和p53的表达。     

GW843682X增加肺癌A549细胞对紫杉醇化疗敏感性的体外研究

[目的]研究GW843682X对肺癌A549细胞化疗敏感性的影响。[方法]培养肺癌A549细胞,均等浓度接种于6孔板,分四组：1空白对照组;2紫杉醇处理组：48μg/ml紫杉醇处理48h;3GW843682X处理组：0.5μmol/L GW843682X处理48h;4联合用药组：48μg/ml紫杉醇联合0.5μmol/L GW843682X处理48h。倒置显微镜下观察细胞形态的变化。流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。RT-PCR检测plk1在mRNA水平的变化。Western blot检测plk1在蛋白质水平的变化。[结果]紫杉醇或GW843682X均能够抑制A549细胞的增殖,倒置显微镜下发现细胞形态变化明显,联合用药组变化更明显。流式细胞仪检测结果发现各组细胞凋亡率分别是2.5%,9.4%,5.8%和22.1%。RT-PCR结果显示紫杉醇或GW843682X均能下调plk1mRNA表达水平,联合用药组下调最明显。Western blot结果显示紫杉醇或GW843682X抑制了plk1蛋白表达水平,联合用药组下调最明显。[结论]GW843682X能够通过抑制plk1的表达增加肺癌A549细胞对紫杉醇的化疗敏感性。     

亚砷酸诱导人鼻咽癌细胞凋亡及其对细胞周期的影响

细胞凋亡与肿瘤的发生和治疗的关系是近年来肿瘤学界研究的热点 ,细胞凋亡受阻将导致细胞代谢的紊乱和肿瘤的发生与发展。本研究拟探讨亚砷酸体外对人鼻咽癌细胞株CNE1的凋亡诱导作用以及对细胞周期的影响 ,以寻求鼻咽癌治疗的新途径。将浓度 5× 10 5/ml的CNE1细胞接种于 5 0ml培养瓶中 ,置于 37℃ ,5 %CO2 条件下培养 2 4h ,大部分细胞贴壁后 ,实验组加入不同浓度的亚砷酸 ,继续培养至预定的时间 ,收集悬浮及贴壁细胞 ,70 %冷酒精固定过夜 ,常规碘化丙锭(PI)染色 ,流式细胞仪检测DNA含量及细胞周期分析。细胞离心成团 ,用 1%冰醋酸…     

节拍器化疗对鼻咽癌CNE-1细胞周期和凋亡的影响

目的探讨顺铂节拍器化疗对人鼻咽癌细胞CNE-1细胞周期和细胞凋亡的影响。方法采用MTT方法,检测顺铂对鼻咽癌细胞株CNE-1的半抑制浓度（IC50）,相当于临床中采用6 mg/m^2顺铂小剂量连续化疗的血浆浓度。以低于此浓度的0.10μg/ml作为顺铂节拍器体外化疗参考剂量,采用流式细胞术检测0.10μg/ml顺铂连续作用12 h和96 h细胞周期和细胞凋亡的变化情况。结果MTT法检测顺铂半抑制浓度IC50为0.19μg/ml,0.10μg/ml顺铂作用12 h后检测细胞周期变化,与对照组比较无显著变化;而作用96 h后与对照组相比进入G2/M期细胞比例显著增多,两者差异有统计学意义（P〈0.05）,但作用12 h和96 h后均未检测到明显细胞凋亡现象。结论采用小剂量顺铂作用足够长时间,可以诱导鼻咽癌CNE-1细胞周期发生变化,但是并不能诱导细胞凋亡。细胞周期同步化于G2/M期,为节拍器化疗与放疗的联用提供了可能。     

鼻咽癌相关基因NAG7对鼻咽癌细胞周期及凋亡的影响

背景与目的NAG7基因是我室克隆的鼻咽癌相关的肿瘤抑制候选基因,其功能与作用机制目前尚不清楚.研究鼻咽癌相关的潜在抑瘤基因NAG7对鼻咽癌细胞系(HNE1)细胞周期和细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法采用脂质体转染技术将NAG7基因导入HNE1细胞,建立稳定表达NAG7的细胞株,Northernblot分析转染细胞NAG7基因的表达,并采用流式细胞技术检测细胞周期、细胞周期素及细胞凋亡的改变,并用westernblot验证.结果NAG7基因重表达的HNE1细胞与空载体转染的HNE1和HNE1细胞相比G0/G1期细胞数增加(P<0.05),S期细胞数减少;细胞凋亡数目增加(P<0.05);细胞周期素A、D1、E表达明显降低(P<0.05),细胞周期素B1表达降低,Westernblot检测亦证实cyclinD1和cyclinE表达明显下调.结论NAG7的重表达导致细胞周期素表达下调,从而延缓细胞经G1期进入S周期及诱导细胞凋亡增加进而抑制NPC细胞的过度增殖.     

放射线对鼻咽癌细胞周期阻滞、凋亡和抑癌基因p57^kip2表达的影响

目的：研究放射线对鼻咽癌细胞（CNE）周期阻滞、凋亡和抑癌基因p57^kip2蛋白表达的影响。方法：运用流式细胞术检测放射线诱导的细胞周期阻滞、凋亡；运用免疫组织化学法和Westernblot法检测抑癌基因p57^kip2蛋白的表达。结果：照射后，CNE细胞G1期无明显阻滞，S期出现短暂堆积，G2／M期阻滞强度具剂量和时间依赖性，随照射剂量增加，其阻滞程度增强，阻滞时间延长，G2／M期阻滞在12、24h与照射剂量呈正相关（P〈0．01），随照射后时间延长而增强，峰值出现于12Gy24h；凋亡发生率与照射剂量和照射后时间均呈正相关（P〈0．01）。p57^kip2蛋白表达在照射后随照射剂量的增加和照射后时间的延长均呈现上调（P〈0．01）。结论：放射线对鼻咽癌细胞G2／M期阻滞、凋亡率和抑癌基因p57^kip2蛋白表达均有明显的增强作用。     

分割放疗对鼻咽癌组织细胞增殖凋亡的影响

目的：探讨常规分割放疗和超分割放疗对鼻咽癌组织细胞增殖凋亡的影响。方法：采用ＴｄＴ酶介导的生物素化ｄｕｔｐ缺口末端标记技术（ＴＵＮＥＬ）和免疫组织化学Ｓ－Ｐ法,分别检测６０例鼻咽癌患者在放疗第２周和第４周时细胞凋亡率（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｒａｔｅ,ＡＲ）和增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｃｅｌｌ ｎｈｕｃｌｅａｒ ａｎｔｉｇｅｎ,ＰＣＮＡ）的表达。结果：常规分割放疗组放疗第４周后的ＡＲ     

不同分割放疗对鼻咽癌细胞凋亡的影响

鼻咽癌（NPC）超分割放疗和常规放疗过程中癌细胞凋亡的情况如何,目前未见研究报道,本文旨在对此问题作一探讨。1 材料与方法1．1 临床资料将50例NPC患者随机分为两组,常规分割放疗组和超分割放疗组,每组25例。病理类型均为低分化鳞癌,采用6－MVX直线加速器放疗。放疗中1～2周和3～4周时在鼻内窥镜直视下分别于鼻咽部再次取活检。放疗1～2周的标本中6例病理阴性（常规分割放疗组和超分割放疗组分别为2例和4例）;放疗3～4周的标本中7例病理阴性,4例可疑（常规分割放疗组和超分割放疗组分别为5例和6例）。因此,得到15对放疗中1～2…     

大蒜素对重组质粒转染后Jurkat细胞周期和凋亡的影响

目的:探讨大蒜素转染后下调CXCR4表达对Jurkat细胞周期和凋亡的影响及大蒜素的作用机制.方法:克隆人CXCR4启动子序列,构建报告载体PgL4.17-CXCR4,转染Jurkat细胞,用不同浓度的大蒜素处理对数生长期的Jurkat细胞,PT-PCR检测CXCR4 mRNA的变化水平,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡.结果:不同浓度剂量组与空白对照组相比,转染Jurkat细胞CXCR4 mRNA表达水平明显下降,G0/G1期细胞比例增加,G2/M期和S期细胞比例相应下降,凋亡细胞明显增加.结论:重组报告载体PgL4.17-CXCR4转染Jurkat细胞,能够有效下调CXCR4基因,诱导Jurkat细胞发生凋亡和细胞周期阻滞,从而抑制细胞增殖.     

长春新碱对鼻咽癌细胞增殖和周期的影响

[目的]探讨长春新碱(VCR)对鼻咽癌CNE鄄2Z细胞增殖和周期的影响。[方法]MTT法检测增殖抑制率和IC50,流式细胞术分析细胞周期。[结果]不同浓度的VCR分别处理细胞24h、48h、72h时,抑制率随浓度的增加和时间的延长而增加,其IC50分别为(2.01±0.26)、(1.59±0.23)、(0.92±0.11)μg/ml,各IC50间的差异有非常显著性意义(P<0.01)。0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/mlVCR分别处理细胞6h、12h、24h时,G0/G1期细胞明显下降,G2/M期细胞明显升高,随时间的延长变化更明显(P<0.01)。[结论]VCR对CNE鄄2Z细胞具有增殖抑制作用,该抑制作用具有剂量和时间依赖性;阻滞细胞于G2/M期,此阻滞作用具有时间依赖性;一定剂量的VCR可能通过阻滞CNE鄄2Z于G2/M期而抑制其增殖。     

唑来膦酸影响人鼻咽癌HNE-1细胞增殖和凋亡的体外实验

目的 观察唑来膦酸对鼻咽癌细胞系HNE-1的增殖抑制及凋亡诱导作用并探索其相关机制。方法 MTT法检测体外细胞增殖能力;流式细胞仪分析细胞凋亡和细胞周期变化;原位末端标记法 (TUNEL) 检测DNA片段化以标记凋亡细胞;Real-time PCR和Western blot检测凋亡相关基因Bcl-2、Bad、Bax及 Caspase-9 mRNA和蛋白表达。结果 MTT显示不同浓度唑来膦酸处理组(2.5、5、10、20、40 μmol/L)作用24 h,对 HNE-1细胞增殖无抑制作用(P>0.05);作用48和72 h均能明显抑制 HNE-1 细胞增殖(P<0.05);但抑制增殖能力与药物浓度和作用时间未呈时效和量效关系(P>0.05)。10~40 μmol/L唑来膦酸处理后,48和72 h 的早期凋亡率明显高于对照组;S期细胞比例较对照组升高 (P＜0.01);TUNEL 法染色显示,作用72 h后凋亡 细胞明显增多(P<0.05);Real-time PCR和Western blot显示,唑来膦酸下调Bcl-2 mRNA和蛋白的表达,同时上调Bad、Bax及Caspase-9 mRNA和蛋白表达。结论 唑来膦酸可以抑制HNE-1细胞增殖,诱导HNE-1细胞凋亡,可能与促进Bad、Bax及Caspase-9的表达并降低Bcl-2的表达有关。     

细梗香草皂甙对鼻咽癌CNE-2细胞的体外抗瘤作用

[目的]观察细梗香草皂甙抗人鼻咽癌CNE-2细胞的效应。[方法]细梗香草皂甙与CNE-2细胞共培养,采用MTT法检测细胞增殖,软琼脂实验检测细胞集落形成情况,流式细胞仪检测细胞凋亡。[结果]不同浓度细梗香草皂甙作用于CNE-2细胞后,细胞存活率显著性降低,48h细梗香草皂甙IC50为7.4μg/ml。CNE-2细胞经8μg/ml细梗香草皂甙处理后,软琼脂集落形成能力下降,集落形成数为119±11个,比对照组（297±24个）低;细梗香草皂甙组的凋亡率达16.43%±3.1%,而对照组为9.34%±2.3%。[结论]细梗香草皂甙对鼻咽癌CNE-2细胞株有抑制增殖和诱导凋亡的作用。     

bcl-x_S增加鼻咽癌细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性

目的 :利用bcl xS基因降低肿瘤细胞凋亡阈值 ,促进化疗药物顺铂诱导的鼻咽癌细胞凋亡 ,探索提高顺铂疗效的新途径。方法 :利用脂质体LipofectAmine将含有人bcl xS基因的重组真核表达质粒pcDNA3xS导入人鼻咽癌低分化上皮细胞株CNE 2Z ,G4 18筛选培养后 ,经Westernblot检测bcl xS的表达。以不含有bcl xS基因的pcDNA3质粒转染CNE 2Z作为对照细胞(CNE 2Zneo)。顺铂处理 2种细胞后 ,台盼蓝计数法求得各自的IC50 ,流式细胞仪及荧光染色检测凋亡细胞百分比。结果 :Westernblot检测证实获得稳定表达bcl xS的细胞 (CNE 2ZxS) ,与对照细胞相比 ,其对顺铂的IC50 值明显降低 ,经相同剂量顺铂处理后 ,流式细胞仪及荧光染色检测 ,结果表明 ,其凋亡细胞百分比明显高于对照细胞。结论 :bcl xS能显著增加鼻咽癌CNE 2Z细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性     

替尼泊甙对胃癌细胞凋亡及细胞周期的影响

 目的 探讨替尼泊甙体外对胃癌细胞BGC-823的作用机制。方法 体外培养胃癌细胞株BGC-823,通过MTT法,流式细胞仪,观察替尼泊甙对胃癌细胞的生长抑制作用以及对细胞凋亡,细胞周期的影响。结果 在一定浓度范围内,细胞的生长抑制率随着浓度的增加而增加,细胞的凋亡率随着时间的增加而增加,细胞周期被阻滞在G2/M期,在48小时达到高峰。结论 替尼泊甙可抑制胃癌细胞的生长,诱导细胞的凋亡,其诱导凋亡的能力可能是通过把细胞阻滞在G2/M期实现的。     

X线照射对不同放射敏感性鼻咽癌细胞中ATM mRNA表达的影响

[目的]研究X线照射对鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2中ATM mRNA表达水平的影响。[方法]采用逆转录酶聚合酶链式反应（RT-PCR）技术．以β-actin为内参照,测定10GyX线照射前后CNE1、CNE2中ATM mRNA表达水平的变化：[结果]在X线照射前,CNE1中ATM mRNA基础水平与CNE2相似：存X线照射后,CNE1中ATM mRNA水平在照射4h后明显升高。12h后恢复：CNE2中ATM mRNA水平在照射后12h内无显著变化．[结论]在具有不同放射敏感性的鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2中．ATM mRNA表达的基础水平相似,在经X射线处理后,CNE1和CNE2中ATM mRNA水平变化规律不同。这种ATM mRNA表达差异可能是导致两者放射敏感性不同的原因之一．     

Survivin、Bcl-2的表达与鼻咽癌相关

背景与目的研究凋亡抑制基因Survivin、Bcl-2在鼻咽癌中的表达及其与鼻咽癌的相关性。材料与方法应用免疫组化分析68例鼻咽癌组织、45例鼻咽慢性炎症组织中Survivin和Bcl-2的表达;RT-PCR分析24例鼻咽癌组织、18例鼻咽慢性炎症组织中Survivin和Bcl-2的表达。结果免疫组化分析表明,鼻咽癌组织中,Survivin、Bcl-2的表达阳性率分别为69.1%(47/68)和79.4%(54/68),鼻咽慢性炎症组织中Survivin、Bcl-2的表达阳性率分别15.6%(7/45)和13.3%(6/45),对两组标本中的Survivin、Bcl-2分别进行比较,差别均有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR分析表明,鼻咽癌组织中,Survivin、Bcl-2的表达阳性率分别为79.2%(19/24)和87.5%(21/24),鼻咽慢性炎症组织中Survivin、Bcl-2的表达阳性率分别22.2%(4/18)和27.8%(5/18),对两组标本中Survivin、Bcl-2分别进行比较,差别均有统计学意义(P<0.01)。结论Survivin、Bcl-2的表达与鼻咽癌相关,两者的表达可能在鼻咽组织癌变过程中起重要作用。