实验性骨延长区TGF-β_1的基因表达和细胞定位

目的　了解骨延长过程中TGF β1 基因在骨延长区组织细胞的表达和定位 ,从分子水平探讨延长区骨修复的机制。方法　采用胫骨上干骺端截骨延长 (1.0mm d)动物模型 ,14只山羊分 7个时相点取材。通过延长区组织冰冻切片 ,TGF β1 地高辛标记的cDNA探针原位杂交。结果　延长早期延长区阳性表达细胞逐渐增加 (15d)至最高峰 ,此阶段主要定位于增生的纤维细胞和血管内皮细胞 ;以后细胞阳性表达率迅速下降 ,定位于延长区骨小梁边缘的成骨细胞。结论　TGF β1 在延长区骨修复过程中具有重要作用 ,提高和维持延长区TGF β1 基因高水平有效表达 ,可能对促进和加快延长区骨愈合具有重要的意义。     

应用外源性的rhBMP-2后牵引成骨区生长因子TGF-β1的表达

目的通过动物实验,研究应用外源性的rhBMP-2后牵引成骨区生长因子TGF-β1的表达。方法在32只成年大耳白兔的一侧下颌骨前部行骨切开术,分别将空白胶原、rhBMP-2胶原复合物植入下颌骨切开处,用牵引器延长一侧下颌骨4 mm,分别于牵张完成后的第1、3、7、14 d处死一组动物,取牵引区新生骨痂行组织学及TGF-β1免疫组化染色,通过细胞图像分析仪测量牵引区新骨生成的平均灰度值,利用SPSS软件采用方差分析方法进行统计分析。结果牵引区周围组织均愈合良好,牵引间隙新骨逐渐形成,应用rhBMP-2组中的新骨组织周围TGF-β1的表达比空白胶原组中的多。结论动物实验表明,应用外源性的rhBMP-2后牵引成骨区生长因子TGF-β1的表达明显增强。     

应用外源性的rhBMP-2后牵引成骨区生长因子TGF—β1的表达

目的通过动物实验,研究应用外源性的rhBMP-2后牵引成骨区生长因子TGF-β1的表达。方法在32只成年大耳白兔的一侧下颌骨前部行骨切开术,分别将空白胶原、rhBMP-2胶原复合物植入下颌骨切开处,用牵引器延长一侧下颌骨4mm,分别于牵张完成后的第1、3、7、14d处死一组动物,取牵引区新生骨痂行组织学及TGF-βl免疫组化染色,通过细胞图像分析仪测量牵引区新骨生成的平均灰度值,利用SPSS软件采用方差分析方法进行统计分析。结果牵引区周围组织均愈合良好,牵引间隙新骨逐渐形成,应用rhBMP-2组中的新骨组织周围TGF-β1的表达比空白胶原组中的多。结论动物实验表明,应用外源性的rhBMP-2后牵引成骨区生长因子TGF-β1的表达明显增强。     

单侧下颌骨牵引成骨术对颞下颌关节的影响

目的 :探讨单侧下颌骨牵引成骨术 (mandibulardistractionosteogenesis,MDO)对颞下颌关节 (temporo mandibularjoint,TMJ)的影响。方法 :恒河猴 1 0只行右侧MDO ,间歇期 5d ,牵引速度 0 .5mm× 2次·d-1 ,共 1 5d。分别于牵引完成时、牵引后 2、4、6、1 2周时拍摄X线片并处死一组动物 ,取双侧TMJ制作脱钙石蜡切片 ,行HE染色及TGF β1免疫组化染色。结果 :术后恒河猴下颌中线明显偏向左侧 ,前牙开牙合、反牙合 ,右侧后牙重度开牙合 ,左侧后牙为反牙合。X线片上见右侧髁状突向后上方移位 ,左侧髁状突向前下方移位。切片上见术后早期双侧TMJ均发生变化 ,右侧髁状突退行性变及增生活动均较左侧明显 ,且变化累及软骨各层及软骨下骨组织。稳定期开牙合逐渐关闭 ,髁状突逐渐向正常位置移动。牵引完成后 1 2周右侧后牙开牙合基本关闭 ,前牙开牙合及反牙合仍较明显 ,髁状突位置略偏后 ,仍存在退行性变 ;左侧髁状突除软骨肥大层仍较厚外 ,其位置及组织学表现接近正常。稳定期不同阶段髁状突TGF β1阳性着色均较对照组显著增强。 结论 :MDO可造成TMJ解剖位置变化及组织形态较轻微的退行性变 ,但远期这些变化可以得到逐步修复。TGF β1在TMJ退行性变的修复重建过程中 ,可能发挥了一定作用。     

转化生长因子-β及其受体在不同时期增生性瘢痕组织中的表达

目的:检测转化生长因子-β(TGFβ1、TGFβ2)和受体(TGFβRⅠ、TGFβRⅡ)在增生性瘢痕组织中的表达特征,探讨其对增生性瘢痕形成的作用。方法:采用免疫组化染色方法检测TGFβ1、TGFβ2、TGFβRⅠ、TGFβRⅡ在人正常皮肤组织及增生性瘢痕中的表达水平与定位。结果:在正常对照皮肤组织中,TGFβ1在基底细胞层呈弱阳性表达,在真皮成纤维细胞表达为阴性;TGFβ2在基底细胞层、棘细胞层下方、真皮层血管内皮细胞表达为阳性;TGFβRⅠ、TGFβRⅡ在表皮、毛囊上皮细胞、真皮层血管内皮细胞表达阳性,真皮成纤维细胞基本不表达。增生性瘢痕真皮组织中大量成纤维细胞的TGFβ1、TGFβ2、TGFβRⅠ、TGFβRⅡ表达均为强阳性;而部分瘢痕病史超过1年的患者瘢痕真皮层中主要为胶原组织,成纤维细胞较少,成纤维细胞TGFβ1、TGFβ2表达为阴性,但TGFβRⅠ、TGFβRⅡ的表达则为强阳性。结论:转化生长因子-β和受体在增生性瘢痕组织早期形成中发挥重要的促进作用。     

联合移植修复长段骨缺损的实验研究

[目的 ]探讨肌肉瓣与骨髓加松质骨颗粒联合移植修复长段骨缺损中碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)及转化生长因子 (TGF β)的表达及修复机理 .[方法 ]在健康中国家兔双侧桡骨中段制作 2 0mm的长骨缺损模型 ,实验组行肌肉瓣与骨髓加松质骨颗粒联合移植 ,对照组单纯植入肌肉瓣 .不同时期进行各组家兔的组织学观察以及bFGF与TGF β多克隆抗体的免疫组织化学染色 .[结果 ]行移植术后 2 ,4 ,6 ,8周时实验组家兔软骨细胞、成骨细胞及骨细胞的bFGF及TGF β呈强阳性染色 .对照组家兔在移植修复 4周时肌肉组织间形成的软骨细胞中有少量软骨细胞呈阳性染色 ,6周及 8周骨缺损两端新生骨痂中部分骨细胞的bFGF及TGF β呈阳性染色 ,但阳性染色细胞数与实验组相比有显著性差异 .[结论 ]肌肉瓣与骨髓加松质骨颗粒联合移植早期在骨缺损局部中bFGF与TGF β的表达与分泌旺盛 ,促进诱导成骨 ,较快地修复长段骨的缺损 .     

TGFβ1对人血管内皮细胞整合素β3及粘着斑激酶表达的影响

目的　观察转化生长因子 β1 ( TGFβ1 )对培养的人血管内皮细胞表面整合素 β3 表达及粘着斑激酶 ( focal adhesion kinase,FAK)活性的影响。方法　采用细胞 - EL ISA和免疫沉淀 -蛋白质酪氨酸激酶活性测定法。结果　 1ng/ m l、5 ng/ ml及 10 ng/ ml浓度的 TGFβ1 分别作用于培养的人血管内皮细胞 ( ECV30 4) 6、2 4和 48小时后 ,其细胞表面整合素 β3 蛋白的表达均增加 ( P<0 .0 5 ) ,且呈剂量依赖性。 5 ng/ m l和 10 ng/ m l的 TGFβ1 作用于培养的 ECV30 46小时和 2 4小时后 ,细胞中 FAK活性明显增高 ( P<0 .0 5 )。结论　 TGFβ1 促进血管内皮细胞表面整合素 β3 的表达和 FAK活性增高 ,可能是单核细胞和内皮细胞之间粘附功能增加 ,血管增生的机制之一     

PRF 对下颌骨牵引成骨区骨保护素表达的影响

目的 探讨富血小板纤维蛋白（PRF）对牵引成骨（DO）区骨保护素（OPG）表达的影响。方法 将25 只大耳白兔随机分5 组，分别行双侧下颌骨皮质骨切开术，一侧下颌骨牵引间隙放置PRF 膜，作为实验组，对侧作为对照组，分别于牵引稳定期1、3、7、14 和28 d 各处死一组动物，将下颌骨DO 区骨块制成脱钙石蜡切片，进行苏木精- 伊红染色及OPG 免疫组织化学染色，细胞图像分析仪测量牵引间隙处骨痂OPG 表达情况。结果 下颌骨牵引处形成新生骨，免疫组织化学OPG 染色主要表达在成骨细胞的胞浆中。实验组与对照组在稳定期1、3、7、14 和28 d 的OPG 阳性表达细胞数比较，差异有统计学意义（P <0.05）。结论 PRF 能促进兔下颌骨DO 区新骨的生成，OPG 可能在DO 过程的早期调控组织细胞应力信号传递，发挥成骨作用。     

麦胚提取物对成骨细胞TGF-β_1和IGF-1表达的影响

目的　通过研究成骨细胞中转化生长因子 (TGF) - β1 和胰岛素样生长因子(IGF) - 1的表达 ,进一步探讨麦胚乙醇提取物对大鼠成骨细胞的作用机理。方法　体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞 ,用免疫组化方法测定成骨细胞中TGF β1 和IGF 1的表达情况 ,用HPIAS - 1 0 0 0图象分析仪对各组表达进行定量分析。结果　麦胚提取物培养的大鼠第 3代成骨细胞的TGF β1 和IGF 1呈阳性表达 ,麦胚提取物组的TGF - β1 和IGF 1平均光密度都显著高于阴性对照组 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1 ) ,但与阳性对照组比较无显著差异 (P >0 .0 5)。结论　麦胚乙醇提取物可增强新生大鼠成骨细胞TGF β1 和IGF 1的表达     

股骨头缺血性坏死的bFGF表达

目的:了解碱性成纤维生长因子(bFGF)在股骨头缺血性坏死(ANFH)中的表达情况.方法:对缺血性坏死的股骨头进行取材,取材点分别位于A:股骨头缺血性坏死区中心;B:股骨头缺血性坏死区边缘;C:股骨头正常骨质区.标本行组织学检查和bFGF免疫组化检查.结果:A区及C区bFGF无阳性染色.B区:主要以新生的小血管和部分新生骨为主,血管内皮细胞和部分成骨细胞出现细胞核黄染的阳性表现.结论:在ANFH的病理过程中,bFGF缺乏是影响了坏死股骨头修复一个重要因素.     

转化生长因子β与骨代谢

骨重建涉及一系列成骨细胞(OB)和破骨细胞(OC)的信息交换,是一个由循环激素和局部因子共同调节的复杂过程。转化生长因子β(TGF - β)在骨形成和骨吸收中的平衡方面起重要作用,它在骨修复与骨重建过程中的作用逐渐成为人们研究的热点。1TGF - β及其受体的结构TGF - β超家族包括多个亚家族。它们是一类结构相似,功能不同的肽类物质,包括TGF - βs、激活素(activins)、抑制素(inhibins)、骨形成蛋白(BMPs)及苗勒抑制物(mullerian)等。它们的氨基酸序列具有不同程度的同源性,是由高度保守的7个半胱氨酸残基,其中6个相互靠近,形成链内二硫键,将几个β片层结构连接在一起的刚性结构,而第7个半胱氨酸残基形成链间二硫键,构成具有生物活性的二聚体。在哺乳动物体内,存在TGF - β1、TGF - β2、TGF - β33种异构体形式,三者具有极高的同源性。TGF - β必须通过与细胞膜表面特异性受体结合才能发挥作用。现已知Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型受体是有高亲和性的细胞膜受体。Ⅰ、Ⅱ型受体为糖蛋白,它们均为跨膜的丝氨酸/和苏氨酸激酶。Ⅲ型受体为蛋白多聚糖。2TGF - β及其受体的生物学特性骨是体...     

兔下颌牵引成骨区应用rhBMP-2对BMP-7表达的影响

目的:研究不同剂量外源性rh BMP-2对兔下颌骨牵引成骨区新骨BMP-7表达的影响。方法:选取成年日本大耳白兔45只,雌雄不限,适应性饲养1周,随机分为对照组、实验1组和实验2组,每组各15只。在兔下颌骨磨牙前行截骨术,分别将空白胶原载体、rhBMP-2胶原复合物1.5 mg和rh BMP-2胶原复合物3 mg植入其下颌骨切开处。观察稳定期的第1、3、7、14、28 d的兔的新骨生成,并用免疫组织化学染色法观察BMP-7的表达。结果:成骨细胞(OB)和骨髓基质细胞(SC)的细胞质免疫组织化学法BMP-7阳性表达呈棕色或棕褐色颗粒状着色,结果显示BMP-7的表达与rh BMP-2有剂量依赖性。在同一稳定期内实验组兔成骨细胞和骨髓基质细胞与对照组有显著性差异(P<0.05),且实验2组与实验1组也有显著性差异(P<0.05),在同一剂量下,稳定期1 d BMP-7表达达到高峰,主要集中在间充质细胞的细胞质中,随着稳定期的延长其表达逐渐下降,但稳定期3 d和7 d BMP-7仍为强阳性表达,稳定期14 d进一步减弱,到稳定期28 d表达的很少,达到正常水平。结论:BMP-7在兔牵引成骨过程的不同稳定期的成骨细胞和骨髓基质细胞有不同的表达,说明其对牵引成骨的新骨形成有一定的调节作用。     

下颌骨牵张后bFGF与IGF—I在新骨组织中的定位表达

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)与胰岛素样生长因子（IGF-I）在下颌牵张成骨过程中的表达及意义。方法 对12只成年山羊行双下颌骨牵张成骨术，在牵张结束后的第1、2和4周分别处死4只动物，取牵张区新骨组织用免疫组化检测bFGF和IGF-I的表达，另选2只同龄山羊作为正常对照。结果 下颌骨牵张后bFGF与IGF-I均呈高水平表达，bFGF定位于间充质或成纤维样细胞、成骨细胞以及新骨基质，而IGF-I则主要定位于成骨细胞。结论 bFGF与IGF-I可能在下颌骨牵张后的新骨生成中起着重要的调控作用。     

骨保护素在兔下颌牵张后新骨组织中的表达

目的 研究骨保护素（osteoprotegerin,OPG）在不同时期下颌骨牵张成骨过程中表达水平的变化,探讨其可能发挥的作用.方法在30只成年大耳白兔的一侧下颌骨前部行骨切开术,用牵引器延长一侧下颌骨4mm,分别于牵张完成后的第1,3,7,14,28天处死一组动物,取牵引区新生骨痂行组织学及OPG免疫组化染色.结果下颌牵引延长后牵引间隙均有新骨形成,免疫组化染色OPG主要定位于成骨细胞的胞浆中.其中以牵引结束的第1,7天的表达最强,以后逐渐下降,第28天仅有微弱表达.结论OPG可能在牵引成骨过程中特别是调控组织细胞应力信号传递的早期发挥重要作用.     

转化生长因子-β_1对猪关节软骨细胞合成糖胺多糖的作用

目的 :观察转化生长因子 β1 (TGF β1 )对软骨细胞外分泌基质糖胺多糖 (GAG)含量的影响。方法 :通过Ⅱ型胶原酶消化法获得高活性的软骨细胞 ,定量接种 6× 10 6 个细胞于培养皿 ,在细胞贴壁后更换培养基时 ,加入TGF β1 10ng mL ,每周传代 1次 ,连续 5周 ,留取所有培养液用阿利新蓝法测定软骨细胞外分泌基质GAG的变化 ;利用光镜观察原代及传代软骨细胞的生长情况。结果 :体外培养的软骨细胞从传代后合成糖胺多糖类基质 ,第 2代传代细胞分泌GAG的能力最强 ;加入TGF β1 能明显促进传代软骨细胞合成大量的糖胺多糖类基质。结论 :TGF β1 能明显促进体外培养的传代软骨细胞合成大量的糖胺多糖类基质     

下颌骨牵张后bFGF与IGF-Ⅰ在新骨组织中的定位表达

目的　研究碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)与胰岛素样生长因子 (IGF- )在下颌牵张成骨过程中的表达及意义。方法　对 12只成年山羊行双下颌骨牵张成骨术 ,在牵张结束后的第 1、2和 4周分别处死 4只动物 ,取牵张区新骨组织用免疫组化检测 b FGF和 IGF- 的表达。另选 2只同龄山羊作为正常对照。结果　下颌骨牵张后 b FGF与 IGF- 均呈高水平表达 ,b FGF定位于间充质或成纤维样细胞、成骨细胞以及新骨基质 ,而 IGF- 则主要定位于成骨细胞。结论　 b FGF与 IGF- 可能在下颌骨牵张后的新骨生成中起着重要的调控作用。     

不同剂量rhBMP-2对兔下颌骨牵引成骨区新骨生成的影响及其OPG表达

目的 研究不同浓度rhBMP-2在不同时间对兔下颌骨牵引成骨区新骨生成的影响及牵引区新骨中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)的表达.方法 在48只成年大耳白兔的一侧下颌骨前部行骨切开术,分别将空白胶原、rhBMP-21.5 mg和rhBMP-2 3 mg胶原复合物植入下颌骨切开处,用牵引器延长一侧下颌骨4mm,稳定期第1、3、7、14天,分别处死各组动物,取牵引区新生骨痂行OPG免疫组化染色.结果 下颌牵引延长后牵引间隙均有新骨形成,免疫组化染色OPG主要定位于成骨细胞的胞浆中.在同一时间内,应用rhBMP-2组较对照组有显著性差异(P<0.05),且rhBMP-23 mg剂量组较rhBMP-2 1.5 mg剂量组有显著性差异(P<0.05).结论 动物实验表明,rhBMP-2能促进兔下颌骨牵引成骨区新骨的生成并具有浓度依赖性.     

下颌骨牵引成骨过程中转化生长因子表达

目的通过建立兔下颌骨牵引成骨实验动物模型,研究下颌骨牵引成骨过程中TGF-β1表达及意义。方法选用新西兰白兔30只,随机选取6只动物作空白对照组,24只动物右侧下颌骨植入外置式颌骨牵引器。经7d延迟期后,按1mm/d速率延长下颌骨7d,固定期8周。在延迟期第7天,牵引期第2、4、7天,固定期第1、3、6、8周分别处死3只动物,采用免疫组化、RT-PCR方法,检测TGF-β1表达变化。结果TGF-β1表达贯穿下颌骨牵引成骨全过程,下颌骨牵引成骨过程中不同时相多种组织细胞参与表达TGF-β1。TGF-β1 mRNA及其蛋白表达在牵引早期达到高峰,此后逐渐减弱。结论TGF-β1在下颌骨牵引成骨血运重建及新骨生成过程中发挥重要作用。TGF-β1可能与传导机械牵引力刺激的细胞信号传导有关,从而启动血运重建和新骨生成机制。     

实验性骨延长区TGF—β1的基因表达和细胞定位

目的 了解骨延长过程中TGF-β1基因在骨延长区组织细胞的表达和定位,从分子水平探讨延长区骨修复的机制。方法 采用胫骨上干骺端截骨延长（1.0mm/d）动物模型,14只山头分7个时相点取材。通过延长区组织冰冻切片,TGF-β1地高辛记的cDNA探针原位杂交。结果 延长早期延长区阳性表达细胞逐渐增加（15d）到进取高峰,此阶段主要定位于增生的纤维细胞血管内皮细胞;以后细胞阳性表达率迅速下降,定位于延长区骨小梁边缘的成骨细胞。结论 TGF-β1在延长区骨修复过程中具有重要作用,提高和维持延长区TGF-β1基因高水平有效表达,可能对促进加快延长区骨愈合具有重要的意义。     

转化生长因子β1在宫颈癌中的表达

转化生长因子β1(Ttransforming growth factor β1,TGFβ1)是一种具有广泛生物学作用的同源二聚体多肽.它可在细胞增殖、细胞外基质沉积、血管生成及免疫反应等生理病理过程中起作用[1].其在肿瘤发生和恶性转化过程中的作用尤其受到有关学者的重视.国内外文献已报道,多种肿瘤TGFβ1表达均强于其起源组织,而宫颈癌中TGFβ1的表达特点在国内还未见相关报道.本研究对72例宫颈癌进行TGFβ1免疫组织化学染色,以探讨TGFβ1在宫颈癌组织中的表达特点及其意义.