7例Colti病毒性脑炎的临床分析

目的 对Colti病毒性脑炎的流行病学、临床及预后进行探讨。方法 对1999～2001年住院的78例病毒性脑炎病人的血清做虫媒病毒的检测，发现7例病人Colti-IgM呈阳性反应，对这7例病人进行分析。结果 7例病人中4例是婴幼儿；全部在6～9月发病；病前先出现全身症状，继而出现中枢神经系统受损的表现；脑脊液4例正常，3例轻微变化；脑电图3例正常，4例有改变；CT4例正常，3例有改变。6例痊愈，1例有后遗症。结论 Colti病毒性脑炎以婴幼儿为主，可能是广州地区夏秋季脑炎病因之一，临床经过类似一般病毒性脑炎，预后好。     

儿童腮腺炎病毒性脑膜脑炎脑电地形图分析

目的:对66例患腮腺炎病毒性脑膜脑炎儿童进行脑电地形图检查与分析。方法:利用DBS—1018型脑电地形图仪,采集原始脑电波,做功率谱地形图。结果:异常60例,异常率(91％),脑电地形图主要表现为δ、θ频带功率值弥漫性增高。结论:脑电地形图对辅助临床诊断儿童腮腺炎病毒性脑膜脑炎具有重要价值。     

病毒性脑炎脑脊液病毒核酸检测的研究进展

目的 脑脊液病毒核酸检查是诊断病毒性脑炎的关键，而长期以来病毒学诊断技术敏感性和特异性很差，远远不能满足临床要求。随着分子生物学的迅速发展，以PCR技术为基础的各种分子生物学诊断技术，成为生物医学领域内最有价值的研究手段和病毒学诊断的金标准，已经广泛的应用于临床标本的检测，为病毒性脑炎病原学的基因诊断带来了突破性的进展；方法本文就病毒性脑炎的脑脊液采集时间、预处理和保存以及PCR技术的应用研究进展进行了综述；结论套式、逆转录和荧光定量PCR已越来越多的应用于临床，预料原位PCR将在检测脑脊液病毒核酸检测等方面有着重要的意义。     

病毒性脑炎脑脊液病毒核酸检测的研究进展

目的脑脊液病毒核酸检查是诊断病毒性脑炎的关键,而长期以来病毒学诊断技术敏感性和特异性很差,远远不能满足临床要求。随着分子生物学的迅速发展,以PCR技术为基础的各种分子生物学诊断技术,成为生物医学领域内最有价值的研究手段和病毒学诊断的金标准,已经广泛的应用于临床标本的检测,为病毒性脑炎病原学的基因诊断带来了突破性的进展;方法本文就病毒性脑炎的脑脊液采集时间、预处理和保存以及PCR技术的应用研究进展进行了综述;结论套式、逆转录和荧光定量PCR已越来越多的应用于临床,预料原位PCR将在检测脑脊液病毒核酸检测等方面有着重要的意义。     

脑心肌炎病毒（EMCV）感染昆明小鼠模型的建立

目的：建立EMCV感染昆明小鼠模型。方法：6～8周龄昆明小鼠,雌雄各半,分为空白对照组和EMCV高(100TCID₅₀/20 g)、中(10 TCID₅₀/20 g)、低(1 TCID₅₀/20 g)剂量组。分别于EMCV感染5 d、7 d、9 d、11 d、13 d、15 d称重,眼眶采血后,断颈处死。取心、脑、肝和脾组织,计算各器官脏器指数;qRT-PCR检测心、脑、脾、肝和外周血病毒载量;qRT-PCR检测心和脑IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA表达量;取心和脑,HE染色后观察组织病理损伤。结果：与空白对照组相比,高剂量的EMCV感染小鼠5 d时,能显著提高心脏指数(P<0.05)和极显著提高脾脏指数(P<0.01);qRT-PCR结果显示EMCV感染9 d时,小鼠心、脑、肝、脾和外周血病毒载量最高,中、低剂量EMCV感染小鼠各脏器中的病毒载量很低;高剂量的EMCV感染小鼠9 d时,心和脑IL-1β(P<0.01)、IL-6(P<0.001)和TNF-α(P<0.01)极显著升...     

20世纪末新出现的病毒性脑炎--尼巴病毒性脑炎

1∫恢中碌牟《拘阅匝?998年 9月马来西亚的Ｐｅｒａｋ州发生病毒性脑炎的流行 ,许多成年人出现高热、脑炎等临床症状 ,病例急剧增加 ,截至 1999年 5月 ,共发病 2 65例 ,死亡10 5例 ,死亡率达 40 %。由于该病发病凶险 ,死亡率高 ,且病因不清 ,震惊世界[1 ] 。 1999年初 ,与马来西亚毗邻的新加坡也发现同样的脑炎病人 ,经医院确诊的病例为 11例 ,死亡 1例。同年 3月马来西亚大学的研究人员从Ｐｅｒａｋ州Ｎｉｐａｈ镇的病毒性脑炎的尸解标本中分离到 1株病毒 ,该病毒颗粒为 160～ 30 0ｎｍ ,符合副粘病毒 (Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓ)形态特…     

脑电图在腮腺炎病毒性脑膜脑炎中的应用

目的:探讨脑电图在腮腺炎病毒性脑膜脑炎诊断中的作用.方法:对51例腮腺炎病毒性脑膜脑炎的患儿进行治疗前后的脑电图检查.结果:治疗前46例患儿脑电图异常,其中5例出现癫(癎)样放电.1～2周后复查仍有22例脑电图异常,其中1例仍有癫(癎)样放电.经1个月后复查有6例脑电图异常,其中1例仍有癫(癎)样放电.结论:脑电图对腮腺炎病毒性脑膜脑炎的早期诊断有很高的阳性率,而且对其预后的估计也有参考作用.     

山西省临汾市ECHO30病毒所致病毒性脑炎疫情的病原学分析

目的 对山西省临汾市一起病毒性脑炎疫情进行病原学分析.方法 用Real-timePCR方法对9份咽拭子标本进行肠道病毒核酸检测.对肠道病毒核酸阳性的标本,分别扩增肠道病毒5'UTR区和VP2基因区片段,PCR扩增产物测序后,经BLAST比对初步确定病毒型别为ECHO30;使用ECHO30的特异性引物扩增VP1基因部分片段,测序后使用MEGA 4.0软件与NCBI数据库的其他ECHO30毒株进行进化分析.结果 9份病毒性脑炎标本中有4份为肠道病毒阳性;经肠道病毒5'UTR片段、VP2基因和VP1基因测序,确定4条临汾株ECHO30病毒核苷酸序列与2004年浙江ECHO30株和ECHO30标准株Bastianni同源性较高,且4条ECHO30病毒VP1基因的差异性为0.5％.进化分析显示,本地区的4株ECHO30病毒自成一簇,且与中国大陆地区的其他参考株亲缘关系较近.结论 肠道病毒属ECHO30病毒引发山西省临汾市病毒性脑炎疫情,有必要监测本地区的病毒性脑炎病原谱.     

Mutations in the NS2B and NS3 genes affect mouse neuroinvasiveness of a Western European field strain of tick-borne encephalitis virus

An attenuated strain (263) of the tick-borne encephalitis virus, isolated from field ticks, was either serially subcultured, 5 times in mice, or at 40 degrees C in PS cells, producing 2 independent strains, 263-m5 and 263-TR with identical genomes; both strains exhibited increased plaque size, neuroinvasiveness and temperature-resistance. Sequencing revealed two unique amino acid substitutions, one mapping close to the catalytic site of the viral protease. These observations imply that virus adaptation from ticks to mammals occurs by selection of pre-existing virulent variants from the quasispecies population rather than by the emergence of new random mutations. The significance of these observations is discussed.     

JE Nakayama/JE SA14-14-2 virus structural region intertypic viruses: biological properties in the mouse model of neuroinvasive disease

A molecular clone of Japanese encephalitis (JE) virus Nakayama strain was used to create intertypic viruses containing either the 5'-C-prM-E or the prM-E region of the attenuated JE SA14-14-2 virus in the JE Nakayama background. These two intertypic JE viruses, JE-X/5'CprME(S) and JE-X/prME(S), respectively, generally resembled the parental JE virus in cell culture properties. Similar to virus derived from the JE Nakayama molecular clone (JE-XJN), JE-X/prME(S) was highly neuroinvasive and neurovirulent for young adult mice, whereas JE-X/5'CprME(S) was attenuated for neuroinvasiveness and only partially attenuated for neurovirulence. Immunization of young mice with JE-X/5'CprME(S) virus elicited neutralizing antibodies against JE Nakayama virus and conferred protection against encephalitis following challenge with JE Nakayama virus. The sequence of the JE-X/5'CprME(S) virus differed from that of JE-X/prME(S) virus at two nucleotides in the 5' UTR, 3 amino acid positions in the capsid protein, 4 positions in the prM protein and 1 in the envelope protein. For JE-X/prME(S) virus, the 4 differences in prM and the single substitution in the envelope represented reversions to the sequence of JE Nakayama virus. Overall, this study reveals that molecular determinants associated with the prM-E region of the attenuated JE SA14-14-2 virus are insufficient by themselves to confer an attenuation phenotype upon JE Nakayama virus. This suggests a role for determinants in the 5' UTR and/or the capsid protein of the JE SA 14-14-2 virus genome in influencing the virulence properties of the JE Nakayama virus in the mouse model.     

流感病毒致小鼠急性肺损伤模型建立及利巴韦林干预作用研究

目的 建立A/FM/1/47/(H1N1)流感病毒感染诱导的小鼠急性肺损伤模型,并使用利巴韦林对其进行治疗,观察其保护机制.方法 将30只13-15g的昆明(KM)小鼠随机分为三组(正常组、模型组和利巴韦林组),每组10只,模型组与利巴韦林组采用H1N1流感病毒经鼻腔接种,利巴韦林组小鼠配以药物治疗,定时称量各组小鼠的体质量、观察记录小鼠存活状态,连续观察15d;另取36只13-15g的KM小鼠,如上随机分为三组,每组12只,模型组与利巴韦林组采用H1N1流感病毒经鼻腔接种,利巴韦林组小鼠配以药物治疗,感染后第6d测量肺系数、肺湿/干重比、观察肺病理组织学变化、动脉血气分析、血清细胞因子含量和肺部病毒载量.结果 实验结果显示,流感病毒滴鼻感染可诱发小鼠病毒性肺损伤.利巴韦林可延长感染小鼠生存时间,降低肺水肿,改善低氧血症,抑制炎性细胞的分泌,抑制病毒在体内的复制.结论 本研究利用流感病毒感染小鼠的病毒性肺损伤,分析了利巴韦林对流感病毒诱发的病毒性肺损伤的保护作用.该模型对进一步开发抑制流感病毒性肺损伤的新药有重要意义.     

Colti病毒抗原制备、保存及其在检测患者血清Colti病毒抗体中的应用

目的 获得较高滴度和稳定的Colti病毒抗原，进一步开展Colti病毒感染的血清学诊断。方法 用C6／36细胞培养Colti病毒，于不同时间收获后进行病毒滴度测定。病毒经聚乙二醇(PEG)纯化浓缩后抗原分别保存于-20℃和4℃备用。利用该抗原采用ELISA法检测患者血清标本的Colti病毒抗体。结果 在制备Colti病毒抗原时，以细胞培养3—4周的病毒滴度最高，经PEG纯化浓缩的抗原于-20℃和4℃条件下，保存6个月，其抗原滴度仍保持在较高水平。特别是加入甘油的抗原无论在-30℃，还是在4℃下，甚至可保存2年。用这些抗原，检测疑似乙型脑炎或病毒性脑炎患者标本1141份，Colti病毒IgM抗体阳性130例，阳性率为11．4％(130／1141)，特别是检测广州市儿童医院患者标本41份，9份Colti病毒抗体阳性，阳性率为22．0％，其中5例临床诊断为病毒性脑炎。结论 为建立检测Colti病毒抗体及诊断试剂盒提供了较稳定的抗原，Colti病毒可能是引起我国夏、秋季脑炎的又一重要病原。     

Cytolytic effector pathways and IFN‐γ help protect against Japanese encephalitis

Japanese encephalitis, caused by infection with the neurotropic flavivirus, Japanese encephalitis virus (JEV), is among the most important viral encephalitides in Asia. While previous studies established an essential role of Ab and type I IFN, it is still unclear if the cell‐mediated immune responses, through their direct antiviral effector functions, contribute to protection against the fatal disease. We report here that mice defective in both the granule exocytosis and death receptor pathways of cytotoxicity display increased susceptibility to JEV. The two cell contact‐dependent cytotoxic effector mechanisms act redundantly within the CNS to reduce disease severity. We also demonstrate that IFN‐γ is critical in recovery from primary infection with JEV by a mechanism involving suppression of virus growth in the CNS, and that T cells are the main source of the cytokine that promotes viral clearance from the brain. Finally, we show by in vivo depletion of NK cells that this innate immune cell population is dispensable for control of JEV infection in the periphery and in the CNS. Accordingly, cell contact‐dependent cytolytic and IFN‐γ‐dependent noncytolytic clearance of virus mediated by T cells trafficking into the CNS help in recovery from lethal infection in a mouse model of Japanese encephalitis.     

Matrix protein mediated shutdown of host cell metabolism limits vesicular stomatitis virus-induced interferon-alpha responses to plasmacytoid dendritic cells

Upon infection with many different viruses, plasmacytoid dendritic cells (pDC) produce large amounts of type I interferon (IFN-/β). To address why upon vesicular stomatitis virus (VSV) infection pDC, but not conventional myeloid DC (mDC), are induced to produce IFN-, pDC and mDC were differentiated from bone marrow cells (BM-DC). Upon VSV infection BM-pDC produced IFN-, whereas BM-mDC did not. Notably, upon infection with VSV-M2, a VSV variant expressing a M51R mutant matrix (M) protein that showed a reduced sequestration of host cell metabolism, BM-pDC and BM-mDC mounted massive IFN- responses. Both DC subsets showed comparable RNA levels of retinoic acid inducible gene-I (RIG-I) and Toll-like receptor (TLR) 7 and were able to respond upon triggering with double-stranded RNA (dsRNA) or single-stranded RNA (ssRNA) analogs. Moreover, upon VSV-M2 infection IFN- production by both DC subsets was largely dependent on viral replication. Interestingly, upon virus infection BM-pDC, but not BM-mDC, up-regulated mRNA levels of nuclear export factors Nup96/98, probably reflecting cellular mechanisms to circumvent viral escape strategies. Collectively, these results indicated that cell types induced to produce IFN- upon viral infection are not primarily defined by cellular receptor configurations but rather by complex virus/host cell interactions.     

我国狂犬病病原学和病理形态学观察

报告四例狂犬病病例及对其尸脑组织的病原学和病理形态学观察。４例病人均有被犬咬伤史；发病后临床病状典型，表现为发热、恐水、怕风等；潜伏期和病程分别在２０～１３２天和７～１４天；临床诊断明确。死亡后尸检脑组织病理改变为病毒性脑炎病变，在感染神经细胞胞浆内均检到内基氏体。从尸脑组织中分离出狂犬病毒４株。又从４例病人血清中和２例病人脑脊液中分别检测出特异性狂犬病毒抗体各１例。     

大剂量免疫球蛋白治疗急性病毒性脑炎临床研究

目的 探讨静脉大剂量免疫球蛋白对急性病毒脑炎的辅助治疗作用．方法 55例急性病毒性脑炎患者随机分为研究组（27例）和对照组（28例），研究组给予人免疫球蛋白（每d0．25—0．3g／kg），连续冲击治疗5d．观察两组病人疗效、并发症、脑电图改变．结果两组病人显效率分别为51．9％和21．4％（P〈0．05），有效率分别为85．2％和53．6％（P〈0．05）、并发症感染分别为7．4％、32．1％（P〈0．05）；治疗2周后中度及重度异常脑电图比率分别为18．5％、46．4％（P〈0．05）．结论 大剂量免疫球蛋白辅助治疗急性病毒性脑炎能提高疗效、减少并发症，值得临床推广．     

淋巴滞留性脑水肿的动物模型

目的 建立一种简便易行、重复性好、符合人类发病条件的淋巴滞留性脑水肿模型。方法 采用阻断大鼠脑淋巴引流的方法,建立淋巴滞留性脑水肿的动物模型,观察其行为学变化,并从术后不同时间取脑标本,进行肉眼、普通光镜、透射及扫描电镜观察,证实脑水肿的存在。结果 所有动物均发生脑水肿,表现行为异常,脑膜脑脑组织肿胀、充血,小血管壁外膜及Virchow-Robin间隙增宽,内含大量水肿液,毛细血管基底膜肥厚,神经元固缩、轮廓不清晰或肿胀、坏死,胶质细胞增生、肿胀,硬脑膜表现凹凸不平、水肿明显。结论 阻断脑淋巴引流,可以制备淋巴滞留性脑水肿模型,其操作简便、成功率高、重复性好。     

引起河南省一起病毒性脑炎暴发的柯萨奇病毒B5的鉴定及其序列分析

目的 鉴定2011年引起河南省漯河地区一起病毒性脑炎(VE)暴发的病原体,并对分离的柯萨奇病毒B5(CVB5)进行基因特征分析.方法 采集漯河地区病毒性脑炎暴发期间29例患者的5份咽拭子、21份粪便和14份脑脊液,采用实时荧光RT-PCR方法分别检测总肠道病毒(PE)、EV71及CA16病毒核酸.所有标本均进行病毒分离培养,对其中5例患者的2份粪便和3份脑脊液的阳性分离产物进行VP1和5′-UTR区核苷酸序列测定及亲缘进化分析.结果 实时荧光RT-PCR结果显示,所有临床标本EV71和CA16病毒核酸检测均为阴性,咽拭子、粪便和脑脊液的PE核酸检测阳性率分别为60.0％(3/5)、61.9％(13/21)和85.7％ (12/14).咽拭子、粪便和脑脊液病毒分离率分别为20.0％(1/5)、25.0％(5/21)和29.0％ (4/14).VP1和5′-UTR区核苷酸序列BLAST分析及分子分型结果显示为CVB5,对其中5株分离毒株进行VP1全长基因分析显示彼此之间核苷酸同源性为97.9％ ～ 99.5％.与其同源性最近的毒株是2010年引起长春手足口病暴发的CVB5分离株CC10/10/Changchun,核苷酸同源性为97.1％～98.1％.与2010及2012年河南省平顶山地区的脑炎分离株COXB5/Henan/2010和03001N/HN/CHN/2011/CB5的同源性分别为89.0％～89.6％和91.8％～92.5％.VP1区遗传进化树显示此次分离株为基因型D,且与长春株成一簇.结论 导致此次病毒性脑炎暴发的病原体为肠道病毒CVB5,优势基因型的变迁可能与此次暴发相关.