三叶青提取物抗乙肝病毒活性的研究

目的 研究三叶青4个提取部位对乙肝病毒的抑制作用.方法 运用mT法检测样品药物导致50%细胞死亡的数值浓度为CC50;用ELISA方法检测样品药物达到抑制HbsAg、HbeAg分泌,以及运用荧光定量PCR法检测样品药物抑制病毒DNA复制量的50%时的浓度数值为IC50.结果 三叶青4个提取部位对乙肝病毒分泌的HbsAg、HbeAg均有抑制作用.结论 三叶青乙酸乙酯部位对乙肝病毒具有较强活性,能明显降低HBV的DNA复制水平,可进一步从中提取分离具有更强生物活性的物质,为新药开发提供物质基础.     

复方虎杖方体内外抗乙肝病毒的活性评价

目的 研究复方虎杖方体内外抗乙肝病毒作用.方法 体外实验采用CCK-8染色法检测复方虎杖方水提物、醇提物对HepG2.2.15细胞株的抗增殖活性,采用化学发光微粒子免疫检测法测定HBsAg、HBeAg含量,采用实时荧光定量PCR法检测HBV-DNA含量;体内实验采用血清斑点杂交法(Dot blot)测定给药5、10 d...     

利用2.2.15细胞株筛选抗乙肝病毒中草药的体外实验研究进展

抗病毒治疗是慢性乙型肝炎治疗的关键所在，但HBV宿主范围狭窄，缺少体外病毒繁殖系统。HBV转染细胞系2．2．15细胞株的建立为抗HBV药物的筛选提供了一个细胞模型，本文就2．2．15细胞株近十年来抗HBV中草药筛选情况作一综述。     

吉西他滨促进HepG2.2.15细胞系中乙肝病毒pgRNA转录和病毒复制及相关分子机制研究

目的：探讨吉西他滨对HepG2.2.15细胞中乙肝病毒前基因组RNA（pregenomic RNA,pgRNA）转录以及乙肝病毒复制的影响及其可能的作用机制。方法：使用不同浓度吉西他滨处理HepG2.2.15细胞,分别使用CCK-8法、流式细胞术、实时定量聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction,RT-PCR）、酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA）法检测细胞活性、细胞凋亡、细胞周期、细胞内乙肝病毒pgRNA、细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原（hepatitis B sur－face antigen,HBsAg）、乙型肝炎e抗原（hepatitis B e antigen,HBeAg）、乙肝病毒DNA（hepatitis B virus DNA,HBV DNA）;实时定量PCR法检测吉西他滨作用下HepG2.2.15细胞中与pgRNA转录有关的调控基因肝细胞核因子4α（hepatocyte nuclear factor 4,HNF4α）、P38蛋白激酶（P38 mitogen-activated protein kinase,P38MAPK）、环磷酸腺苷效应元件结合蛋白1（CAMP responsive element binding protein 1,CREB1）、核转录因子 p65（nuclear factor-kappa B p65,NF-?资b p65）、组蛋白去乙酰化酶1（histone deacetylase 1,HDAC1）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1α（peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1-alpha,PGC-1α）、叉头转录因子O1（forkhead box protein O1,FOXO1）、相关调控基因沉默信息调节因子2相关酶1（sirtuin 1,SIRT1）、P53 mRNA水平以及pgRNA的表达量,分析这些基因随吉西他滨浓度变化与pgRNA随浓度变化的相关性,找出与pgRNA变化相关性最高的基因,并使用Western blot在蛋白质水平验证吉西他滨对此基因蛋白质表达量的影响。结果：吉西他滨对HepG2.2.15细胞的生长显示出浓度以及剂量依赖性的抑制作用;吉西他滨使细胞凋亡率增高;吉西他滨使细胞更多的细胞停滞在G0G1期,而处于S期细胞比例降低;吉西他滨明显增加HepG2.2.15细胞内乙肝病毒 pgRNA,72 h之内呈现明显的时间与剂量依赖性;吉西他滨作用细胞24 h会使细胞培养上清液中的HBeAg增加;吉西他滨促进HNF4α mRNA、HNF4α蛋白质表达量增加,且在所检测的与乙肝病毒转录调节有关的基因中,HNF4α mRNA变化趋势与HBV pgRNA变化趋势相关性最高。结论：吉西他滨可在细胞水平促进乙肝病毒pgRNA转录以及乙肝病毒的复制,其机制为通过促进乙肝病毒转录因子HNF4α的表达实现的。     

乙肝病毒HBx-d382与HBx-d431突变体特异性抗体检测方法的建立及临床应用

目的建立检测乙肝病毒X基因突变体HBx-d382和HBx-d431特异性抗体的方法,探讨其在诊断HBV相关性肝细胞癌中的应用价值。方法通过生物信息和多肽合成的方法,制备HBx-d382和HBx-d431特异性多肽抗原。采用间接ELISA法对正常人和慢性乙肝病毒感染者和肝细胞癌病人血清中抗HBx-d382和抗HBx-d431特异性抗体进行检测。结果肝细胞癌病人血清中抗HBx-d382和抗HBx-d431抗体的阳性率均高于正常人、慢性乙肝病毒感染者（P<0.05）,慢性乙肝病毒感染者抗HBx-d382和抗HBx-d431抗体的阳性率高于正常人（P<0.05）。慢性乙肝病毒感染者HBsAg(+)/HBeAb(+)/HBcAb(+)模式抗HBx-d382阳性率明显低于HBsAg(+)/HBeAg(+)/HBcAb(+)模式和HBsAg(+)/HBcAb(+)模式（P<0.05）,而抗HBx-d431和抗HBxP阳性率在这些血清学模式之间无显著性差异（P>0.05）。结论抗HBx-d382和抗HBx-d431是乙肝病毒感染的一种特异性抗体,可以用于HBV携带者及慢性乙肝病人的监测,对预测肝细胞癌的发生有一定的意义。     

乙肝病毒e抗体和核心抗体二项阳性的DNA检测分析

乙肝病毒e抗体和核心抗体阳性在临床上大约可占2-10%,而人们对这部分人的基因检测往往比较忽略,其实这部分人群里也有少数有病毒的复制,具有一定的传染性,应引起临床重视。     

化学发光酶免疫分析法及ELISA法检测在乙肝病毒及核心抗体定性检测中的应用价值

目的对比分析化学发光酶免疫分析法及ELISA法检测在乙肝病毒及核心抗体定性检测中的应用效果。方法选取于2014年2月至2016年10月开封市中心医院收治的62例疑似肝炎患者,采集所有入选者血液样本,对其乙肝病毒(HBV)及核心抗体Ig G与Ig M先实施ELISA法检测,再实施化学发光酶免疫分析法检测,对比两种检测方法HBV检出情况及对乙肝Ig G与Ig M检出情况。结果 ELISA法HBV阳性检出率(95.16%)与化学发光酶免疫分析法(98.39%)相比,差异无统计学意义(P>0.05);ELISA法对乙肝Ig G与Ig M抗体检测阳性率为19.35%(12/62)、17.74%(11/62),低于化学发光酶免疫分析法69.35%(43/62)、80.65%(50/62),差异有统计学意义(P<0.05)。结论与ELISA法相比,化学发光酶免疫分析法对乙肝病毒的核心抗体检出率较高。     

茵兰益肝颗粒剂体外抑制乙型肝炎病毒复制的实验研究

[目的]验证含有茵兰益肝颗粒剂药效成分的药物血清对转染乙型肝炎病毒基因的人肝癌细胞系2.2.15(HepG2.2.15)细胞分泌乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和e抗原的(HBeAg)抑制作用。[方法]组织培养及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测。[结果]药物血清第8天对HepG2.2.15细胞半数毒性浓度(TC₅₀)为11.48%,最大药物血清无毒浓度(TC₀)为6.0%。6.0%~3.0%、1.50%、0.75%4种药物血清浓度在HepG2.2.15细胞中第8天对HBsAg的抑制率分别为7.89%~5.8%、1.6%、1.6%,对HBeAg抑制率均为负值。[结论]茵兰益肝颗粒剂对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg有较低的抑制率,对HBeAg无抑制作用。     

MRSA-PBP2a蛋白的体外诱导、抗体制备及鉴定

目的：探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant staphylococcus aureus,MRSA)蛋白的体外诱导;抗MRSA-PBP2a(pencillin binding protein2a,PBP2a)蛋白抗体的制备及效价鉴定．方法：采用NCCLS推荐的琼脂板稀释法和PCR法筛选MRSA,以β-内酰胺抗生素作为诱导剂,进行体外诱导产生PBP2a蛋白．免疫家兔后产生抗MRSA-PBP2a蛋白抗体,采全血分离血清,用改良双向免疫扩散法进行抗体滴度测定．结果：11株临床分离的金葡菌采用二种方法均检测出2株MRSA,SDS-PAGE和Western blot结果均显示从MRSA菌株中均能诱导出了PBP2a蛋白;免疫后均能产生较高的效价抗体,分别为1：32和1：64．结论：成功诱导出产生耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a蛋白菌株,并制备获得PBP2a蛋白,以及制备抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a蛋白抗体,为研究MRSA-PBP2a蛋白活性、MRSA的免疫治疗和MRSA快速鉴定方法学的建立奠定基础．     

乌头碱温敏凝胶的制备及其体外评价

目的制备乌头碱温敏凝胶制剂,并对其体外释药进行考察。方法以温度敏感型材料泊洛沙姆407（P407）为载体材料制备乌头碱温敏凝胶制剂,通过正交设计优选出乌头碱温敏凝胶的处方工艺。采用恒温摇床法以磷酸盐缓冲液（pH=5.80）为释放介质测定其体外释放度。结果乌头碱温敏凝胶的胶凝温度为36.1℃。96 h体外累积释放率为89.45%。结论本实验制备工艺简单,制得的乌头碱温敏凝胶缓释性能良好,具有较好的应用前景。     

吉非替尼PLGA微球的制备与体外释放研究

目的：以吉非替尼为模型药物,乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）为载体,研究制备吉非替尼PLGA缓释微球。方法：选择O/W乳化溶剂扩散法制备微球,在单因素考察的基础上,设计正交试验优化制备工艺;采用光学显微镜、扫描电镜等手段观察微球形貌;差式扫描量热法验证吉非替尼PLGA微球的形成;考察吉非替尼PLGA微球的体外释放行为。结果：差式扫描量热法结果表明,吉非替尼与PLGA分子间作用力发生变化,以分子形式均匀分散在载体中。吉非替尼PLGA微球呈白色球形颗粒,表面平整,平均粒径为（10.35±0.32）μm,包封率为（88.44±1.26）%,载药率为（10.00±0.23）%;体外释药符合零级释放方程Q=0.769t-1.800 9,r2=0.980 8。结论：吉非替尼PLGA微球制备工艺稳定,在体外缓慢释放药物达5 d以上,具有明显的缓释作用。     

风疹病毒单克隆抗体的制备

目的 制备用于研究风疹病毒（ＲＶ）生物学特性及血清学应用的特异性ＭｃＡｂ。方法 ＨＶ抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,无菌取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合建立杂交瘤细胞,并对杂交瘤细胞产生抗体特性及相应ＭｃＡｂ进行了分析。结果 成功建立了三株稳定分泌ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞５Ｄ５、５Ｇ５、２Ｆ７,染色体数目均大于９８条;相应ＭｃＡｂｓ均属ＩｇＧ１。与纯化ＲＶ抗原有强阳性反应。结论 该法可产出高特异性、高亲和力ＲＶ特异性ＭｃＡｂ。     

洛伐他汀缓释片的制备及其体外释放度的评价

目的 优选洛伐他汀缓释片的处方和最佳制备工艺.方法 通过单因素试验和正交试验,以释放度和休止角为指标,选择羟丙甲纤维素(HPMC)、微晶纤维素(MCC)、乳糖、十二烷基硫酸钠(SDS)、微粉硅胶和硬脂酸镁的用量.结果 主药与HPMC的最佳配比为1:2,与乳糖的最佳配比为1:3,与MCC的最佳配比为1:1.5,与SDS的最佳配比为1:0.1,微粉硅胶用量为0.2﹪,硬脂酸镁用量为0.5﹪.结论 制剂处方合理,制备工艺简单,稳定性好,质量可控.     

抗NGAL抗体的制备、纯化及其鉴定

目的制备出一定纯度、免疫反应性好的抗NGAL抗体。方法采用纯的NGAL蛋白免疫动物,制备抗血清,然后进行硫酸胺沉淀法纯化抗NGAL抗体,最后运用SDS-PAGE、Western blotting分别鉴定抗NGAL抗体的纯度与免疫反应性。结果硫酸胺沉淀法纯化抗NGAL,SDS-PAGE检测分析表明抗NGAL抗体的纯度大于70%,Western blotting检测分析表明抗NGAL抗体的免疫反应性良好。结论最后获得了一定纯度、免疫反应性良好的抗NGAL抗体。     

FAAP的原核表达、纯化与抗体制备

目的 构建pET28a-FAAP-His原核表达载体,表达His-FAAP融合蛋白,制备FAAP蛋白的多克隆抗体.方法 构建pET28a-FAAP-His原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21中并诱导表达His-FAAP融合蛋白,用纯化的FAAP蛋白免疫昆明小白鼠后,制备多克隆抗体,通过Western blotting检验抗血清的特异性和灵敏性.结果 成功构建pET28a-FAAP-His原核表达栽体.在大肠杆菌BL21中经1mM的异丙基-β -D-硫代半乳糖苷(isopropy-β -D-thiogalactoside,IPTG)37℃诱导4h后,融合蛋白有很高水平的表达.Western blotting结果显示FAAP抗体能够有效地检测人血管内皮脐静脉细胞内FAAP蛋白的表达.结论 成功地对FAAP进行了原核表达、纯化,抗FAAP小鼠的多克隆抗体具有较好的特异性,为进一步研究FAAP的结构与功能奠定了坚实的基础.     

抗TG独特型抗体对小鼠脾细胞抗体分泌的免疫调节

用鼠抗人甲状腺球蛋白(TG)单克隆抗体(18A_1,IgG_1)免疫家兔,抗血清流穿正常小鼠 Ig 与无关单抗(MIg-Lp-1-32)亲和层析柱,吸除抗同种型、同种异型抗体。经 ELISA 竞争抑制、中和抑制试验证明制备出抗 TG 独特型抗体(ATG-Ab_2)。ATG-Ab_2与 TG 免疫小鼠的脾细胞体外作用18h,能特异地抑制小鼠脾细胞分泌抗 TG,而对经 Fn 免疫的小鼠脾细胞分泌抗 Fn 无影响,表明其具有下调节免疫的作用。     

基于表位多肽的抗TRIM22抗体的制备及其初步应用

 目的 制备抗TRIM22多肽抗体及鉴定其性能。 方法 将TRIM22 N端15个氨基酸的多肽（MDFSVKVDIEKEVTC）与钥孔嘁血蓝蛋白（KLH）偶联,免疫新西兰白兔制备抗血清;将TRIM22多肽与Affi-Gel 10偶联制备免疫亲和层析柱, 兔抗血清经亲和层析纯化后得到TRIM22多肽特异性抗体;采用ELISA测定抗体效价、Western blot来鉴定抗体特异性,并利用该抗体通过间接免疫荧光实验来检测TRIM22蛋白的细胞内定位。 结果 获得了抗TRIM22特异性抗体。Western blot结果显示该抗体能特异识别真核及原核表达的TRIM22蛋白。利用该抗体进行的间接免疫荧光实验发现TRIM22蛋白主要定位在HepG2细胞核中。 结论 该抗体的制备为TRIM22分子的功能研究提供了有力的工具。