丁基苯酞对缺血脑组织中及低糖低氧刺激后培养的神经细胞中胆碱乙酰化酶活性的影响

 目的:观察丁基苯酞(dl-NBP),d-NBP和l-NBP对脑缺血后皮层和纹状体中以及低糖低氧和NMDA刺激后培养的胎鼠皮层神经元中胆碱乙酰化酶活性变化的影响?方法:大脑中动脉堵塞起始处造成大鼠局灶性脑缺血;胎鼠皮层神经元以低糖低氧培养基培养造成低糖低氧模型;胆碱乙酰化酶活性以分光度法进行测定?结果:脑缺血后缺血区皮层和纹状体中胆碱乙酰化酶活性分别下降了61.3%和58.4%?dl-NBP,d-NBP和l-NBP(10和20mg·kg^-1,ip)于脑缺血后5和60min给药2次皆可显著提高脑组织中胆碱乙酰化酶活性?dl-NBP,d-NBP和l-NBP(0.1～10μmol·L^-1)对低糖低氧及NMDA刺激后神经细胞中胆碱乙酰化酶活性也有明显的提高作用?结论:dl-NMP改善局灶性脑缺血后动物的学习记忆功能可能与其对胆碱能神经功能的改善有关?     

丁基苯酞对大鼠皮层神经元损伤后谷氨酸和5-羟色胺释放的影响

 目的:观察丁基苯酞 (3-n-butylphthalide,NBP)对低糖低氧刺激后培养的胎鼠皮层神经细胞谷氨酸和5-HT释放的影响?方法:胎鼠皮层神经元以低糖低氧培养基培养造成低糖低氧模型;谷氨酸和5-HT以荧光分光光度法进行测定?结果:低糖低氧10h可使神经细胞谷氨酸的释放量增加,dl NBP(1和10μmol·L^-1)和l-NBP(10μmol·L^-1)可降低细胞培养基中谷氨酸的浓度,而同剂量的d-NBP对谷氨酸的释放无明显影响?dl-NBP和l-NBP亦可抑制由花生四烯酸 (100μmol·L^-1)引起的神经细胞谷氨酸的释放?本实验结果还显示,dl-NBP(1和10μmol·L^-1)及l-NBP(10μmol0·L^-1)可降低低糖低氧后神经细胞培养基中5-HT的浓度?结论:dl-NBP和l-NBP可抑制谷氨酸和5-HT的释放,这可能是其抗脑缺血作用的机理之一?     

RP-HPLC法测定络通胶囊中丁基苯酞的含量

目的:采用HPLC法测定络通胶囊中丁基苯酞的含量。方法:用ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈-0.1%磷酸溶液(40∶60)为流动相;检测波长228 nm;流速1.0 ml/min;柱温30℃。结果:丁基苯酞在浓度16.4μg/ml~262.4μg/ml范围内呈良好的线性关系(r=0.9999)。平均回收率为98.20%,RSD为1.14%。测得络通胶囊中丁基苯酞的含量分别为1.21 mg/g、1.18 mg/g、1.19 mg/g。结论:本方法简便,准确,重复性好,可用于络通胶囊中丁基苯酞的含量测定。     

丹参素对低氧低糖损伤神经细胞的影响

目的 评价丹参素对低氧低糖诱导人拟神经元细胞SH-SY5Y损伤的影响.方法采用细胞培养于人工无糖培养基、1.5% O_2和5% CO_2环境建立低氧低糖损伤SH-SY5Y细胞模型.以SRB方法测定存活细胞数,相差和荧光显微镜观察细胞凋亡,采用细胞培养上清乳酸脱氢酶(LDH)活性反映细胞受损伤程度,并测定了细胞内脂质过氧化产物丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性以反映细胞氧化胁迫状态.结果 低氧低糖损伤24h,存活细胞数量明显减少,SH-SY5Y细胞皱缩、吖啶橙和溴化乙啶双染可见明显核皱缩、碎裂及凋亡小体出现,细胞培养上清LDH水平明显升高,细胞内MDA含量明显升高,SOD水平降低,表明细胞受到严重的氧化胁迫损伤.丹参素可抑制细胞内SOD活性的降低,对上述各损伤指标均有明显的干预作用,且具有浓度依赖性.结论 丹参素对低氧低糖所致SH-SY5Y神经瘤细胞损伤有明显保护作用,有望成为有临床应用价值的神经保护剂.     

丁基苯酞对原代培养神经元线粒体功能的保护作用

目的:探讨丁基苯酞(butylphthalide,NBP)对原代培养神经元在低糖低氧损伤下的保护作用及线粒体作用机制。方法:采用Hoechst 33342和PI共染的方法,观察NBP对低糖低氧损伤造成神经细胞坏死和凋亡的影响,并用荧光探针标记以及分光光度法检测NBP对神经细胞线粒体膜电位、线粒体膜流动性及线粒体呼吸链复合酶IV活性的影响。结果:NBP(10-6~10-4mol/L)能显著减少低糖低氧引起的神经细胞坏死和凋亡;机制研究表明它能明显改善由损伤引起的神经细胞线粒体膜电位、线粒体膜流动性及线粒体呼吸链复合酶IV活性的降低。结论:NBP对低糖低氧损伤导致的神经细胞坏死和凋亡具有良好的保护作用,而线粒体保护可能是其作用机制之一。     

补肾益智汤联合丁基苯酞对老年血管性痴呆血液流变学及自由基损伤的影响

目的:观察补肾益智汤联合丁基苯酞治疗老年血管性痴呆的临床疗效及对血液流变学、自由基损伤的影响。方法:将医院2013年1月—2015年1月收治的70例血管性痴呆患者按随机数字表分为研究组和对照组各35例,对照组患者单纯口服丁基苯肽0.2 g/次,3次/d,研究组在对照组的基础上再口服自拟补肾益智汤,3个月为1个疗程,治疗2个疗程,治疗前、治疗后3个月、治疗后6个月进行简易精神状态检查(MMSE-R)、韦氏记忆量表(WMS)、痴呆程度量表(CDR)、日常生活自理能力量表(ADL)评估及中医证候评分,治疗前、治疗后6个月空腹抽血进行血液流变学指标[全血高切黏度(HS)、全血低切黏度(LS)、血浆黏度(PV)、红细胞沉降率(ESR)]及超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)检测,治疗结束后进行临床疗效评估。结果:研究组和对照组治疗后3个月、治疗后6个月的MMSE-R、WMS明显升高(P<0.05),CDR、ADL明显降低(P<0.05);组间比较,研究组治疗后6个月的MMSE-R、WMS明显高于对照组(P<0.05),CDR、ADL明显低于对照组(P<0.05)。研究组治疗后善忘、善误、神情恍惚、善恐易怒、头晕、耳鸣、失眠较治疗前明显改善(P<0.05),且善忘、善误、神情恍惚、头晕、耳鸣、失眠的改善效果优于对照组(P<0.05)。组内比较,研究组和对照组治疗后HS、LS、PV、ESR较治疗前明显降低(P<0.05);组间比较,研究组治疗后HS、LS、PV、ESR明显低于对照组(P<0.05)。研究组和对照组治疗后SOD明显高于治疗前(P<0.05),MDA明显低于治疗前(P<0.05);组间比较,研究组治疗后SOD明显高于对照组(P<0.05),MDA明显低于对照组(P<0.05)。研究组总有效率为77.14%,明显高于对照组48.57%(χ2=6.668,P<0.05)。结论:自拟补肾益智汤联合丁基苯酞能够协同减轻自由基损伤,改善微循环,从而改善行为能力、认知功能、中医证候,值得临床推广使用。     

川芎苯酞对大鼠局部脑缺血的保护作用及机理探讨

目的:研究川芎苯酞对大鼠局部脑缺血的保护作用并探讨其作用机理。方法:栓线法制作大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO),观察川芎苯酞对大鼠脑缺血的影响;采用在体动脉血栓形成、静脉血栓形成法,观察其对血栓形成的影响;并研究了其对大鼠血小板聚集、血液流变性的影响。结果:川芎苯酞(25,50mg·kg^-1)灌胃给药明显改善大脑中动脉栓塞所致脑缺血大鼠的行为障碍,减少脑缺血区梗死面积,抑制大鼠体内血栓的形成和ADP诱导的大鼠血小板聚集,改善大鼠血液流变性。结论:川芎苯酞对大鼠局部脑缺血具有明显的抑制作用,机制可能与其改善凝血状态、抑制血小板依赖性血栓的形成有关。     

补肾中药对老年大鼠脑和脾脏中乙酰胆碱酯酶、胆碱乙酰化转移酶活性及胆碱能M-受体功能的影响

目的:通过测定脑和脾脏中乙酰胆碱酯酶(AchE)、胆碱乙酰化转移酶(ChAT)活性和 M-受体结合容量(Rt)等指标,探讨补肾中药延缓脑功能衰老的机理。方法:用微量酶底物比色法测定 AchE 活性,放射酶分析法测定 ChAT 活性以及用放射性标记配基受体结合方法测定 M 受体结合容量。结果:老年大鼠脑和脾脏中 AchE 活性比青年对照组显著升高,ChAT 活性明显降低,M-受体 Rt值也显著降低。SRBC 免疫后,脑和脾脏中 AchE 活性较未免疫的老年大鼠更高,ChAT 活性降低,表明外来抗原产生的免疫应答可通过增加 AchE 活性及降低 ChAT 活性而降低 Ach 含量。补肾中药可抑制未免疫和 SRBC 免疫后老年大鼠脑和脾脏中 AchE 活性,增加 ChAT 活性,增加 M-受体 Rt 值,改善脑的记忆功能。结论:补肾中药可以通过调节 Ach 的合成和分解酶活性以增加脑和脾脏组织中 Ach 含量,提高 M 受体 Rt 值,从而提高老年大鼠脑记忆功能。     

艾灸对老年鼠乙酰胆碱含量及胆碱脂酶活性影响的研究

目的：研究脑内胆碱能系统功能在衰老过程中的变化,以探讨艾灸延缓衰老的作用机制。方法：以自然老龄大鼠为衰老模型,设以青年组、老年组和老年艾灸组：老年艾灸组则用直径约0．8cm的艾条温和灸“百会”、“肾俞”穴;利用HPLC分析技术观察乙酰胆碱（Ach）、胆碱乙酰转移酶（ChAT）、胆碱脂酶（枷）的含量及活性。结果：通过8个疗程的艾灸治疗,艾灸组ACh的含量及ChAT的活性有所增高,而AChE活性则用所降纸。结论：说明艾灸能通过对中枢胆碱能损害的修复作用,而达到延缓脑老化的功效。     

艾灸对老年鼠乙酰胆碱含量及胆碱脂酶活性影响的研究

目的:观察脑内胆碱能系统功能在衰老过程中的变化,以探讨艾灸延缓衰老的作用机制.方法:以自然老龄大鼠为衰老模型,用直径约0.8cm的艾条温和灸老龄大鼠的"百会"、"肾俞"穴,利用HPLC分析技术观察乙酰胆碱(Ach)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)、胆碱脂酶(AchE)的含量及活性.结果:通过8个疗程(5日为1个疗程)的艾灸治疗,老龄大鼠艾灸组Ach含量及ChAT活性较老龄大鼠模型组有所增高(P＜0.01,P＜0.05),而AchE活性则有所降低(P＜0.01).结论:艾灸能通过对中枢胆碱能损害的修复作用从而达到延缓脑老化的功效.     

Effect of Toki-Shakuyaku-San (TJ-23) on the activity of choline acetyltransferase in the brain of menopausal rats

This study was designed to examine the effect of TJ-23 on the synthesis of acetylcholine menopausal rats. TJ-23 (500 mg/kg body weight) was administered daily through drinking water for either 1 or 3 months. Treatment with TJ-23 for 1 month resulted in an increase in the choline acetyltransferase (ChAT) activity in the ventral hippocampus, but there was no statistically significant change in the frontoparietal cerebral cortex. Treatment with TJ-23 for 3 months resulted in a decrease in the ChAT activity in the frontoparietal cortex, but there was no statistically significant change in the hippocampus. Furthermore, treatment with TJ-23 for 3 months resulted in a decrease in the ChAT activity in the amygdala-pyriform cortex complex. From these observations, it is inferred that TJ-23 treatment brings on the synthesis of acetylcholine in the frontoparietal cerebral cortex and hippocampus, and furthermore, treatment with the same regimen brings on different time sequences of acetylcholine synthesis in the frontoparietal cerebral cortex and hippocampus in menopausal rats.     

红景天苷对缺氧/缺糖损伤神经细胞的保护作用

目的 :以SH-SY5Y细胞缺氧 /缺糖损伤为模型 ,观察红景天苷对神经细胞保护的作用。方法 :流式细胞术检测细胞凋亡百分率及细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度 ,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率 ,用试剂盒显色法测定LDH的含量。结果 :缺氧 /缺糖损伤 2h可诱导神经细胞凋亡和坏死 ,分别为 18.5 9% (P<0.01)和 4 .94 % (P<0.01)。形态学观察也发现大量神经细胞染色质凝聚 ,核碎裂 ,凋亡小体产生 ,并显著增加细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度和LDH的释放 ,分别为 8.46nmol·L^-1(PP<0.01)和 16 .5 9% (P<0.01) ,并随缺氧 /缺糖损伤时间的延长而明显增高 ;红景天苷 (1～ 3μmol·L^-1)能显著降低神经细胞凋亡及坏死的百分率 ,降低细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度 ,减少LDH的释放 ,其作用随剂量增加而作用增强。结论 :红景天苷具有抑制SH-SY5Y细胞凋亡的作用 ,可对神经细胞起到保护作用 ,这种作用可能与其降低细胞内 [Ca²⁺ ]i浓度有关。     

复方脑益康对AD大鼠脑组织ChAT表达的影响

目的:观察中药复方脑益康对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)大鼠脑组织胆碱乙酰基转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)表达的影响。方法:采用大鼠双侧Meynert核(nucleus basalis of Meynert,NBM)注射鹅膏蕈氨酸(ibotenic acid,IBO)建立AD动物模型,灌胃给药28 d后,应用免疫组织化学染色和Western-blot印迹分析观察ChAT在AD大鼠额叶皮层的表达。结果:脑益康改善脑组织ChAT阳性神经元的形态及数量、增加ChAT蛋白的表达。结论:脑益康通过促进ChAT蛋白合成,增加乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)的合成,从而保护中枢胆碱能神经元。     

三七总皂苷抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠海马神经细胞凋亡的研究

目的 :以原代培养的大鼠海马神经细胞缺氧 /缺糖再给氧为模型 ,观察三七总皂苷对神经细胞凋亡的抑制作用。方法 :流式细胞仪检测凋亡细胞百分率 ,激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内Ca²⁺浓度 ,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死细胞百分率 ,同时 ,测定细胞乳酸脱氢酶 (LDH)的释放。结果 :神经细胞缺氧 /缺糖 5h后再给氧可诱导神经细胞凋亡和细胞坏死 ,并显著增加细胞内Ca²⁺浓度和LDH的释放 ,并随再给氧时间的延长而增加。三七总皂苷能降低神经细胞凋亡及坏死的百分率 ,降低细胞内Ca²⁺浓度 ,减少LDH的释放 ,三七总皂苷的作用随剂量增加而作用增强。结论 :三七总皂苷对缺血再灌注损伤后海马神经元的凋亡过程具有抑制作用 ,这种作用可能与其能降低细胞内Ca²⁺浓度有关。     

基于PI3K/AKT通路探讨水蛭、地龙提取物对MCAO/R小鼠脑缺血半暗带神经元的保护作用

[目的] 探究水蛭和地龙提取物对MCAO/R小鼠脑缺血半暗带神经元的保护作用及机制。[方法] 选用40只8周龄健康C57BL/cnc雄性小鼠,采用大脑中动脉线栓法制备脑缺血再灌注小鼠模型,造模成功后采用随机数字表法分为假手术组（Sham组）、脑缺血再灌注组（MCAO/R组）、水蛭提取物组、地龙提取物组。各给药组每日尾静脉注射给药1次,连续给药7 d。mNSS评分评价小鼠神经功能损伤,苏木精-伊红（HE）染色检测各组小鼠脑缺血半暗带组织病理变化,TUNEL染色检测小鼠脑缺血半暗带细胞凋亡率,Nissl染色观察神经元受损伤程度,蛋白免疫印迹（West-ern-Blot）法检测B淋巴细胞瘤-2 （Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、Cleaved Caspase-3、Caspase-3、磷脂酰肌醇3激醇（PI3K）、蛋白激酶B （AKT）、p-AKT、神经元核蛋白（NeuN）以及微管相关蛋白2 （MAP2）的蛋白表达情况,免疫荧光检测Bax,Bcl-2表达情况。[结果] 与MCAO/R组比较,水蛭提取物组、地龙提取物组,神经功能缺损、组织形态、神经元损伤情况均有不同程度改善,上调脑缺血半暗带PI3K、Bcl-2、NeuN、MAP2蛋白表达及升高p-AKT/AKT和Bcl-2/Bax比率。[结论] 水蛭、地龙提取物可以改善MCAO/R小鼠脑缺血半暗带神经元损伤,其机制可能是通过激活PI3K/AKT信号通路。     

羟基红花黄色素A抗缺氧/复氧所致神经元损伤的作用及机制研究

[目的] 考察羟基红花黄色素A（HSYA）抗缺氧/复氧（H/R）损伤神经元的作用及机制。[方法] 原代培养Wistar大鼠胎鼠皮层神经元,将神经元随机分为正常对照组、H/R组、羟基红花黄色素A低（5 μg/mL）、中（20 μg/mL）、高（80 μg/mL）剂量组,考察HSYA对神经元活力和乳酸脱氢酶（LDH）释放的影响;采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）和酶联免疫吸附实验（ELISA）分别检测脑源性神经生长因子（BDNF）、生长相关蛋白43（GAP-43）及Nogo-A等与神经元突触重塑相关指标的mRNA和蛋白表达。[结果] 与正常对照组比较,H/R组细胞活力明显降低,LDH释放明显增加（P<0.01）,BDNF及GAP-43 mRNA和蛋白表达均显著降低（P<0.05）,Nogo-A mRNA和蛋白表达显著增加（P<0.01）;与H/R组比较,HSYA低、中、高3个剂量组细胞活力均显著增强,LDH释放明显减少（P<0.01）,BDNF及GAP-43 mRNA及蛋白表达明显增加,Nogo-A mRNA和蛋白表达显著降低（P<0.05或P<0.01）。[结论] HSYA能够提高神经元活力,减少LDH释放,具有抗H/R所致神经元损伤的作用,该作用与促进BDNF表达有关;此外,HSYA还能促进GAP-43 mRNA和蛋白表达、抑制Nogo-A mRNA和蛋白表达,从而增加神经元突触可塑性。     

体外培养海马神经元糖氧剥夺损伤模型的建立及川芎嗪对其胞内钙离子的影响

目的研究川芎嗪对体外培养海马神经元糖氧剥夺损伤细胞内钙离子[Ca^2＋]i的影响。方法建立体外培养海马神经元糖氧剥夺（OGD）模型,应用激光共聚焦显微技术检测不同剂量川芎嗪对OGD状态下海马神经元内Ca^2＋的影响。结果成功建立海马神经元OGD模型,经检测模型组[Ca^2＋]i高于空白对照组（P〈0．05）;阳性药组和川芎嗪大、中剂量组[Ca^2＋]i均低于模型组（P〈0．05）。结论海马神经元OGD存在钙超载,川芎嗪具有钙拮抗作用,对脑组织有保护作用。     

三七总皂苷对大鼠海马神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的保护作用

目的观察三七总皂苷对大鼠海马神经细胞缺氧缺糖再给氧损伤的保护作用.方法建立缺氧/缺糖再给氧模型,模拟缺血再灌注损伤.流式细胞术检测凋亡细胞百分率,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死细胞百分率,同时,测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)的漏出和一氧化氮(NO)的产生量.结果神经细胞缺氧/缺糖5h后再给氧可诱导神经细胞凋亡和细胞坏死,并显著增加LDH的漏出和NO的产生,并随再给氧时间的延长而增加.三七总皂苷能降低神经细胞凋亡及坏死的百分率,减少LDH的漏出和NO的过量产生,三七总皂苷的作用随剂量增加而增加.结论三七总皂苷具有拮抗海马神经细胞凋亡的作用,这种作用可能与降低或抑制一氧化氮合酶(NOS)活性,减少NO的过量产生有关.