氯胍通过下调FASN/SREBP-1c通路抑制肝癌细胞增殖、集落形成及迁移

目的探讨氯胍对肝癌细胞Hep-G2及SMMC-7721增殖、集落形成和迁移的影响及可能机制。方法用不同浓度的氯胍分别处理Hep-G2及SMMC-7721细胞。采用MTT法检测细胞增殖情况,克隆形成实验检测细胞集落形成能力,Transwell检测细胞迁移能力,Western blotting检测脂肪酸合成酶(FASN)及调节元件结合蛋白(SREBP-1c)的表达情况。结果氯胍抑制Hep-G2及SMMC-7721的增殖、集落形成及迁移能力;Western blotting显示氯胍下调FASN及SREBP-1c的表达。结论氯胍能抑制肝癌细胞Hep-G2及SMMC-7721增殖、集落形成及迁移,其作用机制可能与下调FASN/SREBP-1c通路有关。     

人血管内皮生长因子shRNA真核表达载体对肝癌细胞系SMMC-7721的增殖影响

目的:使用VEGF shRNA真核表达载体转染肝癌细胞系SMMC-7721,观察对其增殖影响。方法:使用VEGF shRNA真核表达载体转染肝癌细胞系SMMC-7721,ELISA法检测转染前后肝癌细胞系SMMC-7721的VEGF蛋白表达量,检测转染前后肝癌细胞系SMMC-7721的增殖及细胞的克隆形成能力的变化。结果:VEGF shRNA真核表达载体大部分阻断肝癌细胞系SMMC-7721的VEGF蛋白表达,转染后细胞周期中,G1期细胞增多,S期细胞减少,细胞增殖能力降低;MTT法观察细胞生长速度变慢,单个细胞的克隆形成能力明显下降。结论:VEGF shRNA真核表达载体可明显抑制SMMC-7721细胞增殖能力,为将VEGF shRNA真核表达载体应用于肝癌的基因治疗提供依据。     

肝星状细胞对肝癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭的影响及作用机制研究

目的观察人肝星状细胞LX-2对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法人肝星状细胞LX-2条件培养基（HSC-CM）与肝癌SMMC-7721细胞共培养,设为HSC-CM组;人正常肝细胞LO2条件培养基(LO2-CM)与肝癌SMMC-7721细胞共培养,设为LO2-CM组（阴性对照）;1%FBS培养基与肝癌SMMC-7721细胞共培养,设为1%FBS组（空白对照）。采用CCK-8法检测3组肝癌SMMC-7721细胞增殖能力;Transwell侵袭实验检测培养48h后细胞侵袭能力;Westernblot检测增殖细胞核抗原（PCNA）、血管内皮生长因子（VEGF）、核因子资B（NF-资B）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）蛋白表达水平。结果HSC-CM组、LO2-CM组、1%FBS组肝癌SMMC-7721细胞增殖能力、侵袭能力、PCNA、VEGF、NF-资B、基质金属蛋白酶２（MMP-2）蛋白表达水平比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）;与LO2-CM组、1%FBS组比较,HSC-CM组肝癌SMMC-7721细胞增殖能力、侵袭能力均增强（均P＜0.05）;PCNA、VEGF、NF-资B、MMP-2蛋白表达水平均上调（均P＜0.05）。结论肝星状细胞可促进肝癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭等生物学行为,其作用机制可能与上调PCNA、VEGF、NF-资B、MMP-2表达水平有关。     

沉默Blimp-1促进IFN-γ表达抑制肝癌细胞的作用研究

目的探究B淋巴细胞诱导成熟蛋白-1(B-lymphocyte-induced maturation protein-1,Blimp-1)与肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡、侵袭的关系以及作用机制。方法实验分为对照组、shRNA-NC组、shRNA-Blimp1组;沉默肝癌细胞中Blimp-1基因的表达,实时荧光定量PCR(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测Blimp-1mRNA和蛋白表达,CCK-8法观察细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞的凋亡,Transwell法观察细胞的侵袭能力,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)的蛋白水平。结果与对照组相比,shRNA-Blimp1组细胞中Blimp-1 mRNA和蛋白的表达量均显著降低(P0.05)。沉默Blimp-1表达显著抑制SMMC-7721细胞增殖(P0.05),促进其凋亡(P0.05),显著降低细胞的侵袭能力(P0.05),显著上调IFN-γ蛋白水平(P0.05),但对IL-2蛋白水平无明显影响。结论沉默Blimp-1可促进IFN-γ蛋白表达,从而抑制肝癌细胞增殖、侵袭及促进凋亡。     

RAD51表达与肝细胞癌增殖侵袭能力及预后的关系

目的 探讨RAD51在肝细胞癌(HCC)组织中的表达、临床意义及其对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响。方法 利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库比较RAD51 mRNA在组织中的表达差异,采用实时荧光定量PCR在细胞系中验证表达差异,分析RAD51表达与生存时间、预后的关系。采用siRNA沉默肝癌SMMC-7721细胞系中的RAD51表达,进行CCK-8实验、Transwell小室实验比较细胞增殖、迁移侵袭能力的变化。结果 RAD51 mRNA在肿瘤组织、细胞的表达高于正常肝组织、细胞,高表达组患者的总体生存期较差,其表达水平可作为独立预后因素。沉默RAD51后SMMC-7721细胞的增殖能力下降,迁移侵袭能力明显受到抑制。结论 RAD51高表达与HCC患者更高的病理分级、临床分期有关,是影响总体生存预后的独立危险因素,沉默其表达可显著抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖、迁移及侵袭能力。     

miR-1-3p抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移并诱导其凋亡

目的 探讨在肝癌细胞SMMC-7721中微小RNA(miR)-1-3 p的表达变化对其增殖、迁移和凋亡的影响及miR-1-3p的作用机制.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-1-3p和CAAP1的相对表达量;SMMC-7721细胞按miR-1-3p过表达载体(miR-1-3p组)、pcDNA3组、miR-1-3p inhib-itor组和NC inhibitor组(对照组)分别转染,采用qRT-PCR检测转染效果,CCK-8实验检测细胞增殖能力,克隆形成实验观察并比较组间克隆形成率,流式细胞术和Western blot检测细胞凋亡及CAAP1蛋白表达,划痕和Transwell实验观察SMMC-7721迁移和侵袭.利用miRDB、TargetScan、miRanda数据库预测miR-1-3 p靶基因,双荧光素酶报告验证miR-1-3和CAAP1靶向性.结果 miR-1-3p在SMMC-7721细胞中的表达明显低于正常肝细胞LO2,差异有统计学意义(P<0.05);miR-1-3p上调,SMMC-7721增殖、迁移和侵袭能力显著下降,凋亡显著增强,而下调miR-1-3p的表达则作用相反;miR-1-3p和CAAP1具有靶向性;miR-1-3p过表达明显抑制CAAP1表达.结论 miR-1-3p上调可能通过与CAAP1的3'-UTR结合抑制SMMC-7721细胞增殖、侵袭、迁移.     

ADFMCHR激活PPAR γ抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长

目的:研究5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素(ADFMChR)激活过氧化物酶活化因子受体γ(PPARγ)抑制体外培养人肝癌SMMC-7721细胞增殖作用。方法:体外培养人肝癌SMMC-7721细胞。台盼蓝拒染法检测细胞生长;平皿克隆形成法检测细胞锚定依赖性生长;软琼脂克隆形成法检测细胞集落形成能力。结果:细胞计数结果显示,ADFMChR延长SMMC-7721细胞倍增时间,抑制SMMC-7721细胞生长,呈剂量依赖性。但是对预先用PPARγ阻断剂GW 9662孵育30分钟的SMMC-7721细胞,ADFMChR的生长抑制作用明显降低;平皿克隆、软琼脂克隆形成法结果显示,ADFMChR抑制SMMC-7721细胞的锚定依赖性生长能力和锚定非依赖性生长能力,而GW 9662可以降低ADFMChR对SMMC-7721细胞的增值抑制作用。结论:ADFMChR具有抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长作用,其机制与激活PPARγ有关。     

miR-122调控LAMC1表达与肝癌细胞迁移侵袭相关性研究

目的探讨mi R-122调控LAMC1表达与肝癌细胞迁移侵袭相关性研究。方法选取人正常肝细胞株LO2、肝癌细胞株Hep G2和高转移能力肝癌细胞株SMMC-7721,构建mi R-122 mimics稳定表达载体并对其进行转染,Real-Time PCR检测各组细胞株内micro RNA-122含量;CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡;划痕实验检测肝癌细胞迁移侵袭能力;生物信息学预测、荧光报告载体实验Real-Time PCR检测层粘连蛋白γ1(Recombinant laminin gamma 1,LAMC1)m RNA水平变化。结果与对照组人正常肝细胞株LO2相比,mi R-122过表达后,肝癌细胞株Hep G2和高转移能力肝癌细胞株SMMC-7721细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,LAMC1 m RNA含量显著降低,肝癌细胞株Hep G2和高转移能力肝癌细胞株SMMC-7721细胞侵袭和迁移能力显著下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论上调mi R-122表达可通过调控LAMC1表达抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

三氧化二砷抑制人肝癌细胞侵袭性的体外研究

目的：研究三氧化二砷（As2O3）对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭能力的影响,为As2O3用于原发性肝癌的治疗提供实验依据。方法：以0.25、0.5、1.0、2.0、4.0μg/ml的As2O3与人肝癌细胞株SMMC-7721孵育24、48和72h后,应用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）观察As2O3对细胞生长的影响;应用Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭和运动实验,观察As2O3对肝癌细胞侵袭能力的影响。结果：应用As2O3处理后人肝癌SMMC-7721细胞生长受到抑制,且有时间-浓度依赖性;同时肝癌细胞过膜细胞数减少,侵袭能力受到抑制。结论：As2O3在体外能有效抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖和侵袭能力,且有浓度依赖性。