外源性Apelin调节自噬对防治大鼠肺动脉高压形成的作用

  目的  从细胞自噬的角度,探讨外源性Apelin对肺动脉高压(PAH）的作用及相关机制。  方法  26只雄性SD大鼠随机分为对照组（n=6）、模型组（n=10）和干预组（n=10）,模型组和干预组采用左肺切除术联合野百合碱注射法（PE+MCT）制备大鼠PAH模型,对照组仅打开胸腔+注射等量生理盐水。从术后第2周开始,干预组每日按大鼠体质量腹腔注射10 nmol/kg Apelin-13,连续3周,对照组与模型组均注射等量生理盐水。3组大鼠均于术后第5周测量平均肺动脉压力（mPAP）,计算右心室肥厚指数（RVHI）,行HE染色观察肺组织及肺血管形态结构,肺组织免疫荧光染色检测自噬相关蛋白LC3的表达,实时荧光定量（qRT）-PCR测量肺组织自噬相关蛋白P62、Beclin-1的mRNA表达量,Western blot测量肺组织LC3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、P62、Beclin-1的蛋白表达量,肺组织免疫荧光染色检测自噬相关蛋白LC3的定位及表达。  结果  与对照组相比,模型组mPAP、RVHI升高（P<0.05）,肺组织结构紊乱、肺血管壁增厚,肺组织LC3蛋白表达量升高,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ升高,Beclin-1的mRNA和蛋白表达量升高,P62的mRNA和蛋白表达量下降（P<0.05）;Apelin-13干预后,上述指标均得到改善（P<0.05,与模型组比较）。  结论  外源性Apelin对PAH的形成具有一定的防治作用,其作用机制可能与Apelin抑制自噬有关。     

鞘内注射吗啡诱导脊髓背角自噬状态的改变

目的研究鞘内注射吗啡诱导吗啡耐受过程中大鼠脊髓背角自噬状态的变化。方法选择鞘内置管成功的成年雄性SD大鼠48只,随机分为M组和C组,每组24只。M组2次/d,连续7 d鞘内注射吗啡20μg;C组2次/d,连续7 d鞘内注射生理盐水。于鞘内注射前及第1、3、5、7天第2次鞘内注药后30 min采用电子VonFrey测痛仪测定机械缩足反射阈值,然后随机取6只大鼠L4～6脊髓背角采用Western blot测定自噬标记蛋白LC3Ⅱ、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ及自噬调节信号相关蛋白Beclin-1的表达。结果鞘内注射吗啡7 d后,吗啡镇痛作用较第1天下降60.2%,提示出现吗啡耐受形成。C组各时点LC3Ⅱ及Beclin-1均有少量表达,各时点比较差异无统计学意义;与C组比较,M组各时间点脊髓背角Beclin-1、LC3Ⅱ表达量及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均显著上调(P<0.05);M组内不同时点比较,第1天LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值最高(P<0.05),随后逐渐下降;第1天Beclin-1表达最高(P<0.05),随后下降,在第5天后表达量趋于稳定。结论鞘内注射吗啡可诱导脊髓背角自噬增加,Beclin-1可能参与鞘内注射吗啡诱导所致的自噬状态改变。     

Apelin-13对脑缺血再灌注损伤作用的初步研究

目的:研究Apelin-13对缺血/再灌注小鼠脑损伤的作用,并初步探讨其对自噬性细胞死亡的影响。方法:取健康雄性CD-1小鼠,随机分为假手术(sham)组、生理盐水(Saline)组、Apelin组;Apelin组和Saline组首先建立脑缺血再灌注(MCAO/R)模型,再灌注即刻给予同侧侧脑室注射Apelin-13或等量生理盐水,然后在再灌注48 h后,进行神经功能方面检测,同时利用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色评估脑梗死体积;缺血再灌注24 h和48 h后,采用West-blot法检测各组自噬相关蛋白LC3的表达情况。结果:Apelin-13可显著降低小鼠脑缺血再灌注后神经功能缺损症状,减少脑梗死体积,减低自噬相关蛋白LC3的表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值。结论:Apelin-13对小鼠脑缺血再灌注损伤有一定的保护作用,抑制神经细胞的自噬性死亡可能是其作用机制之一。     

Adropin对脂肪细胞自噬及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶通路的影响

目的探讨Adropin对脂肪细胞自噬及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)通路的影响。方法将小鼠胚胎成纤维前脂肪细胞3T3-L1诱导分化为成熟脂肪细胞,随机分为对照组、Adropin组、自噬激动剂组、Adropin+自噬激动剂组。对照组细胞不予特殊处理,Adropin组细胞加入Adropin (终浓度为1 000 nmol·L-1),自噬激动剂组加入西罗莫司(终浓度为100 nmol·L-1),Adropin+自噬激动剂组细胞加入Adropin(终浓度为1 000 nmol·L-1)和西罗莫司(终浓度为100 nmol·L-1),继续培养2 h;采用单丹磺酰尸胺染色检测各组细胞中自噬空泡情况,细胞免疫荧光染色法检测各组细胞微管相关蛋白轻链3(LC3)表达,采用Western blot法检测各组细胞自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ、p62及PI3K/AKT通路蛋白PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、AKT、磷酸化AKT(p-AKT)的表达。结果与对照组比较,Adropin组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05)。与对照组比较,自噬激动剂组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05)。Adropin+自噬激动剂组与对照组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1、p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。与Adropin组比较,自噬激动剂组、Adropin+自噬激动剂组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05)。与自噬激动剂组比较,Adropin+自噬激动剂组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05)。4组细胞中PI3K、AKT蛋白相对表达量两两比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。结论 Adropin可抑制脂肪细胞自噬,其机制可能是通过激活PI3K/AKT通路而实现。     

Apelin-13对葡萄糖剥夺乳鼠心肌细胞自噬的影响及机制

目的观察血管紧张素1型受体相关蛋白配体（apelin-13）对损伤心肌细胞自噬的影响,探讨其可能的作用机制。方法体外培养3 d龄内的SD乳鼠心肌细胞,通过葡萄糖剥夺（glucose deprivation,GD）方法建立心肌细胞损伤模型,将细胞随机分为5组：正常对照组（Control组）、葡萄糖剥夺组（GD组）、Apelin-13预处理组（GD＋Apelin-13组）、Tricribine＋Apelin-13预处理组（GD＋Apelin-13＋Tricribine组）和阻断剂组（Tricribine组）。采用透射电镜观察细胞内自噬体的变化,免疫沉淀脂质激酶分析法检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）的活性,Western-blotting法检测细胞内自噬相关蛋白-微管相关蛋白1轻链3（LC3）的表达,以及信号通路相关蛋白Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的表达。结果葡萄糖剥夺可诱导乳鼠心肌细胞自噬体数量、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加（P〈0.01）;Apelin-13预处理能减轻葡萄糖剥夺引起的心肌细胞损伤,使自噬体数量、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值下降,提高PI3K的活性,上调Akt、mTOR蛋白的磷酸化水平（P〈0.01）;Akt特异性阻断剂Tricribine可以使Apelin-13的上述保护作用减弱（P〈0.01）。结论 Apelin-13在一定程度上可以抑制GD诱导的心肌细胞自噬,机制可能与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

柴黄清胰活血颗粒对重症急性胰腺炎大鼠胰腺组织细胞自噬的影响

目的 观察柴黄清胰活血颗粒对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺组织细胞自噬的影响。方法 将SD大鼠随机分为假手术组(SO组)、SAP组和柴黄清胰活血颗粒治疗组(CH组),应用3.5%牛磺胆酸钠建立SAP模型,CH组予以柴黄清胰活血颗粒灌胃,SO组和SAP组予以生理盐水灌胃,12、24 h分批处死大鼠。苏木素-伊红(HE)染色对胰腺组织进行病理学评价;Western blot检测自噬效应蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅰ(LC3-Ⅰ)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、可溶/不可溶自噬底物募集蛋白(Soluble/Insoluble p62)、溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)相对表达水平;免疫荧光双染色法检测LC3表达,并进行LC3和Insulin共定位分析。结果 12、24 h时,与SO组比较,SAP组和CH组病理学评分明显升高,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、LAMP2、p62(Insoluble)相对表达水平明显升高,p62(Soluble)相对表达水平明显降低,LC3免疫荧光强度升高,差异有统计学意义(P<0.05)。12、24 h时,与SAP...     

天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠血管内皮细胞 自噬相关信号通路Ca2+/AMPK/mTOR 的影响

目的 探讨天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠（SHR）血管内皮细胞自噬相关信号通路Ca2+/AMPK/ mTOR 的影响。方法 将30 只雄性SHR 大鼠随机分为SHR 组、尼莫地平组（5.4 mg/kg）及天麻钩藤饮组 （10.26 g/kg）,另设京都种大鼠（WKY）作为对照组,灌胃体积为10 ml/kg,连续给药6 周。采用无创血压仪 分别检测各组给药前、给药2 周后、给药4 周后及给药6 周后的大鼠尾动脉收缩压;采用酶联免疫吸附法 （ELISA）检测给药6 周后各组大鼠血浆血管紧张素Ⅱ（ANG Ⅱ）、白细胞介素1（IL-1）及钙调素（CaM） 水平;采用Western blot 检测给药6 周后各组大鼠血管内皮细胞中自噬标志物（Beclin-1）、微管相关蛋白 轻链（LC3- Ⅱ）及自噬通路相关腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）,以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR） 的表达情况;采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测给药6 周后各组大鼠血管内皮细胞中自噬通路相 关AMPK、mTOR 基因的表达情况。结果 与WKY 组比较,SHR 组大鼠尾动脉收缩压增高,血浆ANG Ⅱ、 IL-1 及CaM 含量增加,血管内皮细胞中自噬标志物Beclin-1、LC3- Ⅱ和自噬通路相关AMPK、mTOR 蛋白 及mRNA 表达水平均上调（P <0.05）;与SHR 组比较,尼莫地平组和天麻钩藤饮组大鼠血压均降低（P <0.05）, 血浆ANG Ⅱ、IL-1 及CaM 含量下降,且两者血管内皮细胞中自噬标志物Beclin-1、LC3- Ⅱ和自噬通路相 关AMPK、mTOR 蛋白及mRNA 表达水平均降低（P <0.05）。结论 天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠血管内 皮细胞自噬相关信号通路Ca2+/AMPK/mTOR 具有明显的调控作用,可能是其降压的重要机制之一。     

清毒汤对重症肝损伤大鼠肠上皮细胞自噬的影响

目的 观察清毒汤对实验性重症肝损伤大鼠血清中内毒素及白细胞介素-17（interleukin-17,IL-17）及白细胞介素-23（interleukin-23,IL-23）和肠组织中自噬相关蛋白LC3、Beclin-1的影响。方法 将SPF级Wistar雄性大鼠采用数字表法随机分为正常组、模型组、乳果糖组、中药组,除正常组外,其余各组每日灌胃给予12 mg/kg硫代乙酰胺（thioacetamide,TAA）,持续12周,建立TAA致实验性重症肝损伤大鼠模型。第8周末,乳果糖组、中药组每日予以乳果糖1.6 g/kg、清毒汤5.95 g/kg灌胃治疗,连续4周后取材。HE染色观察肝与结肠组织病理变化,透射电镜观察肠上皮细胞中自噬体,酶联免疫吸附法检测大鼠血清中内毒素、IL-17、IL-23的含量,Western blotting法检测肠组织自噬相关蛋白LC3、Beclin-1表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠肝肠组织大量炎性浸润,自噬体较少,内毒素、IL-17、IL-23浓度显著升高,LC3蛋白及Beclin-1含量均显著下降（P<0.01）;经清毒汤干预治疗后,炎性浸润明显减少,自噬体明显增多,内毒素、IL-17、IL-23浓度明显下降,且LC3Ⅱ/LC3I、Beclin-1蛋白含量均显著升高（P<0.01）。结论 中药清毒汤可减轻TAA致肝损伤模型大鼠的肝、肠组织损伤,降低内毒素、IL-17及IL-23浓度,并提高自噬体数量及LC3、Beclin-1蛋白含量,说明清毒汤可能通过激活重症肝损伤大鼠的肠上皮细胞自噬,减少炎性因子的释放来降低内毒素的产生,从而减轻肝脏损伤。     

自噬在子宫肌瘤中作用研究

目的 研究子宫肌瘤细胞中自噬的程度,探讨自噬对子宫肌瘤的影响.方法 随机选取2013年7月至2014年6月该院因子宫肌瘤住院的患者20例,取子宫肌瘤组织和同一病例正常子宫平滑肌.其中各取10例组织消化为细胞,利用单丹黄酰尸胺(MDC)染色后检测荧光度,检测自噬囊泡数量.另取10例组织提取蛋白,利用Western blot检测自噬相关蛋白Ⅱ型微管相关蛋白轻链3(LC3-Ⅱ)、Beclin-1和P62表达水平.结果 肌瘤细胞中自噬囊泡荧光度明显低于正常子宫平滑肌细胞(P<0.05),肌瘤细胞中LC3-Ⅱ、Beclin-1和P62蛋白水平也明显低于正常子宫平滑肌细胞(P<0.05).结论 子宫肌瘤细胞中自噬水平明显降低,自噬抑制可能为子宫肌瘤发生的原因之一.     

低温复合丙泊酚对大鼠海马神经元凋亡蛋白表达及超微结构变化的影响

目的 观察低温复合丙泊酚对大鼠海马神经元凋亡蛋白Caspase-3、自噬相关蛋白Beclin 1和LC3-Ⅱ及其神经元超微结构变化的影响,探讨丙泊酚对低温所致大鼠海马神经元自噬与凋亡的干预作用.方法 将大鼠分为空白对照组(A组)、低温丙泊酚组(B组)和低温水合氯醛组(C组),B、C两组低温干预30 min,各组进行心脏灌注,断头取脑,制备大鼠海马神经元组织标本,用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Caspase-3的表达,用Western blot检测Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的表达,透射电镜观察神经元超微结构的变化.结果 3组Caspase-3、Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的水平差异有统计学意义(P＜0.05);透射电镜结果显示B、C组大鼠海马区神经元均有不同程度的改变,尤其是C组神经细胞凋亡现象明显.结论 低温状态下海马神经元仍有一定的自噬与凋亡现象,而丙泊酚则可减少这种损害,具有较好的神经元保护作用.     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

喉癌主癌灶手术切缘的临床特点分析

目的探讨研究喉癌主癌灶手术的安全切缘在临床上的特点。方法回顾性分析2007年6月—2011年3月已经确诊喉癌的患者100例,随机分成A、B两组,A组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取镜下观察分析;B组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取肉眼观察分析,将结果进行临床特点分析比较。结果早期的喉癌患者和晚期的喉癌患者的阳性切缘例数,差异无统计学意义（P〉0.05）;晚期的阳性切缘发生次数高于早期的阳性切缘发生次数,差异有统计学意义（P〈0.05）。声门上区[SG]2、3和5、10mm;跨声门型[TG]2、3mm和5、10mm的切缘对比,差异有统计学意义（P〈0.05）。SG、G、TG、IG的2mm和3mm,5mm和10mm对,差异无统计学意义（P〉0.05）。肉眼阳性切缘观察39个,镜下阳性切缘观察43,两者差异无统计学意义（P〉0.05）。结论依据原发不同部位、不同分期和不同范围选取适合的切线,就可以有效地减少阳性切缘的发生。     

儿童腹痛328例病因诊断及分析

目的：根据儿童急性腹痛的特点,诊断儿童腹痛应综合临床及相关检查提供的依据,做出准确诊断,给予适当治疗。方法：对临床328例腹痛患儿进行选择性辅助检查和分析。结果：小儿腹痛病因复杂,腹腔内疾病占64．63％,共17种病因;腹腔外疾病占35．37％,共6种病因。结论：仔细询问病史、认真体格检查、密切观察病情、针对性地选择辅助检查,在儿童腹痛的诊断上具有重要的意义。