瘦素抑制巨噬细胞中马尔尼菲篮状菌增殖的机制研究

［摘要］　目的　探讨瘦素抑制巨噬细胞中马尔尼菲篮状菌（TM）增殖的机制。方法　培养THP-1细胞并经佛波酯（PMA）刺激诱导分化为THP-1巨噬细胞,加入TM共培养,洗去未被吞噬的TM孢子。实验组予瘦素进行干预,对照组不予瘦素干预。应用菌落形成单位（CFU）实验检测THP-1巨噬细胞中TM的增殖情况。应用实时荧光定量PCR法检测Toll样受体（TLRs）及其下游信号通路因子的mRNA表达水平。结果　CFU实验结果显示,终浓度为1～15 μg/ml瘦素均可有效抑制THP-1巨噬细胞中TM的增殖（P<0.05）,且在终浓度为5 μg/ml时即可获得最佳的抑制效应。实时荧光定量PCR结果显示,实验组TLR2、TLR6 mRNA表达水平高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,但两组TLR3、TLR4、TLR7 mRNA表达水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。实验组髓样分化原发反应基因88（MyD88）、促分裂原活化蛋白激酶1（MAPK1）、白介素（IL）-1β mRNA表达水平高于对照组,IL-6 mRNA表达水平低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,但两组肿瘤坏死因子（TNF）-α和巨噬细胞炎症蛋白1α（MIP-1α） mRNA表达水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论　瘦素可以抑制THP-1巨噬细胞中TM的增殖,这可能是通过上调TLR2/6信号通路、激活炎症因子实现的。     

丹皮酚对VEGF和SDF-1在糖尿病大鼠视网膜上表达的干预作用

［摘要］　目的　探讨丹皮酚对糖尿病大鼠视网膜基质细胞衍生因子-1(SDF-1)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的干预作用。方法　将36只雄性SD大鼠随机分为正常对照组（CON组）、丹皮酚组（DPF组）和糖尿病组（DM组）,每组12只。按干预时长不同,各组又再分为1月组、3月组和5月组,每组4只。通过腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型。应用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）法检测各组SDF-1和VEGF的mRNA表达水平。通过HE染色观察血管内皮细胞核突破内界膜的数量。结果　RT-qPCR检测结果显示,在干预1个月、3个月和5个月时间点,DM组SDF-1 mRNA和VEGF mRNA的表达水平均显著高于CON组和DPF组（P<0.05）,DPF组表达水平稍高于CON组,但差异无统计学意义（P>0.05）。HE染色结果显示,DM组和DPF组大鼠视网膜突破内界膜的细胞核数均较CON组显著增加（P<0.05）。DM组和DPF组视网膜突破内界膜的细胞核数随干预时间的延长而增加,且DPF组各时间点的细胞核数均显著少于DM组（P<0.05）。结论　丹皮酚可以通过下调糖尿病大鼠视网膜SDF-1和VEGF的表达来抑制视网膜新生血管形成。     

黄连素逆转人结肠癌细胞奥沙利铂耐药性的作用及机制

［摘要］　目的　探究黄连素（Ber）逆转人结肠癌细胞奥沙利铂(OXA)耐药性的作用及机制。方法　选用人结肠癌耐OXA细胞THC-8307/OXA进行实验,分为对照组、OXA组和Ber（5、10、20 μg/ml）+OXA组。采用倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-qPCR检测MDR-1 mRNA的表达,Western blot检测P-gp、PI3K、Akt和p-Akt蛋白的表达。结果　与OXA组比较,Ber（5、10、20 μg/ml）+OXA组的细胞存活率显著降低（P<0.05）,凋亡率显著升高（P<0.05）;MDR-1 mRNA、P-gp蛋白、p-Akt蛋白、PI3K蛋白的表达水平及p-Akt/Akt值均显著降低（P<0.05）。其中Ber（10、20 μg/ml）+OXA组的效应显著高于Ber（5 μg/ml）+OXA组,Ber（20 μg/ml）+OXA组的效应显著高于Ber（10 μg/ml）+OXA组。OXA组与对照组的检测结果比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论　Ber可显著逆转THC-8307/OXA细胞对OXA的耐药性,其作用机制可能与PI3K/Akt信号通路抑制,P-gp蛋白表达下调有关。     

TGF-β信号通路对牙源性黏液瘤来源的间充质干细胞成骨分化的影响分析

［摘要］　目的　探究转化生长因子-β（TGF-β）信号通路对牙源性黏液瘤（OM）来源的间充质干细胞（OMMSC）成骨分化的影响。方法　选择2018年至2020年南京大学医学院附属口腔医院收治的OM患者2例,经手术取部分病灶标本进行OMMSC分离培养。另外选择于该院接受牙种植治疗的年轻患者5例,抽取颌骨骨髓进行颌骨骨髓来源的间充质干细胞（JBMSC）分离培养。通过细胞增殖实验、流式细胞术检测、茜素红S染色进行细胞鉴定。成骨培养7 d后通过实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测TGF-β信号通路以及成骨相关基因的表达情况。观察小分子药物SB431542及TGF-β1干预对OMMSC、JBMSC成骨分化能力的影响。结果　经分离获得的OMMSC、JBMSC具有梭形形态,表达间充质干细胞表面标志物,并具有成骨分化能力,符合间充质干细胞的特征。与JBMSC相比,OMMSC具有更强的增殖能力。RT-PCR检测结果显示,TGF-β/Smad信号相关因子在OMMSC中呈高表达（P<0.05）,成骨相关因子骨桥蛋白（OPN）表达降低（P<0.05）。茜素红S染色结果显示SB431542可显著促进OMMSC成骨分化,而TGF-β1对OMMSC成骨分化有抑制作用。结论　该研究成功对OMMSC进行了分离,发现TGF-β信号相关因子在OMMSC中呈高表达,抑制TGF-β信号转导通路可增强OMMSC的成骨能力,为改善OM患者骨缺陷提供参考。     

人胶质瘤中HIF1A和MAGED4的表达及调控关系初探

［摘要］　目的　探讨缺氧诱导因子1A（HIF1A）和黑色素瘤相关抗原D4（MAGED4）在人胶质瘤中的表达情况,并分析HIF1A对MAGED4表达的影响。方法　通过基因表达谱交互式分析（GEPIA）数据库收集人胶质瘤组织样本数据681例,正常脑组织样本数据207例,比较其MAGED4 mRNA和HIF1A mRNA表达水平。通过中国胶质瘤基因组图谱（CGGA）数据库中下载693例胶质瘤患者的mRNA-seq_693数据集及相应的临床信息,分析MAGED4 mRNA和HIF1A mRNA表达的相关性,以及二者与患者临床特征指标的关联性。应用氯化钴模拟体外缺氧环境,通过实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）和蛋白免疫印记（WB）实验探讨沉默胶质瘤细胞HIF1A表达对MAGED4表达变化的影响。结果　基于GEPIA数据库的分析结果显示,低级别胶质瘤（LGG）和胶质母细胞瘤（GBM）组织的HIF1A mRNA和MAGED4 mRNA水平均高于正常脑组织,差异有统计学意义（P<0.05）。基于CGGA数据库的分析结果显示,MAGED4 mRNA表达水平与HIF1A mRNA表达水平呈正相关（r=0.322,P=0.000）。MAGED4 mRNA高表达组年龄<40岁、异柠檬酸脱氢酶（IDH）突变型的人数比例大于MAGED4 mRNA低表达组,差异有统计学意义（P<0.05）,两组性别、肿瘤类型、世界卫生组织（WHO）肿瘤分级,O6-甲基鸟瞟-DNA甲基转移酶（MGMT）启动子甲基化状态、1p/19q共缺失情况比较差异无统计学意义（P>0.05）。将HIF1A siRNA转染至U87-MG和U251细胞,并在缺氧条件下培养48 h,RT-qPCR和WB实验结果显示,HIF1A下调后,MAGED4的表达水平也显著下降。结论　HIF1A和MAGED4均高表达于胶质瘤,且两者呈正相关。胶质瘤细胞中HIF1A可调控MAGED4的表达。     

基于网络药理学探讨鸡血藤治疗再生障碍性贫血的潜在作用机制

［摘要］　目的　应用网络药理学探讨鸡血藤治疗再生障碍性贫血（AA）的潜在作用机制。方法　通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获取鸡血藤的活性成分及作用靶点基因,通过GeneCards数据库检索AA的相关靶点基因,通过韦恩图分析其交集。应用R软件对关键靶点进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析。应用Cytoscape 3.8.2软件构建药物-活性成分-关键靶点-通路-疾病网络。结果　通过TCMSP筛选获得24种活性成分,其对应的靶点基因56个。经GeneCards数据库检索,获得AA的疾病靶点基因1 665个。韦恩图分析结果显示其交集靶点基因21个。基于该21个关键靶点基因,GO功能富集分析共获得1 052个富集结果,包括生物过程（BP）1 012个、细胞组分（CC）13个、分子功能（MF）27个。KEGG通路富集分析共获得70条信号通路,主要通路包含细胞凋亡、p53信号通路、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路,以及病毒、癌症、传染病等疾病相关通路。结论　鸡血藤通过多成分、多靶点、多通路的相互作用发挥治疗AA的作用,为进一步探讨鸡血藤治疗AA的作用机制提供参考。     

FTO、GSDMD在胃癌组织中的表达及其作用机制研究

［摘要］　目的　探讨肥胖相关蛋白（FTO）与消皮素D（GSDMD）在胃癌（GC）组织中的表达及其作用机制。方法　通过TIMER 2.0数据库分析FTO及GSDMD在GC组织中的差异表达。收集2022年1月至2023年3月广西医科大学第二附属医院手术切取的GC组织及其对应癌旁组织(距离肿瘤边缘3～5 cm)各45例,并收集患者的临床病理资料。采用免疫组织化学染色法检测组织中FTO、GSDMD的表达情况,分析其与患者临床病理特征的关联性。通过转染低表达FTO慢病毒构建低表达FTO的AGS细胞（FTO低表达组）,并以转染空载体慢病毒的细胞作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测两组细胞FTO mRNA、GSDMD mRNA的表达水平;采用细胞划痕实验及细胞迁移实验分析两组细胞迁移能力。结果　基于TIMER 2.0数据库的分析结果及免疫组织化学染色结果显示,FTO、GSDMD在GC组织中呈高表达（P<0.05）。FTO和GSDMD高表达均与肿瘤侵犯深度、淋巴结转移密切相关（P<0.05）。细胞实验结果显示,FTO低表达组的GSDMD mRNA表达水平显著低于对照组（P<0.05）,划痕愈合率更低,细胞迁移数更少,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论　FTO可能通过调控GSDMD表达促进GC细胞转移。     

基于网络药理学及分子对接技术探讨清解化攻方治疗重症急性胰腺炎的作用机制

［摘要］　目的　基于网络药理学和分子对接技术探讨清解化攻方治疗重症急性胰腺炎（SAP）的作用机制。方法　应用中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）检索清解化攻方的活性成分和作用靶点,通过Cytoscape构建“药物-成分-靶点-疾病”网络图,借助DAVID数据库和R软件对药物疾病交集基因进行GO和KEGG富集分析,利用Autodock Vina软件进行分子对接。结果　共筛选出清解化攻方的202个药物活性成分和225个潜在靶点,其中210个靶点与SAP相关。靶点通路富集分析结果显示,清解化攻方可能作用于炎性因子、细胞凋亡等途径发挥作用。分子对接结果显示,清解化攻方的主要活性成分与关键靶点具有良好的结合活性。结论　清解化攻方可能通过P53信号通路、PI3K-AKT信号通路等多途径发挥抗炎、调控细胞凋亡、改善能量代谢等作用。     

2型糖尿病伴牙周病患者牙周干预后龈下菌斑中牙周致病菌的比较分析

［摘要］　目的　观察2型糖尿病伴牙周病患者牙周干预后临床指标的变化和龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌（Pg）的检出量变化,初步探讨龈下微生物的检出量与牙周干预疗效之间的关系。方法　根据随机数字表将确诊为2型糖尿病并伴有牙周病的患者分为实验组和对照组,记录牙周指数。实验组进行牙周干预并取龈下菌斑检测,对照组仅取龈下菌斑进行检测。6个月后复查。观察临床指标和牙龈卟啉单胞菌检出量的变化。结果　基线时两组的临床指标和Pg检出量比较差异均无统计学意义（P均>0.05）,6个月时,实验组临床指标值较对照组显著降低（P<0.01）,Pg检出量降低,但与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）。经过牙周干预治疗后,实验组出血指数（SBI）和附着丧失（AL）值均减小,SBI和AL值变化差异均具有统计学意义（P<0.05）;而对照组基线和6个月的临床指标值变化差异均无统计学意义。两组Pg的PCR定量检测结果在基线和6个月时变化差异均无统计学意义（P>0.05）。结论　牙周干预治疗对改善牙周指数有良好效果,但是难以彻底清除牙周致病菌。     

SNHG3调控miR-186-5p/ZEB1促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化的机制研究

［摘要］　目的　探究SNHG3调控miR-186-5p/E盒结合锌指蛋白1（ZEB1）促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化（EMT）的机制。方法　在HepG2细胞中转染siRNA干扰片段敲除SNHG3、转染pcDNA3.1(+)/SNHG3使SNHG3过表达,通过实时荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）检测是否转染成功。克隆形成实验检测HepG2细胞增殖,细胞划痕实验检测HepG2细胞迁移率,Transwell小室实验检测HepG2细胞侵袭数量,双荧光素酶活性检测验证SNHG3与miR-186-5p、miR-186-5p与ZEB1的靶向关系,FQ-PCR和Western blot法检测SNHG3、ZEB1、E-cadherin、N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9、Snail的表达水平。结果　肝癌组织中SNHG3表达量高于正常组织,SNHG3表达量低/中的肝癌患者的生存预后优于SNHG3表达量高的肝癌患者,差异有统计学意义（P<0.05）。克隆形成实验结果显示,与pcDNA3.1(+)组相比,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞增殖数量显著增加（P<0.05）。细胞划痕实验结果显示,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞迁移率显著高于pcDNA3.1(+)组（P<0.05）。Transwell小室实验结果显示,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞侵袭数量显著高于pcDNA3.1(+)组（P<0.05）。双荧光素酶活性检测结果显示,miR-186-5p mimic和pGL6-SNHG3-WT共转染后,荧光素酶活性低于其他组,miR-186-5p mimic和pGL6-ZEB1-WT共转染后,荧光素酶活性低于其他组,差异有统计学意义（P<0.05）。FQ-PCR和Western blot检测结果显示,当SNHG3过表达时,E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量显著下调,N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9和Snail mRNA和蛋白相对表达量以及ZEB1蛋白相对表达量显著上调;当SNHG3敲除后,E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量显著上调,N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9和Snail mRNA和蛋白相对表达量以及ZEB1蛋白相对表达量显著下调,差异有统计学意义（P<0.05）。结论　SNHG3调控miR-186-5p/ZEB1可促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,表明SNHG3是肝癌潜在的治疗靶点。     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP     

Lack of correlation of degree of villous atrophy with severity of clinical presentation of coeliac disease

BACKGROUND AND AIM: Both the clinical presentation and the degree of mucosal damage in coeliac disease vary greatly. In view of conflicting information as to whether the mode of presentation correlates with the degree of villous atrophy, we reviewed a large cohort of patients with coeliac disease. PATIENTS AND METHODS: We correlated mode of presentation (classical, diarrhoea predominant or atypical/silent) with histology of duodenal biopsies and examined their trends over time. RESULTS: The cohort consisted of 499 adults, mean age 44.1 years, 68% females. The majority had silent coeliac disease (56%) and total villous atrophy (65%). There was no correlation of mode of presentation with the degree of villous atrophy (p=0.25). Sixty-eight percent of females and 58% of males had a severe villous atrophy (p=0.052). There was a significant trend over time for a greater proportion of patients presenting as atypical/silent coeliac disease and having partial villous atrophy, though the majority still had total villous atrophy. CONCLUSIONS: Among our patients the degree of villous atrophy in duodenal biopsies did not correlate with the mode of presentation, indicating that factors other than the degree of villous atrophy must account for diarrhoea in coeliac disease.