垂直流免疫印迹法检测尿液HIV-1抗体的技术研究

目的 利用垂直流技术的快速性与免疫印迹法(WB)检测的精确性,建立垂直流免疫印迹检测技术(VWB),探讨其在检测尿液HIV-1抗体的临床意义.方法 通过SDS-PAGE电泳和电转,将HIV-1抗原包被于硝酸纤维素膜(NC膜)上,然后将膜黏合于自制反应槽的底部,并与真空抽滤系统结合构成垂直流免疫印迹法检测装置.利用该装置对临床样本(12例HIV-1抗体阳性尿液样本,10例HIV-1抗体阴性尿液样本)进行检测,并与传统WB法的检测结果相比较.结果 VWB法检测尿液样本阳性符合率为100%,阴性符合率为100%,主要抗原蛋白带符合率高于WB法检测尿液样本.结论 VWB法检测尿液样本的结果与WB法检测血清样本的结果基本一致,是HIV-1感染确认检测方法的又一补充技术.     

HIV-1抗体阳性标本免疫印迹带型分析

目的通过对HIV-1抗体阳性标本免疫印迹带型分析,了解艾滋病感染者带型分布特征,探究其内在规律。方法搜集2013-2014年驻马店市993例经确证为HIV-1型阳性感染者检测条带和基本信息,从性别、年龄、感染途径等对不同确证带型出现的频次进行统计分析。结果 993例经确证为HIV-1抗体阳性感染者中,env基因相关蛋白检出率最高,其中gp160为100.00%(993/993)、gp120为100.00%(993/993);gag基因相关蛋白p55检出率最低为82.58%(820/993)。P55带型的阳性检出率在各年龄中,差异有统计学意义。结论驻马店市近两年发现HIV阳性结果中,env相关带型出现机率较高,预示HIV感染的可能性较大;但其检出率与其他地区存有一定的差异。p55在不同年龄中有一定的差别,其内在的规律需要结合临床鉴别分析,进一步追踪和探讨。     

江西口岸出入境人员HIV-1抗体阳性者免疫印迹带型分析

目的研究江西口岸出入境人员HIV-1艾滋病感染者免疫印迹试验（WB）带型的分布特征。方法对2003—2013年3月江西口岸出入境人员HIV－1抗体确证阳性的WB带型结果进行统计分析。结果23例江西口岸出入境人员HIV-1阳性标本免疫印迹带型中gp160、gp120、p66、p51、gp41、p31、p24阳性率为100％,p55阳性率为78．3％,p17阳性率为95．6％;中国籍和非洲籍人员比较,非洲籍人员的p55阳性率高于中国籍人员;不同性别比较,p55阳性率差别有统计学意义,女性高于男性;不同年龄组间比较,p55阳性率差异有统计学意义。结论江西口岸出入境人员HIV—1抗体阳性者gp160、gp120、p66、p51、gp41、p31、p24阳性率高,具备确证HIV－1的特异性条带,对于不同国家的出入境人员还有待进一步扩大样本量进一步研究。     

人血液和尿液样本HIV-1抗体的ELISA 检测比较

目的 比较人的血液和尿液样本中HIV-1抗体的一致性。方法 在广东省两所劳动教养所收集346名HIV高危的血液和尿液样本，分别用血液和尿液ELISA初筛试剂检测HIV-1抗体。结果 346份血液和尿液样本各18份阳性，其中有17人的血液和尿液平行样本均为HIV—1抗体阳性，血液和尿液样本HIV-1抗体检测的一致性为99．4％。结论 在采集血液样本不便的情况下，可利用尿液ELISA初筛诊断试剂进行HIV感染的筛查和监测。     

血液唾液和尿液HIV抗体快速检测及免疫印迹试剂评估

目的对Calypte公司血液、唾液和尿液3种HIV-1／2抗体快速检测试剂与尿液和血液两种HIV-1抗体免疫印迹试剂进行评估,为引进检测性能良好的试剂提供参考。方法平行采集84位HIV阳性感染者指尖血、唾液、尿液和静脉血标本,分别用Calypte公司的3种快速试剂进行HIV-1／2抗体检测,并与梅里埃血液ELISA参比试剂检测结果比较;尿液和静脉血标本分别用Calypte公司的两种免疫印迹试剂进行检测,并与GerieLabs公司的血液免疫印迹参比试剂检测结果进行比较。结果血液、唾液和尿液快速检测试剂的敏感性分别为100％、100％和96．42％,3种快速试剂检测结果与梅里埃血液ELISA检测结果一致性分别为100％、100％和96．42％;血液和尿液HIV-1WB试剂检测结果与GeneLabs参比试剂的一致性为100％。结论Calypte公司3种HIV-1／2抗体快速检测试剂和两种HIV-1抗体免疫印迹试剂与相应的参比试剂有很好的一致性。     

558例男男性行为人群HIV-1抗体阳性者免疫印迹试验带型分析

目的通过对男男性行为(MSM)人群HIV-1抗体阳性标本免疫印迹带型分析,了解带型分布特征,探究内在规律。方法收集2015-2018年艾滋病自愿咨询检测(VCT)门诊MSM人群中558例经确证为HIV-1抗体阳性感染者的基本信息和检测条带,分析不同年龄、婚姻状况、文化程度者带型差异。结果558例HIV-1抗体阳性者的WB条带中,10条全条带出现114例,占20.43%,7~9条带392例,占70.25%,3~6条带52例,占9.32%。条带gp160、gp120、p24出现率均为100.00%,gp41出现率为98.21%,最低为条带p55,出现率为30.65%。仅条带p66在不同婚姻状况者间分布差异有统计学意义(χ^2=14.19,P<0.01),其他各条带在不同年龄、文化程度、婚姻状况者间分布差异均无统计学意义(χ^2=0.42~8.06,P值均>0.05)。结论VCT门诊MSM人群HIV-1抗体阳性者中大多数发现在未进入AIDS期,条带分布规律需结合流行病学特征进一步追踪和探讨。     

一种尿液HIV-1抗体EIA试剂现场使用评价

目的　现场评价 Calypte TM尿液 HIV- 1抗体 EIA试剂。　方法　同时采集 112 0名吸毒者的尿液与血液 ,分别用 Calypte TM尿液试剂盒和 Vironostika R○ HIV Uni- Form Plus O血液试剂盒进行初筛检测 ,两种方法重复检测阳性样本 ,用蛋白印迹法确认 ,对检测结果进行比较。　结果　 Calypte TM尿液试剂盒的敏感性、特异性和功效值分别为10 0 %、99.1%和 99.1%,与确认结果比较 ,阳性符合率为 10 0 %。　结论　 Calypte TM尿液 HIV - 1抗体 EIA试剂盒在HIV- 1流行区 ,可以考虑作为替代血液检测试剂盒。     

应用ELISA检测戒毒人员尿液和血液标本HIV-1抗体结果分析

目的 比较应用ELISA（酶联免疫吸附试验）检测尿液和血液标本HIV－1抗体的一致性。方法 对广州市某强制戒毒所的203例曾吸毒人员分别采集尿液和血液标本,应用ELISA（酶联免疫吸附试验）分别采用尿液和血液初筛试验检测尿液和血液标本中的HIV－1抗体。结果 30例中有20例血液标本的HIV－1抗体为阳性,其平行尿液标本中有19例HIV－1抗体为阳性。分析结果表明应用尿液,血液标本检测HIV－1抗体方法的一致性为99．5％。结论 尿液标本HIV－1抗体的ELISA检测结果是可靠的,对采集血液标本有困难的监测人群具有实用价值。     

免疫印迹试验带型与HIV-1感染关系的探讨

目的了解免疫印迹试验(WB)带型与HIV-1感染的关系,探寻WB确证问题处理办法。方法收集2004-2009年上半年经首次确证为HIV-1抗体阳性或不确定结果并进行了追踪复检的检测对象,对其复检结果和流行病学资料进行分析。结果初检WB带型为p17、p24p17、p66p17者复检均转阴,为p24、gp160、gp160gp120、gp120p24、gp160p24者有阳性或阴性两种转归;初检包含两条env带或包含一条env带和p24带的3条或3条以上条带者复检结果均为阳性。复检阴转者主要来自于无偿献血,自愿咨询检测(VCT)、孕产妇、术前检查、婚/体检。复检间隔时间为2 d至11个月,其中阳转间隔最短5 d,最长6个月,平均为51 d;阴转间隔最短2 d,最长11个月,平均为129 d。另1例艾滋病病人初检带型为gp160gp120;1例阴性转归者带型为gp160p66p51p24。结论建议WB出现"2条env带或1条env带+p24带"者判为不确定,在此基础上至少增加1条带(无论env、gag或pol带)才判HIV-1抗体阳性;对WB不确定带型或可疑带型结果的感染判定必须结合带型特点、流行病学资料和临床特征综合分析,并可通过缩短随访时间达到尽快确定感染状况的目的。     

265例HIV-1抗体阳性者抗体蛋白印迹带型分析

目的通过对本实验室以蛋白印迹（WB）法确认的HIV-1抗体阳性者抗体WB条带的分析，了解不同人群抗体WB带型分布的差异。方法WB法确认HIV-1抗体阳性。结果抗pol基因编码蛋白的抗体WB带型分布以及P31抗体的阳性率在不同传播途径的HIV-1抗体阳性者问差异有统计学意义（P〈0．01）；年龄（age，A）≤40岁的HIV-1抗体阳性者P66和P24抗体阳性率分别明显高于相应A〉40岁以上者，（P〈0．05）；抗pol基因编码蛋白的抗体WB带型分布以及P66抗体阳性率在不同地域的HIV-1抗体阳性者闻差异有统计学意义（P〈0．01）。结论HIV-1抗体WB带型分布在不同性别、不同年龄人群间差异无统计学意义。但在不同传播方式、不同地域的人群间差异有统计学意义；HIV-1 pol、gag基因编码的某些蛋白的抗体产生在不同传播方式、不同年龄及不同地域的人群间差异有统计学意义。     

2011-2014年常州地区HIV-1抗体阳性者 免疫印迹带型分析

摘要:目的　分析2011-2014年常州地区HIV-1抗体阳性者的免疫印迹（Western Blot,WB）带型。方法　应用WB试验对2011-2014年常州地区HIV-1抗体阳性待确证标本进行确证检测,并对其WB带型进行统计学分析。结果　1144份HIV-1抗体待确证标本中,36份确证为阴性,71份为不确定,1037份为阳性,阳性率为90.7%。在HIV-1抗体阳性标本WB带型中,gp160阳性率最高,为96.5%;p24和gp120次之,阳性率均在90.0%以上;gp41、p66、p51和p31阳性率较低,均低于90.0%;p17、p55和p39阳性率分别为66.4%、45.7%和41.9%;WB带型阳性率男女性之间差异均无统计学意义（P＞0.05）;20～39岁组的p39阳性率高于其他年龄组（χ2＝10.861,P＜0.05）,＜20岁组的p17阳性率高于其他年龄组（χ2＝7.906,P＜0.05）。结论　p39和p17带型阳性率在4个年龄组之间的差异均有统计学意义;gp160、gp120、gp41和p24是HIV-1抗体确证阳性的重要条带,且本地区检测的HIV-1抗体阳性者多在AIDS期前。     

湖北省采供血HIV-1感染者分子流行病学分析

目的分析湖北省经采供血感染人类免疫缺陷病毒（HIV-1）流行株的亚型特点和流行规律。方法2005年采集湖北省HIV-1感染者抗凝外周血22份,分离外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBM-Cs）,提取前病毒DNA,用巢式PCR方法（nested polymerase chain reaction,nested-PCR）扩增HIV-1病毒gag至pol约3kb的核酸序列,并进行序列测定。应用BioEdit软件对序列排列、比对后,使用Clustal X系统进化树分析,确定亚型,并应用Simplot软件进行重组分析。结果通过巢式PCR扩增以序列测定得到17份样品的序列,根据gag-pol基因序列,与HIV-1亚型国际参考株比较,通过系统进行分析,确定湖北省的17个HIV-1毒株与邻近省份河南省的流行株B′亚型十分接近,均属于泰国B′亚型,并且未发现重组株的存在。结论湖北省经采供血感染的HIV-1流行株属于B′亚型,与河南省有偿献血员流行的HIV-1 B′亚型密切相关。     

2013-2015年全国HIV-1病毒载量检测能力验证方法的比较

目的 通过分析2013-2015年全国HIV-1病毒载量检测能力验证（VQA-PT）结果,了解法国bioMerieux公司的NucliSens EasyQ HIV-1 v2.0（EasyQ）、美国Siemens Healthcare Diagnostics公司VERSANT HIV-1 RNA 3.0 assay（bDNA）、美国罗氏分子诊断公司COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 test（Taqman）、美国Abbott Molecular公司Abbott Real Time HIV-1 Kit（M2000）、中山大学达安基因股份有限公司和东北制药集团辽宁生物医药有限公司的HIV-1核酸定量检测试剂盒（国产试剂）5种方法检测结果之间的定量换算关系,为不同方法检测HIV-1病毒载量结果的横向比较提供参考。方法 参照《HIV-1病毒载量测定及质量保证指南》（2013版）的要求,由中国CDC性病艾滋病预防控制中心参比实验室统一组织全国HIV-1的VQA-PT。采用多中心回溯性研究方法,2013-2015年共计考核6次,考核实验室155家,涉及阳性样本22个,相应结果2 954个。针对每个阳性样本的所有结果,首先转换为对数值,而后按照检测方法分类,计算对数值的均值,获得不同方法检测相同样本的一组数据。对最终获得的22组数据进行Bland-Altman分析和线性回归分析。结果 Bland-Altman分析显示,EasyQ及bDNA与Taqman的一致性为100%,M2000及国产试剂与Taqman的一致性≥ 90%。回归分析结果显示,EasyQ、bDNA、M2000及国产试剂检测结果在数值上与Taqman之间存在相应的换算关系（P<0.01）。结论 对于我国HIV-1感染者,使用不同病毒载量检测方法获得的结果一致性良好,不同方法的结果之间可以转换,进而对治疗效果进行分析评价。     

一起家庭内HIV-1感染的分子流行病学研究

[目的]采用现场流行病学和分子流行病学相结合的方法,以阐明家庭内成员HIV-1病毒传播关系。[方法]通过定性流行病学,调查一家庭内各成员有关HIV-1感染及其相关因素,并应用巢式RT-PCR扩增HIV-1pol区和env区基因,经DNA测序后用遗传进化系统树比对的方法,结合现场调查资料进行综合分析。[结果]该家庭中3人HIV感染毒株亚型均为CRF 07-BC。3个病例毒株的基因同源性高达99%和98%,且克隆基因差异较小,父母之间的基因克隆进化关系成立,但父子之间的进化关系明显大于母子的关系。3人与耐药相关基因突变位点分布情况基本一致,但在A71T位点上的突变率以儿子最高(100%),父亲其次(83%),母亲则未发生突变。[结论]该家庭中母亲是感染了父亲的部分尚未发生变异的病毒株,儿子则感染了父亲体内的变异株,初步提示为家庭内个人密切接触的HIV感染。     

探讨ELISA和化学发光法对血清中HIV-1/HIV-2抗体、梅毒抗体和丙肝抗体的检测

目的:比较ELISA法和化学发光法对血清中HIV-1/HIV-2抗体、梅毒抗体和丙肝抗体的检测。方法:用ELISA法与化学发光法对病人血清和标准物质进行以上三种抗体的检测,并对结果进行分析。结果:(1)化学发光法测定值较低的阳性标本,ELISA法测定有可能为阴性。(2)用化学发光法检测病人血清中HIV-1/HIV-2抗体为阴性标本的测定数据有一定程度的波动。(3)同一公司生产的以上三种抗体的标准物质,用ELISA均为阳性,可是用化学发光法仅丙肝抗体检测为阳性,而其它两种均为阴性。结论:基本证实了化学发光法比ELISA法敏感性高。     

HIV-1基因亚型研究进展

HIV的典型遗传特征之一是高度的遗传多样性,这一特征为艾滋病患者的抗病毒治疗和HIV疫苗的研制带来了困难,然而也为研究人群中病毒的传播和进化提供了有利条件.根据HIV基因序列和氨基酸序列的特征,HIV-1可分为多种亚型.对HIV-1基因亚型的分析,可敏感地提示HIV的流行信息,及早发现新的HIV亚型毒株的传播,预测HI流行趋势,为艾滋病诊断试剂的更新换代、HIV疫苗的研制提供依据,还可用于估计疾病进展及抗病毒药物治疗的敏感性与耐药性,在预防和控制艾滋病方面发挥重要作用.