分泌链霉亲和素菌株的筛选及所产链霉亲和素性质的研究

目的：筛选分泌链霉亲和素的菌株。方法：在河北省范围,于不同的时间,地域,植被状态取土,接种高氏一号培养基,选取可能的放线菌菌落,接种葡萄糖－天冬酰胺液体培养基,用ELISA方法检测菌液以判断是否产生链霉亲和素,筛选出1株产链霉亲和素较高者,命名为L－183,大量培养L－183后,用亲和层析提取链霉亲和素,并对其性质做鉴定。结果：L－183分泌的链霉亲和素产量高,达76mg/L;相对分子质量为62．2ku,等电点为6．0,结论：L－83有可能成为生产链霉亲和素的菌株。     

链霉菌L-183发酵条件优化

目的 对链霉菌L-183生产链霉亲和素(streptavidin,SA)的发酵条件进行优化.方法 通过单因子和正交实验,获得SA发酵培养基的最佳配方比.结果 在优化条件下,SA的产量达到151.5 mg/L.与先前报道相比,产量提高36.5%,且成本降低,操作步骤更为简化.结论 链霉菌L-183生产链霉亲和素的发酵条件优化为规模化生产奠定了基础.     

里氏木霉产胞外多糖发酵条件的优选研究

目的：建立简便有效的里氏木霉胞外多糖提取发酵工艺,为木霉胞外多糖的进一步开发利用奠定基础。方法以粗胞外多糖产量为指标,采用单因素试验优化发酵培养基配方,利用正交试验对摇瓶培养过程中的发酵液初始 pH、孢子接种量、发酵温度及发酵时间进行优选。结果里氏木霉发酵最佳控制参数为：培养基配方为蔗糖50 g/L、酵母粉20 g/L、K2HPO4·3H2O 8 g/L、MgSO40.5 g/L;发酵条件为发酵液初始 pH5.0、孢子接种量10%、发酵温度28℃、发酵时间190 h。优选发酵条件下里氏木霉粗胞外多糖产量达到21.6 g/L（RSD=2.54%, n=3）。结论优化的里氏木霉胞外多糖发酵提取工艺是一种简便、合理、可行和产量较高的提取工艺。     

生物素—链霉亲和素系统在检测HBeAg中的比较

应用链霉亲和素和生物素系统发展成的酶连接免疫吸附测定（ELISA）改良法检测HBeAg，取得较满意效果。标记链霉亲和素-辣根过氧化物酶（SA-HRP）时，两的重量比以（0.5-0.8):1为佳，浓度以7μg/ml为最理想；SA-HRP的反应时间以30min为适宜。本改良法与生物素亲和素ELISA（BA）法、普通ELISA法检测HBeAg的灵敏度比较。其相对灵敏度高于后二；用Abbott试剂作为标准。检测HBeAg100人份，其阳性率高于BA法和普通ELISA法，提示链霉亲和素FLISA（BSA）法可提高方法的特异性及灵敏度。     

生物素－链霉亲和素系统在检测HBeAg中的比较

应用链霉亲和素和生物素系统发展成的酶连接免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）改良法检测ＨＢｅＡｇ，取得较满意效果。标记链霉亲和素－辣根过氧化物酶（ＳＡ－ＨＲＰ）时，两者的重量比以（０．５～０．８）：１为佳，浓度以７μｇ／ｍｌ为最理想；ＳＡ－ＨＲＰ的反应时间以３０ｍｉｎ为适宜。本改良法与生物素亲和素ＥＬＩＳＡ（ＢＡ）法、普通ＥＬＩＳＡ法检测ＨＢｅＡｇ的灵敏度比较，其相对灵敏度高于后二者；用Ａｂｂｏｔｔ试剂作为标准，检测ＨＢｅＡｇ１００人份，其阳性率高于ＢＡ法和普通ＥＬＩＳＡ法。提示链霉亲和素ＥＩ，ＩＳＡ（ＢＳＡ）法可提高方法的特异性及灵敏度。     

重组巴斯德毕赤酵母高密度培养中铵离子浓度的影响

采用Mut^s表型的重组毕赤酵母生产血管生长抑制素，表达阶段流加甘油—甲醇混合碳源以提高菌体密度和血管生长抑制素的表达水平，菌体密度可达174g／L，约是表达阶段采用甲醇为单一碳源的发酵过程的3倍。菌体密度的提高导致表达阶段发酵液中铵离子浓度下降很快，当发酵液中的铵离子浓度低至40mmol／L时，影响了血管生长抑制素的表达。改变pH调节方式并在发酵后期添加25mmol／L(NH4)2SO4使发酵液中铵离子浓度维持在150mmol／L以上，血管生长抑制素的表达产量达到108mg／L。     

链霉菌的培养与链霉亲和素的纯化

报道链霉菌的两种合成培养基和一种链霉亲和素的纯化方法，在该两种合成培养基中，亲和素链霉菌均能旺盛生长，获得了Ｓ．ａｖｉｄｉｎｉｉ的典型形态和菌落形征，ＳＡ的收获量也较高。在纯化过程中采用ＤＥＡＥ５２层析柱所得到ＳＡ的最高产量为１５．２μｇ／ｍｌ该纯化方法简单，易于操作和常规使用。     

链霉菌的培养与链霉亲和素的纯化

报道链霉菌的两种合成培养基和一种链霉亲和素（Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ，ＳＡ）的纯化方法。在该两种合成培养基中，亲和素链霉菌（Ｓ．ａｕｉｄｉｎｉｉ）均能旺盛生长，获得了Ｓ．ａｕｉｄｉｎｉｉ的典型形态和菌落特征，ＳＡ的收获量也较高。在纯化过程中采用ＤＥＡＥ５２层析柱所得到ＳＡ的最高产量为１５．２μｌ，该纯化方法简单，易于操作和常规使用。     

影响人γ—型干扰素基因在工程菌中表达效率的因素研究

本工作研究了影响人γ—型干扰素基因在工程菌中表达效率的3种因素；结果表明：采用M9＋LB发酵培养基，控制工程菌培养时间和温度，即种子菌在LB（Amp）液中30℃生长10h，转入发酵培养基中30℃扩增3h，42℃诱导培养3h，并按种子菌液与发酵培养液2％的比例扩增工程菌，可使发酵菌液中工程菌密度达OD（600）1．6，IFN－γ表达水平占菌体总蛋白的65％～70％，使IFN－γ活性达1．68×107IU／ml。     

不同生物素检测系统在核酸分子杂交检测中的应用——Ⅱ 碱性磷酸酶标记亲和素及胶体金标记链霉亲和素检测系统

分别应用碱性磷酸酶标记亲和素和胶体金标记链霉亲和素对斑点杂交结果进行检测。通过提高溶液中离子浓度和pH值的方法基本消除了碱性磷酸酶标记亲和素与核酸的非特异结合,这一检测系统的检测敏感性可达到1pg。胶体金标记链霉亲和素的检测效果欠佳,仅为12.5ng。     

重组工程菌pET32a-CR1-SCR15-18/BL21(DE3)高密度发酵工艺研究

目的建立重组工程菌pET32a-CR1-SCR15-18/BL21(DE3)的高密度发酵工艺。方法以摇瓶发酵结果为基础,扩大至发酵罐发酵,对影响工程菌生长及目的蛋白表达的因素如发酵培养基、培养温度、pH值、活化时间、诱导时间及分批补加营养物质等条件进行优化。结果采用改良M9-CA培养基、37℃活化4 h后以0.2 mmol/L IPTG诱导表达4 h,以甘油为碳源,在生长期和诱导期分别以40 ml/h和70 ml/h的速率连续流加补料,全程滴加氨水保持培养基pH值保持在7.5,调节转速控制溶解氧在40%左右。最终菌体产量提高至40 g/L以上,CR1-SCR15-18蛋白表达率达28%以上。结论高密度发酵工艺显著提高了工程菌的产量和CR1-SCR15-18蛋白的表达水平。     

铁皮石斛组培快繁技术研究

目的 通过研究铁皮石斛种子萌发、小苗增殖和生根的适宜培养基,建立一套铁皮石斛组织培养的快速繁殖体系.方法 以铁皮石斛种子为外植体,研究激素（6-benzylaminopurine和1-naphthleetic acid）不同质量浓度配比、天然添加物（马铃薯汁和香蕉汁）对铁皮石斛种子萌发、小苗增殖和壮苗生根的影响.结果 铁皮石斛种子萌发最适培养基为1/2MS ＋0.2 mg/L NAA＋ 100 g/L马铃薯汁＋25 g/L蔗糖汁,小苗增殖最适培养基为1/2MS ＋0.2 mg/L NAA＋ 100 g/L马铃薯汁（或香蕉汁）＋25g/L蔗糖汁＋0.5g/L活性炭,壮苗与生根最适培养基为1/2MS＋ 0.2 mg/L NAA＋ 100 g/L香蕉汁＋25 g/L蔗糖汁＋0.5g/L活性炭.结论 建立了一套铁皮石斛组培快繁体系,可用于大规模生产铁皮石斛组培苗.     

一种改良的猪肺动脉干平滑肌细胞培养方法

在本室已建立的肺动脉平滑肌细胞(PASMC)培养方法的基础上作了改进①用含400ml.LPASMC条件培养液和100ml／L胎牛血清(FBS)的PASMC混合培养液(PASMCMM)代替含100ml/LFBS的M199培养液;②传代时间选在90％长满,即PASMC处在对数生长期末而停滞期前;③用5～8滴／瓶混合消化液传代,然后用含100ml／L小牛血清的M199培养液终止反应,并使其贴壁,第2d改换成PASMCMM。经此法培养的PASMC具有生长快、分散更均匀的特点。细胞倍增时间(45．6h)较改进前(56．8h)缩短11．2h。改进后的培养方法更加简便、实用、高效。因此是一种快速、并可大量获取优质PASMC的有效方法。     

乌头植株再生体系的建立

目的 建立乌头高效再生系统，短期内获得大量优质种苗。方法 以试管苗叶片为外植体，在添加不同激素配比的培养基上培养。结果 培养基MS BAl．0mg/L KT0．5mg/L NAA0．2mg/L最适合于乌头叶片不定芽的分化；培养基MS BAl．5mg/L NAA0．1mg/L有利于芽的增殖；培养基MS BA0．5mg/L NAA0．1mg/L有利于芽的伸长；不加激素的1／2MS培养基有利于根的诱导。结论 采用组织培养方式可进行乌头的快速繁殖，使乌头种苗的工厂化生产成为可能。     

百合的组织培养

目的 研究百合组培快繁的最佳途径。方法 在MS培养基上添加不同的激素配比；采用鳞叶不同部位作为外植体；改变培养方式。结果 确定了外植体产生小鳞茎的最佳培养基为MS＋NAA 0．5mg/L GA3 2.0mg/L；鳞叶的下部小块分化率最高，92．5％；小鳞茎叶脱分化形成愈伤组织后再分化可获得多而健壮的次级小鳞茎；次级小鳞茎采用液体振荡培养可快速增重。结论 采用组织培养方式可进行百合的快速繁殖，使百合种球的工厂化生产成为可能。     

高密度微载体培养人肝癌细胞

目的研究人肝癌细胞在高密度微载体培养时的生长条件与培养方式,建立实验室规模高效、简便培养人肝癌细胞的方法。方法应用微载体CuhiSpher-S和Cytodex-1在1 L SuperSpinner搅拌瓶中培养人肝癌细胞THCC-98,采用批式换液连续培养的方式,对细胞生长及营养物质葡萄糖利用、代谢产物乳酸生成进行分析。结果人肝癌细胞THCC-98在CultiSpher-S和Cytodex-1培养中葡萄糖13消耗量高达2mmol／10^6。细胞（2．17和2．3）,乳酸日生成率为0．75—1．08mmol／10^6。细胞,最高浓度为9mmol／L（9．2比9．5）。通过实施批式换液连续培养,换液0．3—0．9V／d,可使细胞最高密度达（1．04比0．89）×10^7cells／ml。就两种微载体培养比较,CultiSpher-S由于具有更大的表面积／体积比,提供给细胞更大的生长空间,其所能达到的细胞密度高且营养物质利用更为有效。结论用1 L SuperSpinner搅拌瓶Cultisphere微载体批式换液连续高密度培养人肝癌细胞,细胞密度可达10^7cells／ml,批式收获细胞〉10^10。     

地钱愈伤组织的诱导及其细胞培养条件的建立

目的探计对地钱愈伤组织的诱导和悬浮细胞培养的条件。方法用MSK 2和MS培养基对地钱配子体进行愈伤组织诱导，运用模糊评判对MSK-2培养基生长激素组合进行综合性状评价。结果MSK-2和Ms（2mg/L 6 BA）均能诱导出地钱愈伤组织，其中MSK 2的诱导效果较好。光照（3000～8000 lux）能有效地促进地钱愈伤组织生长。激素配比组合是0.5mg/L 2,4 D+2mg/L NAA+2mg/L 6-BA适合于地钱细胞生长以及次生代谢生产。 结论地钱愈伤组织的诱导成功和悬浮细胞培养条件的建立，为探索药用苔藓植物次生代谢产物生产提供新的途径以及对苔藓植物细胞规模化培养提供新的理论指导。     

溪黄草离体培养和快速繁殖

目的：探讨溪黄草Isodon serra (Maxim).Kudo离培养的过程,为优良品种的快速繁殖奠定基础。方法：以溪贡草无菌苗的带节茎为外植体,采用MT基体培养基,附加不同植物激素进行试验。结果：培养基中附加激素BA有利于芽的发生;适宜的BA浓度为1mg/L,出芽率高达100％,且出芽数量多;基本培养基以完全的MT成分为好;生根据培养选择MT＋0．2mg/L NAA,生根率为100％,试管苗移栽,成活率为90％,结论,通过溪黄草离体培养的研究,获得了较高的植株再生频率,建立了有效的组织培养再生体系。     

丽江山慈姑的组织培养及育种技术研究

目的 建立药用植物丽江山慈姑的组织培养和快速繁殖体系。方法 对丽江山慈姑的球茎、地上茎、叶片及根尖等不同部位进行丛生芽及原球茎的诱导，筛选适合生根的培养基配方。结果 通过研究，筛选出了丽江山慈姑原球茎的诱导、增殖及生根培养基配方，建立了丽江山慈姑的快速繁殖体系，实现了大规模的组培生产。结论 在MS培养基上，丽江山慈姑球茎和地上茎诱导丛生芽效果较好，MSF 6—BA 2mg/L NAA0．5mg/L的激素配比既能使丽江山慈姑快速增殖，又能诱导出原球茎，适合大规模生产，在1／2MS IBA0．5mg/L NAA0．2mg/L的培养基上，丽江山慈姑原球茎生根效果较好。