DNA聚合酶β表达对食管癌放疗敏感性及预后的影响

[目的]探讨DNA聚合酶β表达对食管癌放疗敏感性的影响及预后评估。[方法]收集85例食管癌患者,根据DNA聚合酶β(DNA polβ)的表达水平随机分为高表达常规分割组、高表达超分割组、低表达常规分割组和低表达超分割四组。常规分割:2Gy/f,总量56~64Gy/28~32次,超分割:1.3 Gy/f,2f/d,总量56~62Gy/43~48次。治疗中及治疗后随访,观察急性反应、晚期反应以及近期疗效、局控率及1、3年生存率。[结果]四组之间放疗晚期反应肺纤维化及食管狭窄差别无统计学意义(P=0.887、0.711);近期疗效差异无统计学意义(P=0.862);急性反应放射性气管炎、放射性食管炎差异有意义(P=0.049、0.031),超分割两组显著高于常规分割组;1、3年局部控制率及生存率两组差异明显(P=0.028、0.036、0.040、0.014)。[结论]超分割放疗加重急性反应,DNA polβ表达不同对放疗敏感性有影响,低表达组超分割放疗预后相对较好。     

全反式维甲酸和二甲亚砜诱导人食管癌细胞wtp53基因的表达

目的探讨野生型p53(wtp53)基因表达与食管癌细胞分化相关性。方法采用全反式维甲酸(ATRA)和二甲亚砜(DMSO)诱导人食管癌Eca109细胞分化,应用甲基绿-派洛宁染色、软琼脂集落形成、原位杂交方法分别检测细胞分化和wtp53的基因表达变化。结果ATRA和DMSO作用5d后可以抑制Eca109细胞增殖,诱导细胞分化及降低集落形成率。wtp53基因表达随着Eca109细胞分化而增高。结论ATRA和DMSO可上调Eca109细胞wtp53的表达使其趋向正常细胞分化。     

全反式维甲酸对CNE—2Z细胞增殖的影响及凋亡诱导

目的：了解全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）对ＣＮＥ－２Ｚ细胞增殖生长及凋亡有无影响。方法：采用ＭＴＴ法、细胞核染色、ＤＮＡ裂解率及电泳分析。结果：（１）用ＡＴＲＡ诱导细胞至７２ｈ，细胞增殖抑制率随浓度升高而增加。（２）在终浓度为５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ诱导ＣＮＥ－２Ｚ细胞５天，可见部分细胞体积变小，核浓缩及核碎裂；ＤＮＡ裂解率（４４．２０±６．３２）明显高于对照组（１５．４１±５．５０），差别有显著性，Ｐ＜０．０１；ＤＮＡ琼脂糖电泳，出现不连续的典型梯状ＤＮＡ条带。片段大小为２００ｂｐ或其倍数。（３）在浓度为５×１０－７ｍｏｌ／Ｌ诱导５天和５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ诱导４天时，均无明显细胞凋亡出现。结论：ＡＴＲＡ对ＣＮＥ－２Ｚ细胞增殖有抑制作用，且随浓度增加而增强；ＡＴＲＡ可诱导ＣＮＥ－２Ｚ细胞发生凋亡，但表现出明显的剂量和时间依赖性。     

全反式维甲酸诱导食管癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)诱导食管癌EC9706细胞凋亡的作用及其机制。方法用不同浓度的ATRA处理EC9706细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测ATRA对EC9706细胞的增殖抑制效应;采用流式细胞仪和原位末端标记(TUNEL)法检测细胞周期的变化和凋亡率;采用免疫组化S-P法,检测凋亡相关基因caspase-3和bcl-2的蛋白表达,并用病理图像分析软件进行半定量分析。结果ATRA对EC9706细胞有增殖抑制和诱导凋亡的作用;流式细胞仪检测显示,在G1期之前可出现Sub-G1峰,凋亡率最高为(32.6±0.4)%,并有浓度和时间依赖性;TUNEL法显示凋亡小体形成;EC9706细胞在凋亡过程中,凋亡相关基因caspase-3的蛋白表达增强,bcl-2的蛋白表达减弱。结论ATRA作用于食管癌EC9706细胞后将引起细胞凋亡的增加,这主要与ATRA能促进caspase-3的活化,并下调bcl-2的蛋白表达有关。     

全反式维甲酸诱导荷瘤裸鼠EC9706食管癌细胞凋亡的机制

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)诱导荷瘤裸鼠EC9706食管癌细胞凋亡的作用机制.方法 将食管癌EC9706细胞接种于裸鼠,成瘤后将裸鼠分为ATRA作用组、5-氟尿嘧啶(5-Fu)作用组、联合用药组和空白对照组,每组10只,腹腔内连续给药10 d后处死裸鼠.采用原位末端标记(TUNEL)法,检测各组裸鼠移植瘤组织中的细胞凋亡情况.采用免疫组化SP法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),检测caspase-3和survivin蛋白及mRNA的表达水平.结果 ATRA作用组、5-Fu作用组和联合用药组的细胞凋亡率分别为44.3%、39.7%和91.0%,均明显高于空白对照组(0.7%,均P＜0.01).空白对照组caspase-3蛋白表达水平为46.12±0.33,caspase-3 mRNA的相对表达量为0.14±0.03,均显著低于ATRA作用组、5-Fu作用组和联合用药组(P＜0.05).空白对照组survivin蛋白表达水平为96.07±0.13,survivin mRNA的相对表达量为0.84±0.04,均显著高于ATRA作用组、5-Fu作用组和联合用药组(均P＜0.05).ATRA作用组与5-Fu作用组的细胞凋亡率、caspase-3和survivin蛋白及mRNA的表达差异均无统计学意义(均P＞0.05),但单药组与联合用药组的差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 ATRA可诱导荷瘤裸鼠EC9706细胞产生凋亡,其作用机制与下调survivin蛋白和mRNA的表达以及上调caspase-3蛋白和mRNA的表达有关.     

全反式维甲酸对食管癌EC9706细胞系化疗敏感性的影响

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)对食管癌EC9706细胞系化疗敏感性的影响及其作用机制.方法 将常规传代培养的食管癌EC9706细胞分为4组,即ATRA作用组(加入终浓度为1μmol/L的ATRA)、5-氟尿嘧啶(5+Fu)作用组(加入终浓度为50mg/L的5-Fu)、联合用药组(加入终浓度为1μmol/L的ATRA和终浓度为5omg/L的5-Fu)和空白对照组(仅含EC9706细胞).采用原位酶末端标记(TUNEL)法检测各组细胞的凋亡情况,采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率和细胞周期的变化.结果 TUNEL法检测结果显示,联合用药组的凋亡率达89.7%,明显高于ATRA作用组(38.3%)和5-Fu作用组(40.3%,均P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示,联合用药组的凋亡率达76.9%±2.7%,明显高于ATRA作用组(38.2%±2. 6%)和5-Fu作用组(45.2%±2.3%,均p＜0.05).联合用药组G1期细胞比例明显增加,达83.4%±3.0%,明显高于ATRA作用组(48.2%±2.5%)和5-Fu作用组(53.2%±2.6%,均P＜0.05);联合用药组S和G2/M期细胞比例明显下降,与其他各组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).ATRA作用组与5-Fu作用组的凋亡率和各期细胞比例的差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 ATRA有增加食管癌EC97O6细胞对5-Fu敏感性的作用,其作用机制与其调节细胞周期的变化和增加细胞的凋亡有关.     

全反式维甲酸和丁酸钠对人肝癌细胞几种特异性酶表达的影响

目的 探讨Ｂｅｌ－７４０２人肝癌细胞株分化的生化指标及全反式维甲酸（ＲＡ）和丁酸钠（ＳＢ）联合作用对Ｂｅｌ－７４０２人肝癌细胞株的分化作用。方法 以反映肝癌特异性的γ－谷氨酰转肽酶（γ－ＧＴ）为反映肝癌细胞分化的酪氨酸α酮戊二酸转氨酶（ＴＡＴ）和碱性磷酸酶（ＡＬＰ）为指标,通过Ｈｕｓｅｂｙ法测定处理前后肝癌细胞γ－ＧＴ活性的变化,Ｄｉａｍｏｎｄｓｔｏｎｅ分光光度法测定ＴＡＴ活性,而ＡＬＰ活性的测定     

DNA聚合酶β高表达与食管癌放化疗敏感性的临床研究

目的观察DNA聚合酶β(DNA polβ)表达对食管癌放化疗疗效的影响。方法 98例食管癌患者根据DNA polβ表达分为阴性单纯放疗组、阴性放化疗组、阳性单纯放疗组、阳性放化疗组4组。各组均进行常规分割放疗,2 Gy/次,5次/周,中位处方剂量60 Gy。2个放化疗组放疗的同时给予顺铂、5-Fu和亚叶酸钙方案化疗,于放疗开始的第1、5周给予。结果阴性单纯放疗组、阴性放化疗组、阳性单纯放疗组、阳性放化疗组的3 a局部控制率分别为54.5%、61.5%、41.7%、53.8%,3 a生存率分为31.8%、38.4%、25.0%、26.9%。结论 DNA polβ表达阴性者放疗联合化疗可改善其生存。     

全反式维甲酸对人胃腺癌细胞中Akt及其磷酸化蛋白表达的影响

目的研究全反式维甲酸（alltrans-retinoic acid,ATRA）对人胃腺癌细胞（SGC-7901）中Akt及其磷酸化蛋白p—Akt（Ser473）和p—Akt（Thr308）表达的影响及其对细胞凋亡的诱导作用。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法检测ATRA对SGC-7901增殖的抑制作用;荧光混微镜观察细胞凋亡形态;Western blot方法检测不同浓度ATRA处理后的SGC-7901细胞中Akt、p-Akt（Ser473）和p-Akt（Thr308）的表达情况。结果ATRA对SGC-7901细胞增殖的抑制作用呈时间和剂量依赖性;ATRA处理48h时,荧光显微镜观察细胞呈现明显的凋亡形态学改变;Western blot检测显示ATRA对细胞中Akt蛋白的表达没有明显影响,但显著下调两种p-Akt蛋白的表达。结论ATRA诱导SGC～7901细胞凋亡可能与其抑制磷酸化Akt蛋白表达有关。     

全反式维甲酸诱导人卵巢癌细胞凋亡的实验研究

目的：观察全反式维甲酸(A11一trans retinoic acid，ATRA)诱导人卵巢癌细胞CAOV3产生凋亡。方法：应用扫描电镜、透射电镜、DNA断裂分析及流式细胞术观察ATRA诱导人卵巢癌细胞CAOV3凋亡。结果：ATRA作用后电镜下细胞逐渐变圆，细胞表面微绒毛消失，核染色质更加致密，浓缩分块，胞质中有空泡形成，细胞表面出泡，脱落形成膜包裹的凋亡小体。流式细胞术不同浓度ATRA对CAOV3细胞凋亡作用的结果显示在DNA直方图上均出现低于G1期二倍体DNA含量的亚二倍体峰，随药物浓度增加，亚二倍体细胞从10^-8mol／L ATRA时的18．7％增加到10^-6mol／L的37．4％；10^-6mol／LATRA作用24h即诱导CAOV3细胞产生典型的梯形DNA条带(DNAlallder)，大小约180bp的整数倍递增，随ATRA作用时间延长而逐渐加强；结论：ATRA可以诱导卵巢癌细胞产生细胞凋亡，呈时间和浓度依赖性。     

Apoptosis of human pancreatic carcinoma cells induced by all-trans retinoic acid and interferon

Objective  To investigate the apoptosis of human pancreatic carcinoma PC3 cells induced by the combination of all-trans retinoic acid (ATRA) with interferon alpha (IFN-α). Methods  PC3 cells were treated with ATRA and IFN-α. The inhibitory rate of PC3 cell proliferation was detected using MTT method. Cellular apoptosis was determined with flow cytometry. The percentage of PC3 cell apoptosis was assayed using TUNEL methods. Results  ATRA and IFN-α could inhibit cellular proliferation and induces cellular apoptosis of PC3 cells. The inhibitory effect was stronger when the ATRA and IFN-α were combined as a therapy. Conclusion  ATRA inhibits the proliferation of PC3 cells and induce the apoptosis of PC3 cells. The combination of IFN-α with ATRA may enhance these effects on PC3 cells.      

CRABP-II- and FABP5-independent responsiveness of human glioblastoma cells to all-trans retinoic acid

Glioblastomas respond differently to all-trans retinoic acid (RA) for unknown reasons. Because CRABP-II and FABP5 mediate RA intracellular signaling respectively and lead to distinct biological consequences, their expression patterns in different grades of astrocytomas and the glioblastoma cells lines LN18, LN428 and U251 were examined to identify potential correlations with RA sensitivities. The response of glioblastoma cells to RA, decitabine or the FABP5 competitive inhibitor, BMS309403, was analyzed. CRABP-II and FABP5 were expressed to varying degrees by the 84-astrocytoma cases examined. Treatment of LN428, U251 and LN18 cells with RA failed to suppress their growth; however, U251 proliferation was inhibited by decitabine. The combination of decitabine and RA suppressed the growth of all three cell lines and induced significant apoptosis of LN428 and U251 cells. Both CRABP-II and FABP5 were transcribed in the three cell lines but FABP5 proteins were undetectable in U251 cells. The ratio of CRABP-II to FABP5 was not altered after RA, decitabine or RA and decitabine treatment and the resistance of cells to RA was not reversed by BMS309403 treatment. In conclusion, CRABP-II and FABP5 expression patterns are neither related to the tumor grades nor correlated with RA sensitivity. Additional molecular factors may be present that determines the sensitivity of glioblastoma cells to RA. Dicitabine may improve the sensitivity of glioblastoma cells to RA, however, its underlying mechanism and its in vivo feasibility need to be investigated.     

亚硒酸钠和维甲酸联合对HL－60细胞生长、分化的影响

以人早幼粒白血病细胞（ＨＬ－６０）为实验对象，观察了亚硒酸钠和维甲酸联合作用对其生长、分化的影响。结果表明：５．８μｍｏｌ／Ｌ亚硒酸钠和０．１μｍｏｌ／Ｌ维甲酸联合可显著抑制细胞生长，且细胞毒性并无增加，强于两者的单独作用。而且可明显诱导细胞向粒系细胞分化，在处理５天后有７２％的细胞进行分化。单用０．１μｍｏｌ／Ｌ维甲酸只有３９％的细胞分化成熟。ＮＢＴ还原实验表现出类似结果。     

亚硒酸钠和维甲酸联合对HL－60细胞生长、分化的影响

 以人早幼粒白血病细胞（HL－60）为实验对象，观察了亚硒酸钠和维甲酸联合作用对其生长、分化的影响。结果表明：5.8μmol/L亚硒酸钠和0.1μmol/L维甲酸联合可显著抑制细胞生长，且细胞毒性并无增加，强于两者的单独作用。而且可明显诱导细胞向粒系细胞分化，在处理5天后有72%的细胞进行分化。单用0.1μmol/L维甲酸只有39%的细胞分化成熟。NBT还原实验表现出类似结果。     

戊地昔布对人食管癌Eca109细胞凋亡及凋亡基因Fas/FasL表达的影响

目的:探讨环氧化酶-2特异性抑制剂戊地昔布对人食管癌Eca109细胞凋亡及凋亡基因Fas/FasL表达的影响。方法:采用MTT法检测戊地昔布对人食管癌Eca109细胞生长的抑制作用;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡和细胞周期分布;电子显微镜检测细胞凋亡形态结构改变;流式细胞术检测凋亡基因Fas和FasL蛋白的表达。结果:戊地昔布(25~400μmol/L)抑制人食管癌Eca109细胞的生长呈时间浓度依赖性;作用72 h后,浓度为400μmol/L的戊地昔布对细胞生长的抑制率可达85.95%,凋亡率由(2.38±0.42)%增加到(48.46±0.73)%;50~400μmol/L时增殖指数和S期的细胞比例则明显降低,G0/G1期的细胞比例增加;同时,流式细胞术显示,50~400μmol/L的戊地昔布可上调人食管癌Eca109细胞Fas及FasL蛋白的表达。结论:戊地昔布可诱导人食管癌Eca109细胞发生凋亡,诱导凋亡的机制可能部分与其上调Fas及FasL的表达有关。     

应用mRNA差异显示方法克隆维甲酸诱导的人肺腺癌GLC-82细胞分化相关基因

目的克隆维甲酸诱导的人肺腺癌ＧＬＣ８２细胞分化相关基因。方法在全反式维甲酸诱导人肺腺癌ＧＬＣ８２细胞系分化的基础上,采用ｍＲＮＡ差异显示技术,对这个细胞系以全反式维甲酸诱导前及诱导后８小时、２４小时和４天的细胞基因表达差异情况进行分析。结果在全反式维甲酸诱导前后的细胞之间存在明显的基因表达差异。有些基因经维甲酸（ＲＡ）诱导后持续表达或瞬时表达,而有些基因经ＲＡ作用后表达水平降低或完全被抑制。经克隆筛选,获得了一些经全反式维甲酸诱导激活或抑制的差异表达基因片段,对其中的３个片段进行了序列分析和同源性比较。结论全反式维甲酸具有调控分化相关基因表达与否的重要作用,由ＲＡ诱导的肿瘤细胞再分化是一个多基因参与的过程