不同冷冻保护剂对外周血干细胞保存的研究

目的:探索冻存外周血干细胞(peripheralbloodstemcell,PBSC)的最佳冷冻保护剂组合和最大细胞浓度。方法:将冷冻保护剂二甲基亚砜(dimethylsulfoxideDMSO)、羟乙基淀粉(hydroxyethylstarchHES)、人血清白蛋白(humanserumalbrinALb)及自体血浆(autoplasma)按不同比例组成3组冷冻保护剂,A组:5%DMSO+6%HES+4%ALb;B组:5%DMSO+6%HES+autoPLASMA;C组:5%DMSO+4%Alb。冻存PBSC的细胞浓度分别为1×108/ml、2×108/ml和4×108/ml3个梯度。比较3组不同冷冻保护剂对不同细胞浓度的PBSC的冻存效果。进行冻存前后粒单系集落形成单位集落形成能力(colonyformingunitGranulocytemacrophage和爆式红系集落形成单位CFUGM;burstformingUniterythroid,BFUE)、CD34+CD38-细胞的测定,及复苏后细胞拒染率测定。数据处理用统计学区组方差分析。结果:3组不同冷冻保护剂组合中以B组的CFUGM,BFUE回收率最高,在细胞浓度为1×108/ml的回收率分别为78.7±9.8%和69.8±14.1%;A组与C组的CFUGM回收率分别为68.3±6.2%和65.8±7.2%,BFUE回收率分别为63.4±9.7%和60.4±10.6%,B组与A组、C组方差分析F=56.7,0.01相似文献   

冻存对脐血树突状细胞介导的食管癌疫苗的影响

目的:观察低温冻存对人脐血DC与EC109食管癌细胞融合疫苗生物学特性及CTL活性的影响。方法:应用免疫磁珠标记法分选人脐血CD34 干细胞,细胞因子扩增培养为成熟DC,聚二乙醇(PEG)融合法制备EC109-DC融合疫苗,-80℃低温冰箱冻存,3周后复苏,计算疫苗回收率及存活率。倒置相差显微镜观察冻存后疫苗的细胞形态,流式细胞术分析疫苗及疫苗活化后T淋巴细胞的表型,MTT法检测疫苗特异的CTL活性。结果:冻存后疫苗存活率及回收率分别为(77·2±1·8)%、(61·8±1·4)%。冻存对疫苗细胞形态及表型无明显影响。冻存疫苗和未冻存疫苗活化后T淋巴细胞,CD3 T/CD4 T及CD3 T/CD8 T均较活化前明显增加,P=0·002;CD4 T/CD8 T由活化前的0·85分别增加至1·25和1·29,疫苗冻存与否对T细胞活化能力无明显差别,P=0·052。疫苗特异的CTL活性未受冻存明显影响,其杀伤率与未冻存疫苗组相比差异无统计学意义,P=0·667。结论:-80℃低温冰箱短期冻存对EC109-DC融合疫苗生物学特性及特异的CTL活性无明显影响,可望为EC109-DC疫苗的开发应用提供简单可行的保存方法。     

自体外周血造血干细胞(APBSC)动员采集及冻存的研究

目的评价自体外周血造血干细胞(APBSC)的动员、采集及冻存方法。方法18例病例中，恶性淋巴瘤16例(NHL14例，HD2例)，睾丸肿瘤2例。病人行诱导化疗完全缓解后，采用大剂量联合化疗加小剂量粒细胞集落刺激因子(G—CSF)进行外周造血干细胞动员。用CS-3000，Plus血细胞分离机采集外周血造血干细胞，将分离的单个核细胞(MNC)经程序降温仪降至-80℃后，冻存-196℃液氮。冷冻前及解冻后分别行MNC计数和粒单系祖细胞集落(CFU—GM)培养。结果动员后外周血WBC及MNC总数明显增加，与动员前比较，差异有显著性。冷冻前后，MNC计数，CFU—GM集落数无明显差异。结论大剂量联合化疗加小剂量G—CSF动员方案是安全有效的。冷冻保存APBSC及复苏过程对细胞损伤较小，值得推广使用。     

冻存后人脐血DC介导的食管癌细胞瘤苗实验研究

目的：探讨杂交瘤技术制备脐血树突状细胞（DC）和食管癌细胞的融合瘤苗在低温冻存后的生物学特性及特异性CTL活性。方法：分离脐血CD34^＋干细胞诱导扩增为成熟DC，与EC109细胞经聚乙二醇（PEG）法融合；免疫磁珠法筛选EC109-DC；鉴定瘤苗表型；-80℃低温冰箱冻存融合细胞EC109-DC，3周后融冻；观察融冻瘤苗表型及致瘤性；MTT法测定瘤苗诱导淋巴细胞增殖能力及体外特异性免疫应答能力。结果：融冻后疫苗体外半悬浮生长；同时高表达FR和CD80；融冻后瘤苗接种小鼠体内未见肿瘤形成；未冻存和冻存后融合疫苗EC109-DC活化的T淋巴细胞，可产生针对EC109细胞的特异性杀伤作用。结论：冻存未破坏融合疫苗的完整性；融冻后瘤苗无体内致瘤性，安全可靠；-80℃低温冰箱短期冻存对EC109-DC融合疫苗生物学特性及特异的CTL活性无明显影响，可望为DC疫苗提供简单可行的保存方法。     

非程控降温—80℃冷冻保存外周血干细胞及应用研究

目的 为外周血造血干细胞（PBSC）的冷冻保存建立简便，经济且有效的方法并应用于临床。方法 采用6．25％二甲基亚砜（DMSO）加7．5％右旋糖酐（DEX）为冷冻保护剂，将21例恶性血液病患者行干细胞动员，采集获取的PBSC浓集液与细胞冻存液混合，不同程控降温而直接将分装后的混悬液和小样本保存于－80℃冰箱中。于冻存前和冻存后1周，1个，3个月和6个月时分别取样分析，检测细胞回收率和台盼蓝拒梁率。结果 冻存1周和1个月其细胞回收率和存活率无明显差别（P＞0．05），冻存至3个月时细胞活性及CD34^ 细胞回收率明显降低（P＜0．01），但不随同存期延长而进行性下降。19例移植患者输注保存后的PBSC均获得造血重建。结论 非程控－80℃冷冻技术是一种简便，经济和有效的造血干细胞冻存方法，且能很好地保存PBSC的造血潜能。     

冻存外周血干细胞扩增CIK细胞及其体外的抗肿瘤效应

目的:探讨患者冻存外周血干细胞体外诱导CIK细胞的增殖能力、表型特征及其对B细胞淋巴瘤细胞系的杀伤效应.方法:复苏患者冻存外周血干细胞悬液,Ficoll密度梯度方法分离单个核细胞及从健康人新鲜外周血分离单个核细胞,经IFNr、IL-2、CD3McAb诱导培养获得CIK:细胞.细胞计数板观察CIK细胞增殖能力;流式细胞术检测CIK的表型;以CFSE标记靶细胞区分效应细胞,PI染色,FACS检测靶细胞死亡率.结果:患者冻存外周血干细胞来源的CIK细胞较健康人增殖速度慢,最大增殖倍数低,但CD3+CD56+细胞比例与健康人差异无统计学意义,分别为(16.14±8.49)%和(17.52±3.30)%,P=0.744.患者及健康人CIK细胞与相应的诱导培养前单个核细胞相比,杀伤活性明显增强,在效靶比10:1时患者及健康人CIK细胞对Daudi细胞的杀伤活性为(29.23±8.85)%、(20.13±2.36)%,与培养前相比P值分别为0.004、0.001;患者CIK细胞杀伤活性强于健康人,P=0.05.结论:患者冻存外周血干细胞可以诱导生成具有抗肿瘤活性的CIK细胞,为其临床应用提供了实验依据.     

外周血干细胞冻存夹的改良及临床应用

外周血干细胞移植(peripheral blood stem cell transplantation,PBSCT)在血液病和实体瘤的治疗中得到了广泛的应用,干细胞移植过程中,干细胞的冻存是保证移植成功的重要环节.直接-80℃冰箱冻存外周血干细胞是一种简便、实用、安全、可靠、成本低的外周血干细胞保存方法,在外周血干细胞移植中已得到广泛应用[1].干细胞放入-80℃冰箱前,需用冻存夹固定干细胞冻存袋,以往选择有机玻璃板作冻存夹,使用中有诸多不便,我们对冻存夹进行了改良,形成了具有经济实惠,方便实用,取材容易,制作简单等优点的改良新型冻存夹,使用后效果满意,现介绍如下.     

外周血干细胞CD+34/CD-38亚群与集落形成能力的相关性分析

目的探讨外周血干细胞亚群CD34+/CD38-与CFU-GM,BFU-E的相关性及其影响因素.方法应用流式细胞仪测定外周血干细胞冻存前后的CD34+及CD34+/CD38-,对冻存前后的PBSC进行CFU-GM,BFU-E测定.对数据进行对比分析及相关性分析.结果冻存后较冻存前集落产率明显降低(P＜0.05),而冻存1个月与3个月的集落产率差异无显著性(P＞0.05).冻存前后CD34+/CD38-百分率与CFU-GM、BFU-E的数目相关性分析显示二者均存在显著相关性.结论外周血干细胞CD34+/CD38-百分率与CFU-GM,BFU-E集落产率之间存在显著相关性,二者可作为测定PBSC质与量的互补指标.冷冻保存时间对PBSC的膜分子抗原无明显影响.冷冻保存减少了CFU-GM,BFU-E的产率,但冻存1个月与3个月对PBSC的集落产率影响不明显.     

-80℃直接冷冻保存造血干细胞移植治疗恶性血液病

:[目的]探讨 -80℃直接冷冻保存自体造血干细胞移植(APBSCT)治疗恶性血液病的疗效。[方法]ABSCT5例 ,移植前采用粒细胞集落刺激因子(G CSF)动员外周血干细胞(PBSC) ,分离后 ,将采集的PBSC分袋直接置于 -80℃冰箱冷冻保存。[结果]PBSC短期冻存后检测回收率和台盼蓝拒染率均在80%以上 ;接受移植的5例患者均获成功 ,并持续缓解(CCR) ,中位CCR时间为18(5～31)个月 ,无复发。[结论] -80℃直接冷冻短期保存PBSC具有良好效果 ;具有简单、方便、费用低等优点 ;ABSCT造血重建快并发症少 ,值得进一步推广     

纯化的自体CD34~+细胞移植治疗恶性血液病临床对照观察

 目的　分析CD34+ 纯化自体造血干细胞移植治疗恶性血液病的临床疗效。方法　 11例病人进行了CD34+ 纯化自体造血干细胞移植 ,8例患者进行了未分选的自体造血干细胞移植 ,动员方案为CTX+Vp 16联合G CSF。CD34+ 细胞分选采用CliniMACS系统。结果　分选后CD34+ 细胞纯度达到(88.99± 6 .88) % ,回收率达到 (6 9.0 6± 17.0 7) %。 11例分选患者感染率为 (5 / 11例 ) ,复发率为 (1/ 11例 ) ,死亡率为 (3/ 11例 )。外周血中性粒细胞 >0 .5× 10 9/L时间为 (11± 1)天 ,血小板 >2 0× 10 9/L为(13± 3)天 ,8例未行CD34+ 分选患者的感染率 (4/ 8例 ) ,复发率为 (3/ 8例 ) ,死亡率为 (5 / 8例 )。外周血中性粒细胞 >0 .5× 10 9/L时间 (11± 1)天和血小板 >2 0× 10 9/L(14± 4 )天。结论　利用CliniMACs系统体外进行外周血CD34+ 细胞的富集与纯化纯度、回收率均满意 ,自体移植后造血功能重建顺利 ;与对照相比造血重建时间、感染率...     

Pharmacogénétique des fluoropyrimidines. La méthylènetétrahydrofolate réductase

Résumé: Lefficacité optimale des fluoropyrimidines nécessite des concentrations élevées en 5-10 méthylènetétrahydrofolate (CH₂FH₄), contrôlées par la méthylènetétrahydrofolate réductase (MTHFR) qui convertit irréversiblement le CH₂FH₄ en 5-méthyltétrahydrofolate (CH₃FH₄). Les polymorphismes 677CT et 1298AC du gène MTHFR sont associés à une baisse dactivité de lenzyme. Les tumeurs «MTHFR mutées» devraient donc être plus sensibles aux fluoropyrimidines que les tumeurs «MTHFR sauvages». Les études expérimentales et cliniques publiées à ce jour tendent à montrer une plus grande sensibilité au 5-FU (associé ou non à lacide folinique) dans les tumeurs MTHFR mutées par rapport aux tumeurs sauvages. Ces résultats montrent la nécessité de poursuivre ces recherches afin de confirmer limpact de ces polymorphismes sur lefficacité des fluoropyrimidines.     

Oncogénétique et psycho-oncologie, une collaboration recommandée...

Résumé: La possibilité depuis 1994, de connaître la probabilité individuelle de développer certains cancers a permis de proposer de nouvelles modalités de prévention, de traitements et contribué au développement actuel de loncogénétique. Une meilleure connaissance des répercussions psychologiques tant pour les patients que pour les apparentés est désormais possible et limplication des psycho-oncologues dans ce cadre de la réalisation des tests prédictifs, recommandée. La mission de «messager» qui incombe au «cas-index» doit faire lobjet dune attention particulière. La complexité de linformation et la dimension paradoxale que peut avoir parfois la communication à propos des choix, rend difficile lévaluation de la qualité du consentement. La situation particulièrement délicate dune aide à la décision à légard de la chirurgie prophylactique, exige une collaboration étroite des généticiens et des psycho-oncologues.Les soins de support en oncologie     

The role of papillomaviruses in human cancers

This review comprehensively evaluates the influence of gene-gene, gene-environment and multiple interactions on the risk of colorectal cancer (CRC). Methods of studying these interactions and their limitations have been discussed herein. There is a need to develop biomarkers of exposure and of risk that are sensitive, specific, present in the pathway of the disease, and that have been clinically tested for routine use. The influence of inherited variation (polymorphism) in several genes has been discussed in this review; however, due to study limitations and confounders, it is difficult to conclude which ones are associated with the highest risk (either individually or in combination with environmental factors) to CRC. The majority of the sporadic cancer is believed to be due to modification of mutation risk by other genetic and/or environmental factors. Micronutrient deficiency may explain the association between low consumption of fruit/vegetables and CRC in human studies. Mitochondrial modulation by dietary factors influences the balance between cell renewal and death critical in colon mucosal homeostasis. Both genetic and epigenetic interactions are intricately dependent on each other, and collectively influence the process of colorectal tumorigenesis. The genetic and environmental interactions present a good prospect and a challenge for prevention strategies for CRC because they support the view that this highly prevalent cancer is preventable.     

Antifungal combination therapy in localized candidosis

A mouse model of localized candidosis in air-filled subcutaneous cysts imitating thrush has been developed. We have now tested various antifungal combinations in this animal model. Flucytosine (5-FC) + amphotericin B (Amph B) showed the highest efficacy, a clear additive or even synergistic effect was seen. The combination of 5-FC + imidazole or triazole derivative was less efficacious, an additive effect was rare. The combination of 5-FC + Amph B was also tested against Candida albicans strains showing various degrees of 5-FC-resistance. A significant reduction in 5-FC-resistant mutants was seen after the treatment with the combination.     

PSA-Test zur Früherkennung des Prostatakarzinoms

Zusammenfassung Prostatakrebs ist hierzulande seit einigen Jahren die häufigste Krebserkrankung bei Männern. Da über die Ätiologie wenig gesichertes Wissen vorliegt und daher kaum Möglichkeiten zur primären Prävention bestehen, konzentrieren sich die Anstrengungen auf die Suche nach wirksamen Verfahren zur sekundären Prävention. Hierbei gilt die Verwendung des PSA-Tests zur Früherkennung des Prostatakarzinoms als derzeit aussichtsreichstes Verfahren. Bevor ein neues Früherkennungsverfahren zur breiten Anwendung empfohlen oder in das gesetzliche Früherkennungsprogramm aufgenommen wird, muss jedoch seine Wirksamkeit in hierfür geeigneten wissenschaftlichen Untersuchungen nachgewiesen werden. Bis jetzt gibt es bereits eine ganze Reihe epidemiologischer Studien zur Effektivität des PSA-Screenings, doch konnte ein Wirksamkeitsnachweis bisher nicht erbracht werden. Zwei große randomisierte Studien in Europa und den USA lassen für die Jahre 2005–08 erste Ergebnisse erwarten. Da epidemiologische Arbeiten belegen, dass durch PSA-Screening eine nicht unerhebliche Überdiagnostik und Übertherapie eintritt, d. h. Schaden angerichtet werden kann, ist das Ergebnis der genannten randomisierten Studien vor weitergehenden Entscheidungen unbedingt abzuwarten. Bis dahin sollte von der Anwendung des PSA-Tests zur Prostatakrebsfrüherkennung unmissverständlich abgeraten werden. Da für den Test bereits ausgiebig Werbung betrieben wurde, kommt einer gründlichen ärztlichen Aufklärung von an dem Test interessierten Personen eine Schlüsselrolle zu.     

Les génériques en cancérologie: à molécule identique, médicaments identiques? Les biosimilaires, des super-génériques?

Résumé: Les biosimilaires vont bientôt voir leur apparition en Europe. Comment un laboratoire peut-il aborder le développement de son dossier dAMM? Quelles sont les bases légales et les recommandations officielles? Comment la similarité et/ou le caractère générique peuvent-ils être démontrés? Les règles sont-elles identiques à celles des produits chimiques conventionnels pour lesquels, notamment en cancérologie, il existe des médicaments génériques? Comment faire pour que la sécurité et lefficacité des médicaments biosimilaires soient assurées pour les patients?     

异基因造血干细胞移植后患者肝损害病因与临床特征分析

 【摘要】　目的　总结异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后患者肝损害的发生率、发生原因、诊断方法与治疗选择。方法　回顾性分析郑州大学附属肿瘤医院2006～2010年接受allo-HSCT的83例良、恶性血液病患者中Ⅱ～Ⅳ级肝损害的发生率、各种病因的构成比、临床表现以及诊断方法,分析移植后不同时期肝损害病因的差异、治疗方法、疗效。结果　83例allo-HSCT患者中,发生Ⅱ～Ⅳ级肝损害45例（54.2 %）。按肝损害致病病因分类,预处理化疗所致7例,环孢素所致9例,肝静脉闭塞病（HVOD）所致2例,肝脏移植物抗宿主病（GVHD）所致24例,乙型肝炎病毒再激活所致2例,多器官衰竭所致1例。发生于移植后1个月内者20例（44.4 %）,以药物性肝损害为主,1个月～100 d者13例（28.9 %）,101 d～1年者12例（26.7 %）,均以肝脏GVHD为主。经减停肝损害药物、抗排异、保肝等治疗后,27例治愈,10例好转,2例未愈,6例死于原发病复发或移植相关并发症。结论　肝损害是allo-HSCT后常见的并发症,药物及肝脏GVHD是其最主要的致病原因,肝损害与其发生时间的相关性可作为肝损害病因学诊断的参考依据。根据肝损害的病因选择针对性的治疗方法,可取得较好的疗效。     

Cancer immunotherapy

Unprecedented progress has seen made in the last decade in the field of cancer immunotherapy. The recent approval of nivolumab （Opdivo）, the first anti-programmed cell death-1 （PD-1） antibody, for metastatic melanoma in Japan, marked a milestone in the rapidly advancing field of cancer immunotherapy. Nivolumab together with ipilimumab （Yervoy）, the anti-cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 （CTLA-4） antibody, are the first 2 drugs in the class of ＂immune checkpoint inhibitors＂ that have delivered impressive responses in patients with metastatic melanoma and renal cell cancer （RCC） as well as a variety of solid tumors.     

Pharmacokinetics and dosage of fluconazole in continuous hemofiltration (CAVH, CVVH) and hemodialysis (CAVHD, CVVHD)

Continuous haemofiltration (CAVH, CVVH) and haemodialysis (CAVHD, CVVHD) are increasingly used in patients with acute renal failure (ARF). The elimination rates of fluconazole vary considerably among the different procedures. In CVVHD, the elimination rate is, depending on the combined dialysate/ultrafiltrate flow rate, the most marked compared to CVVH and intermittent dialysis with a fluconazole clearance exceeding the values of healthy persons in CVVHD 2 L/h. To achieve therapeutic plasma levels during continuous renal replacement therapy, the same loading dose as in patients without renal failure should be applied, followed by the adjusted maintenance dose for anuric patients multiplied by a factor taking the extracorporeal elimination of the absorbed dose into account (CAVH, CVVH: x 2.2, ultrafiltrate flow 0.5 L/h; CAVHD, CVVHD: x 3.8, combined dialysate/ultrafiltrate flow 1.5 L/h). Despite the broad therapeutic margin of fluconazole, drug monitoring is recommended with respect to the very limited number of investigations with relatively low dosages up to 200 mg/day and--which is of paramount importance--to achieve therapeutic drug levels in vital indications.