新生大鼠上丘脑组织培养研究

目的探讨新生大鼠上丘脑组织培养方法,并对其在培养过程中的变化进行观察.方法取出生4 d的SD乳鼠上丘脑组织,分别在鼠尾胶原玻片、多聚赖氨酸玻片和Biocoat培养小室上进行组织培养,使用相差显微镜动态观察组织块生长情况.48 h后观察组织块贴壁率,在培养5d时使用图像分析仪观察细胞迁移情况,测量最大迁移距离.使用乳酸脱氢酶试剂盒,测量组织培养液中乳酸脱氢酶活性的动态变化.常规HE染色形态学观察,并使用透射电镜观察组织块超微结构.结果与传统的培养载体相比,上丘脑组织在Biocoat培养小室上进行培养可以获得较高的组织贴壁率和细胞迁移距离.上丘脑组织在接种后3～15 d,其培养液中乳酸脱氢酶活性保持在较低水平.培养早期上丘脑组织块边缘出现细胞突起,胶质细胞迁移,随着培养时间延长,细胞出现凋亡,组织结构破坏.结论Biocoat培养小室是进行新生大鼠上丘脑组织培养的理想载体,接种3 d后组织生长趋于旺盛,而在2周后多数组织的生长逐渐衰退.     

药用植物桔梗的组织培养初步研究

桔梗Platycodon grandiflorum (Jacq.)DC.根宣肺祛痰，排脓消肿。报告用上胚轴作为外植体，进行桔梗组织培养的研究成果，结果表明用MS＋2，4－DO．2，培养基一步分化出苗，用MS＋6－BAO．5＋NAAO．05培养基增殖，增殖率5－7，分化苗用1／2MS＋NAAO．5＋IAAO．1生根培养基能迅速生根，生根率100％，组培苗移载后成活率高。     

豆状核,丘脑与丘脑枕三维空间形态和位置的研究

目的：为了增加和填补豆状核、丘脑与丘脑枕三维空间形态和位置的解剖学资料,并为提高脑立体定向手术中靶点定位的准确性提供定位数据。方法：将成人６１只整脑制成２ｍｍ厚的三维连续切片,并在各脑片上直接进行观测。结果：调查了１２２个豆状核、丘脑与丘脑枕的前后径、左右径、上下径,体积及“靶心”坐标值;通过还原、重建,绘出三维切面的空间投影轮廓图。结论：明确了三核团在脑内空间的整体构型,其结果可指导脑立体定向手     

大鼠视交叉上核的组织结构

用Nissl法和快速灌注Golgi法结合电镜与电子计算机三维重建神经元技术,研究视交叉上核(SCN)的组织结构。SCN神经元可分为三类:①无小棘神经元;②多棘神经元;③中间型神经元。三种神经元的功能可能分别与传出、传入和联络有关。SCN超微结构显示神经元胞质中富含多聚核糖体、高尔基复合体和常见于核膜凹陷处的粗面内质网。神经毡发达,含三种终末和五种突触亚型。     

用基因芯片研究异丙酚麻醉大鼠丘脑基因表达谱

目的:运用基因芯片研究异丙酚麻醉大鼠丘脑基因表达谱的变化. 方法:SD大鼠12只,随机分为对照组和异丙酚组,每组6只. 对照组、异丙酚组大鼠分别腹腔注射生理盐水或100 mg/kg异丙酚. 1 h后,取丘脑,抽提RNA,以RNA为模板逆转录合成cDNA,以cDNA为模板转录生物素标记的cRNA,cRNA经提纯、片断化后与大鼠神经生物学表达芯片U34杂交;杂交后的芯片用扫描仪检测信号,收集图像,用Microarray Suite Version 5.0软件分析差异表达基因并对其作初步功能分析. 结果:1323条待测基因中,异丙酚麻醉后221条基因差异表达,上调表达80条,下调表达141条,其中差异表达超过两倍的为53条. 差异性表达的基因功能可分为离子通道、信号转导、转录因子、细胞因子等. 结论:异丙酚麻醉可诱导大鼠丘脑众多基因的差异表达,基因芯片是研究全麻机制的有效方法.     

大鼠丘脑束旁核的电镜观察

透射电镜下观察了大鼠ＰＦ中参与突触构成的各种轴突终末及突触联系为主的超微结构特征，ＰＦ中参与突触构成的轴突终末分为Ｒ，Ｆ，Ｐ及Ｇ终末四类，Ｒ终末包括ＳＲ及Ｇ终末四类，Ｒ终末包括ＳＲ及ＬＲ终末，ＳＲ终末占８１．５３％，为含有小圆形清亮小泡的轴突终末，所含小泡平均直径为４３ｎｍ，ＬＲ终末占９４．５％，含较大直径的圆形清亮小泡，平均直径为５６ｎｍ，与树突构成对称或不对称的轴－树突触，Ｆ终末占６．４４％，     

大鼠丘脑束旁核的光镜观察

采用Ｎｉｓｓｌ染色的大鼠丘脑冠状切片对基ＰＦ细胞构筑进行了定量研究，大鼠ＰＦ中的神经元有长梭形（纺缍形）、圆或椭圆形、三角形及多极形四类、以中、小型细胞为主。各形态细胞在由ＭＤ和ＣＬ分隔成的ＰＦ内，外侧部中分布不一，内侧部长梭形为主占３９．９４％，外侧部圆或椭圆形为主占４２．７６％，大小上，内侧部小型细胞占４７．５８％，中型细胞占５１．７９％，外侧部小型占５８．３７％，中型占４０．９５％。     

大鼠丘脑背内侧核的传入纤维联系

采用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）微量注射和微电泳方法，观察大鼠丘脑背内侧核（ＭＤ）的传入纤维联系。结果表明：ＭＤ接受前额区皮质、颞叶新皮质、脑岛无颗粒型皮质、梨状区皮质、杏仁复合体，苍白球腹侧部；丘脑网状核；上丘、黑网状部。小脑齿状核的传入纤维。     

大鼠丘脑及邻近部分神经结构微血管的定量研究

目的：观察并定量研究大鼠丘脑及邻近部分神经结构的微血管。方法：应用血管染色法显示了４０例大鼠丘脑及邻近结构的微血管；采用体视学方法对血管团边界明显的神经结构的微血管密度做定量研究，并用目镜测微器测这些结构的微血管管径；应用计算机图像分析系统测算这些结构微血管投影面积的百分比，所得数据均做统计处理。     

新生大鼠成纤维细胞原代培养

目的探讨新生sD大鼠成纤维细胞的培养方法。方法采用胰酶消化法和组织块贴壁法原代培养成纤堆细胞。采用HE染色及波形蛋白（Vimentin）免疫细胞化学染色对培养细胞进行鉴定。结果两种方法均能培养出成纤维细胞,其中酶消化法一次性可获得较多细胞,但细胞状态较差,贴壁慢,生长慢;组织块贴壁法短时间内可长出大量成纤维细胞,一周即可传代。HE染色后倒置相差显微镜下观察细胞形态典型,免疫细胞化学染色结果显示Vimentin呈阳性反应。结论组织块贴壁培养法是获取成纤维细胞简单,可行,快速的方法。     

神经生长因子对小鼠颈上神经节和大鼠腓神经损伤后修复的影响

目的 应用形态学方法观察研究神经生长因子（NGF）对长春新碱（VCR）损伤的小鼠颈上神经节和钳夹损伤的大鼠腓神经修复再生作用。方法 颈上神经节：出生2d的昆明种小鼠随机分为实验组、对照组和空白对照组。实验组皮下注射VCR（0.2mmol/L～10ul/g体重）和NGF（2、5、10ug/g体重）,对照组仅注射VCR,每天1次,连续4d。光镜下测量颈上神经节横径并且观察神经节细胞形态变化。周围神经：将钳夹损伤腓神经的SD大鼠随机分为实验组和对照组,并从损伤后第1天在近损伤处分别肌注NGF（2、4、8ug/kg体重）和生理盐水,每天1次,连续12d。取腓神经和趾长伸肌,光镜观察,并计数损伤处远端和近端神经纤维数量。结果 VCR可损伤颈上神经节,神经节横径缩小,节细胞凋亡解体;NGF则可改善VCR的损害作用,神经节横径增大61%～95%,节细胞数明显增多59%～70%,细胞凋亡现象显著减轻,改善程度与NGF剂量相关。NGF对排神经再生和趾长伸肌形态变化也有明显改善作用,尤以大剂量NGF的作用更显著。结论 NGF对长春新碱损伤的小鼠颈上神经节和经钳夹损伤的大鼠腓神经有明显的促修复作用。     

SD乳鼠海马神经细胞原代培养方法的探讨

目的 寻求一种简单、廉价的原代SD乳鼠海马神经细胞培养方法.方法 采用胰蛋白酶消化法制备游离海马神经细胞悬液,进行培养.结果 通过多次探索、观察、成功的进行了原代海马神经细胞培养.结论 本方法适合一般实验室开展海马神经细胞培养.     

乳鼠心肌细胞酶消化培养和贴块培养法的比较

目的探索经济、简单易行的心肌细胞培养方法。方法选用新生乳大鼠心肌细胞进行0．25％胰酶分离培养和贴块培养两种培养方法。结果用0．25％胰酶消化培养可获得大量的单细胞，但是酶对细胞的损伤比较大，酶消化所受的影响因素比较多，此过程获取单细胞所需的时间比较长；贴块培养法简便易行，得到的细胞结构完整、存活率高，且经济实惠、适合长期研究且需细胞量不多的实验。结论酶分离培养和贴块培养各有优劣势，应根据不同的实验目的选用不同的培养方法。     

水杨酸钠对新生小鼠下丘核区神经干细胞分化的影响

目的　在体外培养新生小鼠下丘核区NSCs的基础上 ,研究水杨酸钠对NSCs分化的影响。方法　分离、收集新生昆明小鼠下丘核区脑组织 ,体外经EGF和bFGF刺激下培养 ;通过免疫细胞化学方法染色鉴定神经干细胞及其子代细胞的分化方向和水杨酸钠给药后分化为神经元的细胞的GABA和Glu蛋白表达。结果　培养的部分细胞在特定生长因子的作用下可分裂、增殖 ,同时表达神经干细胞特异性抗原nestin ,并在撤除生长因子后向神经元和胶质细胞分化。干细胞分化的神经元中的GABA和Glu蛋白表达位于细胞质和细胞核。在无水杨酸钠组两类递质阳性着色细胞数没有明显差异 ;水杨酸钠给药后Glu阳性着色细胞数较GABA阳性着色细胞数明显增加 ,吸光度值比较有显著性差异 (P <0 0 1)。结论　①小鼠下丘核区存在着具有多向分化潜能的神经干细胞。②水杨酸钠具有促进NSCs分化为Glu阳性神经元的作用。     

新生大鼠雪旺细胞的体外培养和纯化

目的:探索简单有效获取大量高纯度雪旺细胞的新方法。方法:分离出生3d的新生SD大鼠坐骨神经,使用胰蛋白酶及I型胶原酶混合消化,结合差速贴壁法和G418纯化。四氮唑盐(MTT)比色法测定细胞的生长增殖情况,免疫细胞化学方法计算雪旺细胞的纯度。结果:胰酶和胶原酶混合消化后的活细胞率为94.6±3.4%,纯化后的雪旺细胞纯度为95.6±2.5%。结论:胰酶和胶原酶混合消化结合差速贴壁和G418纯化是获取大量高纯度雪旺细胞的简单有效方法。     

新生大鼠中脑黑质神经细胞的原代培养

对新生1天大鼠中脑黑质神经细胞进行原代培养，以建立稳定的神经细胞培养模型。通过光镜对培养各阶段的神经细胞系统地观察，描写了它们的生长发育过程和形态特征，同时用特异性诱发荧光技术和酪氨酸羟化酶（TH）免疫细胞化学方法，进一步确定培养的黑质神经细胞的化学性质。本方法与通常从胚胎鼠取材比较，具有难度小，取材范围大的优点。     

大鼠颈上神经节组织移植至自体中脑水管周灰质对皮肤痛阈的影响

为观察自中脑水管周灰质（PAG）释放的儿茶酚胺类物质能否引起痛敏感性的变化，选择新生大鼠颈上神经节（SCG）作为PAG内的移植物。移植后应用烟碱皮下注射（0.lmg／kg）引起移植物儿茶酚胺释放，可见被移植大鼠痛敏感性降低，与移植前对照组痛阈比较P＜0.01，而注射等渗盐水对痛阈无影响。烟碱引起的镇痛效应可被肾上腺素受体拮抗剂酚妥拉明部分阻断。实验后对移植物进行了儿茶酚胺组织化学检查。上述结果表明，PAG及移植物儿茶酚胺的局部释放可以调节伤害性感受，减低痛敏感性。     

大鼠滑膜细胞原代培养的研究

目的:建立原代培养大鼠滑膜细胞的方法。方法:取大鼠关节滑膜组织,用酶消化法分离细胞,用RPMI-1640培养液进行培养并传代,观察滑膜细胞生长状况。结果:用酶消化法培养滑膜细胞,方法简单,细胞形态典型。结论:单一的胶原酶消化法是一种有效的滑膜细胞原代培养的方法。