核因子-κB活性对BXSB狼疮小鼠脾脏自发性生发中心形成的影响

目的探讨核因子(NF)-kB活性对BXSB狼疮小鼠脾脏中自发性生发中心形成的影响及其机制。方法18只BXSB自发性狼疮小鼠随机分成对照组和吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC)干预组,PDTC组：隔日腹腔注射PDTC(120mg/kg体重)；对照组：隔日腹腔注射等量溶媒。持续8周结束实验。以电泳迁移率改变实验检测脾脏组织NF-kB活性,双标记流式细胞术检测脾脏B细胞CD154表达及生发中心B细胞凋亡,组织化学方法染色脾脏生发中心,并以图像处理系统半定量分析。结果PDTC显著抑制BXSB狼疮小鼠脾脏组织NF-kB活性,较对照组下降62．82%；BXSB狼疮小鼠脾脏组织可见自发性生发中心形成,抑制NF-kB活性能下调脾脏B细胞CD154表达、使其自发性生发中心形成受阻、促进生发中心B细胞凋亡。结论NF-KB过度活化可通过上调脾脏B细胞CD154的异常表达而促进自发性生发中心形成、并减少生发中心B细胞凋亡。由此,自发性生发中心形成过程中生成的自身反应性B细胞得以逃逸凋亡,分化成产自身抗体浆细胞。提示NF-kB可成为防治系统性红斑狼疮的一个作用靶点。     

三氧化二砷对BXSB狼疮鼠生存时间及脾细胞分泌白细胞介素-4干扰素-γ的影响

目的探讨三氧化二砷（ATO）对BXSB狼疮小鼠生存时间、外周血抗dsDNA抗体水平及离体脾脏单个核细胞白细胞介素（IL）-4、干扰素（IFN）-γ分泌水平的影响。方法BXSB狼疮小鼠44只，随机分为2组，治疗组予腹腔内注射ATO，对照组注射等量生理盐水，酶联免疫吸附试验（ELISA）测其外周血抗dsDNA抗体水平，并将生存时间作比较；另外，通过体外培养脾脏单个核细胞比较C57和BXSB小鼠脾脏单个核细胞分泌IL-4、IFN-γ水平的差异，然后观察ATO对BXSB小鼠脾脏单个核细胞IL-4、IFN-γ分泌水平的影响，同时观察ATO对细胞活性的影响。结果ATO可延长BXSB狼疮小鼠的生存时间，显著降低其外周血中抗dsDNA抗体的水平；1μmol／L浓度的ATO对小鼠脾脏单个核细胞的活性无明显影响：与C57小鼠相比，BXSB狼疮小鼠脾脏单个核细胞在体外经有丝分裂原刺激之后分泌IL-4、IFN-γ水平较高，ATO能显著抑制其分泌。结论ATO可延长BXSB狼疮鼠的生存时间，降低其外周血抗dsDNA抗体的水平．提示ATO对BXSB狼疮鼠有一定的治疗作用；ATO抑制该小鼠脾脏单个核细胞IL-4和IFN-γ的分泌可能是其发挥治疗作用的重要机制之一。     

淫羊藿苷经NF-κB信号通路干预大鼠免疫衰老的作用及机制

目的探讨中药延缓免疫衰老的作用和机制。方法清洁级健康雄性SD大鼠50只,分为4月龄(4 mon)、24月龄(24 mon)、24月龄加PDTC处理(24 mon+PDTC)、24月龄加Ica(icariin,Ica)干预(24 m+Ica)和24月龄加Ica干预再加PDTC处理(24 mon+Ica+PDTC)五组,每组10只。自21月龄满开始,24 mon+Ica组和24 mon+Ica+PDTC组大鼠予Ica灌胃,24 mon组和24 mon+PDTC组给予等量蒸馏水灌胃,均连续3个月。24 mon+PDTC组和24 mon+Ica+PDTC组大鼠在灌胃结束前1 w每2 d腹腔注射PDTC,按200 mg/kg体重分2次注射。处死大鼠分别提取大鼠脾CD4+T淋巴细胞,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,电泳迁移率(EMSA)检测细胞NF-κB的活性,Western印迹法检测细胞P65蛋白表达水平。结果 24 mon组大鼠脾CD4+T淋巴细胞凋亡率明显高于4 mon组和24 mon+PDTC组(P0.05),而24 mon+Ica组细胞凋亡率显著降低(P0.05);与24 mon+PDTC组比较,24 mon+Ica+PDTC组脾CD4+T淋巴细胞凋亡率明显降低(P0.05)。与4 mon组大鼠相比,24 mon组大鼠脾CD4+T淋巴细胞中p65蛋白表达显著下调(P0.01);与24 mon组比较,24 mon+Ica组p65蛋白表达明显上调(P0.01),24 mon+PDTC组则显著下调(P0.05)。与24 mon+PDTC组比较,24 mon+Ica+PDTC组p65蛋白表达明显增强(P0.05)。24 mon组大鼠脾CD4+T淋巴细胞NF-κB的活性明显低于4 mon组(P0.01);与24 mon组比较,24 mon+Ica组NF-κB的活性增强(P0.01),24 mon+PDTC组NF-κB活性则降低(P0.01)。相关分析表明,CD4+T淋巴细胞NF-κB活性与细胞凋亡率呈负相关(r=-0.75,P0.01)。结论 NF-κB通过抑制淋巴细胞凋亡参与免疫衰老的调控;Ica可能通过提高NF-κB的活性和诱导P65高表达来抑制淋巴细胞过度凋亡从而延缓免疫衰老。     

三氧化二砷对自发性狼疮BXSB小鼠免疫系统的影响

目的　探讨三氧化二砷对自发性狼疮BXSB小鼠免疫系统和脾脏淋巴细胞亚群的影响。方法　BXSB小鼠 12只 ,随机分为两组 ,对照组 (生理盐水 )和治疗组 (三氧化二砷0 4mg·kg-1·d-1) ,隔日腹腔注射共 5 5d ,观察血清IgG、抗dsDNA抗体、抗核抗体 (ANA)和脾脏淋巴细胞亚群的变化。结果　治疗组的血清IgG和抗dsDNA抗体均比对照组低 ,P值分别为 0 0 4 7和0 0 0 3。治疗组的ANA有 2例阳性 ,而对照组有 3例阳性。治疗组的CD4 %和CD3%比对照组明显低 ,其P值分别为 0 0 32和 0 0 0 9。结论　适当剂量的三氧化二砷可能会抑制BXSB小鼠的自身免疫系统功能 ,并降低其脾脏淋巴细胞CD4 %和CD3%亚群数     

系统性红斑狼疮B细胞中CD154诱导转录因子NF-κB核转移异常的研究

目的对配体CD154在系统性红斑狼疮(SLE)患者B淋巴细胞中刺激转录因子NF-κB核转移的异常进行研究.方法分离正常人对照、SLE患者外周血B淋巴细胞及扁桃体生发中心B淋巴细胞,并以后者为参照,观察与正常人对照相比,SLE外周血B淋巴细胞中CD154和抗CD154抗体对NF-κB核转移或基础活化的影响.结果①正常人外周血B细胞CD154刺激主要诱导NF-κB亚单位p50、p65及c-Rel进入细胞核,而SLE外周血B细胞与扁桃体B细胞相似,刺激前细胞核内功能性p50和c-Rel基础值即高于正常人对照,CD154刺激只进一步诱导p65进入细胞核;②抗CD154抗体可抑制SLE外周血CD154高表达的B细胞核中p65和c-Rel的基础活化值,亦与扁桃体B细胞相似.结论与正常人对照相比,SLE外周血B淋巴细胞中CD154诱导NF-κB核转移存在显著异常,类似生发中心表型.     

NF-κB在TNF-α致人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的研究核转录因子-κB（nuc lear factor-κB,NF-κB）在TNF-α诱导培养的人脐静脉内皮细胞凋亡过程中的作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,并用10 ng/m l的TNF-α进行诱导,不同时间段观察NF-κB活性、NF-κB抑制物IκBα表达以及细胞凋亡的情况,EMSA测定NF-κB活性,W estern-b lot检测IκBα的表达情况;Tunel法检测细胞凋亡;并用NF-κB的抑制剂PDTC预处理细胞后来观察TNF-α诱导细胞凋亡的情况。结果TNF-α以时间依赖性诱导人脐静脉内皮细胞凋亡,NF-κB的活性在处理后10 m in开始增强,2 h后恢复正常,IκBα的表达在10m in开始下降,2 h恢复正常;PDTC能抑制TNF-α诱导的凋亡。结论TNF-α在诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞时,IκBα降解,NF-κB激活,从而引起细胞的凋亡。     

B细胞刺激因子受体融合蛋白改善BXSB狼疮鼠病变的研究

目的 观察腹腔注射B细胞刺激因子受体融合蛋白(BAFF-R-IgG4mut)对狼疮鼠病变的影响.方法 100μl的磷酸盐缓冲液(PBS)、200 μg人IgG4和100 μg BAFF-R-lgG4mut融合蛋白分别经腹腔注入10周龄BXSB狼疮鼠,每周注射3次,共注射5周.分别检测狼疮鼠外周血BAFF水平、外周血和脾脏组织中B220~+CD5~-B细胞、CD3~+CD4~-CD8~+T细胞和CD3~+CD4~+CD8~-T细胞的表达,检测尿蛋白、IgG型抗双链DNA(dsDNA)抗体、肾脏病理损伤指标和狼疮鼠的存活率.以方差分析和X~2检验进行数据统计.结果 实验组9、10、12、15周龄鼠外周血BAFF水平分别是(2.0±1.6)ng/ml、(4.1±2.2)ng/ml、(3.7±1.9)ng/ml、(3.9±1.8)ng/ml,较对照组下降(P<0.01);外周血、脾脏组织中B220~+CD5~-细胞比率较埘照组下降(P<0.01),蛋白尿、IgG型抗dsDNA抗体产生减少,IgG在肾组织沉积及肾组织病理损伤较对照组明显减轻(P<0.01),存活率较对照组延长(P<0.01). 结论 BAFF-R-IgG4mut融合蛋白改善BXSB狼疮鼠病变.     

吡咯烷二硫氨基甲酸脂对缺氧再给氧冠状动脉内皮细胞凋亡的影响

目的:探讨缺氧再给氧(H/R)时冠状动脉内皮细胞(CAEC)氧自由基清除功能和细胞凋亡率的变化及抗氧化剂吡咯烷二硫氨基甲酸脂(PDTC)对它的影响。方法:将体外培养的猪CAEC分为3组。对照组:未经处理;H/R组:作H/R处理;PDTC组:在H/R前于培养液中加入PDTC。分别检测各组细胞谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量、核转录因子(NF-κB)表达及细胞凋亡率。结果:实验期对照组GSH、MDA含量、NF-κB的表达及细胞凋亡率无明显改变;H/R及PDTC组GSH含量明显低于对照组同期,而MDA含量、NF-κB表达及细胞凋亡率明显高于对照组同期;但PDTC组GSH含量明显高于H/R组同期,MDA含量、NF-κB的表达及细胞凋亡率明显低于H/R组同期。结论:H/R使细胞GSH含量明显减少,MDA含量、NF-κB的表达及细胞凋亡率明显增加;PDTC能有效降低NF-κB的表达,改善细胞氧自由基清除功能,降低细胞凋亡率,减轻H/R损伤。     

铜绿假单胞菌肺炎大鼠核因子-κB表达及二硫代氨基甲酸吡咯烷对其的影响

目的探讨NF-κB及其诱导TNFα在大鼠铜绿假单胞菌（PA）肺炎中的表达及二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）对其的影响。方法72只SD大鼠分为健康对照组、PA组、PDTC干预组。每组24只。PA组大鼠制作PA模型,PDTC干预组制作PA模型前腹腔注射PDTC200mg／kg体重。PA组、PDTC干预组接种铜绿假单胞菌悬液0．2ml（6×10^8CFU／m1）。观察大鼠肺组织形态学改变,免疫组化及Western blot检测肺组织NF-κB表达,RT-PCR检测肺组织TNFαmRNA表达。结果PA组大鼠肺组织明显充血、水肿,大量炎性细胞浸润;PDTC干预组大鼠肺组织充血、水肿等炎性表现较PA组明显减轻。PA组大鼠肺组织NF-κB表达阳性细胞明显增多,PDTC干预组NF—κB表达阳性细胞明显减少。Western blot显示,各时间点NF-κB表达不同,3h达高峰。RT—PCR显示,PA组TNFαmRNA高表达,以6h最为明显;PDTC干预组TNFαmRNA表达明显下调,与PA组相比,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论NF-κB及其诱导的TNFα在PA肺炎中发挥重要作用,PDTC可能通过抑制NF-κB的活性减轻PA引起的肺损伤。     

核因子-κB调控老年大鼠脾淋巴细胞凋亡及淫羊藿总黄酮对其影响

目的探讨核因子-κB（nuclearfactor—kappaB，NF-κB）对老年大鼠脾淋巴细胞凋亡的调控作用及淫羊藿总黄酮（epimedium total flaonoids，EF）对老年大鼠脾淋巴细胞凋亡的调控作用是否通过NF—κB实现。方法分别给予老年大鼠模型NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）和EF干预，提取大鼠脾淋巴细胞，用流式细胞仪检测细胞凋亡，Westem blot检测P65蛋白表达，电泳迁移率（electrophoretic mobility shift assay，EMSA）检测NF-κB的活性。结果老年大鼠脾淋巴细胞凋亡率比青年大鼠高（P〈0．01），PDTC使老年大鼠的凋亡率更高，而EF使老年大鼠的凋亡率降低，与老年组相比有显着性差异（P〈0．05），且EF能拮抗PDTC诱导老年大鼠胆淋巴细胞凋亡。与青年大鼠相比老年大鼠脾淋巴细胞P65蛋白表达显著下调（P〈0．01），而使用EF的老年大鼠组P65蛋白表达明显上调，表明EF诱导P65高表达。老年大鼠脾淋巴细胞NF-κB的活性弱于青年大鼠（P〈0．01），而PDTC处理组的NF—κB活性最低与老年大鼠组相比差异明显（P〈0．01），EF干预组的NF-κB的活性最强，与老年大鼠组相比差异非常显著（P〈0．01）。相关分析表明，淋巴细胞NF—κB活性与细胞凋亡率呈负相关（r=-0．57，P〈0．01）。结论NF-κB通过抑制淋巴细胞凋亡而参与老年大鼠免疫衰老调控过程；EF可能通过提高NF-κB的活性和诱导P65高表达来抑制淋巴细胞凋亡从而延缓免疫衰老进程。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸对脂多糖致急性肺损伤大鼠NF-κB P65蛋白表达的影响

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)对脂多糖(LPS)所致急性肺损伤(ALI)大鼠NF-κB P65蛋白表达的影响。方法雄性大鼠54只,随机分三组。对照组(N组)6只,腹腔注射生理盐水3 ml/kg。ALI组(L组)24只,腹腔注射LPS 3 mg/kg。PDTC干预组(P+L组)24只,先腹腔注射PDTC 120 mg/kg,0.5 h后再腹腔注射LPS 3 mg/kg。后两组分别于腹腔注射LPS后1、2、4、8 h作为观测时间点。观察肺组织胞质及胞核中NF-κB P65蛋白表达强度的变化。结果 ALI组各时相肺组织胞质中P65蛋白的表达强度较对照组显著降低(P<0.01),而胞核中P65蛋白表达强度较对照组显著升高(P<0.01),但PDTC干预组P65蛋白与ALT组比较,肺组织胞质中P65蛋白的表达强度较ALT组升高(P<0.05),而胞核中P65蛋白表达强度较ALT组降低(P<0.05)。结论 LPS引起肺组织NF-κB P65蛋白由胞质向胞核转移而活化,NF-κB参与炎症的调控,在ALI中发挥重要作用。而PDTC可抑制炎性介质的表达和释放,可有效地减轻LPS所致大鼠ALI。     

老年心力衰竭患者核因子-κB活化与细胞凋亡抑制因子的相关性研究

目的 探讨充血性心力衰竭（CHF）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中核因子-κB（NF-κB）表达与细胞凋亡抑制因子（CD95）分泌的相关性。方法 采用凝胶电泳迁移率变动分析法（EMSA）测定60例心力衰竭患者和20例健康对照组PBMCs NF-κB的表达，用双抗体夹心ABC—ELISA法测定CD95，多普勒超声心动图测定患者的心功能。结果 心力衰竭患者PBMCs NF-κB活性和血清CD95含量显著高于健康对照组（P〈0．01），且NF-κB和血清CD95含量呈正相关（P〈0．05）。结论 CHF患者NF-κB表达增高，CD95分泌增多。在CHF，可能通过NF-κB表达的上调促进CD95的分泌。     

糖尿病小鼠主动脉平滑肌ROS/NF-κB信号通路对MuRF1介导的BK-β1降解的调控作用

目的 探讨糖尿病小鼠主动脉平滑肌活性氧簇（ROS）/核因子-κB（NF-κB）信号通路对肌肉环指蛋白（Muscle RING finger，MuRF）1介导大电导钙激活钾通道β1亚基（BK-β1）降解的调控机制。 方法 腹腔注射链脲霉素制备1型糖尿病小鼠模型，将雄性C57/BL6J小鼠分为6组（每组15只）:对照组，对照+N-乙酰半胱氨酸（NAC，ROS清除剂）组，对照+吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC，NF-κB抑制剂）组，糖尿病组，糖尿病+NAC组，糖尿病+PDTC组。对照+NAC组和糖尿病+NAC组给予NAC 100 mg/（kg·d）腹腔注射治疗，对照+PDTC组和糖尿病+PDTC组给予PDTC 50 mg/（kg·d）腹腔注射治疗，对照组和糖尿病组给予同等体积的生理盐水腹腔注射。药物治疗12周后，Western blot检测胸主动脉BK-β1、MuRF1、RelA/p65的表达水平；动脉血管舒张反应性实验检测胸主动脉血管环对BK通道的激动剂NS-1619的反应性；酶消化法急性分离小鼠胸主动脉平滑肌细胞，全细胞膜片钳实验技术记录小鼠胸主动脉平滑肌细胞BK通道的电流。 结果 与对照组、对照+NAC组和对照+PDTC组相比，糖尿病组的BK-β1的表达显著降低（P<0.05），MuRF1和RelA/p65的表达显著增加（P<0.05），胸主动脉血管环对NS-1619的舒张反应性降低（P<0.05），当刺激电压>50 mV时，糖尿病组胸主动脉平滑肌细胞BK通道电流显著降低（P<0.05）；与糖尿病组相比，糖尿病+NAC组和糖尿病+PDTC组的BK-β1的表达显著增加（P<0.05），MuRF1和RelA/p65的表达显著降低（P<0.05），胸主动脉血管环对NS-1619的舒张反应性显著改善（P<0.05），当刺激电压>50 mV时，糖尿病+NAC组和糖尿病+PDTC组胸主动脉平滑肌细胞BK通道电流显著增加（P<0.05）。 结论 NAC和PDTC可抑制糖尿病小鼠胸主动脉平滑肌MuRF1介导的BK-β1降解，ROS/NF-κB信号通路可能是参与调控MuRF1介导的BK-β1降解。     

重症急性胰腺炎肺损伤大鼠NF-κB、ICAM-1的变化

Wistar大鼠72只随机分为重症急性胰腺炎(SAP)模型组、PDTC保护组、假手术组,每组24只.造模后3、6、12 h处死大鼠,测定各组肺组织内细胞核因子κB(NF-κB)结合活性、细胞间黏附分子1(ICAM-1)mRNA 表达量.结果SAP损伤后模型组肺组织内NF-κB活性较对照组明显增加,可于损伤后6 h达高峰,PDTC保护组NF-κB活性明显减弱;模型组于3 h ICAM-1mRNA表达量已开始升高,12 h表达量明显升高;PDTC保护组各时间点表达量均低于模型组,其中6、12 h与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05).认为NF-κB高水平激活直接或间接上调ICAM-1 mRNA表达量是引起急性坏死性胰腺炎合并肺损伤的重要原因.     

NF-κB在氧化型低密度脂蛋白引起人脐静脉内皮细胞表达CD40中的作用

目的研究氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对人脐静脉内皮细胞表达分化抗原CD40中核因子κB(NF-κB)的作用,进一步探讨卡托普利可能的抗动脉硬化作用。方法在ox-LDL作用人脐静脉内皮细胞前预先用卡托普利、NF-κB阻断剂(PDTC)、卡托普利+一氧化氮合酶阻断剂(L-NAME)、卡托普利+PDTC作用后,应用流式细胞技术检测细胞表面CD40的表达。结果预先加入卡托普利、PDTC人脐静脉内皮细胞的CD40的表达低于ox-LDL组(P<0.05),卡托普利组内皮细胞CD40的表达值低于卡托普利+PDTC组和卡托普利+NAME组,组间相比差异显著(P<0.001)。结论ox-LDL通过NF-κB途径激活了CD40的表达,卡托普利通过一氧化氮(NO)途径及NF-κB的转录使ox-LDL引起的内皮细胞CD40的表达下降,从而具有抗动脉硬化作用。     

二硫代氨基甲酸吡咯烷对苦参碱诱导肝癌细胞凋亡的影响

目的 观察二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)抑制核因子-κB(NF-κB)活化后对苦参碱诱导肝癌细胞HepG2凋亡的影响.方法 MTT法观察苦参碱(分0.8、1.0、1.5、2.0、2.5 g/L组)及PDTC联合苦参碱对HepG2细胞增殖的抑制作用.将HepG2细胞随机分为细胞对照组、PDTC组(20μmol/L)、苦参碱组(1.5 g/L)和PDTC+苦参碱联合组,流式细胞仪和末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法检测细胞凋亡;电泳迁移率改变实验检测细胞核内NF-κB的活化水平.结果 PDTC增强了苦参碱对细胞增殖的抑制作用(F=183.92,P＜0.01).苦参碱同时具有诱导HepG2细胞凋亡和NF-κ B活化的作用;PDTC能显著增加苦参碱诱导的HepG2细胞凋亡和抑制苦参碱诱导的HepG2的NF-κB活化,细胞凋亡率由6.11%±0.81%增加至12.95%±0.02%(χ2=9.67,P＜0.05),NF-κB活化的灰度值由38.82±0.17降至32.01±0.69(χ2=10.38,P＜0.05).结论 苦参碱诱导HepG2细胞凋亡的同时激活NF-κB;PDTC可通过抑制NF-κB活化,增强苦参碱诱导HepG2细胞凋亡的作用.     

二硫代氨基甲酸吡咯烷联合苦参碱对人肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的 探讨二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)抑制核因子-κ B(NF-κ B)活化后对苦参碱抑制人肝癌裸鼠移植瘤生长的影响.方法 建立人肝癌细胞HepG2裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为对照组(灭菌等渗盐水)、苦参碱组(35 mg/kg)、PDTC组(120 mg/kg)和PDTC(120 mg/kg)+苦参碱(35 mg/kg)联合组,腹腔注射用药.绘制肿瘤生长曲线,测定肿瘤生长抑制率;TdT介导的dUTP缺口末端标记法检测肿瘤细胞凋亡情况;电泳迁移率变动分析法检测细胞核内NF-κB的活化水平;免疫组织化学法检测肿瘤组织bcl-2和bax蛋白表达水平;RT-PCR法检测肿瘤细胞NF-κB、bcl-2和bax的mRNA表达水平.多组间比较用SNK-q检验,单独效应比较采用LSD法,相关分析采用Pearson法进行分析.结果 PDTC增强了苦参碱对肿瘤增殖的抑制作用(P＜0.05);苦参碱在诱导肿瘤细胞凋亡的同时激活NF-κB;PDTC能显著抑制苦参碱诱导的NF-κB活化,NF-κB活性的灰度值由93.64±2.95降至65.78±5.65(F=124.754,P＜0.01),同时促进苦参碱诱导肿瘤细胞凋亡,细胞凋亡指数由55.9%±2.8%升高至74.3%±4.8%(P＜0.05).NF-κB的mRNA表达水平与bcl-2的mRNA表达水平呈正相关(r=0.983,P＜0.01).结论苦参碱诱导皮下移植瘤细胞凋亡的同时激活NF-κB;PDTC可通过抑制NF-κB的活化而下调bcl-2的表达,改变bcl-2与bax的比值,增强苦参碱诱导肿瘤细胞凋亡的作用.

Abstract：

Objective To investigate the relationship between activation of nuclear factor-κ-gene binding (NF-κ B) and apoptosis induced by matrine(MT) in transplanted tumor of human hepatocellular carcinoma in nude mouse. Methods Tumors were established by injection of hepatocellular carcinoma cell line HepG2 into the back of nude mice. The mice were divided randomly into four groups: Control group, MT group (35 mg/kg), PDTC group (120 mg/kg) and Combination group: PDTC+MT group (120 mg/kg+35 mg/kg), the reagents were injected peritoneally. The tumor growth curve of nude mice bearing transplanted tumor were observed and the inhibition ratios were evaluated. Apoptosis of carcinoma cells was analyzed by TUNEL. The DNA-bingding activity of NF-κ B was determined by electrophoretic mobility shift assay (EMSA). Expression of bcl-2 and bax in carcinoma tissue were detected by immunohistochemical method.NF-κ B mRNA, bcl-2 mRNA and bax mRNA in carcinoma tissue were detected by RT-PCR. Results Pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC) could enhance the inhibition of matrine on carcinoma proliferation (P＜0.05). The apoptosis and activation of NF-κB in carcinoma cells could be induced by matrine. PDTC significantly suppressed NF-κ B activation induced by matrine in carcinoma cells from 93.64±2.95 to 65.78±5.65 (F=124.754, P＜0.01). Meanwhile, PDTC increased the apoptosis induced by matrine from 55.9%±2.8%to 74.3%±4.8% (P＜0.05).A positive correlation observed between the expressions of NF-κ B and of bcl2 (Pearson correlation coefficient=0.983,P＜0.01). Conclusions Matrine could induce apoptosis and activation of NF-κ B in transplanted tumor. PDTC could increase apoptosis in hepatocellular carcinoma cells might be due to the suppression of NF-κ B activation and the enhancement of bcl-2 expression.     

TNF-α诱导脑胶质瘤细胞凋亡过程中NF-κB、IκB活性的研究

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)及其抑制因子(IκB)在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人脑胶质瘤细胞株U 251细胞凋亡过程中生物活性的变化。方法应用流式细胞仪检测TNF-α对U-251细胞生长的抑制和诱导凋亡作用。用免疫组化方法检测肿瘤细胞p65的表达,用W estern b lot检测IκB蛋白的变化。结果TNF-α可诱导U 251细胞凋亡,激活细胞中p65并诱导IκB降解;抗氧化剂二硫碳吡咯烷醇(PDTC)可抑制TNF-α诱导的IκB的降解及NF-κB的激活,增强TNF-α诱导U 251细胞的凋亡。结论TNF-α在诱导U 251细胞凋亡的过程中可激活NF-κB。抑制NF-κB活性,可增强TNF-α诱导细胞凋亡的作用。     

PDTC对大鼠急性肺损伤TNF-α、IL-1β及核因子-κB蛋白表达的影响

目的 探讨核因子-κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)在脂多糖(LPS)诱导大鼠急性肺损伤(ALI)中细胞因子TNF-α、IL-1β含量及NF-κB P65蛋白表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠56只,随机分三组.对照组(N组)8只,腹腔注射生理盐水3 ml/kg.ALI组(L组)24只,腹腔注射LPS 3 mg/kg.PDTC干预组(P+L组)24只,先腹腔注射PDTC 120 mg/kg,0.5h后再腹腔注射LPS 3 mg/kg.后两组分别于腹腔注射LPS后4、12、24 h作为观测时间点,观察BALF中TNF-α、IL-1β的含量及肺组织胞浆及胞核中NF-κB P65蛋白表达强度的变化.结果 L组各时相BALF中TNF-α、IL-1β较N组显著升高(P＜0.01),且随着时间延长增加明显,但P+L组TNF-α、IL-1β与L组比较显著减少(P＜0.05).L组各时相肺组织胞浆中P65蛋白的表达强度较N组显著降低(P＜0.01),而胞核中P65蛋白表达强度较N组显著升高(P＜0.01),但P+L组肺组织胞浆中P65蛋白的表达强度较L组升高(P＜0.05),而胞核中P65蛋白表达强度较L组降低(P＜0.05).结论 LPS引起BALF中TNF-α、IL-1β大量释放,肺组织NF-κB P65蛋白由胞浆向胞核转移而活化,NF-κB参与炎症的调控,在ALI中发挥重要作用.而PDTC可抑制炎性细胞因子的表达和释放,抑制NF-κB活化,有效减轻LPS所致大鼠ALI.     

VX-680对小鼠实验性结肠炎NF-κB通路的调节作用

目的 探究极光激酶A(Aurora-A)抑制剂(VX-680)对小鼠实验性结肠炎的作用以及对NF-κB通路的调节作用。方法 选择18只体质量相近的C57BL/6小鼠，随机分为3组，每组各6只：对照组(正常饮水+10%DMSO溶剂腹腔注射7 d)、DSS模型组(3%DSS饮水造模+10%DMSO溶剂腹腔注射7 d)、治疗组[3%DSS饮水造模+VX-680(40 mg/kg)腹腔注射7 d]。记录小鼠肠炎疾病活动指数(disease activity index, DAI)和结肠组织病理评分，ELISA检测小鼠结肠组织炎性因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ的变化，qRT-PCR检测Mucin-1、Mucin-2、NF-κB p65的mRNA表达，检测Aurora-A和NF-κB通路中NF-κB p65、IRF-5的蛋白表达。结果 与对照组相比，DSS模型组DAI评分和组织病理学评分更高(P<0.01),促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ的表达上升(P<0.01),Mucin-1、Mucin-2的mRNA水平下降(P<0.01)...