反相高效液相色谱法测定大鼠脑组织吗啡-3-葡萄糖醛酸苷含量

目的:建立一种反相高效液相色谱(RP-HPLC)检测法,用于测定大鼠脑组织中吗啡-3-葡萄糖醛酸苷(M3G)的浓度。方法:微粒体酶体外反应体系,经孵育和处理后,采用HPLC分析定量,并进行方法学考察。RP-HPLC测定采用DiamonsilTMC18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为10mmol.L-1磷酸二氢钾缓冲液(含1mmol.L-1十二烷基磺酸钠,磷酸调pH=2.15):乙腈(79.5∶20.5),流速:1.5ml.min-1,紫外检测波长:210nm,进样量50μl。结果:本实验条件下各物质分离良好,M3G线性范围50-600μg.L-1。M3G最低检测限为50μg.L-1。M3G的方法回收率在90%-105%范围内,提取回收率在75%以上。结论:本法可用于对大鼠脑微粒体体外孵育生成吗啡-3-葡萄糖醛酸苷含量的测定。     

高效液相色谱法测定海洛因依赖者尿液中的吗啡

目的:建立高效液相色谱法测定海洛因依赖者尿液中的吗啡浓度。方法:尿样经酸水解后用乙酸乙酯提取,然后采用HPLC分析。仪器条件:Diamonsil(tm)钻石C18色谱柱,流动相0·012mol·L-1磷酸二氢钾-乙腈(90:10,含0·05mmol·L-1三乙胺),流速1·0ml·min-1,检测波长205nm。结果:吗啡和内标与内源性杂质分离良好;在0·050-2·000μg·ml-1浓度范围线性关系良好(r=0·9999);检测限为0·020μg·ml-1;高、中、低3种浓度相对回收率为95·3%-104·6%,日内变异(RSD)为4·0%-8·1%,日间变异为1·9%-10·7%。结论:本法简便、准确,可用于测定海洛因依赖者尿液中的吗啡浓度。     

反相高效液相色谱法同时测定人血浆中对乙酰氨基酚/曲马朵及其代谢物的含量

目的:建立一种用高效液相色谱法(HPLC)同时测定人血浆中对乙酰氨基酚/曲马朵及其代谢物氧去甲基曲马朵(M1)浓度的方法。方法:以间乙酰氨基酚为内标,血浆样品经碱化后,用乙酸乙酯提取。HPLC-UV测定采用DiamonsilTM C18色谱柱(250mm×4.6mm),流动相为0.01mol·L-1磷酸二氢钾缓冲液(含三乙胺0.005mol·L-1,磷酸调pH3.0)-乙腈(79:21),流速:1.0ml·min-1,紫外检测波长:218nm。结果:本实验条件下各物质分离良好,对乙酰氨基酚在0.2-21.6μg·ml-1范围呈线性,曲马朵及其代谢物M1分别在10-720和5-160ng·ml-1范围呈线性。对乙酰氨基酚的最低检测限为0.2μg·ml-1,曲马朵和M1的最低检测限分别为10和5ng·ml-1。三种物质的方法回收率均在80%-120%范围内,提取回收率均在75%以上。结论:本法简单、快速,可用于人血浆中对乙酰氨基酚/曲马朵及M1的同时检测。     

UPLC法测定大鼠血浆中大豆苷元浓度及药动学研究

目的建立测定大鼠血浆中大豆苷元浓度的UPLC法,探讨大豆苷元在大鼠体内的药代动力学过程。方法 SD大鼠6只,ig给予30mg·kg-1大豆苷元混悬液,血浆样品经β-葡萄糖醛酸苷酶水解后,采用UPLC法测定大豆苷元浓度,并用DAS软件拟合并计算其药代动力学参数。结果大豆苷元的血药浓度在20μg·L-1～800μg·L-1范围内线性良好,提取回收率均大于85%,日间和日内RSD小于10%,符合生物样品分析要求。大鼠灌胃给药后,血浆中大豆苷元的药时曲线呈二室开放模型,主要药动学参数Tmax,Cmax,T12β,AUC(0-t),AUC(0-∞),CL,Vd分别为33.3min,355.4μg·L-1,915.7min,213.2mg·min·L-1,218.2mg·min·L-1,0.1467L·min-1·kg-1,74.4L·kg-1。结论该方法操作简便、快速、专属性强,可用于大豆苷元体内大批量样品定量分析及药代动力学研究。     

HPLC-电喷雾串联质谱法快速测定人血浆中喹硫平的浓度

目的:建立测定人血浆中喹硫平浓度的高效液相色谱-电喷雾串联质谱法。方法:血浆样品经醋酸乙酯-二氯甲烷(4∶1)提取后测定,色谱柱为C18,流动相为甲醇-5mmol·L-1甲酸铵(90∶10),流速为1mL.min-1,柱温为25℃。其中,样品经电喷雾离子源正离子化后,通过三重四极杆串联质谱仪,采用选择反应监测(SRM)对喹硫平(m/z384.3→253.1)和内标拉莫三嗪(m/z256→145)进行测定。并用此法测定34例精神分裂症患者稳态血药浓度。结果:血浆喹硫平检测浓度在2.5~500μg·L-1范围内线性关系良好;分析方法的最低定量限为2.5μg·L-1。喹硫平高、中、低3种浓度(250、100、5μg·L-1)的平均回收率分别为101.03%、104.21%、97.74%,日内(n=5)、日间(n=3)RSD均小于15%。结论:本方法简便、快速、准确、灵敏、重现性好,可用于临床常规喹硫平血药浓度监测和药动学研究。     

福康片对大鼠吗啡药代动力学的影响

目的··:研究福康片戒毒药物对大鼠吗啡药代动力学的影响。方法··:用放射免疫法 (RIA)测定了大鼠单独皮下注射 (sc)盐酸吗啡 (A组 )和合并灌胃 (ig)福康片 (B组 )后吗啡的血药浓度 ,计算两组吗啡药代动力学参数。结果··:两组吗啡药代动力学模型均符合二室模型一级吸收。B组吗啡血药浓度明显低于A组。合用福康片后 ,大鼠吗啡的t1/2ka由0.078h增加到0.164h ;Cmax由3971.143μg·L -1减少到2248.474μg·L -1 ;AUC由每小时11337.584μg·L-1 减少到8005.219μg·L-1;t1/2β 由4.091h减少到3.615h ;CL由每小时0.529L·kg-1 增加到0.750L·kg-1。结论··:福康片可降低吗啡的吸收速率及血液中的吗啡浓度     

RP-HPLC测定犬血浆中3种丹参酮的浓度

目的 建立RP-HPLC法同时测定家犬血浆中丹参酮ⅡA、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ的含量。方法 采用DiamonsilTM C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-水(89∶11),流速0.7 ml·min-1,检测波长为254 nm,温度为室温,血浆样品加内标吉非罗齐,甲醇沉淀蛋白,上清液进样。结果 家犬血浆中内源性成分对3种丹参酮的测定无干扰;丹参酮ⅡA在0.08-6.3μg·ml-1浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.9994),平均方法回收率为99.5％;隐丹参酮在0.08-8.0μg·ml-1浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.9996),平均方法回收率为100.6％;丹参酮Ⅰ在0.10-6.0μg·ml-1浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.9996),平均方法回收率为102.5％。3种丹参酮测定的日内RSD在0.75％～4.43％之间,日间RSD在2.8％2～7.65％之间。结论 该法样品处理简便,灵敏度较高,结果准确。     

复方甘草口服溶液中吗啡含量测定方法的验证

目的:验证复方甘草口服溶液中吗啡的含量测定方法。方法:采用固相萃取结合高效液相色谱法检测。色谱柱:Kromasil C8(250mm×4.6mm,5μm);流动相:0.05mol·L-1磷酸二氢钾溶液-0.0025mol·L-1庚烷磺酸钠溶液-乙腈(梯度洗脱);检测波长:220nm;流速:1mL·min-1。结果:吗啡检测浓度在2.02～20.2μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.9997);平均回收率为99.0%,RSD=0.40%(n=9)。结论:本方法准确、灵敏度高、稳定性好,结果准确、可靠。     

HPLC测定房水及血液中环孢霉素A浓度的实验研究

目的建立一种新的反相高效液相色谱法(RP-HPLC),用于测定房水及全血中的环孢霉素A(CsA)浓度。方法RP-HPLC测定房水及全血中的CsA浓度:ODS-C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-水(70∶30);柱温60℃;检测波长210nm。结果采用乙腈-水-正己烷-甲醇的处理方法,CsA的峰面积与其浓度具有很好的线性关系:Y=339.2 X+4505.2,r=0.9991,CsA线性范围为62.6～626μg·L-1,最低检测浓度50μg·L-1,回收率98.7～103.6%,日内和日间变异系数小于4.0%,兔房水CsA浓度为144～466μg·L-1;大鼠全血CsA浓度在210～600μg·L-1。结论该样品与处理方法及HPLC检测方法简单、准确、经济,干扰少,可用于CsA的房水及血药浓度检测。     

HPLC法测定复方甘草片中吗啡的含量

目的:建立用HPLC法测定复方甘草片中吗啡含量的方法。方法:采用硅胶柱,以水-乙腈-甲酸(85∶15∶0.05)为流动相;流速为0.7ml·min-1;检测波长220nm。结果:吗啡在4.148μg·ml-1-37.332μg·ml-1浓度范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.9999),平均回收率为99.6%,RSD=1.75%(n=5)。结论:方法简便,重现性好,可作为本品质量控制方法。     

氯胺酮诱导的大鼠条件性位置偏爱

目的:探讨氯胺酮在大鼠模型上形成条件性位置偏爱(CPP)的特点,分析氯胺酮精神依赖性潜力。方法:(1)60只SD♂大鼠随机分为对照组、氯胺酮及吗啡阳性对照组。(2)氯胺酮组每隔24h腹腔注射氯胺酮10m·lkg-1一次,连续6d,建立大鼠氯胺酮精神依赖性模型,吗啡组给予等剂量的吗啡,对照组则给予等剂量的生理盐水;(3)氯胺酮组及吗啡组于CPP形成后给予生理盐水进行消退实验。结果:(1)氯胺酮组及吗啡组大鼠出现了明显的CPP;(2)与吗啡组相比,氯胺酮组的CPP效应更显著,但消退较快。结论:氯胺酮可诱导大鼠产生CPP,但随着时间的推移CPP消退速度较吗啡快。     

盐酸丁丙诺啡对海洛因依赖者脱毒后预防复吸的研究—248例盐酸丁丙诺啡维持治疗临床研究

目的:研究盐酸丁丙诺啡对海洛因依赖者脱毒后预防复吸的效能。方法:248例海洛因依赖者完成脱毒后给予盐酸丁丙诺啡舌下含片维持治疗,药物剂量从第1月4mg·d-1,2mg·d-1到第2月后一直以1.5mg·d-1维持;维持者每次来所取药时做尿液吗啡检测,填写相关量表。结果:丁丙诺啡舌下含片维持治疗第1,3,6,12,18,24月时的保持率分别为61·69%,29·84%,12·10%,2·65%,1·61%和0·81%。尿液吗啡检测阴性率在前2个月占应检人数的75%以上;渴求强度“非常想”和“不想”因子在第1,6,12月时差异有显著性(P<0·01);稽延性戒断症状总平均分第1月和第3,6,12月比较差异有显著性(P<0·01);不良反应以思睡、便秘为主,后者随维持治疗时间延长而加重。结论:盐酸丁丙诺啡舌下含片维持治疗对海洛因依赖者脱毒后预防复吸有肯定的作用。     

芋螺毒素类似物静脉给药抑制小鼠吗啡依赖作用研究

目的:探究尾静脉给予芋螺毒素类似物Glu-Con-G、Glu-Con-G[1-11]和Glu-Con-G[1-13]对小鼠吗啡依赖的影响,验证静脉给药的可行性。方法:建立条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)模型,观察静脉给予3种芋螺毒素类似物对小鼠吗啡依赖的作用。结果:(1)50、100、200μg.kg-1 Glu-Con-G、Glu-Con-G[1-11]和Glu-Con-G[1-13]对吗啡成瘾小鼠CPP表达有抑制作用;(2)100、200μg.kg-1Glu-Con-G及50、100、200μg.kg-1 Glu-Con-G[1-11]、Glu-Con-G[1-13]对吗啡成瘾小鼠CPP复燃有拮抗作用;(3)200μg.kg-1Glu-Con-G、Glu-Con-G[1-11]和Glu-Con-G[1-13]均不影响小鼠的运动活性及探索行为。结论:静脉给予3种芋螺毒素类似物对吗啡诱导的CPP表达、复燃均具有抑制作用;Glu-Con-G[1-11]抗吗啡依赖的作用优于Glu-Con-G,且分子量小于Glu-Con-G[1-13],有望成为一种潜在的抗成瘾药物。     

The Disposition of Morphine and Its Metabolites in the In-situ Rat Isolated Perfused Liver

A specific HPLC method with UV detection was used to investigate the disposition of morphine and its metabolites in the in-situ rat isolated perfused liver preparation. Livers of male Sprague-Dawley rats (n = 4) were perfused under single pass conditions with protein-and erythrocyte-free perfusate, containing 2·66 μm morphine, for up to 90 min. The concentration of morphine, normorphine and morphine-3-glucuronide (M3G) in outflow perfusate, and the biliary excretion of M3G and normorphine glucuronide, all reached steady-state levels within 15–20 min after commencing perfusion. At steady-state, the mean (± s.d.) extraction ratio of morphine was 0·87 ± 0·06 and clearance (26·0 ± 1·7 mL min^?1) approached perfusate flow rate (30 mL min^?1). Although M3G was the main metabolite, accounting for 72·8 ± 12·7% of eliminated morphine, a significant proportion (21·6 ± 13·5%) was N-demethylated to normorphine and was recovered as unchanged normorphine in outflow perfusate and normorphine glucuronide in bile. The biliary extraction ratio of hepatically-formed M3G was 0·61 ± 0·31. Results from an additional six experiments, in which livers were perfused with 1·33 and 2·66 μm of morphine for 30 min each in a balanced cross-over manner, indicated that the disposition of morphine and its metabolites was approximately linear within this concentration range.     

吗啡依赖大鼠伏隔核区单胺转运体表达的时点变化

目的:研究慢性吗啡处理的大鼠停药后不同时间伏隔核(NAc)脑区多巴胺转运体(DAT)和5-羟色胺转运体(5-HTT)水平的变化。方法:将50只♂SD大鼠随机等分为实验组即吗啡成瘾组(n=25)和生理盐水对照组(n=25)。实验组每天两次腹腔注射(ip)吗啡,起始剂量每次5mg·kg-1,逐日递增,直至d10时50mg·kg-1;其中根据动物存活的时间分为吗啡戒断后0d组(M0),1d组(M1),6d组(M6),14d组(M14),21d组(M21),每组5只;对照组,用相同方式注射同体积的生理盐水。实验组和对照组在相同时间点处死,取NAc脑区脑组织。用免疫组化法检测NAc脑区脑组织DAT和5-HTT的表达,用图像分析系统测量免疫阳性产物的灰度均值并进行同期平行比较。结果:(1)5-HTT灰度均值实验组组内不同时点比较差异均有显著性(P<0.001);实验组和对照组组间相同时点比较,除M21以外余各时点比较差异亦有显著性(P<0.001),实验组M0、M1渐升高,M6、M14、M21降低。(2)DAT灰度均值实验组组内不同时点对比均差异有显著性(P<0.001),实验组和对照组组间相同时点对比差异亦有显著性(P<0.001),实验组在NAc脑区灰度均值与对照组相比均升高,灰度均值M0最高。结论:慢性吗啡处理后,NAc脑区DAT和5-HTT的表达在戒断初期先降低,后期有所升高,表明NAc脑区的DAT、5-HTT参与了阿片类物质依赖的形成。     

6-[4-(4′-吡啶)氨基苯]-4,5-二氢-3(2H)哒嗪酮对大鼠胸主动脉环收缩功能的影响

目的研究新型钙增敏强心剂6-[4-(4′-吡啶)氨基苯]-4,5-二氢-3(2H)哒嗪酮(MCI-154)的扩血管作用机制。方法采用生物张力换能器及生理记录仪测定大鼠离体胸主动脉环和蜕膜胸主动脉环的收缩张力。结果MCI-154可浓度依赖性抑制1nmol.L-1~10μmol.L-1去甲肾上腺素(pD2′为4.21±0.23)和80mmol.L-1KCl(IC50为7μmol.L-1)引起的血管环收缩,提示其可通过抑制血管平滑肌细胞膜上受体操纵性和电压依赖性钙通道而减少胞外钙内流。在无Ca2+K-H液中,MCI-154预处理可浓度依赖性降低3μmol.L-1苯肾上腺素(IC50为5μmol.L-1)及20mmol.L-1咖啡因(IC50为16μmol.L-1)引起的血管环收缩张力,提示其可抑制血管平滑肌细胞胞内钙释放。在1μmol.L-1Ca2+溶液中,MCI-154可显著降低蜕膜血管环收缩张力(IC50为10μmol.L-1),提示其可降低血管平滑肌对Ca2+的敏感性。结论MCI-154可通过抑制血管平滑肌胞外钙内流、胞内钙释放和降低其对Ca2+敏感性来降低血管平滑肌收缩张力,体外具有扩血管效应。     

谷胱甘肽治疗抗结核药所致肝损害

目的：探讨谷胱甘肽对抗结核药所致轻、中度肝损害的疗效。方法：抗结核药所致肝损害病人９７例,分成２组,治疗组６２例,不停抗结核药,加用谷胱甘肽 ０． ６ｇ,静脉滴注,ｑｄ × ３ｗｋ。对照组 ３５例,停用抗结核药,不用谷胱甘肽。２组均采用基础治疗（肌苷、维生素Ｂ_(1)）。结果：２组总有效率分别为８９％和 ６６％,治疗前后血清天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶、总胆红素的差值治疗组分别为：（－ ６９±４３）ＩＵ·Ｌ~(-1),（－１１６±１７） ＩＵ·Ｌ~(-1),（-７４±１４）μｍｏｌ· Ｌ~(-1);对照组为：（－３４± ４１） ＩＵ· Ｌ~(-1),（－ ４０±１４） ＩＵ· Ｌ~(-1),（－ ４１±１１）μｍｏｌ·Ｌ~(-1)。结论：谷胱甘肽对抗结核药所致的轻、中度肝损害有明显的治疗作用。