酒精性肝纤维化中肝星状细胞活化的机制研究进展

肝星状细胞（HSC）活化是各种病因所致肝纤维化过程中的关键环节。在酒精性肝病的发展过程中,乙醇和代谢产物乙醛可改变机体氧化还原状态,活化枯否细胞,释放大量细胞因子,诱导HSC活化、增殖和胶原合成,形成肝纤维化。本文将对酒精性肝纤维化中HSC活化的机制和相关靶点加以综述,为开发抗肝纤维化药物和临床治疗提供新的思路。     

肝星状细胞激活、增殖、游走、粘着机制及其临床意义

肝星状细胞 (hepaticstellatecell,HSC)是一种具有多潜能的幼稚间质细胞 ,HSC经激活刺激 ,表型转换后形成MFB(肌成纤维细胞 )分泌大量的细胞外基质 (ECM) ,并引起MMPs(金属蛋白酶 )和TIMPs(金属蛋白酶抑制酶 )平衡失调及抑制HSC凋亡的发生[1 ] 。因此 ,HSC的激活、增殖是肝纤维     

激活素A对肝星状细胞胶原合成的影响

目的：探讨激活素A(ACTA)对肝星状细胞(HSC)细胞外基质(ECM)合成的影响。方法：采用原位酶灌注法和密度梯度离心法分离HSC。初次传代后，HSC随机分为八组，分别加入不同浓度的ACT A和TGF-β1。加药后24h，采用放射免疫法检测培养液Ⅲ型前胶原和Ⅳ型胶原含量。结果：ACTA能刺激体外培养HSC分泌ECM，在一定浓度范围内(1～100μg/L)呈剂量依赖关系；100μg/L ACT A刺激HSC分泌ECM的能力与10μg/L TGF-β1。相当，而且ACTA能协同TGF-β1发挥该生物学效应。结论：ACTA参与肝纤维化形成。     

白介素-10与肝星状细胞的激活

肝星状细胞的持续激活是肝纤维化发生发展的中心环节,在肝损伤时,激活的肝星状细胞可分泌大量细胞外基质,促进胶原纤维沉积,导致肝纤维化的形成.白介素-10是一种多功能的炎症抑制因子,具有抑制炎症反应,减轻肝纤维化的作用,因而研究白介素-10与肝星状细胞的关系越来越受到人们的重视.本文就白介素-10对肝星状细胞激活的影响作一综述.     

高糖、胰岛素对大鼠肝星状细胞增殖影响

目的 通过观察不同浓度葡萄糖以及定量胰岛素与不同浓度葡萄糖并存时大鼠肝星状细胞(HSC)增殖的影响,以进一步探讨糖尿病性肝纤维化的发生机制,为临床糖尿病相关性肝纤维化的发生和防治提供理论和实验依据.方法 将体外培养的大鼠肝星状细胞株以不同浓度葡萄糖及不同浓度葡萄糖加定量胰岛素干预72h,以甘露醇作为高渗透压对照.采用CCK-8法测定各组细胞的吸光度值以明确HSC的增殖数目,3H-胸腺嘧啶掺入法(3H-TDR掺入法)测肝星状细胞DNA的DNA掺入量(Cpm)值以明确HSC的增殖状态.结果 ①HSC吸光度值较正常糖组及高渗透压组显著增加,且呈葡萄糖浓度依赖性增加.②HSC DNA的Cpm值与正常糖组相比显著上升,呈葡萄糖浓度依赖性增加,并且相同糖浓度的加胰岛素糖组显著高于未加胰岛素糖组值(P<0.05).甘露醇组较正常糖组变化不明显,胰岛素甘露醇组Cpm值高于胰岛素正常糖组值.结论 高糖、高胰岛素环境下,HSC被激活、增殖、DNA合成增加,可能是糖尿病肝纤维化的机制之一.     

肝星状细胞凋亡机制及调控研究进展

抑制活化肝星状细胞(HSCs)增殖和诱导其凋亡成为阻止肝纤维化(HF)进程的途径之一。在细胞凋亡的发生过程中,有多种不同因素和途径参与活化HSCs的凋亡,活化HSCs的凋亡受到凋亡和抗凋亡基因、细胞因子等调控。作者就近年来有关HSCs凋亡及其调控的研究进展作一综述。     

胰岛素和高糖对大鼠肝星状细胞增殖及NF-κB p65蛋白表达的影响

目的 探讨胰岛素和高糖对肝纤维化的影响.方法 体外培养大鼠肝星状细胞(hepatic stellatecell,HSC),分为正常对照组、高渗透压对照组、高糖组、(低、中、高)胰岛素组、高糖+(低、中、高)胰岛素组.细胞培养24 h和48 h,用细胞计数试剂盒-8(CCK-8法)检测HSC的增殖情况,并计算细胞增殖率;细胞培养48 h,用免疫印迹法检测HSC NF-κB p65蛋白表达.结果 培养24 h,各组HSC增殖率与正常对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05);培养48 h,高、中胰岛素组HSC增殖率明显高于正常对照组和高渗透压对照组(P＜0.05);高糖组、(低、中、高)胰岛素组、高糖+(低、中、高)胰岛素组HSC p65蛋白表达量均明显高于正常对照组及高渗透压对照组(P＜0.05).结论 胰岛素能诱导体外培养的大鼠HSC增殖,其机制可能与p65蛋白表达增加有关.     

肝星状细胞激活的分子机制与抗肝纤维化治疗

肝星状细胞(HSC)激活是肝纤维化发生的中心环节,其激活过程可分为始动阶段(旁分泌刺激和转录调控因素启动级联瀑布式的细胞反应)和持续阶段(旁分泌或自分泌刺激和细胞外基质重建共同维持HSC活化的表型反应)。肝脏中多种细胞和细胞因子参与调节了HSC的激活过程。活化型HSC的表型变化主要包括细胞增殖、收缩和纤维形成等。抗肝纤维化治疗策略主要包括调控HSC活化增殖或促其凋亡、抑制胶原合成或促其降解、细胞因子治疗和间充质干细胞治疗等。     

非对称二甲基精氨酸对肝星状细胞的激活作用及其机制

目的:研究内源性一氧化氮合酶抑制物非对称二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine,ADMA)对肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)活化的影响及其机制.方法:原代分离和培养SD大鼠HSC细胞,加入不同浓度的ADMA(1,3或10 μmol/L)孵育12至48 h.细胞组织化学检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达;酶联免疫吸附试验测定Ⅰ型胶原的合成;逆转录PCR检测HSC转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)mRNA水平;荧光发光法检测细胞内氧自由基(reactive oxidant species,ROS)生成;凝胶电泳迁移率试验检测核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)活性.结果:ADMA能呈浓度和时间依赖性上调HSC TGF-β1 mRNA水平,增加α-SMA阳性细胞数和促进Ⅰ型胶原的合成.同时,ADMA能显著增加细胞内ROS生成和诱导NF-κB活化,而预处理抗氧化剂四氧化吡咯二硫代氨基甲酸酯能抑制ADMA(10 μmol/L)诱导的NF-κB活化和TGF-β1 mRNA水平上调.结论:ADMA能诱导HSC的激活(包括收缩和分泌功能),其作用与激活细胞内ROS-NF-κB途径,上调TGF-β1表达有关.因此,ADMA可能是一种新的HSC功能调节因子,在肝纤维化的发生发展中起重要作用.     

绿原酸对肝星状细胞增殖、细胞外基质生成及降解的影响

目的 研究绿原酸（CGA）对肝星状细胞增殖、胶原蛋白（Collagen） Ⅰ、Collagen Ⅲ、基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）及基质金属蛋白酶-2（MMP-2）表达及分泌的影响。方法 体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,随机分为5组:阴性对照组、血小板衍生生长因子（PDGF）组、PDGF+ CGA （12.5 μg/mL）组、PDGF+ CGA （25 μg/mL）组和PDGF+CGA （50 μg/mL）组。干预24 h后,MTT法检测HSC-T6的增殖情况;RT-PCR检测Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、TIMP-1及MMP-2 mRNA表达;ELISA检测细胞上清液中Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、TIMP-1及MMP-2的蛋白含量。结果 CGA可明显抑制PDGF诱导的肝星状细胞增殖（P<0.05）,且随着剂量的增加,抑制作用逐渐增强（P<0.05）;CGA可明显抑制PDGF诱导的Collagen Ⅰ、CollagenⅢ、TIMP-1的表达和分泌（P<0.05）,但对MMP-2的表达和分泌无明显影响。结论 CGA可通过抑制肝星状细胞增殖及细胞外基质合成、促进细胞外基质降解来发挥抗肝纤维化作用。     

益气活血方药抑制大鼠HSC体外增殖作用的实验研究

目的　研究益气活血方药抑制大鼠肝星状细胞 (HSC)体外增殖的作用机理和有效部位群。方法　用脂多糖 (lipopolysccharide ,LPS)刺激体外培养的HSC增殖 ,同时加入不同时相的含药血清Scl、Sc2或正常鼠血清 (Sn)或该方药不同提取物 ,分别培养 2 4、4 8、72h ,MTT法测定细胞增殖率 ,流式细胞仪测定HSC凋亡率。结果　在培养各时相Sc1和Sc2对LPS刺激的HSC增殖都有明显的抑制作用 (P <0 0 5或P <0 0 1)。流式细胞仪测定HSC凋亡的结果显示Sc2明显促进了HSC的凋亡 (P <0 0 1)。该方药不同提取物以不同的模式抑制体外培养的大鼠HSC增殖。结论　益气活血方药含药血清具有抑制体外培养大鼠HSC增殖作用 ,并促进其凋亡 ;益气活血方药有不同的有效部位群 ,并以不同的模式发挥作用     

脂肪间质干细胞对肝星状细胞活化、增殖、凋亡相关作用的研究

目的探讨脂肪间质干细胞(ADSCs)对活化态肝星状细胞(HSCs)增殖、活化凋亡的影响及其探讨产生作用的原因。方法从肝脏及腹腔脂肪分别分离纯化培养HSCs及ADSCs,通过半透膜(transwell insert)在6孔塑料培养板上建立HSCs与ADSCs的双层培养体系,大鼠正常肝细胞系(BRLs)及HSCs培养分别作为对照。通过CCK-8比色法检测ADSCs对HSCs增殖的影响;Western blotting检测HSCsα-肌动蛋白(α-SMA)的表达,了解HSCs的活化状态;流式细胞仪检测ADSCs对HSCs凋亡的影响。最后通过检测培养液中细胞因子的含量探讨可能的作用机制。结果 HSCs与ADSCs共培养72h,ADSCs明显抑制HSCs的活化与增殖,促进HSCs的凋亡,培养液细胞因子检测显示ADSCs比BRLs分泌更多的HGF,而较少分泌TGF。结论 ADSCs具有分泌细胞因子抑制HSCs活化增殖,促进凋亡的潜能。ADSCs的治疗作用可能与其分泌的细胞因子有关。     

壮肝逐瘀煎对大鼠肝星状细胞活化的影响

目的探讨壮肝逐瘀煎影响肝纤维化发生、发展的作用机制.方法采用免疫组织化学染色,观察壮肝逐瘀煎对四氯化碳(CCL4)复合因素肝纤维化大鼠肝脏星状细胞(HSC)形态及功能的影响,并进行图像分析及统计学处理.结果与病理模型组相比,壮肝逐瘀煎可抑制HSC表达的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和结蛋白(Des)的表达.结论壮肝逐瘀煎能够抑制HSC的活化和增殖,从而起抑制细胞外基质(ECM)合成的作用.     

锌指结构9、结缔组织生长因子在大鼠肝星状细胞中的表达

目的:通过研究肝纤维化大鼠原代肝星状细胞锌指结构9(ZF9)、结缔组织生长因子(CTGF)的表达及其动态变化,初步探讨CTGF、ZF9在肝星状细胞活化中的作用。方法:32只雄性SD大鼠皮下注射40%植物油CCl4,每周2次,并分别于注射1,4,8周后作大鼠肝原位灌注,分离肝星状细胞,Western blot法检测CTGF蛋白,RT-PCR检测ZF9 mRNA水平。结果:正常大鼠肝星状细胞ZF9基因可见弱表达,注射CCl41周后其表达增强,注射CCl44周后转录明显增强,8周时仍高表达。正常大鼠肝星状细胞CTGF蛋白无明显表达,模型组大鼠皮下注射CCl41周后,蛋白出现少量表达,注射CCl44周后,表达进一步增加,第8周CTGF蛋白表达更强。结论:ZF9、CT-GF基因随着肝损伤的加重,在肝星状细胞中的表达逐渐增加,共同促进肝纤维化的发生。     

灵芪蠲肝胶囊含药血清对活化大鼠肝星状细胞凋亡的影响

目的 观察灵芪蠲肝胶囊含药血清对血小板衍化生长因子 （PDGF）诱导的活化大鼠肝星状细胞 （HSC-T6）凋亡的作用,并观察其对凋亡基因Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨其可能的抗肝纤维化机制。方法 首先制备含药血清:SD大鼠随机分为3组,分别用生理盐水 （A组,10 mL/kg）,复方鳖甲软肝片药液 （B组,1.5 g/kg）,灵芪蠲肝胶囊药液 （C组,4.25 g/kg）灌胃7 d,每日1次。经腹主动脉采血,静置、离心、灭活、过滤,取得含药血清。以PDGF 10 ng/mL刺激活化HSC-T6。将各组含药血清按200 mL/L分别作用于HSC-T6。0、12、24、48 h后采用流式细胞技术检测各组HSC-T6凋亡情况以及Bcl-2、Bax的表达。结果 B、C组含药血清作用于HSC-T6细胞12、24、48 h,细胞凋亡率较A组升高,差异有统计学意义 （P<0.05）,而B、C组间的差异无统计学意义（P>0.05）。各组组内不同时间点比较,除A组外,B、C组在不同时间点的两两比较差异均有统计学意义,细胞凋亡率随时间的延长出现明显上升 （P<0.05）。含药血清作用于HSC-T6细胞12、24、48 h,B组、C组Bcl-2的表达较A组明显下降,Bax的表达出现明显上升,差异均有统计学意义 （P<0.05）,而B组与C组间差异均无统计学意义 （P>0.05）。除A组外,B组和C组在不同时间点的两两比较差异均有统计学意义 （P<0.05）,Bcl-2蛋白的表达在0 h最高,随时间的延长表现为下降趋势 （P<0.05）,Bax蛋白的表达随着时间的延长,整体表现为上调趋势 （P<0.05）。结论 灵芪蠲肝胶囊可以诱导活化的HSC-T6凋亡,其机制可能为影响Bcl-2/Bax表达失衡,从而发挥其抗纤维化作用。     

姜黄素、阿米洛利联用对大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的　探讨姜黄素 (curcumin)、阿米洛利 (Amiloride)联用对大鼠肝星状细胞增殖的影响。方法　HSC T6细胞与不同浓度的姜黄素、阿米洛利共同培养 2 4h。LDH法观察姜黄素、阿米洛利对HSC T6的毒性作用 ,以MTT法观察姜黄素、阿米洛利单用及联用对HSC T6增殖的效应。结果　各治疗组HSC的增殖与对照组相比明显为低 ,均有显著性差异 (P <0 0 0 1) ;联用组对HSC增殖的抑制率最高 ;联用组HSC的增殖更低于姜黄素组 (P <0 0 5 )。各治疗组培养上清液中LDH活力与对照组相比未见显著性差异 (P >0 0 5 )。结论　姜黄素、阿米洛利均可抑制HSC的增殖 ,且联用组优于姜黄素单用组 ;它们的作用不是非特异性细胞毒作用所致。     

Genistein对大鼠肝脏星状细胞激活的抑制作用

目的　探索酪氨酸蛋白激酶抑制剂 Genistein对肝脏星状细胞 (HSC)激活的抑制作用。方法　采用链霉蛋白酶、胶原酶原位灌注及 Nycodenz一步密度梯度离心法分离大鼠 HSC,并进行体外培养使之激活。用四唑盐比色法 (MTT法 )检测 Genistein作用 2 4、4 8和 72小时对 HSC增殖的抑制作用 ;用激光扫描共聚焦显微镜(L SCM)观察 Genistein作用后 HSC的 α-平滑肌肌动蛋白 (α- SMA,HSC激活的标志之一 )表达的变化。结果　MTT检测显示 ,10 - 5～ 10 - 9mol/ L 浓度的 Genistein作用 2 4、4 8和 72小时对 HSC增殖有抑制作用 ,并以 10 - 7mol/ L 的 Genistein作用 4 8小时的抑制作用最明显。 L SCM观察显示 ,10 - 6和 10 - 7mol/ L 的 Genistein作用 4 8小时可使 α- SMA表达明显减弱。结论　一定浓度的 Genistein能明显抑制 HSC的活化和增殖 ,有可能成为抑制肝纤维化的潜在药物