血液透析对硫嘌呤甲基转移酶活性的影响

目的　探讨慢性尿毒症患者红细胞内硫嘌呤甲基转移酶 (thiopurinemethyltransferase ,TPMT)的活性及血液透析对它的影响。方法　 3 0例慢性尿毒症患者血液透析前和血液透析后 4小时及 5 0名健康志愿者各取 5毫升静脉血采用高效液相色谱法 (high perfor manceliquidchromatographic ,HPLC)测定红细胞的TPMT活性。结果　健康志愿者活性的平均值为 ( 17.1± 4.6)U/mLpRBCs ,慢性尿毒症患者血液透析前红细胞内TPMT活性平均为 ( 2 2 .3± 6.7)U/mLpRBCs ,而血液透析后 4小时TPMT活性平均为 ( 17.5± 4.0 )U/mLpRBCs。结论　除了遗传因素可以影响TPMT活性外 ,尿毒症患者可因肾功能不全诱导TPMT活性上调 ,而血液透析后诱导因素去除 ,TPMT活性又接近正常     

健康汉族人硫嘌呤甲基转移酶遗传多态性研究

背景与目的:近年来发现了多种导致硫嘌呤甲基转移酶(thiopurineS-methyltransferase,TPMT)活性降低或缺乏的TPMT突变等位基因。中国人与白种人TPMT活性的分布比较具有种族差异性。在测定TPMT活性的基础上,本研究对常见的4种TPMT基因突变类型在健康汉族人中的发生频率进行分析和探讨。方法:对225名健康汉族人的TPMT基因型进行测定。采用等位基因特异性的PCR(allele-specificPCR,ASPCR)方法和限制性片段长度多态性(PCR-restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP)的方法分别检测G238C(TPMT2)、G460A和A719G(TPMT3A、3B、3C)的等位基因频率。结果:在225例健康汉族人中没有找到TPMT2、TPMT3B和TPMT3A,一共找到6例TPMT3C杂合子。这6例TPMT3C杂合子的TPMT活性平均值为(9.62±3.58)U/mlRBC。健康汉族人总的TPMT突变等位基因频率是1.33%(6/450)。结论:TPMT突变基因在中国汉族人的发生频率较低,TPMT3C有可能是该人群中最主要甚至是唯一的突变等位基因。     

巯嘌呤甲基转移酶基因多态性位点与酶活性的关系

目的 研究巯嘌呤甲基转移酶（TPMT）基因型与酶活性的关系,为根据不同基因型、酶活性对巯嘌呤类药物的反应而改进治疗方案提供依据。方法 应用以PCR为基础的限制性内切酶消化、变性高效液相色谱分析和SNaPshot定点的序列分析等方法,并结合DNA直接测序,对250例健康献血员、100例脐血标本和280例急性白血病患者,检测TPMT基因第5外显子G238C、第7外显子G460A和第10外显子A719G的3个多态性位点。应用高效液相色谱分析技术,测定3组人群的红细胞内TPMT活性。结果 本研究组人群TPMT基因外显子区3个位点的多态性频率均低,为3．5％。变异的位点为第10外显子A719G,且均为杂合变异。红细胞内TPMT活性波动范围为6～32U,TPMT〉12U者占95．1％（599例）,6～12U者占4．9％（31例）;未发现有TPMT活性缺乏者。健康献血员、脐血标本和急性白血病患者的TPMT杂合变异者,红细胞内平均TPMT活性分别为9．1U、9．3U和9．07U,均分别低于其同组TPMT野生型者的17．6U、17．67U和18．6U（P〈0．01）。在16例健康献血员和脐血标本中,在15例急性白血病患者的红细胞内TPMT低活性者中,分别有4例和6例未发现所检测的TPMT外显子3个SNP位点的变化,提示红细胞内TPMT活性还受其他因素的影响。结论 TPMT基因多态性影响酶的活性,即TPMT杂合变异者,其TPMT活性降低,从而影响巯嘌呤类药物的治疗效应。根据不同TPMT基因型、酶活性对巯嘌呤类药物的反应制定治疗方案,可进一步提高治疗的有效性和安全性。     

金属硫蛋白1h与常染色质组蛋白甲基转移酶1结合调节组蛋白H3K9甲基化并抑制肺癌细胞周期及运动

目的:观察常染色质组蛋白甲基转移酶1(euchromatic histone methyltransferase1,EHMT1)与金属硫蛋白1h(metallothionein1h,MT1h)的相互作用及定位,探讨其对组蛋白H3K9甲基化和肺癌细胞生物学行为的影响及可能的作用机制。方法:将pGBKT7-MT1h质粒与pGADT7-EHMT1质粒共同转化至酵母菌株AH109,进行酵母双杂交实验。将pcDNA4/TO/myc-hisA/MT1h与pcDNA6/TR质粒共转染肺癌细胞株A549和A2,并用四环素诱导MT1h表达后,采用免疫共沉淀和激光共聚焦法检测MT1h、标签蛋白c-myc和EHMT1蛋白的表达及定位;运用组蛋白H3K9甲基转移酶试剂盒检测甲基化转移酶活性,Western印迹法检测三甲基化的组蛋白H3K9表达;FCM和克隆形成实验检测MT1h表达对细胞增殖的影响;划痕实验和Borden小室法检测MT1h对细胞迁移的影响。结果:实验证实MT1h与EHMT1存在直接作用,且二者共定位于细胞核。诱导MT1h表达后,组蛋白甲基化转移酶活性升高,并且MT1h与组蛋白赖氨酸H3K9三甲基化密切相关。功能分析显示,MT1h稳定转染的肺癌细胞多处于G0期,细胞运动和迁移能力降低。结论:MT1h与EHMT1在细胞核内直接作用,可能通过调节组蛋白H3K9甲基化来发挥抑癌基因的作用。     

谷胱甘肽硫转移酶M1基因编码区多态性与中国南方人群鼻咽癌易感性的关系

背景与目的：研究发现谷胱甘肽硫转移酶M1（glutathione S-tranferase M1,GSTM1）基因缺失可使患鼻咽癌的危险性增加。本研究旨在通过对GSTM1基因编码区单核苷酸多态（single nucleotide polymorphism,SNP）位点的研究,来评估其与中国南方人群鼻咽癌遗传易感性的关系。方法：239例鼻咽癌患者和286例健康人群入组该实验、其中225例鼻叫癌患者及273例对照的实验结果用于统计学分析。在GSTM1基因外显子区、内含子和外显子交界区设计引物,用PCR产物直接测序（测序总长度4739bp）,从中获得SNP位点。选择编码区多态位点T1270533G和C1256088C,用tetra—PFimerARMS—PCR和测序方法进行病例．对照研究。结果：通过测序共获取29个SNPs编码区。T1270533G和C1256088C位点氨基酸的密码子分别发生了碱基颠换,产生了错义突变。对225例鼻咽癌患者和273例健康人群分型结果表明T1270533G位点的变异与鼻咽癌临床表型之间无明显关联（OR=0．170,纯合子TT95％CI=0．95—0．306）。C1256088C位点缺失率在鼻咽癌人群中为45％（45／100）,在对照人群中为42％（42／100）。结论：编码区T1270533G位点的多态性并没有影响该基因的解毒功能。该位点与中国南方人群鼻咽癌遗传易感性无明显关联。本组多态性位点C1256088C缺失率高。     

MGMT在脑胶质瘤组织中的表达及其与患者生存期的关系

背景与目的:目前的研究已经证实DNA修复酶——6-氧-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNAmethyltransferase,MGMT)在脑胶质瘤组织中的表达与肿瘤的耐药性有一定的关系,并且能够影响肿瘤的化疗效果。本研究通过分析MGMT在脑胶质瘤组织中的表达及其与患者生存期的关系,为基于耐药机制上的脑胶质瘤分子分类提供参考资料。方法:用组织芯片技术和免疫组织化学方法检测311例脑胶质瘤石蜡标本中MGMT的表达情况,并对所有患者进行手术后的5年随访。结果:MGMT表达阳性者126例,占40.51%(126/311)。其中,星形细胞瘤中阳性率为50.41%(61/121),少枝胶质细胞瘤中为25.71%(18/70),少枝星形细胞瘤中为28.13%(18/64),胶质母细胞瘤中为51.79%(29/56);在Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤中,MGMT表达的阳性率为36.56%(68/186),而在Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤中为46.40%(58/125),经χ2检验分析,两者之间有显著性差异(P<0.001);将MGMT的表达与患者生存期的关系绘制成Kaplan-Meier生存曲线,并进行log-rank分析,MGMT表达阳性者与阴性者之间的差异有显著性(P<0.05)。结论:MGMT在脑胶质瘤的异常表达与肿瘤的组织类型、病理级别有关,MGMT表达阳性患者的生存期明显低于表达阴性的患者。     

O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的:研究DNA修复酶(O-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法:乳腺癌和腺瘤标本共计143例,10%福尔马林固定,石蜡包埋,采用SABC免疫组织化学方法检测MGMT表达。结果:MGMT在乳腺癌和乳腺腺瘤中的阳性率分别为57.85%和13.64%,组间比较具有显著性差异。MGMT在乳腺癌中的表达与患者的年龄、淋巴结转移有关。结论:MGMT的异常表达与乳腺癌的淋巴结转移有关;MGMT可以作为判断乳癌发生和预后的重要指标;检测其表达可以指导临床上化疗方案的制定。     

Combined loss of expression of O6-methylguanine-DNA methyltransferase and hMLH1 accelerates progression of hepatocellular carcinoma

BACKGROUND AND OBJECTIVES: O(6)-methylguanine-DNA methyltransferase (MGMT) and human Mut L homologue 1 (hMLH1) are proteins that play an important role in DNA repair. No reports have yet described whether deficient MGMT and hMLH1 expression correlates with tumor progression and the prognosis of patients with hepatocellular carcinoma (HCC). METHODS: Using immunohistochemical analysis, we evaluated the expression status of MGMT and hMLH1 protein in 60 paraffin-embedded samples from consecutive patients with curatively resected HCC. RESULTS: The lack of expression of both MGMT and hMLH1 in HCCs (n = 7) correlated with advanced pTNM stage (P = 0.039), as compared with HCCs expressing both proteins (n = 25). The absence of both MGMT and hMLH1 was a significant indicator of malignant potential. The expression status of both MGMT and hMLH1 was a predictive factor for overall survival in patients with HCC (P < 0.001). CONCLUSIONS: HCC lacking both MGMT and hMLH1 is correlated with an advanced stage and a poor prognosis. The expression status of both repair proteins is a predictive prognostic marker in patients with HCC after surgical resection.     

DNA甲基转移酶3B-149C>T多态性与致癌风险相关性的Meta分析

目的:评估DNA甲基转移酶3B-149C>T(DNMT3B-149C>T)多态性与致癌风险之间的相关性。方法:依据Newcastle-Ottawa Scale(NOS)文献质量评价量表,对1990～2017年国内外公开发表的相关文献进行评价并提取资料;对DNMT3B-149C>T各基因型模型进行比较,包括CC与TT、CT与TT、CC+CT与TT,综合分析其在病例组和对照组中的分布情况;通过Q检验和I^2值分析各研究间的异质性,应用Begg秩相关法和Egger回归法验证发表偏倚,使用Review Manager 5.0软件和STATA version 12.0进行统计分析,计算比值比(OR)及95%置信区间(95%CI),评估DNMT3B-149C>T多态性与致癌风险的相关性。结果:分析文献中的7 612名癌症病例和9 679名健康对照。按不同癌症类型进行亚组分析,DNMT3B-149C>T多态性与肺癌的患病存在相关性[OR=1.51,95%CI(1.08,2.12),P=0.02]。结论:DNMT3B-149C>T多态性可能是肺癌的易感性因素。     

DNA甲基转移酶3B4过表达与肾透明细胞癌的关系

  目的  探究DNA甲基转移酶（DNA methyltransferase,DNMT）在肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,ccRCC）发生发展中的机制。  方法  收集2012年1月至12月15例内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院术前均未结予放化疗并行肾癌根治术患者的组织标本,均经病理证实为ccRCC。应用实时定量PCR、蛋白印迹、联合亚硫酸氢钠限制酶分析法和甲基化特异PCR等方法检测ccRCC组织中DNMT的mRNA表达,及ccRCC组织中整体甲基化（global methylation）水平和抑癌基因RASSF1A甲基化和表达水平。  结果  ccRCC组织中DNMT3B4的mRNA表达增加,同时其蛋白含量也相应增加。ccRCC患者癌组织中DNA重复序列Alu的甲基化水平0.106±0.04较癌旁组织中0.115±0.03低,差异具有统计学意义（P < 0.05）。而肿瘤抑制基因RASSF1A启动子区域发生高甲基化,其mRNA和蛋白的表达均降低。  结论  DNMT3B4基因过表达可能与染色体不稳定以及RASSF1A基因低表达有关,在ccRCC的发生发展中可能扮演着重要的角色。      

Effect of alternative temozolomide schedules on glioblastoma O6-methylguanine-DNA methyltransferase activity and survival

Background:

O⁶-methylguanine-DNA methyltransferase (MGMT) expression in glioblastoma correlates with temozolomide resistance. Dose-intense temozolomide schedules deplete MGMT activity in peripheral blood mononuclear cells; however, no published data exist evaluating the effect of temozolomide schedules on intracranial tumour MGMT activity.

Methods:

Human glioblastoma cells (GBM43) with an unmethylated MGMT promoter were implanted intracranially in immunodeficient rodents. Three weeks later, animals received temozolomide 200 mg m⁻² for 5 days (schedule A, standard dose) or 100 mg m⁻² for 21 days (schedule B, dose intense).

Results:

Tumour MGMT activity was depleted by day 6 in both treatment groups compared with baseline. O⁶-methylguanine-DNA methyltransferase activity returned to baseline by day 22 in the schedule A group, but remained suppressed in the schedule B group. By day 29, MGMT activity had returned to baseline in both groups. Mean tumour volume was significantly decreased compared with untreated controls with either schedule (P<0.01), although neither schedule was superior (P=0.60). Median survival was 64, 42, and 28 days for schedule A, schedule B, and no drug, respectively (P<0.001 A or B vs control, P=NS A vs B).

Conclusions:

Dose-intense temozolomide prolongs tumour MGMT activity depletion compared with standard dosing, however, survival was not improved in this model.     

Expression of human O6-methylguanine-DNA methyltransferase in Chinese hamster ovary cells and restoration of cellular resistance to certain N-nitroso compounds.

We have constructed a plasmid in which the expression of human O6-methylguanine-DNA methyltransferase (MGMT) cDNA is driven by the Rous sarcoma virus promoter sequence. Transfection of this plasmid into Chinese hamster ovary (CHO) cells results in expression of MGMT and in cellular resistance to N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG) and 1-(2-chloroethyl)-1-nitrosourea (CNU), but not to N-nitroso-N-ethylurea. The specific activity of MGMT in transfected CHO cells correlated well with their resistance to MNNG and CNU. Southern analysis showed that the plasmid had been integrated into the CHO cell genome. Western analysis of extracts from transfected CHO cells using an antibody against a peptide corresponding to the carboxyl-terminal end of the human MGMT protein demonstrated a single band with a molecular size of 24-25 kDa; no such band was observed in extracts from wild-type CHO cells. These transfected cells may therefore be used to study the role of MGMT in the repair of alkylating DNA lesions and to determine its importance in carcinogenesis as well as in chemotherapy.     

O~6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶甲基化状态和同期放化治疗与中国香港胶质母细胞瘤患者生存的相关性研究

背景与目的:胶质母细胞瘤(GBM)是一种恶性程度最高的星形细胞瘤,其主要的治疗方法是外科手术和放射疗法,2005年批准使用替莫唑胺,化学疗法的效果才得以确定。本文比较中国香港原发性GBM患者接受同期放化治疗或单纯放疗的生存时间,探讨GBM肿瘤组织中O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)的甲基化状态在预后评价的价值。方法:回顾性分析2005年3月至2007年6月期间35例经手术后病理确诊并接受过同期放化治疗或单纯放疗的中国香港GBM患者的资料,从石蜡包埋的GBM肿瘤组织中分离出基因组DNA,采用甲基化特异性聚合酶链反应方法(MSP)检测基因MGMT甲基化状态。采用Kaplan Meier方法计算总生存时间(OS)和无进展生存时间(PFS),比较同期放化治疗或单纯放疗和MGMT甲基化或非甲基化状态对生存时间的影响。结果:35例患者中,男性27例,女性8例,平均年龄50.4岁。35例患者的中位PFS和中位OS分别是4.7个月(3.1~6.2个月)和11.7个月(6.5~16.6个月),其中18例仅接受单纯放疗患者的中位PFS和中位OS分别是4.2个月(3.4~5.0个月)和5.8个月(2.0~9.6个月),17例接受同期放化治疗患者的中位PFS和中位OS分别是6.0个月(2.0~10个月)和13.2个月(8.1~18.3个月),P值>0.05。15例(43%)肿瘤组织中存在MGMT甲基化,MGMT甲基化和非甲基化患者的中位OS分别是16.9个月(12.7~21.1个月)和10个月(5.8~14.1个月),P值>0.05。结论:尽管差异无统计学意义,但与单纯放疗比较,接受了同期放化治疗的GBM患者显示出了更长的总体生存趋势,MGMT甲基化可能是GBM的明显预后较好的因素。