尤瑞克林对局灶性脑缺血大鼠Bcl-2家族蛋白表达的影响

目的通过观察尤瑞克林对局灶性脑缺血大鼠Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨尤瑞克林保护缺血性脑组织的可能作用机制,为尤瑞克林治疗缺血性脑血管病在临床上的应用提供理论依据。方法选用健康SD大鼠130只,雌雄各半,随机分为假手术组、局灶性脑缺血组及同一时间尤瑞克林治疗组(3、6、12、24、48、96h);每组10只。以线栓法阻塞大鼠大脑中动脉,制备局灶性脑缺血模型,术后30min尤瑞克林组舌下静脉注射尤瑞克林8.75×10-3、PNA单位·kg-1。行神经功能缺失评分,免疫组化SABC法对凋亡相关基因bcl-2、bax蛋白进行定量分析,电镜观察大脑皮层顶叶缺血半暗带区神经细胞超微结构变化。结果尤瑞克林组与单纯缺血对照组同一时间比较:在6、12、24、48、96h五个时间段Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)、同时在6个时间段Bax蛋白表达均降低(P<0.05),透射电镜示:尤瑞克林组与模型组同时间段对照比较:核膜较光滑无内陷,核切迹不明显,核染色质可见少量成块。结论尤瑞克林对脑缺血保护作用机制可能与调节NO,从而促进血管新生,提高Bcl-2蛋白表达,同时抑制Bax蛋白表达对脑缺血损伤起保护作用的分子机制之一。     

激动γ-羟基丁酸受体对大鼠局灶性脑缺血/再灌注神经细胞凋亡的影响

目的研究γ-羟基丁酸受体(gamma-hydroxybutyrate receptor,GHBR)对大鼠局灶性脑缺血/再灌注神经细胞凋亡的影响。方法成年♂SD大鼠,分为假手术组(Sham),缺血/再灌注(Isc/R),NCS-356160、320、640μg.kg-1组(N1、N2、N3),NCS-382640+NCS-356640μg.kg-1组(NCS-382+N3),尼莫地平600μg.kg-1组(Nim)。采用改良的Longa法制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型。再灌24h后,一部分动物应用免疫组织化学染色法测定大鼠缺血侧大脑皮质Bax,Bcl-2,Caspase-3蛋白的表达,另一部分动物应用流式细胞仪测定神经细胞凋亡率。结果NCS-356160、320、640μg.kg-1及Nim增加缺血神经细胞的Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值,降低Bax、Caspase-3阳性细胞数和细胞凋亡百分率,上述作用可被NCS-382拮抗。结论激动GHBR可抑制大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤引起的细胞凋亡。     

L-硝基精氨酸对大鼠局灶性脑缺血后神经元凋亡的影响

目的观察非选择性一氧化氮合酶抑制剂L-硝基精氨酸(L-NA)对大鼠局灶性脑缺血诱导的神经元凋亡的影响,探讨L-NA对脑缺血的保护作用及其机制.方法健康雄性SD大鼠,体重250～300 g,随机分为假手术组(SH组)、缺血组(IS组)、L-NA治疗组(L-NA组).IS和L-NA组按缺血后时间分为三个亚组:2 h、6 h、12 h.每组6只大鼠.L-NA组每次按20mg/kg,ip给药,每日2次,连续3 d.IS组给等容量的生理盐水.插线法制备大鼠大脑中动脉阻断模型.采用流式细胞仪(FCM)检测脑组织细胞凋亡率,Western blot法和免疫组化法检测Caspase-3蛋白的表达,FCM和免疫组化法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果大鼠脑缺血后,细胞凋亡率、Caspase-3和Bax蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达差异无显著性,Bcl-2/Bax降低,缺血12 h治疗3 d时,L-NA组中细胞凋亡率、Caspase-3和Bax蛋白表达显著低于相应的IS组,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax高于IS组,缺血2、6 h治疗3 d L-NA组中细胞凋亡率、Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达和Bcl-2/Bax与IS组比,差异无显著性.结论缺血后期应用L-NA对脑缺血有治疗作用,可能与降低Caspase-3、增加Bcl-2表达、降低Bax蛋白表达、调节Bcl-2/Bax蛋白平衡有关.     

L-硝基精氨酸对大鼠局灶性脑缺血后神经元凋亡的影响

目的观察非选择性一氧化氮合酶抑制剂L-硝基精氨酸(L-NA)对大鼠局灶性脑缺血诱导的神经元凋亡的影响,探讨L-NA对脑缺血的保护作用及其机制。方法健康♂SD大鼠,体重250~300 g,随机分为假手术组(SH组)、缺血组(IS组)、L-NA治疗组(L-NA组)。IS和L-NA组按缺血后时间分为3个亚组:2、6、12 h。每组6只大鼠。L-NA组每次按20 mg.kg-1,ip给药,每日2次,连续3 d。IS组给等容量的生理盐水。插线法制备大鼠大脑中动脉阻断模型。采用流式细胞仪(FCM)检测脑组织细胞凋亡率、W estern b lot法和免疫组化法检测caspase-3蛋白的表达、FCM和免疫组化法检测bc l-2和Bax蛋白的表达。结果大鼠脑缺血后,细胞凋亡率、caspase-3和Bax蛋白表达明显升高,bc l-2蛋白表达无差异,bc l-2/Bax降低,缺血12 h治疗3 d时,L-NA组中细胞凋亡率、caspase-3和Bax蛋白表达低于相应的IS组,bc l-2蛋白表达、bc l-2/Bax高于IS组,缺血2,6 h治疗3 dL-NA组中细胞凋亡率、caspase-3、bc l-2、Bax蛋白表达和bc l-2/Bax与IS组比差异无显著。结论缺血后期应用L-NA对脑缺血有治疗作用,与降低caspase-3、增加bc l-2蛋白表达、降低Bax蛋白表达、调节bc l-2蛋白/Bax蛋白平衡有关。     

局灶性脑缺血与细胞凋亡

近年研究表明细胞凋亡参与缺血性脑损伤的病理生理过程并在神经元损伤中具有重要作用,从细胞凋亡角度探讨脑缺血的发病机制及抗脑缺血的新途径已成为研究的热点。本文就近年脑缺血与细胞凋亡研究领域的进展,从以下几方面做一综述:细胞凋亡概述;局灶性脑缺血过程中存在细胞凋亡现象;凋亡在这一过程中的作用;脑缺血后神经元发生凋亡的可能机制和该领域中尚待解决的问题。     

碱性成纤维因子对兔局灶性脑缺血后神经细胞凋亡的影响

目的探讨碱性成纤维因子 (bFGF)对兔脑缺血后神经细胞凋亡的影响。方法 2 4只新西兰兔分为三组 (每组 8只 ) ,A组为假手术组 ,滴加生理盐水于兔左侧大脑中动脉表面 ;B组为血栓模型组 ,将 5 0 %氯化铁 2 0 μl敷于兔左侧大脑中动脉表面 30分钟 ;C组为bFGF治疗组 ,血栓形成后即耳缘静脉给予bFGF 45 μg·kg-1·h-1× 3。用流式细胞仪检测各组神经细胞凋亡的百分率 ,观察动物行为变化及脑病理改变。结果 (1)神经细胞凋亡的百分率A组为 5 16± 1 34% ,B组为 16 73±14 87% ,C组为 11 0 3± 2 0 3%。 (2 )脑病理检查证实 ,A组未见梗塞灶 ;B组及C组有梗塞灶 ,血管内的血栓为混和性血栓。结论bFGF对兔局灶性脑缺血后神经细胞凋亡有抑制作用 ,能保护缺血损伤的神经细胞。     

手性3-n丁基苯酞对大鼠局灶性脑缺血诱导的凋亡的影响

目的:观察和比较手性3-n丁基苯酞(NBP)对大鼠局灶性脑缺血再灌注诱导的凋亡的影响。方法:插线法制备大脑中动脉阻断(MCAO)模型,原位末端标记(TUNEL)和琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂,蛋白质印迹和免疫组化方法检测细胞色素c及caspase-3蛋白的表达。结果:大鼠局灶性脑缺血2小时,再灌注开始后24小时可见明显的TUNEL阳性染色和DNA ladder.s-(-)-NBP 5,10 mg/kg显著减少TUNEL阳性细胞数和DNA ladder,s-(-)-NBP 10 mg/kg几乎完全抑制DNA片段化,而r-(+)-NBP 10 mg/kg仅有轻度抑制作用。(±)-NBP(20 mg/kg)对DNA片段化的抑制作用介于s-(-)-NBP(10 mg/kg)和r-(+)-NBP(10 mg/kg)之间。脑缺血过程中可见到线粒体细胞色素c的释放及caspase-3的激活,s-(-)-NBP能明显抑制这一效应,r-(+)-NBP和(±)-NBP对细胞色素c和caspase-3作用的强弱与它们抑制DNA片段化的作用强度相似。结论:NBP,尤其是s-(-)-NBP能够抑制脑缺血诱导的DNA片段化,细胞色素c释放和caspase-3激活。     

降纤酶对大鼠局灶性脑缺血的影响

目的 :观察降纤酶 (defibrase)对大鼠局灶性脑缺血性损伤的治疗作用。方法 :雄性Wistar大鼠 ,采用大脑中动脉内线栓法诱导局灶性脑缺血 ,60只局灶性脑缺血大鼠 ,随机分成 1 0组 ,每组 6只 ,其中 5组大鼠分别在缺血后 0 .5 ,3 ,6,9,1 2h静脉注射降纤酶 ,8U·kg-1,另 5组大鼠分别在相同时间点静脉注射等量生理盐水对照 ,另设 1 0鼠作假手术组。各组大鼠均在手术后 2 4h进行神经功能评分 ,然后处死大鼠 ,标本用苏木精曙红染色 (HE)及氯化三苯基四氮唑(TTC)染色 ,观察梗死灶大小、病理改变。结果 :缺血后 0 .5 ,3h静脉给药治疗组神经功能评分比对照组明显改善 ,分别为 (0 .8±s 0 .5 )分 ,(1 .3± 0 .5 )分和 (3 .0± 0 .9)分 ,(3 .2± 1 .0 )分 ,脑梗死灶体积比对照组明显减小 ,分别为 (1 1 9±3 9)mm3 ,(1 41± 62 )mm3 和 (2 91± 5 6)mm3 ,(2 97± 3 9)mm3 ,差别有非常显著意义 (P <0 .0 1 ) ;缺血区病理改变也轻于对照组。缺血后 6,9,1 2h给药组神经功能评分、脑梗死灶体积与对照组比较均无明显差异 (P >0 .0 5 ) ,治疗组与对照组镜下均见点状出血 ,但未发现治疗组增加脑梗死后出血率。结论 :早期静脉应用降纤酶有效缩小脑梗死灶体积 ,且不增加出血率。     

局灶性脑缺血后细胞凋亡的发生及自由基的变化

神经元细胞的凋亡与坏死对神经元的功能损伤,具有同样的重要作用,由于凋亡出现早且持续时间长,因此神经细胞的调亡现象一直为国内外学者所关注。本实验在建立局灶性脑缺血动物模型的基础上,观察缺血区细胞坏死及凋亡的动态变化和与缺血程度的关系,以及氧自由基在缺血损伤中的作用。 材料与方法 1.模型与选材参照线栓法阻断大脑中动脉(middle3Cerebralartery　occlusionMCAO)[1]动物模型。选取雄性健康的Wister大鼠,随机分为10组:假手术组、正常对照组、缺血5分组、缺血10分组、缺血15分组、缺血30分组、缺血60分组。缺血3h组、缺血6h组、…     

纳洛酮对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡的影响

目的：研究纳洛酮在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的保护机制。方法：腔内线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型。16只雄性Wistar大鼠随机分为缺血组及纳洛酮治疗组，采用TUNEL法检测各组大鼠脑组织于缺血再灌注各2．5h后神经细胞凋亡情况。结果：大鼠脑缺血再灌注2．5h后凋亡的神经细胞主要分布在梗死灶边缘，纳洛酮治疗组细胞凋亡数量低于缺血组(P＜0．05)。结论：纳洛酮具有减少大鼠脑组织缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡的作用。纳洛酮具有抗脑缺血再灌注损伤的保护作用。     

Bcl-2基因与大鼠局灶性脑缺血再灌注后的细胞凋亡

细胞凋亡 ( apoptosis)是细胞死亡的一种形式 ,是由基因介导的主动的细胞自杀现象。以往人们认为坏死是脑缺血后神经细胞死亡的唯一方式。近年来随着生物技术进展 ,更多证据表明脑缺血后神经元死亡由凋亡和坏死共同引起 [1 ] ,此过程中有凋亡相关蛋白表达。目前认为 bcl- 2基因是一种重要的内源性抗凋亡因子 [2 ] ,对维持局灶性脑缺血再灌注后某些神经细胞的生存具有重要作用 ,但其作用机制仍不清楚。本文就脑缺血再灌注后 bcl- 2基因家族与细胞凋亡的关系作一综述。1　 Bcl- 2基因家族1.1　 Bcl- 2基因的定位和分子结构 :Bcl- 2基因是Tsu…     

依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血后神经元凋亡的影响

目的探讨依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血后神经细胞的保护作用。方法采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型(MCAO),将动物随机分为假手术组、生理盐水组和依达拉奉组,采用比色法测定脑组织中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力,免疫组化法检测caspase-3的表达水平,原位末端标记(TUNEL)法检测凋亡水平。结果依达拉奉治疗组与生理盐水组相比,脑组织中MDA含量显著降低(P<0.05),SOD活力显著升高(P<0.05);同时依达拉奉治疗组的脑神经元caspase-3的表达水平及细胞凋亡水平比生理盐水组显著减少(P<0.05)。结论依达拉奉可有效提高大鼠局灶性脑缺血时脑组织中SOD活力,降低MDA水平,并且有效抑制caspase-3表达,对抗神经细胞凋亡。     

胡椒碱对大鼠局灶性脑缺血的神经保护作用

观察胡椒碱对急性缺血性脑损伤大鼠的神经保护作用。方法　随机将ＳＤ大鼠分为假手术组、生理盐水组、 胡椒碱组、溶媒组，每组８只。采用颈内动脉线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞脑缺血模型，术后０５ｈ灌胃给药，１次／ｄ，连续３ｄ。 不同时间点进行神经功能评分。７２ｈ断头取脑，ＴＴＣ染色，测量梗死体积。另择３２只大鼠，分组同上，于脑缺血２４ｈ处死，断头取 脑，观察神经细胞凋亡及Ｃａｓｐａｓｅ ３蛋白表达。结果　胡椒碱组大鼠神经功能评分、脑梗死体积、凋亡细胞数及Ｃａｓｐａｓｅ ３阳性细胞 数较生理盐水组、胡椒碱溶媒组降低，差异有统计学意义（Ｐ＜００５）。结论　胡椒碱通过减少Ｃａｓｐａｓｅ ３蛋白的表达抑制细胞凋亡、 缩小脑梗死体积、改善神经功能。     

褪黑素对大鼠局灶性脑缺血的影响

目的:探讨褪黑素对大鼠局灶性脑缺血保护作用.方法:用线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型.大鼠随机分为假手术组、缺血组、褪黑素组(4 mg&#8226;kg 1)、尼莫地平组(0.2 mg&#8226;kg 1).缺血前30 min舌下静脉给药.持续性缺血30 min,6,24 h后处死动物,测定脑梗死体积,脑组织丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量和NOS活性(分光光度法);透射电镜观察脑组织超微结构改变.结果:MCAO后,脑梗死体积及MDA含量随时间延长而增大,6 h后基本稳定;缺血30 min NO含量及NOS活性升高,缺血6 h降低,24 h再度升高.与模型组比较,褪黑素组能缩小脑梗死体积、降低脑组织中MDA含量、缺血30 min NO含量及NOS活性升高,6,24 h降低,且显著改善脑组织的超微病变,减少神经细胞的凋亡.结论:褪黑素对大鼠局灶性脑缺血有一定的保护作用,机制可能与降低脑组织中NO含量和NOS活性、减轻脑组织生物膜脂质过氧化损伤及减少神经细胞的凋亡有关.     

疏血通注射液对脑缺血大鼠细胞凋亡的影响

目的:研究疏血通对脑缺血大鼠细胞凋亡的影响。方法:雄性Wistar大鼠72只,随机分成脑缺血组、脑缺血+疏血通治疗组、假手术对照组,每组24只,采用大脑中动脉栓塞方法,制作脑缺血模型,疏血通组腹腔注射疏血通注射液0.2ml/kg,脑缺血组及假手术对照组腹腔注射等体积生理盐水。用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测脑组织中神经细胞凋亡。结果:脑缺血组TUNEL染色阳性细胞数显著增多,并随时间的延长而加重,第3天达高峰。脑缺血+疏血通治疗组各时间点与脑缺血组比较TUNEL染色阳性细胞数明显减少(P<0.01)。结论:疏血通能够明显抑制脑缺血大鼠神经细胞凋亡。     

大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的动态变化

目的观察大鼠脑缺血再灌注后大脑皮质和纹状体神经细胞凋亡的动态变化。方法采用大鼠脑缺血2h,再灌注1h,6h,12h,24h和48h的脑缺血再灌注模型。用HE染色体和TUNEL标记的方法,观察大鼠大脑皮层和纹状体神经细胞凋亡的变化。结果在脑缺血再灌注早期有部分神经细胞发生凋亡,随再灌注时间的延长,凋亡细胞数目逐渐增多。24～48h达高峰。结论在脑缺血再灌注损伤时神经细胞凋亡起着重要作用。     

神经生长因子对大鼠全脑缺血再灌注小脑神经细胞凋亡的影响

目的观察神经生长因子（nerve growth factor,NGF）对大鼠全脑缺血再灌注小脑皮层神经细胞凋亡的影响。方法采用闭塞大鼠四动脉建立全脑缺血模型,应用电镜及末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL染色法）观察模型组和NGF治疗组动物脑缺血30min再灌注7d小脑皮层神经细胞凋亡的情况。结果模型组小脑皮层神经细胞有明显形态学损伤,蒲肯野细胞凋亡明显。NGF组神经细胞结构损伤明显减轻,凋亡细胞明显减少。结论NGF对大鼠全脑缺血再灌注小脑皮层神经细胞凋亡有明显的保护作用。     

大鼠局灶性脑缺血对自主神经系统的影响

目的：研究心脏自主神经功能在急性局灶性脑缺血及再灌注后的变化情况。方法：通过线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，连续记录大鼠局灶性脑缺血再灌注不同时间段的动脉血压、心电图信号以及心率．比较分析缺血组缺血后各时段与假手术组相应时段缺血前后以及再灌注前后的动脉血压、心率以及心率变异性的变化。结果：急性脑缺血组动脉血压、心率较假手术组均显著升高，心率变异性的能量有较大的变化；再灌注后，动脉血压、心率及心率变异性均有不同程度的恢复。而且缺血时间越短，恢复越快。结论：在急性脑缺血后，心脏自主神经活动减弱．而交感神经活动相对增强或者迷走神经活动减弱。