胚胎干细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展

脊髓损伤是中枢神经系统的严重创伤,常导致不可逆的感觉及运动功能丧失,主要表现为损伤平面以下感觉、运动功能丧失和大小便功能障碍,并由此引起的一系列并发症(褥疮、坠积性肺炎、尿路感染等).目前,细胞移植治疗脊髓损伤实验取得了一定的进展,为严重脊髓损伤的治疗提供r新的方法.细胞移植根据移植物的不同可以大体分为神经细胞移植和非神经细胞移植,移植物包括胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)、嗅鞘细胞、活化巨噬细胞、骨髓基质干细胞等.其中胚胎干细胞移植治疗已是脊髓损伤的研究热点之一.     

脑源性神经营养因子基因修饰的嗅鞘细胞移植对大鼠损伤脊髓的保护作用

我们以重组缺陷型腺病毒为载体，将脑源性神经营养因子（BDNF）基因转染的嗅鞘细胞移植入大鼠损伤的脊髓，观察脊髓修复和肢体功能恢复情况，为将来应用基因工程细胞移植治疗脊髓损伤提供依据。     

嗅鞘细胞移植对脊髓损伤后神经细胞的保护作用

嗅鞘细胞移植是近年来研究较多的治疗脊髓损伤（SCI）的方法，多数报道认为这与嗅鞘细胞诱导轴束生长有关。为了解嗅鞘细胞移植对SCI后脊髓内神经细胞凋亡的影响，探讨嗅鞘细胞移植治疗SCI的机制，我们进行了实验研究。     

嗅鞘细胞移植修复脊髓损伤的新进展

传统观点认为,中枢神经系统损伤后由于自身的再生能力差和外在环境抑制,神经不能再生。脊髓是中枢神经系统的重要部分,发育成熟的脊髓损伤后神经不能再生是功能永久丧失的主要原因。为促进脊髓神经的再生,各国学者所采用的方法主要集中在以下几方面:(1)神经营养因子的应用;(2)拮抗生长抑制因子的应用;(3)电刺激有应用;(4)外周神经移植;(5)雪旺氏细胞(Schwanncells,SCs)移植;(6)神经干细胞移植;(7)胚胎组织移植;(8)基因治疗;(9)嗅鞘细胞(olfactoryensheathingcells,OECs)移植。在这些方法中,嗅鞘细胞移植被认为是修复脊髓损伤最有前景的方…     

骨髓间充质干细胞与嗅鞘细胞联合移植治疗脊髓损伤的早期观察

[目的]探讨自体骨髓间充质细胞和异体嗅鞘细胞共培养及其联合移植修复脊髓损伤的可行性,为临床治疗提供一种新方法。[方法]无菌条件下采集自体骨髓间充质细胞和胎龄4～6个月的引产胎儿的嗅鞘细胞,分别培养至传代后再共培养,将共培养的混合细胞通过手术直视下移植至脊髓损伤部位。[结果]8例脊髓损伤患者接受自体骨髓间充质细胞和异体嗅鞘细胞联合移植,并获得1～6个月的随访,所有接受细胞移植的8例患者术后均无不良反应,其中1例术后1个月开始出现双下肢深浅感觉恢复,其余7例比细胞移植前无明显改善。[结论]自体骨髓间充质细胞和异体嗅鞘细胞共培养两者之间无相互抑制现象,近期观察二者联合移植修复脊髓损伤是安全的。     

不同剂量嗅鞘细胞蛛网膜下腔移植修复脊髓损伤的实验研究

目的:探讨嗅鞘细胞蛛网膜下腔移植治疗脊髓损伤的可行性、安全性及细胞移植数量与疗效的关系。方法:应用改良Allen′s法制备大鼠T10脊髓损伤模型,随机分四组:大剂量嗅鞘细胞蛛网膜下腔移植组(A组,2×106个)、中剂量嗅鞘细胞蛛网膜下腔移植组(B组,2×105个)、小剂量嗅鞘细胞蛛网膜下腔移植组(C组,2×104个)、DMEM/F12培养液蛛网膜下腔移植组(D组)。术后即刻进行细胞移植,术后第4、10周行CBS功能评分及组织学检查,观察脊髓神经功能修复情况及损伤区神经纤维数量。结果:CBS功能评分示A、B组明显好于C、D两组(P<0.05);A、B两组间比较无差异,C、D两组间比较无差异(P>0.05)。组织学观察发现A、B组神经纤维数量多于C、D组。结论:急性期嗅鞘细胞经蛛网膜下腔移植治疗脊髓损伤安全有效,急性期移植细胞数量较大则脊髓神经功能恢复较好。     

嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤进展

脊髓损伤的治疗一直是科学家和临床医生面临的颇具挑战性问题，近百年来没有多大进展!近年来，髓内细胞移植治疗脊髓横断损伤取得了一定疗效，为严重脊髓损伤的治疗提供了新的方法。其中，移植成髓鞘的细胞取得了较好的疗效，如：雪旺氏细胞，少突胶质细胞，嗅鞘细胞。所有的这些细胞中，嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells OECs)使轴     

嗅鞘细胞治疗脊髓损伤的研究进展

脊髓损伤是一种高致残性神经系统损伤性疾病,目前仍然缺乏有效的治疗方法。研究证实嗅鞘细胞是促进脊髓损伤后神经再生的理想种子细胞之一。嗅鞘细胞能通过分泌作用、与星形胶质细胞相互作用、调节炎症反应、迁移特性、髓鞘形成作用、抗氧化作用、脂质调节作用等方式或特性促进轴突的萌发及定向延长,从而发挥神经保护以及神经修复作用。近年来,一些研究利用生物工程、组织工程、重编程等技术从不同方面增强了嗅鞘细胞的疗效,从而为优化脊髓损伤的细胞治疗提供了新的治疗策略。本文将对嗅鞘细胞修复脊髓损伤的机制加以总结,同时归纳近些年优化嗅鞘细胞治疗脊髓损伤策略的研究进展,为进一步开发脊髓损伤后神经修复潜能提供新的研究思路,优化脊髓损伤的细胞治疗效果。     

嗅鞘细胞静脉移植治疗脊髓损伤的实验研究

[目的]探讨嗅鞘细胞静脉移植治疗脊髓损伤的可行性和疗效.[方法]制备Wistar大鼠脊髓半切模型,随机分4组:局部移植组(A)、静脉移植组(B)、D/F12静脉移植组(C)、空白对照组(D).定期行CBS功能评分及组织学检查,评价脊髓修复情况.[结果]A、B两组功能恢复和组织学改变与对照组有显著差别,A、B两组间无显著差别.[结论]嗅鞘细胞静脉移植可向脊髓损伤部位迁移并修复损伤脊髓,该移植方式即简化了操作,又有较好疗效,具有良好的临床推广和使用价值.     

嗅鞘细胞移植联合跑步训练对改善脊髓损伤大鼠后肢运动功能的研究

目的 :研究嗅鞘细胞移植联合跑步训练对改善脊髓损伤大鼠后肢运动功能的效果,同时探索嗅鞘细胞移植联合跑步训练改善大鼠运动功能的可能机制。方法:选用雄性SD大鼠80只,随机分为4组,每组20只,均进行脊髓损伤造模后进行如下分组处理:生理盐水注射组(A组)、嗅鞘细胞移植组(B组)、生理盐水注射联合跑步训练组(C组)和嗅鞘细胞移植联合跑步训练组(D组)。建模3 d后C、D两组进行跑步训练,1周后B、D两组进行嗅鞘细胞移植(每只大鼠注射总量为4μl,细胞浓度为1.0×106/μl),A、C两组给予相应剂量盐水。观察时间为4周,每组每周测量BBB评分,利用免疫组化染色观察Bax、Bcl-2及NF-200的表达,采用Mallory磷钨酸苏木素染色观察神经纤维数量,使用TUNEL染色观察神经元凋亡。结果:(1)BBB评分:嗅鞘细胞联合跑步训练组与其他3组在第4周差异有统计学意义(P0.05)。(2)在Bcl-2蛋白表达上,嗅鞘细胞移植联合跑步训练有交互作用,两者相互促进(P0.05);在Bax蛋白的表达上,嗅鞘细胞移植可以明显降低其表达,与跑步训练交互作用不明显(P0.05);TUNEL染色显示,嗅鞘细胞移植、跑步训练与时间因素三者具有交互作用,显著抑制细胞凋亡(P0.05)。(3)在Mallory磷钨酸苏木素染色及NF-200免疫组化染色上,嗅鞘细胞移植、跑步训练与时间因素三者具有交互作用(P0.05),促进神经再生。结论 :嗅鞘细胞移植联合跑步训练能够显著改善大鼠后肢运动功能,这可能通过以下途径实现:嗅鞘细胞移植与跑步训练能够相互协同,明显上调Bcl-2基因的表达,从而显著抑制神经元凋亡;同时能明显促进神经元轴索再生,提高神经纤维数量,并且这种效果可以随时间的延长更加显著。     

嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的临床思考

脊髓损伤的治疗仍然是目前医学界的难点及热点.一系列基础研究报告在动物脊髓损伤的模型[1-6]中,证实嗅鞘细胞移植能够促进脊髓损伤的再生和恢复脊髓的部分神经功能.部分临床实验证明嗅鞘细胞的移植的确能改善脊髓损伤病人的神经功能,从而改善其生存质量,虽然恢复的程度有限,但确实看到了一缕曙光[7-8].     

嗅鞘细胞移植对脊髓损伤后损伤区髓鞘相关轴突生长抑制因子受体表达的影响

目的：观察嗅鞘细胞移植前后脊髓损伤区髓鞘相关轴突生长抑制因子受体（NgR）的变化,探讨嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的有关机制。方法：实验于2006年9月至2007年5月在西安交通大学医学院环境与基因重点实验室完成。①实验动物：成年健康SD雄性大鼠40只,用随机数字表法分为正常组、模型组、嗅鞘细胞组和DF12对照组,每组10只。另取30只健康成年雄性SD大鼠作为嗅鞘细胞的来源。②实验方法：除正常组外,其余各组均建立全横切脊髓损伤模型。嗅鞘细胞组将原代培养12d的嗅鞘细胞悬液调整为（1×1011）个/L,在距损伤缘上下各1mm处分4点应用微量注射器注射,深度1.0mm,每处各注射1μl;DF12对照组同法每点注射等量DF12培养液;模型组、正常组不进行任何处理。③观察项目与方法：各组分别于移植后1、4、8周采用免疫组化技术动态检测脊髓损伤区NgR表达的变化。同时在移植后8周后行嗜银染色检测组织形态学变化。结果：①NgR表达的变化：正常组NgR表达的吸光度值明显低于其余3组（P〈0.05）。嗅鞘细胞组于移植后1,4,8周脊髓损伤区NgR的表达均明显低于模型组和DF12对照组（P〈0.05或P〈0.01）,而模型组和DF12对照组差异无统计学意义（P〉0.05）。②组织形态学变化：嗅鞘细胞移植8周后除正常组外,其余各组均可见明显的神经纤维再生,但模型组与DF12对照组大部分纤维排列紊乱,再生纤维方向性较差;嗅鞘细胞组可见明显的新生轴突,且神经纤维跨越损伤部位修复脊髓损伤,无论在数量还是质量上均优于模型组及DF12对照组。结论：嗅鞘细胞移植可能通过降低脊髓损伤区NgR蛋白的表达,从而促进损伤脊髓的修复。     

大鼠嗅球成鞘细胞的体外原代培养、纯化及鉴定

脊髓损伤所致的瘫痪往往导致显著性的机体功能障碍乃至功能丧失。而脊髓损伤后轴突再生困难是引起上述结果主要原因之一．其治疗亦是医学界公认的难题。19世纪末期西班牙组织学家Blanes Viale首先描述：嗅神经鞘细胞（简称嗅鞘细胞,olfactory ensheathing cells,OECs）具有施旺细胞和星形胶质细胞双重特性,研究者们开始关注之并对其进行了研究。随着实验研究的进展,科学家们发现OECs能促进损伤脊髓神经的再生,同时成功的从大鼠嗅球及嗅粘膜中成功分离培养出OECs,并用于移植治疗大鼠脊髓横断损伤模型。     

OECs移植联合应用尼莫地平促进大鼠脊髓损伤后功能恢复

目的探讨嗅鞘细胞(olfactoryensheathingcells,OECs)移植联合应用尼莫地平,恢复大鼠脊髓损伤后的功能。方法将成年大鼠分为脊髓半切洞损伤组(A组),脊髓半切洞损伤 OECs移植组(B组)和脊髓半切洞 OECs 尼莫地平移植组(C组)。手术后应用联合行为评分(CBS),感觉诱发电位(SEP)和运动诱发电位(MEP)检查,测定脊髓功能恢复情况。结果3组CBS得分A组>B组>C组,SEP和MEP潜峰时,均A组>B组>C组。统计分析均差异显著性(P<0.05)。结论移植OECs 尼莫地平能促进损伤脊髓功能的恢复。     

嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤进展

脊髓损伤的治疗一直是科学家和临床医生面临的颇具挑战性问题,近百年来没有多大进展!近年来,髓内细胞移植治疗脊髓横断损伤取得了一定疗效,为严重脊髓损伤的治疗提供了新的方法.其中,移植成髓鞘的细胞取得了较好的疗效,如:雪旺氏细胞,少突胶质细胞,嗅鞘细胞.所有的这些细胞中,嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells OECs)使轴突再生和髓鞘化的效果最好,被许多学者认为是最佳的移植细胞.有可能在脊髓损伤的治疗上取得突破!……     

关于脊髓损伤修复研究策略

我在2003年两次讨论了脊髓损伤的修复[1、2],修复的目标不是损伤节段的神经细胞,而是传导中断的长束及其远端瘫痪肢体的功能有所恢复.至今5年过去了,在脊髓损伤修复研究方面发表了大量文献,特别是有关嗅鞘细胞移植和干细胞移植方面,积累了不少经验,对脊髓损伤修复的认识亦有提高,但从实验结果看,修复损伤脊髓取得运动功能恢复的进展并不大.     

嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的应用前景

介绍嗅鞘细胞在脊髓损伤中的研究进展.嗅鞘细胞是神经系统中具有促进神经轴突再生,引导轴突正确生长的独特细胞,为脊髓损伤的修复带来了希望,具有较好的临床应用前景.目前许多研究将基因工程技术和组织工程技术应用于其移植过程中,取得了一定的成果.     

嗅鞘细胞移植调节星形细胞活性促进急性脊髓损伤大鼠神经功能恢复

[目的]探讨嗅鞘细胞(OECs)对急性脊髓损伤大鼠星形胶质细胞(AST)激活的影响。[方法]乳鼠嗅球制备嗅鞘细胞,制备急性脊髓损伤模型,随机分为3组,空白组:T_(9-11)椎板去除;对照组:T_(10)脊髓损伤,DMEM/F_(12)移植;实验组:T_(10)脊髓损伤,OEC移植。行BBB评分和体感诱发电位检测评价神经功能,Western Blot检测GFAP、CSPG、bFGF表达变化,观察脊髓损伤后星形胶质细胞激活情况及OEC移植对其影响。[结果](1)脊髓损伤后GFAP阳性细胞数目增加,实验组少于对照组,尼氏染色及NF-200阳性细胞数目实验组多于对照组,差异有统计学意义;(2)Western Blot:脊髓损伤后GFAP、CSPG表达增加,bFGF表达下降,OEC干预后,GFAP、CSPG表达较对照组下降。bFGF表达增加;(3)神经功能:脊髓损伤BBB评分及SEP显示治疗组大鼠神经功能得到改善。[结论]嗅鞘细胞移植可抑制星形胶质细胞增殖,调节因子分泌,促进大鼠脊髓损伤恢复。     

神经营养素-3基因修饰嗅鞘细胞移植对急性脊髓损伤作用的实验研究

目的：观察神经营养素-3（NT-3）基因转染嗅鞘细胞（OEG）移植对急性大鼠脊髓损伤的作用。方法：将自行构建的质粒DEGFP-NT3应用脂质体介导的方法导人体外培养的嗅鞘细胞，并移植入急性脊髓损伤大鼠体内．连续观察12周．与接受单纯OEG、空白质粒转染OEG移植的脊髓损伤大鼠进行比较。结果：移植转染DEGFP-NT3后的OEG能在体内长期存活，表达NT-3基因，与对照组比较能更好地促进脊髓损伤区轴突的再生和后肢功能的恢复。结论：OEG是脊髓损伤基因治疗较好的受体细胞。转染NT-3基因的OEG移植后可以在体内较长时间存活．能明显促进急性脊髓损伤神经纤维的再生和功能恢复，为基因修饰嗅鞘细胞在脊髓损伤治疗中的应用提供了实验和理论依据。     

嗅球组织块和细胞悬液移植对脊髓损伤的修复

目的探讨嗅球组织块与嗅球细胞悬液髓内移植修复脊髓损伤的可行性和疗效。方法将Wistar大鼠做成脊髓半切模型,随机分成3组,髓内分别移植嗅球组织块、嗅球细胞悬液及DMEM培养液,分期进行功能联合行为学评分(CBS)及组织学检查,评价对脊髓修复情况。结果嗅球组织块与嗅球细胞悬液髓内移植3周后各时段CBS评分明显高于DMEM组(P<0.05),组织学显示前两组有嗅鞘细胞修复的轴突再生。结论嗅球组织块与嗅球细胞悬液髓内移植修复脊髓损伤不但简化了操作而且有较好的疗效,为临床应用提供了实验依据。