脱氢表雄酮对鼠成骨细胞及CD4+T细胞协同刺激分子表达的影响

目的探讨脱氢表雄酮（DHEA）对成骨细胞（osteoblasts，OB）及CD4^＋T细胞表达协同刺激分子的调控作用。方法颅骨酶解法培养鼠OB，体外模拟雌激素撤退；免疫磁珠细胞分选（rnagnetic cell soaing，MACS）法分离CD4^＋T细胞；将OB或CD4^＋T细胞分为对照组、E2及DHEA处理组，并以LPS刺激；以流式细胞术分析OB表面CD80、CD86以及CD4^＋T细胞表面CD28、CTLA-4的表达。结果经E2及DHEA处理后，OB表达CD80、CD86显著增加（P〈0．05，P〈0．01）；CSA可降低对照组及DHEA处理组OBCDS0、CD86的表达（P〈0．01）。除DHEA组CD28^＋T细胞百分比增加外（P〈0．05），其余各组CD4^＋T细胞CD28和CTLA-4的表达无显著改变（P〉0．05）。结论DHEA可上调鼠OB协同刺激分子CD80、CD86表达，该作用可被CsA阻滞；DHEA还上调CD4^＋T细胞CD28的表达，提示可改善骨．免疫调节网络。     

慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞功能状态与HBV载量的关系

目的：探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血树突状细胞功能状态与HBV载量的关系。方法：采集23例CHB患者和8例健康人的抗凝外周静脉血，分离外周血单个核细胞（PBMCs），在重组人白细胞介素4和重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的作用下培养使DCs增殖、成熟，以间接免疫荧光流式细胞技术分别检测DCs表面CD80、CD86、HLA-DR及ICAM-1的表达；以ELISA法检测DCs培养上清液中IL-12的水平；将培养成熟的DCs与HBsAg共同孵育，用丝裂霉素C处理后再与自体PBMCs共同培养，在培养结束前12小时加入^3H-TDR，收集细胞，以β液闪计数仪测定cpm值；同期用定量聚合酶链反应技术测定CHB患者外周血HBV载量。结果：患者DCs表面CD86、HLA-DR和ICAM-1的表达水平，DCs的抗原提呈能力及其分泌IL-12的水平均显著低于健康对照组；CD80、CD86、HLA-DR及ICAM-1的表达与HBV载量呈显著负相关关系（分别为P〈0．01、P〈0．01、P〈0．001和P〈0．001）；DCs的抗原提呈能力及其分泌IL-12的水平也与HBV载量呈显著负相关关系（分别为P〈0．001和P〈0．01）。结论：CHB患者外周血DCs的成熟和功能存在障碍，DCs的功能状态与血液中HBV的载量密切相关，并可能对HBV的清除产生重要的影响。     

初发系统性红斑狼疮患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+和CD4~+CD25~-Foxp3~+T细胞

目的：研究初发系统性红斑狼疮患者（Systemic lupus elythematosus，SLE）外周血CD4^＋T细胞中CD25和Foxp3表达及其在SLE发病中的意义。方法：根据SLE疾病活动积分（SLEDAI）将初发SLE患者分为活动组（10例）和不活动组（11例），流式细胞仪检测治疗前后外周血CD4^＋T细胞中CD25、Foxp3和CD127表达百分率，并对其与SLE临床活动度、尿蛋白、补体和anti-ds-DNA相关性进行研究。结果：初发活动组和不活动组SLE患者CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞表达百分率分别为（1．91％～6．75％）和（2．74％～7．01％），与正常对照（2．11％～9．90％）相比没有统计学差异（P=0．524，P=0．794）；且初发SLE患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞在体外增殖反应和增殖抑制功能与正常对照相比无明显差别（P=0．174，P=0．689）；外周血CD4^＋CD25^-Foxp3^＋T细胞百分率在初发活动组（3．71％～10．94％）和不活动组（2．97％～7．69％）SLE患者均比正常对照（1．01％～3．62％）显著增高（P〈0．01和P〈0．01）；而CD4^＋CD2^＋Foxp34^-T百分率在初发活动组SLE患者（1．19％～9．23％）显著低于正常对照（2．67％～11．26％）和初发不活动组SLE患者（3．73～8．27％）（P=0．039，P=0．048）；与CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞类似，90％左右的CD4^＋CD25一Foxp3^＋T细胞不表达或低表达CD127，其百分率与anti-ds-DNA浓度呈正相关，且尽管未达到统计学意义，但激素和免疫抑制治疗后其水平下降。结论：初发未经治疗的SLE患者CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞数量和功能无明显异常，而CD4^＋CD25^-Foxp3^＋T细胞数量增多，与SLE疾病活动相关，可能具有调节功能。     

慢性肝脏疾病中CD3^-CD161^＋NK和CD3^＋CD161^＋NKT细胞亚群的变化研究

目的探讨CD3^-CD161^＋NK、CD3^＋CD161^＋NKT细胞在慢性肝炎／肝硬化及肝细胞癌患者肝脏组织及外周血中表达及意义。方法利用流式细胞仪对31例肝细胞癌患者、59例慢性肝炎／肝硬化患者肝脏组织及外周血、15例正常肝脏组织、48例正常人外周血中的CD3^-CD161^＋NK和CD3^＋CD161^＋NKT进行定量分析。结果慢性肝炎／肝硬化组CD3^-CD161^＋NK细胞[（13．4±1．3）％]和肝细胞癌癌周组CD3^-CD161^＋NK细胞[（16．7±4．8）％]及远离肝癌组的肝脏组织CD3^-CD161^＋NK细胞[（22．0±4．4）％]与正常肝脏组织CD3^＋CD161^＋NK细胞[（35．1±7．2）％]相比,肝细胞癌癌周肝脏组织内含量最低（t值分别为2．301、2．137、2．034,P〈0．05）;外周血中肝细胞癌组CD3^-CD161^＋NK细胞f（11．6±6．3％）]、CD3^＋CD161^＋NKT细胞[（14．7±6．2）％]与慢性肝炎／肝硬化组CD3^-CD161^＋NK细胞[（10．8±1．7）％]、CD3^＋CD161^＋NKT细胞[（12．5±0．8）％]、正常对照组CD3^＋CD161^＋NK细胞[（7．5±0．8）％]、CD3^-CD161^＋NKT细胞[（13．8±1．7）％]相比肝癌组CD3^-CD161^＋NKT细胞含量最高（t值分别为2．134,2．099,P〈0．05）,肝癌组CD3^＋CD161^＋NKT细胞含量最高（t值分别为2．125,2．154,P〈0．05）。结论由于NK细胞及NKT细胞数量减少或／和活性降低,使肿瘤细胞逃逸了免疫监视,可能促进了肿瘤的发生、发展及转移。     

补肾宁心方对鼠成骨细胞协同刺激分子表达的升调节作用

目的：探讨补肾宁心方药物血清对成骨细胞（OB）及CD4^＋T细胞协同刺激分子表达的调控作用。方法：颅骨酶解法培养OB，体外模拟雌激素撤退；MACS法分离CD4^＋T；将OB或CD4^＋T分别予以20％对照鼠血清、E2及20％中药血清培养并以LPS刺激，流式细胞术分析OB表面CD80、CD86以及CD4^＋T细胞表面CD28、CTLA-4的表达。结果：E2及中药血清组OB表面CD80、CD86的表达显著增加（P〈0．01）；CsA可降低对照鼠血清组及中药血清组OB表面CD80、CD86的表达（P〈0．01）；各组CD4^＋T细胞CD28和CTLA4的表达无显著改变（P〉0．05）。结论：补肾宁心方可上调OB协同刺激分子CD80、CD86表达；该作用可被CsA阻滞；而对T细胞CD28／CTLA-4表达无显著影响，其免疫学意义有待进一步研究：     

白细胞CD64、CD16在新生儿脐血中的表达

目的 探讨新生儿脐血中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞CD64、CD16表达的临床特点。方法 对我院近2个月产科顺产分娩的健康足月新生儿共20例，利用流式细胞技术进行脐血中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞CD64、CD16表达的测定，与同期30例健康成人检测结果比较，以SPSS10．0软件进行统计学处理。结果 脐血中性粒细胞CD64表达的平均荧光道数（171．23±83．97道尔顿），高于成人对照组（98．05±44．92道尔顿），差异有显著性意义（P〈0．01）；而CD16的表达（939．12±140．61道尔顿）明显低于对照组（1269．44±107．35道尔顿）（P〈0．01）。脐血淋巴细胞CD64、CD16表达的平均荧光道数（37．66±4．85道尔顿、84．42±51．23道尔顿）与成人淋巴细胞CD64、CD16的表达相比较（34．77±5．32道尔顿、81．07±50．11道尔顿）无显著性差异（P〉0．05）。脐血单核细胞CD64表达的平均荧光道数（291．08±118．91道尔顿）与成人单核细胞CD64（256．61±143．02道尔顿）比较，差异无显著性意义（P〉0．05）；而CD16的表达（67．99±19．46道尔顿）较对照组（49．60±17．75道尔顿）明显升高（P〈0．01）。结论 脐血中性粒细胞CD64高水平表达，而CD16的表达降低；单核细胞CD16的表达升高。     

慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞CD8+CD38+的检测意义

目的：通过测定慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞CD8^＋CD38^＋的表达及门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBIL）、凝血酶原时间（PT），旨在为治疗慢性乙型肝炎提供有用的参考指标。方法：流式细胞术检测38例慢性乙型肝炎、14例肝硬化患者外周血淋巴细胞CD8^＋CD38^＋细胞的百分率；同时测定AST、TBIL和PT。结果：（1）慢性乙型肝炎组CD8^＋CD38^＋、CD38^＋细胞均明显高于正常组（P〈0．01，P〈0．01），肝硬化组CD8^＋CD38^＋、CD38^＋细胞均明显高于正常组（P〈0．05，P〈0．05）。肝硬化组CD8^＋CD38^＋、CD8^＋细胞均明显低于慢性乙型肝炎组（P〈0．05，P〈0．05）。（2）慢性乙型肝炎轻、中、重各组之间比较，中度组CD8^＋CD38^＋高于轻度组（P〈0．05），重度组CD8^＋CD38^＋、CD8^＋、CD38^＋均高于轻度组（P〈0．05，P〈0．05，P〈0．05）；重度组CD38^＋高于中度组（P〈0．05）；肝硬化组CD8^＋CD38‘均明显低于轻、中、重各组（P〈0．05，P〈0．01，P〈0．01），肝硬化组CD8^＋低于重度组（P〈0．01）。（3）慢性乙型肝炎患者AST、TBIL、PT不正常组CD8^＋CD38^＋均高于AST、TBIL、PT正常组。结论：慢性乙型肝炎患者CD8^＋CD38^＋细胞明显升高，表明慢性乙型肝炎患者细胞免疫处于异常激活状态，并与肝功能损伤有一定的相关性。慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞CD8^＋CD38^＋的测定，对病情分析和诊断有一定的临床参考价值。     

T淋巴细胞亚群检测在肾移植排斥反应与环孢霉素A中毒鉴别诊断中的应用

目的探讨外周血淋巴细胞亚群检测在人类同种异体肾移植术后急性排斥反应与免疫抑制剂环孢霉素A（cyclosporine A，CSA）中毒的诊断与鉴别诊断中的价值。方法采用四色流式细胞技术对26例肾移植术后肾功能正常、11例急性排斥反应、10例环孢霉素A中毒患者外周血淋巴细胞亚群中CD3^＋、CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋细胞的百分比进行检测。结果肾功能正常组、急性排斥反应组与环孢霉素A中毒组外周血淋巴细胞中CD3^＋细胞的百分比分别为71．83％±9．65％、73．29％±8．85％、72．06％±12．04％，3组比较差异无统计学意义；CD3^＋CD4^＋细胞的百分比分别为38．69％±9．21％、49．58％±8．41％、40．15％±9．98％，急性排斥反应组与正常组和CSA中毒组比较差异有显著统计学意义（P〈0．01）；CD3^＋CD8^＋细胞百分比分别为29.28％±9．02％、19．18％±5.35％、30．86％±9．19％，急性排斥反应组与正常组和CSA中毒组比较差异有显著统计学意义（P〈0．01）；CD3^＋CD4^＋／CD3^＋CD8^＋分别为1．76±0．97、2．92±0．71、1．81±0．92，急性排斥反应组与正常组和CSA中毒组比较差异有显著统计学意义（P〈0．01）。结论检测外周血淋巴细胞亚群的变化，对肾移植术后急性排斥反应和环孢霉素A中毒有鉴别诊断的价值。     

自身免疫性肝炎CD4+CD25+high调节性T细胞的研究

目的探讨CD4^＋CD25^＋high调节性T细胞（Tr）在自身免疫性肝炎（AIH）发病中的作用。方法用流式细胞仪技术比较分析AIH患者16例、慢性乙型肝炎（CHB）22例及键康正常人20例外周血中的CD4^＋CD25^＋high细胞，同时用免疫组织化学法检测AIH和CHB患者肝组织Foxp3的表达情况。结果AIH组外周血中CD4^＋CD25^＋high／CD4^＋百分比显著低于正常组（P〈0、05）和CHB组（P〈O．01），并且CHB组显著高于正常组（P〈0．05）；同时AIH组外周血中CD4^＋ T细胞也显著高于CHB组（P〈0．01））；肝组织Foxp3^＋细胞主要分布于肝小叶内窦周隙、汇管区，AIH组肝组织Foxp3^＋表达显著低于CHB组（P〈0．01）。结论CD4^＋CD25^＋high Tr细胞下降可能是自身免疫性肝炎发病的原因之一。     

急性早幼粒细胞白血病中CD117和CD34共表达的临床意义

目的：研究CD117和CD34在成人急性非淋巴细胞自血病（Acute nonlymphoblastic leukemia，ANLL）M1～M2型和急性早幼粒细胞白血病（Acute promyelocytic leukemia，arE）M3患者中的表达，重点探讨M3患者CD117和CD34共表达（CD117／CD34共表达）的临床意义。方法：将研究病例分为M1～M2和M3二组，采用流式细胞术（Flow cytometery，FCM）随机检测54例M3和63例M1～M2二组初诊患者骨髓单个核细胞（BMMNC）髓系抗原CD117和干（祖）细胞抗原CD34的表达；比较M1～M2和M3二组ANLL患者中CD117、CD34表达的阳性率的差异，以及CD13、CD33和CD117分别与CD34共表达的阳性率差异。结果：CD117在M1～M2组患者中表达的阳性率是71．4／％（45／63），在M3组表达的阳性率为66．7％（36／54），差异无统计学意义（P=0．58）；CD34在M1～M2和M3二组中表达的阳性率分别为66．7％（42／63）和11．1％（6／54），差异有统计学意义（P=0．000）；二组ANLL的CD117／CD34共表达阳性率分别为71．1％（45／63）和7．4％（4／54），其差异有统计学意义（P=0．000）。结论：CD117可作为AL的髓系免疫学标志，但其在ANLL中的表达缺乏系列内阶段特异性。M3患者的CD34表达和CD117／CD34共表达的阳性率低于M1～M2者；CD117／CD34共表达可作为M1～M2和M3鉴别诊断的免疫学分型参考指标。     

CTLA4Ig可诱导T淋巴细胞对氧化修饰低密度脂蛋白的免疫无反应性

 目的 研究融合蛋白CTLA4Ig对氧化修饰低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的T淋巴细胞特异性免疫反应的作用，探索预防和延缓动脉粥样硬化发生和发展的新途径。方法 从健康成人外周血分离单核细胞，加入500 IU/ml的重组人粒单细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）和500 IU/ml的重组人白细胞介素4（rhIL-4），培养6 d。取 1×106个细胞以流式细胞仪检测CD14的表达，其余细胞分为4组，分别加入细菌脂多糖（LPS）30 ng/ml（LPS 组）、LDL 10 μg/ml（LDL 组）、ox-LDL 10 μg/ml（ox-LDL组）和相同体积的PBS（PBS组），作用48 h，以流式细胞仪检测CD86和HLA-DR的阳性表达率和平均荧光强度（MFI）。将各组DC与同种异体T淋巴细胞以1:5和1:10的比例混合进行同种异体混合淋巴细胞增殖反应（MLR），其中ox-LDL 组在1:5的试验中分为4个亚组，分别给予加入1.25、0.62、0.31 μg/ml的CTLA4Ig和不加CTLA4Ig的处理，各组细胞继续培养 4 d，以噻唑蓝（MTT）比色法检测T淋巴细胞增殖活性，结果以刺激指数（SI）表示。结果 细胞培养6 d后CD14的阳性表达率为2.9%，证实已由单核细胞转化为DC。LPS组、ox-LDL组CD86阳性表达率（96.0%±8.8%，97.7%±11.4%）和HLA-DR阳性表达率（90.3%±8.8%，90.9%±7.0%）均明显高于LDL组（90.0%±10.2%，84.4%±9.6%）和PBS组（87.3%±8.4%，83.6%±7.0%）（均P<0.05），ox-LDL组CD86 MFI（73.4±6.6）和HLA-DR MFI（87.0±7.1）均明显高于LDL组（40.0±7.4，55.0±7.7，均P<0.01）和PBS组（54.6±8.2，P<0.01；70.2±6.7，P<0.05）。在MLR中，DC:T细胞=1:5和1:10两种条件下，LPS组、ox-LDL组SI均明显高于LDL组和PBS组（均P<0.05）。在ox-LDL组的MLR中，以1.25、0.62、0.31和0 μg/ml的CTLA4Ig处理的各亚组SI分别为0.96±0.30，1.12±0.33，1.29±0.28和1.64±0.37，CTLA4Ig 浓度为1.25 μg/ml时，ox-LDL激发的同种异体MLR已被完全抑制。结论 ox-LDL可作为抗原被DC递呈，激发同种异体MLR；CTLA4 Ig能明显抑制该作用，诱导T细胞对ox-LDL的免疫无反应。这一结果为动脉粥样硬化防治的研究提示了新的思路。     

Regulation of CD80/B7-1 and CD86/B7-2 molecule expression in human primary acute myeloid leukemia and their role in allogenic immune recognition

Clinical data and animal models afford evidence for anti-leukemia immunity in humans, but the interactions critical for blast cell recognition are unresolved. Expression of B7 molecules by antigen-presenting cells (APC) provides co-stimulatory signals to T lymphocytes via CD28 and CTLA-4 which prevent the induction of alloantigen-specific tolerance. Conversely, expression of CD40 ligand by stimulated T cells activates APC via CD40. In human hematological B cell malignancies (follicular lymphoma and chronic lymphocytic leukemia), the defect in alloantigen presentation of tumoral cells can be repaired by up-regulation of B7 and other co-stimulatory molecules via CD40. We studied the role of B7 molecules in alloimmune recognition and the various ways to improve the antitumoral response on peripheral blood leukemic cells from 20 patients with a diagnosis of primary acute myeloid leukemia (AML). We focused on myelo/monocytic M4/M5 French-American-British classification subtypes which are considered as the neoplastic counterpart of normal monocytes, a prototypic APC. In one-way mixed lymphocyte reaction of CD4+ T cells against leukemic cells, differences in B7-1, B7-2 or CD40 expression by AML cells did not induce specific cytokine secretion; interleukin (IL)-2 and interferon (IFN)-γ were detected but not IL-4, corresponding to a Th1 pattern. Blockade experiments showed that proliferation and IFN-γ secretion only partially depended on B7 molecules, which in contrast had a pivotal role in IL-2 synthesis. In contrast with murine models which suggest a pivotal role for CD80/B7-1 in the immune response against AML, our data support a greater role for CD86/B7-2, in line with the baseline expression of CD86/B7-2 and lack of CD80/B7-1 on most M4/M5 AML cells. AML cell stimulation via CD40: (1) significantly improved IL-2 secretion but not proliferation of responding T lymphocytes, (2) increased CD54/ICAM-1 expression in three quarters of cases, (3) failed in most cases to induce CD40-specific CD80/B7-1 up-regulation and (4) had a weak effect on CD86/B7-2 expression. These data contrast with the very efficient up-regulation of both B7 co-stimulatory molecule expression and tumoral cell alloimmune recognition following CD40 stimulation in B cell malignancy models. The role of the defective B7 molecule up-regulation by the CD40 pathway in inefficient tumor immunogenicity of primary AML cells has to be further investigated, in particular using transfection experiments of CD80/B7-1-deficient AML cell lines. From our in vitro data we conclude that B7 molecules play an important role in the alloimmune surveillance of AML as suggested by the high B7 molecule dependency of IL-2 secretion. Nonetheless, the contribution of B7 molecules to alloimmune T cell proliferation against primary AML cells in human and the way to improve it – regulation via CD40 in particular – differ from B cell malignancies and murine models, suggesting the requirement for specific strategies in the development of antitumor immunity.     

CD64在急性白血病免疫分型中的意义

目的探讨CD64在急性白血病免疫分型中的意义。方法应用直接荧光标记法,经流式细胞术对116例急性髓系白血病(AML)和70例急性淋巴细胞白血病(ALL)进行免疫表型的检测。结果 AML组CD64的表达阳性率明显高于ALL组(41.4%vs 2.9%,P<0.01)。CD64在M5和M4的表达阳性率最高,分别为77.1%和55.6%。CD64的阳性表达率在M0(0)、M1(0)、M2(7.9%)明显低于M3(47.1%)、M4与M5(P<0.01)。各亚型CD64阳性病例中,M4、M5的CD64阳性细胞表达率分别为(62.5±24.7)%、(68.7±25.9)%,均明显高于M2(28.3%±5.7%)、M3(34.3%±6.3%)(P<0.01)。CD64对诊断AML的灵敏度优于CD14,其特异度优于CD117、CD33及CD13。虽然CD64诊断M4\M5的特异度较CD14稍差(82.5%vs 100%),但是灵敏度高于CD14(69.8%vs 41.5%)。结论 CD64可作为辅助诊断AML的髓系标志抗原,有助于提高M4/M5的检出率及其与其他AML亚型的鉴别诊断。     

丁硫氨酸硫酸亚胺早期处理抑制单核细胞向树突状细胞的分化

 目的 研究细胞氧化-还原态对树突状细胞（DC）分化和功能的影响。 方法 细胞氧化-还原态的调控应用特异性谷胱甘肽（GSH）合成抑制剂丁硫氨酸硫酸亚胺（BSO）。自健康人外周血单个核细胞（PBMC）分离单核细胞，在含重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和 IL-4的RPMI 1640 培养液中诱导分化 DC。将单核细胞分为 BSO 早期（培养第 1 天）用药组、BSO 晚期（培养第 5 天）用药组和不予 BSO 处理的对照组。BSO 用药剂量为终浓度 1 mmol/L，换液时补加相应剂量的 BSO。培养第 5 天，分别给予加入脂多糖（LPS）100 ng/ml（LPS刺激组）或重组人干扰素 （rhIFN- ）20 U/ml（IFN- 刺激组）或不予刺激（无刺激组）的处理；培养第 7 天收集各组悬浮细胞进行表型分析和功能检测，并在倒置显微镜下观察 BSO 早期用药组和对照组贴壁细胞。表型分析采用特异性荧光标记单抗及流式细胞仪。功能检测采用混合淋巴细胞反应试验，将经丝裂霉素C 处理的 DC（刺激细胞）与异基因非贴壁 PBMC（反应细胞）混合（刺激细胞:反应细胞分别为 1:25、1:50、1:100）培养 5 d 后，用3H-胸腺嘧啶核苷法检测淋巴细胞增殖情况。 结果 培养第 7 天，镜下观察显示 BSO早期用药组贴壁细胞明显多于对照组；流式细胞仪检测显示 BSO 早期用药组 CD86 和CD1a表达明显低于对照组，CD86 平均荧光强度（MFI）分别为311.3 ± 97.3、552.0 ± 97.9（P = 0.01），CD1a 分别为52.2 ± 22.2、121.2 ± 4.2（P = 0.03）；BSO早期用药组及对照组3H-胸腺嘧啶核苷掺入量（cpm）在刺激细胞:反应细胞＝1:25时分别为 1587 ± 1458 和9336 ± 1333（P=0.015）；加入rhIFN- 20 U/ml 刺激后二组 CD86 MFI 分别为 495.9 ± 143.9 和 800.4 ± 27.7（P = 0.06），而加入 LPS 100 ng/ml 刺激后二组CD86 MFI 分别为 1736.7 ± 375.7 和 1960.8 ± 494.5（P > 0.05）。表明单核细胞分化早期加入 BSO 对 DC 的分化和功能有抑制作用，并对 IFN- 诱导DC成熟有抑制作用。BSO 晚期用药组 DC 抗原提呈功能分子的表达及与对照组比较均无明显差异，对 LPS 或 rhIFN- 刺激的 DC成熟也无明显影响。 结论 BSO 早期持续处理能抑制单核细胞向 DC 细胞的分化，细胞内氧化-还原态水平可能是影响 DC 分化成熟的关键因子。     

同种异体移植肾组织中CD80和CD86表达的观察

目的观察同种异体肾移植肾组织中CD80和CD86的表达,以探讨其在急性肾移植细胞性排异反应中可能的致病作用。方法以正常肾组织(NC组)为对照,采用免疫组织化学方法观察急性细胞性排异反应组(ACR组),无急性细胞性排异反应组(N-ACR组)肾组织中CD80和CD86的表达及肾间质中浸润CD4+和CD8+淋巴细胞数。结果ACR组肾小管上皮细胞的CD80和CD86表达较N-ACR组增高,其肾间质中CD4+和CD8+淋巴细胞数也较N-ACR组和NC组明显增高,同时N-ACR组肾间质的CD4+和CD8+表达较NC组明显增高。结论肾小管上皮细胞作为抗原提呈细胞参与了同种异体肾移植急性细胞性排异反应过程。     

GM-CSF与IL-21基因共转染卵巢癌细胞及其对NK细胞活性的影响

 目的 探讨粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）与 IL-21 基因共转染的体外抗肿瘤效应。 方法 制备 pRSC-GM-CSF- IL21 重组质粒，再用脂质体将 质粒 pRSC-GM-CSF、pRSC-IL21 和 pRSC-GM-CSF-IL21 分别转染人卵巢癌 SKOV3 细胞（依次命名为 SKOV3/GM- CSF、SKOV3/IL21、SKOV3/GM-CSF-IL21 细胞）。以 RT- PCR 方法检测 GM-CSF 与 IL-21 表达；倒置相差显微镜观察各组细胞形态学变化；噻唑蓝法测定各组细胞增殖活性；流式细胞仪检测各组细胞细胞周期分布，细胞表面 HLA-ABC、主要组织相容性复合体 I 类相关基因（MIC A/B）、细胞间黏附分子 1（ICAM-1）的表达，以及各组细胞培养上清液对 NK 细胞活性的影响。以未转染的 SKOV3 细胞和转染空质粒 pRSC 的细胞（SKOV3/Neo）为对照。 结果 经酶切与测序鉴定，pRSC-GM-CSF-IL21 重组体构建正确，共转染 SKOV3 细胞中有目的基因 GM-CSF、IL-21 的表达。各组细胞的形态学、增殖特性、细胞周期分布及 HLA-ABC 表达无明显变化。SKOV3、SKOV3/Neo、SKOV3/GM-CSF、SKOV3/IL21 和 SKOV3/GM-CSF-IL21 细胞的 MIC A/B 表达量分别为 19.24% ± 2.31%、31.11% ± 3.76%、37.27% ± 3.04%、54.97% ± 4.77% 和 63.94% ± 5.90%；ICAM-1 表达量分别为 35.88% ± 3.06%、37.75% ± 4.09%、68.59% ± 4.84%、78.53% ± 5.78% 和 84.10% ± 3.98%；加入各组细胞培养上清液后 NK 细胞活性分别为 31.8% ± 3.6%、42.7% ± 3.3%、54.7% ± 7.4%、55.9% ± 4.4% 及 63.4% ± 6.4%。SKOV3/GM-CSF-IL21 细胞分别与 SKOV3、SKOV3/ Neo 细胞比较，3 项指标的差异均有统计学意义（P < 0.01）。 结论 GM-CSF 与 IL-21 基因共转染可上调 SKOV3 细胞表面 MIC A/B 与 ICAM-1 表达，表达产物可增强 NK 细胞活性，这有助于免疫细胞激活，增强抗肿瘤效应。     

缺氧状态下体外培养成骨细胞血管内皮生长因子和骨形态发生蛋白2的表达及意义

目的研究缺氧对体外培养成骨细胞血管内皮生长因子（VEGF）和骨形态发生蛋白2（BMP-2）表达的影响及意义。方法采用酶消化法获取人成骨细胞并进行原代培养，倒置显微镜下观察成骨细胞的生长形态；采用Gomori改良钙钴法和免疫组织化学SABC法分别检测原代培养成骨细胞碱性磷酸酶（ALP）和骨钙素（OCN）的表达，进行原代培养成骨细胞鉴定。细胞传至第2代时，按继续培养条件的不同将细胞分为缺氧组（氧分压〈4．8kPa、氧容积比〈5％）和常氧组，在传代培养24、48、72h时分别收集2组细胞，采用免疫组织化学SABC法检测VEGF和BMP-2的表达，应用图像分析系统进行半定量检测，结果以平均灰度值表示，平均灰度值低示表达水平高。结果原代培养成骨细胞可表达ALP和OCN，初步确定经体外培养获得了具有生物活性的成骨细胞。在培养24、48、72h时，缺氧组成骨细胞VEGF表达水平均明显高于常氧组（平均灰度值分别为123．53±7．38 vs 141．21±6．03、116．45±6．34 vs 138．37±5．04、108．11±5．37 vs 136．65±6．54，均P〈0．01），且缺氧组成骨细胞VEGF表达水平随缺氧时间延长而逐渐升高。缺氧组成骨细胞BMP-2表达水平在培养24h时明显高于常氧组（平均灰度值为143．28±2．82 vs 146．91±2．06，P〈0．01），而在培养48、72h时与常氧组比较，差异均无统计学意义。结论缺氧可诱导成骨细胞VEGF的表达上调；而缺氧延长则不利于成骨细胞BMP-2的表达。缺氧对VEGF和BMP的早期表达调控可能与骨修复的启动相关。     

Impact of cellular CD71 (transferrin receptor 1) expression in Egyptian acute leukemia: correlation with clinicopathologic features

Cellular transferrin receptor 1 (CD71) has been identified as a proliferation marker. Inferior outcome with higher expression was observed in many solid tumors. This study objected to assess the expression of CD71 in patients with acute leukemia and to address its prognostic significance and relations to clinicopathologic features. The study included 34 acute myeloid leukemia (AML) and 64 acute lymphoblastic leukemia (ALL) newly diagnosed cases from Mansoura Oncology Center. CD71 was analyzed on blast cells by flow cytometry. CD71 expression was significantly elevated in both AML and ALL. Antigen expression apparently increased in T-ALL, while in AML there was a trend toward a gradual increase of antigen expression in relation to maturation evidence of myeloid subtypes. CD71 expression correlated positively with total leukocyte count in ALL cases and negatively with platelet count in AML cases. In ALL, higher CD71 expression was associated with higher relapse rate and was an independent prognostic factor of overall survival (HR 1.8; 95 % CI 1.2–4.1). In conclusion, CD71 is overexpressed in acute leukemia; it predicts adverse clinical outcome in ALL. In addition, CD71 antagonism could be a possible therapeutic target in acute leukemia.     

CD80和CD86在肾细胞癌组织中的表达

目的　观察肾细胞癌细胞中共刺激分子CD80 (B7- 1)和CD86(B7- 2 )的表达 ,以了解共刺激途径在肾细胞癌的肿瘤免疫中的作用和意义。方法　以正常肾组织和癌周组织为对照 ,采用免疫组织化学方法观察肾细胞癌组织中CD80 (B7-1)和CD86(B7- 2 )的表达。结果　CD80和CD86在肾细胞癌组织中的表达的阳性率明显低于癌周组织和正常肾组织 (P <0 0 5 ) ,但癌周组织与正常肾组织的CD80和CD86表达的阳性率无显著差别 (P >0 0 5 )。结论　共刺激分子CD80和CD86在肾细胞癌组织中呈低水平表达。肾细胞癌组织低水平表达共刺激分子可能与肿瘤细胞“逃避”机体的免疫攻击有关。     

急性髓系白血病中CD64表达的敏感性及特异性研究

研究急性髓系白血病(AML)免疫分型中CD64的敏感性和特异性.用系列抗原对132例AML患者的骨髓细胞进行直接标记,并用流式细胞术进行分析.结果表明:在AML中,CD64对急性粒-单细胞白血病(M4)和急性单核细胞白血病(M5)中敏感性最高(分别为96.4%和100%),在其他AML(M0、M1、M2、M3,M6、M7)中表达均较低.CD64对M4和M5中的特异性为56.5%.因此,CD64有助于AML中M4、M5的鉴别诊断.