紫杉醇对大鼠肺血管平滑肌细胞表型和细胞骨架的影响

目的 探讨不同浓度的紫杉醇对大鼠肺血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及其对细胞骨架和表型转化的影响.方法 采用MTT、[3H]-胸腺嘧啶掺入法检测不同药物浓度紫杉醇对血小板源性生长因子BB( PDGF-BB)诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响;采用蛋白质免疫印迹法(Westernblot)对平滑肌α肌动蛋白及平滑肌22α蛋白(SM22α)表达活性进行检测;利用激光共聚焦显微镜观察F-肌动蛋白的改变.结果 与PDGF组比较,紫杉醇药物干预组细胞增殖受到明显抑制,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测抑制率分别为40.0％,30.0％,18.0％ (P＜0.01),[3H]-胸腺嘧啶掺入法测得的细胞增殖抑制率分别为45.4％,35.4％,21.6％ (P ＜0.01),平滑肌α肌动蛋白和SM22α表达均升高,细胞骨架F-肌动蛋白的荧光强度明显下降.结论 在PDGF-BB存在的情况下,紫杉醇可剂量依赖性抑制血管平滑肌细胞的增殖,通过作用于微丝细胞骨架促进血管平滑肌细胞由合成型向收缩型转化,进而影响血管平滑肌细胞的增殖.     

紫杉醇对兔血管内皮和平滑肌细胞增殖影响的时间效应关系

目的　观察紫杉醇对兔血管内皮和平滑肌细胞增殖影响的时间效应关系 ,探讨药物洗脱支架植入后 ,损伤血管修复过程中延迟再狭窄发生的部分细胞学机制。方法　将兔平滑肌接种于上室、内皮细胞接种于下室建立细胞共培养体系 ,根据下室中内皮细胞生长状态随机分为融合内皮组、对数内皮组、平滑肌对照组和内皮对照组 ,于融合内皮组和对数内皮组下室加入 10nmol/L紫杉醇干预 2 0min ,分别于干预前、干预后第 1天、第 3天、第7天和第 10天检测平滑肌细胞和内皮细胞氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入率 ,并作细胞计数。结果　紫杉醇干预后第1天和第 3天 ,对数内皮组和融合内皮组平滑肌细胞氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入率和细胞计数均明显低于平滑肌对照组 (对数内皮组和融合内皮组平滑肌细胞氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入率分别为第 1天 5 4 %± 4 %和 5 6 %±5 % ,第 3天 6 5 %± 3%和 6 3%± 3% ;细胞计数分别为第 1天 6 4 %± 6 %和 6 2 %± 4 % ;第 3天 6 8%± 5 %和 6 6 %±5 % ,P <0 .0 5 )。对数内皮组内皮细胞氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入率和细胞计数明显低于内皮对照组 (对数内皮组内皮细胞氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入为第 1天 75 %± 9% ,第 3天 81%± 6 % ;细胞计数为第 1天 72 %± 7% ,第 3天 80 %± 7% ;P <0 .0 5 ) ;     

白细胞介素-1对血管平滑肌细胞的作用及其临床意义

本文综述了白细胞介素-1对血管平滑肌细胞的促增殖、迁移和凋亡的作用，及其诱导一氧化氮产生进而舒张血管，诱导粘附等作用，阐述了其多种病理生理意义。     

紫杉醇水蛭素复合物对兔血管平滑肌细胞和内皮细胞增殖与迁移的影响

目的 观察不同浓度紫杉醇水蛭素复合物对兔血管平滑肌细胞(smooth musele cell,SMC)和内皮细胞(endothelial cell,EC)增生、迁移的影响.方法 培养兔血管SMC和EC,建立细胞共培养体系,模拟紫杉醇水蛭素复合物对血管SMC及EC的作用方式,观察不同浓度紫杉醇水蛭素复合物对兔血管SMC及EC的DNA合成、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白表达的影响,测定不同浓度紫杉醇水蛭素复合物对血管SMC及EC的迁移率.结果 溶剂对照组SMC及EC的氚-胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)掺入、PCNA蛋白表达、迁移与空白对照组相比差异均无显著性.大、中、小剂量紫杉醇水蛭素复合物呈浓度依赖地抑制SMC的3H-TdR掺入、PCNA蛋白表达和迁移(n=6,p<0.05);在大、中剂量之间,紫杉醇水蛭素复合物呈浓度依赖地抑制EC的3H-TdR掺入、PCNA蛋白表达和迁移(n=6,p<0.05);但在小剂量组紫杉醇水蛭素复合物对EC的3H-TdR掺入、PCNA蛋白表达和迁移有抑制倾向,但与空白对照组相比差异均无显著性.结论 小剂量的紫杉醇水蛭素复合物可显著抑制兔血管SMC的增生与迁移,但抑制EC的增生与迁移不明显.     

紫杉醇水蛭素复合物对兔血管平滑肌细胞和内皮细胞增殖与迁移的影响

目的观察不同浓度紫杉醇水蛭素复合物对兔血管平滑肌细胞（smooth musele cell,SMC）和内皮细胞（endothelial cell,EC）增生、迁移的影响。方法培养兔血管SMC和EC,建立细胞共培养体系,模拟紫杉醇水蛭素复合物对血管SMC及EC的作用方式,观察不同浓度紫杉醇水蛭素复合物对兔血管SMC及EC的DNA合成、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）蛋白表达的影响,测定不同浓度紫杉醇水蛭素复合物对血管SMC及EC的迁移率。结果溶剂对照组SMC及EC的氚-胸腺嘧啶脱氧核苷（^3H-TdR）掺入、PCNA蛋白表达、迁移与空白对照组相比差异均无显著性。大、中、小剂量紫杉醇水蛭素复合物呈浓度依赖地抑制SMC的^3H—TdR掺入、PCNA蛋白表达和迁移（n=6,P〈0．05）;在大、中剂量之间,紫杉醇水蛭素复合物呈浓度依赖地抑制EC的^3H—TdR掺入、PCNA蛋白表达和迁移（n=6,P〈0．05）;但在小剂量组紫杉醇水蛭素复合物对EC的^3H—TdR掺入、PCNA蛋白表达和迁移有抑制倾向,但与空白对照组相比差异均无显著性。结论小剂量的紫杉醇水蛭素复合物可显著抑制兔血管SMC的增生与迁移,但抑制EC的增生与迁移不明显。     

缺氧及一氧化碳对大鼠血管平滑肌细胞的作用

目的 探讨缺氧及低浓度一氧化碳（ＣＯ）对大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的作用机制。方法 应用改良的Ｌｏｗｒｙ法测ＶＳＭＣ蛋白质含量,Ｆｕｒａ－２荧光指标剂测ＶＳＭＣ内的钙浓度（〔Ｃａ＾２＋〕）,放射免疫环腺苷酸（ｃＡＭＰ）、环一磷酸鸟苷（ｃＧＭＰ）药盒测ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ浓度。结果 （１）缺氧组ＶＳＭＣ内质网扩张,胞浆内出现髓鞘样结构,线粒体肿胀、空泡化。低浓度ＣＯ复合缺氧组ＶＳＭＣ的损害减轻,仅     

失笑散对大鼠血管平滑肌细胞细胞间黏附分子-1表达的影响

目的 探讨失笑散对肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞细胞间黏附分子(ICAM)-1表达的影响及抗动脉粥样硬化的可能机制.方法 取4～6周龄雄性SD大鼠,进行血管平滑肌细胞的原代培养,当细胞纯度达95%以上,取第3～4代细胞用于实验.按照实验设计将培养细胞分为五组:①空白对照组,②模型组,③失笑散低剂量组,④失笑散中剂量组,⑤失笑散高剂量组.采用流式细胞术、逆转录聚合酶链反应,观察失笑散对TNF-α诱导的平滑肌细胞ICAM-1蛋白及mRNA水平表达.结果 TNF-α可诱导血管平滑肌细胞ICAM-1表达增强;而失笑散可降低TNF-α诱导的ICAM-1 mRNA水平及蛋白表达,且呈剂量依赖性.结论 失笑散通过抑制TNF-α诱导的血管平滑肌细胞ICAM-1的表达,延缓了动脉粥样硬化的病变进程.     

血管内皮细胞对平滑肌细胞表型转化的影响

目的分析共培养时大鼠血管内皮细胞(VECs)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化的影响。方法 VSMCs直接种植于培养板表面,VECs则种植于与VSMCs相对的浮胶底面。免疫荧光方法观察和鉴定VECs和VSMCs,RT-PCR和共聚焦显微镜分析表型相关基因的表达。结果原代培养的大鼠VECs呈铺路石样形态,vWF染色阳性。原代培养的大鼠VSMCs免疫荧光染色α-SMA呈阳性。RT-PCR检测结果表明,48h共培养组VSMCs的合成表型相关基因CRBP-1、Smemb的表达水平显著高于单独培养组,分别为1.4倍、1.5倍;72h达到峰值,分别为1.7倍、2.1倍,96h开始下降;共培养组中收缩表型标记物Smoothelin-B和SM-MHC的基因表达水平在48h、72h显著低于单独培养组,96hSmoothelin-B却高于单独培养组。单独培养组上述各基因的变化趋势不变或保持稳定。免疫荧光结果显示SM-MHC蛋白表达在共培养组中96h后从下降转为升高(P<0.05)。结论在共培养体系中,血管内皮细胞对血管平滑肌细胞表型转化的作用表现为先促进向合成型转化,96h后促进向收缩型转化。     

血小板源生长因子对大鼠血管平滑肌细胞表达血管细胞粘附分子1的影响

目的本实验研究血小板源生长因子对血管平滑肌细胞表达血管细胞粘附分子1的影响以及对血管平滑肌细胞与单核细胞粘附的作用。方法利用基因芯片和RT-PCR技术检测鼠主动脉血管平滑肌细胞经血小板源生长因子处理0min、20min、6h后血管平滑肌细胞表达血管细胞粘附分子1的mRNA表达变化;细胞粘附实验观察血管平滑肌细胞经血小板源生长因子分别处理0min、20min、6h后与单核细胞粘附情况。结果血小板源生长因子对鼠血管平滑肌细胞表达血管细胞粘附分子1的表达有显著的诱导作用,其诱导作用在20min即已出现(P<0.05),6h时明显增强(P<0.01)。细胞粘附实验显示随着血小板源生长因子的作用时间的延长,血管平滑肌细胞与单核细胞的粘附率增高,血小板源生长因子处理20min和6h后粘附率是对照组的1.92倍和3.04倍(P<0.05)。结论血小板源生长因子明显诱导血管平滑肌细胞中血管平滑肌细胞表达血管细胞粘附分子1的表达,促进血管平滑肌细胞与单核细胞的粘附,从而参与了损伤早期,白细胞向内膜下迁移的炎症反应。     

老年大鼠血管平滑肌细胞对氧化应激反应的研究

目的观察老年大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）对氧化应激损伤的反应。方法贴块法培养雄性Wistar大鼠胸主动脉VSMC，采用50umol／L H2O2处理细胞6h形成氧化应激，比较老年组和成年组VSMC对氧化应激反应的差异。RT—PCR法检测单核细胞趋化因子-1（MCP-1）mRNA的表达，比色法测定细胞丙二醛（MDA）含量。结果给予H2O2氧化应激前，老年组VSMC的MCP-1mRNA表达及MDA含量无显著差异（P〉0．05）；给予H2O2氧化应激后，老年组VSMC的MCP-1mRNA表达及细胞MDA含量的显著高于成年组VSMC。结论老年大鼠VSMC对氧化应激有着更强烈的反应，这可能是老年期易患动脉粥样硬化性血管疾病的重要机制之一。     

紫杉醇抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖的实验研究

目的 以体外培养的大鼠血管平滑肌细胞为研究对象,探讨紫杉醇对平滑肌细胞增殖的作用.方法 SD大鼠腹腔注射麻醉后,解剖、分离其主动脉,仔细分离血管的平滑肌层并剪成小块置于培养瓶中培养.采用倒置像筹显微镜下观察及α平滑肌肌动蛋白免疫荧光检测对传4代～6代的细胞进行鉴定.根据加入的干预药物将平滑肌细胞分为无血清M199培养基组(A组)、1 nmol/L紫杉醇组(B组)、10 nmol/L紫杉醇组(C组)及100 nmol/L紫杉醇组(D组)共4组,每组均为5个样本.采用流式细胞仪检测不同干预组平滑肌细胞的生长周期,用增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)检测方法 检测细胞的PCNA阳性百分比.结果 培养约2周后出现大量细胞生长,可见致密的细胞层.倒置像差显微镜下观察,细胞呈梭形;随着细胞融合度的增加,可以看到平滑肌细胞特有的"峰-谷"生长现象.培养的血管平滑肌细胞α平滑肌肌动蛋白免疫荧光检测呈阳性,总阳性率大于90%.随着紫杉醇用量的增加,细胞的PCNA阳性百分比呈逐渐减少的趋势,与对照组(A组)比较,10 nmol/L(C组)和100 nmol/L(D组)两种浓度下的紫杉醇引起的PCNA阳性率明显减低.流式细胞仪检测显示,随着紫杉醇用量的增加,细胞S期百分比旱逐渐减少的趋势.与对照组相比,10 nmol/L(C组)和100 nmol/L(D组)两种浓度下的紫杉醇引起的S期百分比明显减低.结论 紫杉醇能够抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖.     

紫杉醇抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖的实验研究

目的以体外培养的大鼠血管平滑肌细胞为研究对象,探讨紫杉醇对平滑肌细胞增殖的作用。方法SD大鼠腹腔注射麻醉后,解剖、分离其主动脉,仔细分离血管的平滑肌层并剪成小块置于培养瓶中培养。采用倒置像差显微镜下观察及α平滑肌肌动蛋白免疫荧光检测对传4代～6代的细胞进行鉴定。根据加入的干预药物将平滑肌细胞分为无血清M199培养基组（A组）、1nmol／L紫杉醇组（B组）、10nmol／L紫杉醇组（c组）及100nmol／L紫杉醇组（D组）共4组,每组均为5个样本。采用流式细胞仪检测不同干预组平滑肌细胞的生长周期,用增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）检测方法检测细胞的PCNA阳性百分比。结果培养约2周后出现大量细胞生长,可见致密的细胞层。倒置像差显微镜下观察．细胞呈梭形：随着细胞融合度的增加,可以看到平滑肌细胞特有的“峰-谷”生长现象。培养的血管平滑肌细胞α平滑肌肌动蛋白免疫荧光检测呈阳性,总阳性率大于90％。随着紫杉醇用量的增加,细胞的PCNA阳性百分比呈逐渐减少的趋势,与对照组（A组）比较,10nmol／L（C组）和100nmol／L（D组）两种浓度下的紫杉醇引起的PCNA阳性率明显减低。流式细胞仪检测显示,随着紫杉醇用量的增加,细胞S期百分比呈逐渐减少的趋势。与对照组相比,10nmol／L（C组）和100nmol／L（D组）两种浓度下的紫杉醇引起的S期百分比明显减低。结论紫杉醇能够抑制大鼠向管平滑肌细朐的增殖．     

氟化钠对血管平滑肌细胞氧化应激水平的影响

目的 研究氧化应激反应中氟对血管平滑肌细胞毒性中的作用机制。方法 对大鼠胸主动脉平滑肌细胞采用组织块培养法。应用生化方法检测细胞内蛋白和丙二醛(MDA)含量及细胞超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的酶活性。结果 随着氟作用时间的延长和氟浓度的增加，细胞内蛋白含量明显下降，在同一时间段MDA含量随着投氟浓度的增加而增加，72h时间段的MDA含量较24h时间段的相同氟作用浓度下MDA明显下降，抗氧化酶SOD、CAT的活性在72h时间段比24、48h时间段的相同氟浓度组活性明显增高。结论 随着氟作用时间的延长，浓度的增加对血管平滑肌细胞有明显毒性，且氧化应激中氟对细胞毒性有重要作用。     

反义c-myc RNA对大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

构建一个含1．53kb反义c－myc片段的逆转录病毒载体PAS-c-myc，将其通过Lipofectin导入PA317细胞并经G418筛选获得分泌病毒上清液的阳性克隆。病毒上清波感染血管平滑肌细胞（SMC）经G418筛选获得抗性克区。DNA印迹杂交证实了反义c-myc片段整合于SMC基因组中。RNA印迹杂交证实了反义c－mycRNA在SMC中得到了表达，且显著降低了SMC中c－mycmRNA的水平。蛋白印迹杂交证实了反义c－mycRNA抑制了c－myc蛋白的翻译。提示：c－myc基因表达在SMC增殖中起重要作用。     

阿托伐他汀对大鼠血管平滑肌细胞分泌基质金属蛋白酶-1的影响

目的观察阿托伐他汀对大鼠血管平滑肌细胞分泌基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的影响。方法培养的大鼠胸腹主动脉血管平滑肌细胞中先加入10 ng/ml的白细胞介素-1β(IL-1β),24 h后加入不同浓度的阿托伐他汀,继续孵育48 h后,采用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测培养上清液中MMP-1的浓度,另外,取阿托伐他汀1×10-5mmol/L浓度,分别在6、244、8 h用同样的方法测培养液上清中MMP-1的浓度。结果随着给药浓度的增加(1×10-7mmol/L、1×10-6mmol/L、1×10-5mmol/L),阿托伐他汀对IL-1β介导的大鼠血管平滑肌细胞分泌MMP-1的抑制作用逐渐增强(加药组MMP-1分泌较对照组分别减少5.18%、11.78%、29.80%),与对照组有统计学差异;随着药物作用时间的延长(6 h、24 h、48 h),阿托伐他汀(1×10-5mmol/L)对大鼠血管平滑肌细胞分泌MMP-1的抑制作用逐渐增强(加药组MMP-1分泌较对照组分别减少17.66%、22.84%、29.80%),与对照组有统计学差异。结论阿托伐他汀呈时间剂量依赖性抑制IL-1β介导的大鼠血管平滑肌细胞分泌MMP-1。     

青蒿素对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :观察青蒿素 (artemisinin ,Art)对体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞 (VSMC)的增殖、DNA合成及细胞周期的影响 ,探讨作用机制。方法 :体外培养大鼠主动脉VSMC ,分为不同浓度的Art组及对照组。观察细胞生长曲线 ;四甲基偶氮唑盐微量酶反应 (MTT)法检测细胞活性 ;3H 胸腺嘧啶脱氧核苷(3H- TdR)掺入法观察其对DNA合成的影响 ;通过HE染色、DNA梯带检测和流式细胞术观察细胞的凋亡并测定细胞周期。结果 :与对照组相比 ,各浓度Art组VSMC计数不同程度减少 ,3H- TdR掺入率降低 ,细胞增殖受抑制 ,VSMC凋亡增加 ,并呈浓度依赖性 ;Art诱导细胞凋亡 ;使细胞周期阻滞于G0 / G1 期。结论 :Art对体外培养VSMC的增殖有抑制作用 ,可能通过抑制细胞DNA合成 ,诱导细胞凋亡及干扰细胞周期等途径发挥作用     

外源性一氧化氮对高血压患者离体动脉平滑肌细胞的增殖作用研究

为探讨原发性高血压（EH）患者血管平滑肌细胞（VSMC）与一氧化氮（NO）的关系以及外源性NO对离体VSMC的增殖作用，采用EH患者肠系膜动脉分离、消化后进行离体VSMC培养。应用一氧化氮合成酶（NOS）诱导剂白细胞介素－1（IL－1）干预，检测NO水平，并用外源性NO药物硝普钠进行干预，研究其对VSMC摄入3H－胸腺嘧啶核苷（3H－TdR）的影响。结果：EH组VSMC释放的NO较正常血压（NT）组低（P＜0．01），IL－1诱导后NO明显增加（P＜0．01），但仍较NT组低（P＜0．05）。外源性NO药物硝普钠干预后3H－TdR掺入量随浓度的增高而减低，与对照组相比P＜0．01。提示：EH患者存在着NO产生通路的异常，外源性NO可抑制平滑肌细胞的增殖。     

卡托普利及SNP对VSMC中ET—1释放的作用

目的探讨卡托普利及ＳＮＰ对培养的大鼠ＶＳＭＣ释放ＥＴ－１的影响及相互关系。方法在大鼠ＶＳＭＣ培养液中置入不同浓度卡托普利及／或ＳＮＰ后,用放免法测定ＥＴ－１。结果卡托普利及ＳＮＰ均可减低因ＡｎｇⅡ引起ＶＳＭＣ分泌增加的内皮素量,ＡｎｇⅡ水平与ＶＳＭＣ分泌ＥＴ－１量呈正相关。结论ＥＴ－１通过抑制ＶＳＭＣ内源性ＮＯ的产生加速ＡＳ的发生及发展,ＡＣＥＩ或ＮＯ抑制ＥＴ－１释放,可减缓ＡＳ形成。     

银杏叶提取物对培养中的胎儿血管平滑肌细胞Bcl-2蛋白表达量的影响

目的观察银杏叶提取物(Egb)对培养中的胎儿血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡相关蛋白Bcl-2的影响。方法采用酶消化法结合组织贴块法培养VSMC。加不同浓度Egb干预不同时间段,形态学观察凋亡现象,利用Annexin-V结合PI,流式细胞仪技术检测细胞凋亡率,检测Bcl-2蛋白的表达量变化。结果与对照组相比,随着时间的延长,Egb浓度的增加,细胞凋亡率增加,细胞Bcl-2蛋白表达率明显减少。结论Egb可以诱导培养中的胎儿VSMC凋亡,并可以抑制VSMC凋亡相关蛋白Bcl-2的表达,并且这两种作用呈时间及浓度依赖性。