肿瘤细胞诱生巨噬细胞分泌细胞毒因子的体内外观察

本文选择K562、YAC--1及LAC--1(来源于SW_1小鼠L783淋巴细胞性白血病克隆细胞株,以本校病理生理学教研室引进)瘤细胞为诱生剂,建立瘤细胞刺激BCG活化的M?分泌细胞毒因子(简称M?--CF)的体内、外模型。用以研究瘤细胞在体外诱生M?--CF的适宜条件,并初步对瘤细胞体内、     

丝裂霉素C对人胎脾LAK细胞活性的影响

本文对人胎脾LAK细胞活性及丝裂霉素C(MMC)对LAK活性的影响作了初步研究。结果显示,人胎脾淋巴细胞可诱导产生明显的LAK活性,对K562和Raji瘤细胞的杀伤活性分别为74.4％和69.4％(E:T=50:1)。诱生的LAK细胞经不同浓度MMC处理后,DNA合成受到显著抑制(p<0.O1),但仍可保持较高水平的LAK活性。提示细胞增殖对MMC的抑制作用更为敏感,LAK细胞在效应阶段并非绝对有赖于细胞增殖。     

家蝇源抗K562活性物质的分离与纯化

为从家蝇Ⅲ龄幼虫体内提取具有抗K562细胞活性的物质,并对其组分化学性质及对人正常细胞的作用进行分析。本文用大肠杆菌诱导家蝇Ⅲ龄幼虫大量表达活性物质,然后通过研磨、离心、固相萃取法（SPE）初步分离活性物质,通过反相高效液相色谱（RP—HPLC）进一步纯化提取活性组分,通过四甲基偶氮噻唑蓝（Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）比色法和光镜观察法相结合,筛选出对K562有抑制作用的活性组分,并鉴定其对人正常细胞293T的作用。结果显示,从家蝇Ⅲ龄幼虫体内分离出4个具有抑制K562细胞活性的多肽组分（峰5～8）,具有分离度高、纯度高等特点。当质量浓度为100ug／mL和作用时间为24h时,4个多肽组分均具有抗K562细胞的活性,其中峰5多肽组分和峰8多肽组分活性较强,对K562细胞的相对抑制率分别为48．52％和65．80％。结果表明,家蝇Ⅲ龄幼虫体内存在一些具有抗K562细胞活性的多肽,而且对人正常细胞几乎无杀伤作用。但是,这些多肽是否属于抗肿瘤肽还有待被证实。     

慢性粒细胞性白血病细胞诱导分化的树突状细胞及其抗原提呈作用的研究

观察细胞因子联合培养诱生的慢性粒细胞性白血病(CML)细胞白血病性树突状细胞(DC)的细胞特性及抗原提呈作用。选择CML患者的骨髓细胞和CML性细胞株K562细胞,应用GM-CSF+IL-4+TNF-α联合培养后进行细胞表型和特异性激活淋巴细胞作用的检测。CML-DC和K562-DC具有DC的形态特征和超微结构,表达CD1a、CD80和CD86等DC相关抗原,并可激活淋巴细胞产生增殖反应,并产生针对白血病细胞的特异性细胞毒效应,同时DC可不同程度地分泌IL-12并协助淋巴细胞产生IFN-γ。CML患者的细胞和K562细胞在细胞因子的诱导下,可分化为具有DC表型特性和特异性激活T细胞的白血病性抗原提呈细胞,使白血病DC瘤苗的应用成为可能。     

B7修饰K562细胞来源的树突状细胞抗肿瘤作用的研究

目的 探讨共刺激信号分子B7转化人白血病细胞株K562后，K562-B7在细胞因子作用下分化为树突状细胞(Dendritic cell，DC)，K562-B7-DC的生物学特性以及介导的抗肿瘤免疫作用。方法 构建重组真核表达质粒pcDNA3．187转化人白血病细胞株K562，获得单个细胞克隆。用K562-B7细胞株在GM-CSF、IL-4和IL-12的联合作用下分化为DC细胞，观察K562-B7-DC的生物学性质及其抗肿瘤的免疫功能。结果 K562-B7-DC在GM-CSF、IL-4和IL-12的联合作用下能分化为DC细胞并能诱导出较强的同种混合淋巴细胞反应及CTL活性，且能分泌内源性IL-12、INF-γ。结论 细胞因子联合诱生的K562-B7-DC能有效的执行其抗原提呈功能，同时协同T淋巴细胞发挥其抗肿瘤免疫作用。     

肿瘤细胞诱生的巨噬细胞细胞毒因子理化性质的分析

从K_(562)等肿瘤细胞激活的小鼠腹腔巨噬细胞的培养物中可收集到具有杀伤多种肿瘤细胞的细胞毒样的可溶性因子(简称Mφ-CF)。该因子经56℃、20分钟处理后仍保持活性;在pH7～10时性质稳定。经还原剂(2-巯基乙醇、二硫苏糖醇)、氧化剂(过碘酸钠)及胰酶处理后其活性降低,但不受蛋白酶抑制剂——苯甲基磺酰氟、8-羟基喹啉的影响,SDS-PAGE测得其分子量约为54Kd。本文实验观察到肿瘤细胞诱生的这种Mφ-CF的某些特性与肿瘤坏死因子(TNF)很类似,可能是一种具有二硫键的含糖蛋白分子。     

脐血CIK细胞诱导K562细胞的凋亡作用

探讨脐血CIK细胞对K562细胞的杀伤活性及诱导凋亡作用。通过第1天在脐血淋巴细胞中加入IFN-r，第2天再加入IL-2和CD3单抗进行细胞培养获得多种细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokines induced killer cells)即脐血CIK细胞。用MTT法测定其抗肿瘤活性，原位末端标记法进行凋亡分析，台盼蓝拒染法计数细胞。脐血CIK细胞及培养上清抗K562活性明显优于CD3AK细胞，短期培养后其增殖活性低于CD3AK细胞；但是加入G-CSF可以提高CIK细胞的增殖活性，且CIK细胞的抗K562活性仍高于CD3AK细胞。CIK细胞诱导K562细胞凋亡率大于CD3AK细胞，G-CSF能部分抑制CIK细胞诱导的K562细胞的凋亡。脐血CIK细胞是一种有效的杀伤活化细胞，脐血在多种细胞因子适当组合的诱导下可提高杀瘤活性。     

人参总皂苷对K562细胞红细胞生成素受体表达的影响

目的:探讨人参总皂苷(TSPG)对人红白血病细胞株(K562细胞)红细胞生成素受体(EpoR)表达的影响。方法:采用流式细胞仪检测TSPG作用前后的K562细胞膜EpoR阳性率的变化;免疫细胞化学检测TSPG作用前后K562细胞EpoR表达的变化;以免疫印迹法检测TSPG处理前后K562细胞全细胞、细胞膜和细胞质中EpoR含量的变化。结果:K562细胞膜表达EpoR蛋白的阳性率随TSPG剂量的增加而显著下降;免疫细胞化学染色可见对照组K562细胞胞膜着色深,胞质浅淡,核/质比例大;经TSPG 200mg/L作用72h后,K562细胞胞膜着色明显变浅,胞质着色明显加深且丰富,核/质比例明显降低;不同剂量的TSPG作用K562细胞72h后,全细胞总蛋白中的EpoR的表达无明显差异,经200mg/L TSPG诱导后的K562细胞膜中EpoR蛋白表达下降,而TSPG(100、200、300、400mg/L)诱导K562细胞72h后,胞质EpoR蛋白表达增强,且随着剂量的加大更加明显。结论:TSPG能使K562细胞的EpoR位置重塑,为研究TSPG诱导K562细胞向红系细胞分化的作用机制提供了依据。     

免疫缺陷小鼠脾细胞对不同来源B细胞杂交瘤自然杀伤活性的研究

多年来,人们一直期望能用诱生裸鼠腹水的方法生产人单克隆抗体。但与其它人淋巴样恶性细胞一样,分泌人单克隆抗体的人-人B细胞杂交瘤难以在未经处理的裸鼠体内生长,其原因一直被归结于裸鼠具有较高的自然杀伤活性。迄今为止,NK细胞对肿瘤     

羊膜间充质干细胞抑制NK细胞的细胞毒活性和单核细胞的功能

目的探讨人类羊膜来源间充质干细胞(human amnion-derived mesenchymal stem cells,HAMs)的免疫抑制功能。方法利用NK细胞可以靶向杀死K562细胞的原理,HAMs和NK细胞共培养后,收集NK细胞并用其作用K562细胞,通过流式细胞技术(FACS)检测K562细胞的死亡率,进而评估NK细胞毒活性变化及HAMs对NK细胞毒活性的影响,探讨HAMs的免疫抑制功能;利用单核细胞分泌细胞因子TNF-α和IL-6的特性,HAMs和单核细胞共培养后,通过FACS检测单核细胞对TNF-α和IL-6表达率的变化,进而评估HAMs对单核细胞分泌功能的抑制能力,探讨HAMs的免疫抑制功能。结果 HAMs抑制NK细胞的细胞毒活性和单核细胞的因子分泌功能。结论 HAMs具有免疫抑制功能。     

调节性T细胞参与肿瘤免疫的研究进展

调节性T细胞（Treg）对于介导免疫稳态、建立和维持自身耐受有重要作用.其对免疫反应具有抑制效应,保护机体免于发生自身免疫性疾病,并且可以抑制抗肿瘤免疫反应.近来研究发现,多种恶性肿瘤的患者外周血及肿瘤微环境中（Treg）增加,并且与预后具有相关性;去除Treg或者封闭其抑制功能可以增强抗肿瘤免疫反应.越来越多的证据表明Treg在肿瘤的进展过程和抑制肿瘤特异性免疫中扮演重要的角色.深入研究Treg的特点、功能和参与肿瘤免疫调节作用的机制将给肿瘤的预防和治疗提供新的思路和有效手段.     

肿瘤细胞来源的胞外体对CIK细胞活性的影响

目的 探讨恶性肿瘤对于细胞因子诱导的杀伤（cytokine induced killer，CIK）细胞的增殖抑制以及诱导凋亡等方面的作用，并探讨肿瘤细胞影响CIK的作用机制。方法 在CIK细胞培养体系中分别加入胃癌细胞系BGC-823、结肠癌细胞系HCT-8细胞的培养上清，观察对于CIK细胞的增殖倍数、主要效应细胞（CD3^＋CD56^＋细胞）的含量以及杀伤活性的影响。为探讨肿瘤细胞来源的胞外体在影响CIK细胞活性中的作用，采用超速离心技术分离肿瘤细胞培养上清中的胞外体结构，观察其对于CIK细胞的抑制作用。结果 培养体系中肿瘤培养上清的加入降低了CIK细胞的增殖倍数和CD3^＋CD56^＋细胞的比例，并且肿瘤培养上清的加入抑制了CIK细胞对于同类肿瘤细胞的细胞毒活性。肿瘤细胞和CIK细胞的共同培养增加了CIK细胞中凋亡细胞的比例，同时降低了增殖细胞比例。通过超速离心方法从BGC-823胃癌细胞培养上清液中分离出胞外体结构，电镜显示为直径介于40～100ml之间的膜性微小囊泡，并且BGC-823细胞培养上清中胞外体结构的去除可以减轻其对于CIK细胞的增殖抑制。结论 肿瘤细胞对于CIK细胞的增殖和生物学活性具有抑制作用，免疫抑制性细胞因子和胞外体都是可能的作用机制。     

树突状细胞疫苗的研究进展

树突状细胞(dendritic cell,DC)是体内最强大的抗原呈递细胞(antigen presenting cell,APC),可在体内外向T细胞提呈肿瘤细胞的抗原,并诱发细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应,发挥抗肿瘤作用。在体内外用现代分子生物学技术,将肿瘤细胞、裂解的肿瘤细胞成分或肿瘤细胞的凋亡产物、肿瘤mRNA或DNA等修饰DC制成瘤苗,或者提取肿瘤患者DC中的Dexosomes制成疫苗等基于DCs的免疫疗法,为肿瘤患者的治疗开辟了一种新的途径,具有极其广阔的前景。     

Results with a modified human myeloma stem cell assay

Summary The human tumor stem cell assay (HTSCA) introduced by Hamburger and Salmon [2] was modified in several details. It was found that a short period of treatment with deoxyribonuclease (DNase) of the material aspirated from the patients bone marrow greatly enhances the production of single cell suspensions and thereby may improve the assay. Instead of the dextran sedimentation method, we used the density gradient centrifugation method according to Bøyum [1] for the isolation of mononuclear cells from the bone marrow. Another methodical modification introduced by us is the use of the same medium for culturing the cells before plating them and in the agar after plating. Under the conditions reported here the formation of colonies was observed in 8 of 11 samples from individual myeloma patients. The average plating efficiency was 0.024% with a range of 0.009% to 0.039% showing that possibly an improvement was achieved when compared to the results obtained with the original method showing an average plating efficiency of 0.014% [2].     

棘阿米巴滋养体致黑色素瘤细胞损伤的初步研究

为研究处于分类地位不同的 5种棘阿米巴滋养体对黑色素瘤细胞B16的细胞毒性作用的方式、以及细胞毒性作用差异与其致病性的关系。将 5种不同种类的棘阿米巴滋养体分别与体外培养的黑色素瘤细胞B16混合 ,利用细胞免疫荧光技术和透射电子显微镜观察棘阿米巴滋养体对黑色素瘤细胞B16的影响 ,并运用MTT法检测、比较不同棘阿米巴对肿瘤细胞作用的差异。结果显示 :这 5种棘阿米巴滋养体对黑色素瘤细胞B16均有不同程度的细胞毒性作用 ,其机制是诱导肿瘤细胞发生细胞凋亡 ,但与其致病性的强弱无关     

A subset of prostate basal cells lacks the expression of corresponding phenotypic markers

Immunohistochemical staining for cytokeratin (CK) 34ssE12 has been routinely used to elucidate prostate basal cells for differentiation between non-invasive and invasive lesions. Our previous studies, however, revealed that some morphologically distinct basal cells observed on H&E-stained sections completely lacked CK34ssE12 expression. Our current study attempted to assess whether these basal cells would also lack the expression of other phenotypic markers, and whether basal cell alterations would affect the proliferation status of the associated tumor cells. Consecutive sections from prostate tumors with large basal cell clusters that were morphologically distinct in H&E sections but were completely negative for CK 34ssE12 were morphologically and immunohistochemically assessed with a panel of basal cell phenotypic and other markers. In addition to CK 34ssE12, these basal cells also completely lacked the expression of other phenotypic markers, including CK5, CK14, p63, and maspin, in contrast to adjacent basal cells, which were strongly positive for these markers. Tumors surrounded by basal cell layers that lack the expression of basal cell phenotypic markers showed a significantly higher rate of cell proliferation and mast cell infiltration than their counterparts. These findings suggest that basal cells might be targets of a variety of pathological alterations, which could significantly impact biological presentations of associated tumor cells.     

Induction of NKT cell-specific immune responses in cancer tissues after NKT cell-targeted adoptive immunotherapy

Vα24 natural killer T (NKT) cells have potent anti-tumor activity. We performed a phase II clinical study in patients with head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) using ex vivo expanded Vα24 NKT cells and α-galactosylceramide (αGalCer; KRN7000)-pulsed antigen-presenting cells (APCs) to investigate the efficacy and induction of NKT cell-specific immune responses. The subjects were 10 patients with locally recurrent and operable HNSCC. One course of nasal submucosal administration of αGalCer-pulsed APCs and intra-arterial infusion of activated NKT cells via tumor-feeding arteries was given before salvage surgery. Anti-tumor effects, NKT cell-specific immune responses in extirpated cancer tissue and peripheral blood, safety, and pathological effects were evaluated. Five cases achieved objective tumor regression. The number of NKT cells increased in cancer tissues in 7 cases and was associated with tumor regression. The combination therapy induced NKT cell-specific immune responses in cancer tissues that were associated with beneficial clinical effects.     

树突状细胞肿瘤疫苗的研究进展

树突状细胞(DC)是目前发现的功能最强大的专职抗原递呈细胞(APC),能激活静息T细胞并使其增殖,产生抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL),从而发挥抗肿瘤免疫效应.近年来,人们在肿瘤疫苗的研究中,采用多种策略制备DC肿瘤疫苗,尝试通过改变机体免疫系统对肿瘤的免疫状态来加强机体的免疫功能,进而清除肿瘤细胞,而对正常组织几乎无伤害,因此有很好的临床应用前景.     

调节性T细胞介导的肿瘤免疫耐受

恶性肿瘤能够有效的逃避免疫系统的监视源于免疫反应系统功能的障碍,多种因素都可导致抗肿瘤免疫的失效.调节性T细胞(Tr)在肿瘤浸润的淋巴细胞及肿瘤引流的淋巴结中高频出现,意味着其能促进肿瘤生长.Tr在肿瘤免疫病理以及调节免疫治疗的效果中起重要作用.因此,肿瘤患者的Tr可能成为重要的治疗靶细胞,并将会为抗肿瘤免疫治疗提供新策略.     

Cbl-b在T细胞和肿瘤免疫中的研究进展

泛素化在细胞信号通路中是一个重要的转录后修饰过程,参与细胞的增殖、分化、凋亡以及基因表达、信号传递、炎症免疫等生命活动的调控.其中E3泛素连接酶Cbl-b参与T细胞的激活和耐受,与肿瘤免疫也有着密切联系,因而Cbl-b对T细胞的调节及它在肿瘤免疫中的研究具有重要意义.