中西药对白癜风发病机制中酪氨酸酶调控的研究现状

酪氨酸酶（Tyrosinase，TYR）是皮肤黑素生成途径中的主要限速酶，是黑素细胞分化成熟的一个特征性标志，其活性与黑素合成含量呈正相关。黑素在黑素细胞的黑素小体中合成，由酪氨酸酶催化酪氨酸生成多巴和多巴醌，再经过一系列反应而合成，并通过黑素细胞的树突而运输到附近的角质形成细胞中，从而形成表皮的色素。     

中药对黑素细胞及酪氨酸酶双向调节作用的研究进展

黑素细胞(melanocytes,MC)合成黑素(Melanin)是机体的一种自稳保护机制,皮肤黑素含量过多、过少或缺乏等均可引起疾病,如黄褐斑、白癜风和白化病等.酪氨酸酶是皮肤黑素生物合成的主要限速酶,其活性与黑素合成含量呈正相关.因而影响黑素细胞和酪氨酸酶生物活性的药物可以用于色素障碍性皮肤病的治疗.     

六味地黄丸对体外培养黑素细胞的抑制作用

目的 :研究六味地黄丸对体外培养的黑素细胞的抑制作用。方法 :采用 MTT法测定细胞增殖情况 ;Na OH裂解法测定黑素合成 ;Takahashi法测定酪氨酸酶含量。结果 :六味地黄丸对黑素细胞的增殖有抑制作用 ,能使细胞数明显减少 (P<0 .0 5 ) ,并能使黑素合成显著下降 (P<0 .0 1) ,使酪氨酸酶活性逐渐减弱 (P<0 .0 1)。结论 :六味地黄丸能抑制黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性 ,这可能是临床应用六味地黄丸治疗皮肤色素性疾病的机制     

中药对黑素细胞及酪氨酸酶调节作用的研究进展

黑素细胞的含量和酪氨酸酶的活性是引起色素性皮肤病的主要原因。近年国内观察中药对体外培养人正常黑素细胞或鼠黑素瘤细胞的影响，观察中药对蘑菇酪氨酸酶的影响，阐明菟丝子、白芷、蒺藜、六味地黄丸、桃红四物汤等一批单味或复方中药具有激活或抑制酪氨酸酶活性，调节黑素细胞的功能，增加或减少黑素生成的作用，为提高中医药治疗色素障碍性皮肤病疗效奠定基础。     

白茶、玫瑰花及玳玳花提取物对体外培养黑素细胞功能的影响

[目的]观察白茶、玫瑰花及玳玳花提取物(祛斑因子A、B)对体外培养的正常人表皮黑素细胞功能及角质形成细胞和黑素细胞共培养体系中黑素小体转运的影响。[方法]制备含药血清,建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系,采用4-甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定黑素细胞增殖,酪氨酸酶多巴速率氧化法测定酪氨酸酶活性,NaOH裂解法测定黑素生成量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测黑素细胞酪氨酸酶mRNA的表达,Pull-down法检测黑素细胞GTP-RhoA和GTP-Rac1蛋白的表达;建立正常人角质形成细胞和黑素细胞的体外共培养体系,流式细胞术检测共培养细胞体系中黑素转运的情况。[结果]与空白血清对照组相比,祛斑因子A、B可显著抑制酪氨酸酶活性;祛斑因子A可显著降低酪氨酸酶mRNA的表达。祛斑因子A中、低剂量可抑制树突结构蛋白的表达。祛斑因子A高、中、低剂量及祛斑因子B均可抑制黑素小体的转运。[结论]为祛斑因子用于色素性疾病的保健防治提供一定的实验依据。     

马钱苷调节UVB诱导的表皮黑素单位黑素生成的实验研究

目的:探讨不同浓度马钱苷对中波紫外线(UVB)诱导该模型中黑素生成及其作用的影响。方法:常规体外共培养人黑色素瘤A375、人皮肤角质形成细胞(HaCaT),以UVB20 m J/cm~2照射后加含马钱苷的培养液作用24h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖;采用多巴氧化法研究酪氨酸酶活性的变化;比色法测定黑素含量,免疫印迹法测定P38通路蛋白表达。结果:马钱苷0.01μm/L可抑制UVB诱导的表皮黑素单位中酪氨酸酶活性增高,减少黑素生成,其机制可能是通过抑制P38蛋白表达减弱信号通路作用,抑制酪氨酸酶活性而实现的。结论:高浓度马钱苷可明显抑制P38MAPK通路,进而抑制酪氨酸酶活性和黑素生成。     

中药对黑素生物合成影响研究I.82味中药乙醇提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用

对中医治疗色素增加性皮肤病方剂69首进行计算机拆方排序,选出高频次出现中药82味,观察这些中药乙醇提取物对蘑菇酪氨酸酶和无细胞系统多巴色素自动氧化生成黑素量的影响.结果显示11味中药乙醇提取物在3个不同浓度对酪氨酸酶活性和黑素生成量呈剂量依赖性抑制,其中白术、白僵蚕、藁本、白芨、白附子、沙苑子、六月雪、柿叶对酪氨酸酶活性抑制率与单体化合物熊果苷无统计学差异(P＞0.05).进一步研究这些中药的皮肤脱色机制与评估其临床应用价值是必要的.     

中药对黑素生物合成影响研究Ⅰ.82味中药乙醇提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用

对中医治疗色素增加性皮肤病方剂６９首进行计算机拆方排序,选出高频次出现中药８２味,观察这些中药乙醇提取物对蘑菇酪氨酸酶和无细胞系统多巴色素自动氧化生成黑素量的影响。结果显示１１味中药乙醇提取物在３个不同浓度对酪氨酸酶活性和黑素生成量呈剂量依赖性抑制,其中白术、白僵蚕、藁本、白芨、白附子、沙苑子、六月雪、柿叶对酪氨酸酶活性抑制率与单体化合物熊果苷无统计学差异（Ｐ〉０．０５）。进一步研究这些中药的皮肤     

山茱萸水提取物对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的:考察山茱萸水提取物对体外构建的人黑素瘤细胞(A375)与角质形成细胞(Hacat)单层混合共培养模型黑素合成的影响。方法:将山茱萸水提取物制备成含生药0.75～12 g.L-15个质量浓度,细胞给药,通过MTT法、NaOH裂解法、多巴氧化法分别测定给药前后A375细胞与Hacat细胞共培养模型的细胞活力、黑素含量和酪氨酸酶活性。结果:与空白对照组相比,6,3,1.5,0.75 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系的细胞增殖率影响不大,对共培养体系黑素生成均有显著差异(P<0.01),对共培养体系酪氨酸酶活性有差异(P<0.05或P<0.01);与阳性对照药物熊果苷相比,6,3 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系黑素生成有显著差异(P<0.01),作用强于熊果苷,1.5,0.75 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系黑素生成无差异;与阳性对照药物熊果苷相比,6,3,1.5,0.75 g.L-1山茱萸水提取物对共培养体系酪氨酸酶活性无差异。结论:山茱萸水提取物能够通过抑制酪氨酸酶活性来抑制A375细胞和Hacat细胞共培养体系的黑素合成,为临床使用山茱萸治疗黄褐斑提供了实验依据。     

驱白艾力勒思亚散对酪氨酸酶激活作用的实验研究

目的:观察驱白艾力勒思亚散提取物对酪氨酸酶活性的作用,并进行其动力学研究,探讨其治疗白癜风的作用机理。方法:分别测定驱白艾力勒思亚散水提取液和乙醇提取液对酪氨酸酶的激活率,Matsuda法测定多巴色素自动氧化生成的黑素量,计算黑素生成上调率,并对酪氨酸酶激活作用进行动力学观察。结果:驱白艾力勒思亚散水提取液和乙醇提取液对酪氨酸酶均有明显的激活作用,其激活作用随着药量的增加而增强,黑素生成的上调率也呈剂量依赖性;动力学研究证实此激活作用显著,且醇提液效果优于水提液。结论:驱白艾力勒思亚散是治疗白癜风的有效药物,激活酪氨酸酶是其作用机制之一。     

加味七白膏对黑素瘤细胞酪氨酸酶活性、黑素合成影响的实验研究

目的 研究加味七白膏的美白作用机理及对酪氨酸酶活性、黑素合成的影响.方法 体外培养黑素瘤细胞,采用酶学方法测定酪氨酸酶活性,490nm比色法测定黑素含量.结果 中药水煎液对黑素瘤细胞酪氨酸酶活性、黑素合成均呈剂量依赖性抑制作用,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05,或P<0.01).结论 加味七白膏美白作用机理之一可能为通过抑制酪氨酸酶活性达到减少黑素合成的目的 而起到美白作用.     

马钱苷对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的：探讨马钱苷对黑素瘤细胞A375与角质形成细胞Hacat共培养模型黑素合成的影响。方法：将A375细胞和Hacat细胞构建共培养模型,以不同浓度马钱苷进行干预,通过MTY法、NaOH裂解法、多巴氧化法分别测定共培养模型的细胞增殖率、黑素含量和酪氨酸酶活性。结果：与阴性对照组相比,马钱苷10-mol／L、1016moL／L和10-7mol／L组对共培养细胞增殖率无显著性差异（P〉0．05）。马钱苷10-mol／L和10。mol／L组对共培养模型黑素合成及酪氨酸酶活性有极显著性差异（P〈0．01）。与阳性对照组相比,马钱苷10。moL／L组对共培养模型酪氨酸酶活性有极显著性差异（P〈0．01）,马钱苷10山mol／L和10。mol／L组对共培养模型黑素合成无显著差异（P〉0．05）。结论：马钱苷可能通过抑制酪氨酸酶活性减少共培养模型黑素合成。     

中药对黑素生物合成影响研究Ⅰ.82味中药乙醇提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用

对中医治疗色素增加性皮肤病方剂６９首进行计算机拆方排序,选出高频次出现中药８２ 味,观察这些中药乙醇提取物对蘑菇酪氨酸酶和无细胞系统多巴色素自动氧化生成黑素量的影 响。结果显示１１味中药乙醇提取物在３个不同浓度对酪氨酸酶活性和黑素生成量呈剂量依赖性 抑制,其中白术、白僵蚕、藁本、白芨、白附子、沙苑子、六月雪、柿叶对酪氨酸酶活性抑制率与单体 化合物熊果苷无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。进－步研究这些中药的皮肤脱色机制与评估其临床应用 价值是必要的。     

小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关基因表达的影响

目的:研究不同浓度小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关酶酪氨酸酶(tyrosinase,TYR),酪氨酸酶相关蛋白-1(tyrosinase related protein-1,TRP-1),酪氨酸酶相关蛋白-2(tyrosinase related protein-2,TRP-2)mRNA表达的影响。方法:采用CCK8检测细胞活力,选取小柴胡汤低、中、高质量浓度分别为0.1,1,2.5 g·L-1用于实验,逆转录-聚合酶链式反应(RTPCR)法检测B16细胞中TYR,TRP-1,TRP-2 mRNA的表达。结果:与正常组比较,随着浓度的增加,小柴胡汤水煎液能够显著下调细胞TYR,TRP-1,TRP-2 mRNA的表达(P0.05,P0.01)。结论:小柴胡汤对黑素合成的抑制作用除了通过直接抑制TYR活性外,还可通过下调酪氨酸酶家族其他成员TRP-1,TRP-2的基因表达、蛋白合成3方面实现其抑制黑素生成的作用,提示小柴胡汤对黑素生成的抑制可通过对酶蛋白转录后调节途径来实现。     

中药对黑素代谢影响的研究近况

黑素代谢障碍是色素性皮肤病的基本病机，中医药治疗色素性皮肤病已有千余年历史，近年国内用磨菇酪氨酸酶对110种单味及复方中药进行筛查，以鼠黑素瘤细胞对51种单味及复方中药作确认，20种单味中药进行动物试验，2种单味中药检测酪氨酸酶基因表达水平，阐明赤芍，菟丝子，白术，茯苓2及桃红四物汤，补中益气汤等一批单味及复方中药具有激活或抑制酪氨酸酶活性，调节黑素细胞功能，增加或减少黑素合成的作用。为发展提高中医中药治疗色素障碍性皮肤病水平奠定了基础。     

验方祛斑汤对A375人黑素瘤细胞黑素合成的影响

目的 研究验方祛斑汤对A375人黑素瘤细胞株细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成的影响,探讨验方治疗黄褐斑的作用机制.方法四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定验方对细胞增殖的影响,用酶学方法测定对酪氨酸酶活性的影响,475nm比色法测定验方对黑素含量的影响.结果验方祛斑汤对体外培养的A375人黑素瘤细胞具有抑制细胞增殖,降低酪氨酸酶活性和黑素含量作用.结论该方能抑制黑素细胞黑素合成,这可能是其治疗黄褐斑的作用机制之一.     

六味地黄丸对体外培养的黑素细胞的抑制作用

目的：研究六味地黄丸对体外培养的黑素细胞的抑制作用。方法：采用MTT法测定细胞增殖情况；NaOH裂解法测定黑素合成；Takahashi法测定酪氨酶含量。结果：六味地黄丸对黑素细胞的增殖有抑制作用，能使细胞数明显减少（P＜0．05），并能使黑素合成显著下降（P＜0．01），使酪氨酸酶活性逐渐减弱（P＜0．01）。结论：六味地黄丸能抑制黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性，这可能是临床应有六味地黄丸治疗皮肤色素性疾病的机制。     

高良姜素对氢醌诱导的白癜风小鼠模型的影响

目的研究不同质量分数高良姜素对氢醌诱导白癜风小鼠模型的影响。方法采用2.5%氢醌涂抹小鼠背部剃毛后的区域以诱导白癜风动物模型,分光光度法测定血清中的酪氨酸酶(TYR)、丙二醛(MDA)水平及胆碱酯酶(CHE)活性,分别采用HE染色法、多巴特殊染色法、Lillie染色法观察不同质量分数高良姜素对小鼠皮肤含黑色素毛囊数、基底层黑素细胞数和含黑素细胞表皮细胞数的影响;采用免疫组化法检测小鼠皮肤中TYR蛋白表达。结果模型组小鼠背部毛发颜色明显较对照组小鼠白,2.5%氢醌诱导后,模型小鼠含黑色素的毛囊数、基底层黑素细胞和含黑素颗粒表皮细胞数量明显较对照组低。经过高良姜素治疗后,小鼠背部毛发颜色由白变黑;与模型组相比,高良姜素治疗组的小鼠皮肤含黑色素毛囊数量明显上升(P<0.01);4.250 mg/kg 90%高良姜素组基底层黑素细胞数和含黑素颗粒表皮细胞数显著上升(P<0.05、0.01),皮肤TYR蛋白表达也显著升高(P<0.05);0.425、4.250 mg/kg 90%高良姜素能够显著升高小鼠血清TYR水平,降低MDA水平及CHE活性(P<0.05、0.01);4.250、42.500 mg/kg 99%高良姜素显著提高基底层黑素细胞数(P<0.01);4.250 mg/kg99%高良姜素能够显著提高含黑素颗粒表皮细胞数(P<0.05),降低血清CHE活性(P<0.01)。99%高良姜素3个剂量均能够升高血清TYR水平(P<0.05、0.01),0.425、4.250 mg/kg 99%高良姜素降低血清MDA水平(P<0.01)。结论不同质量分数的高良姜素均能够改善氢醌诱导的小鼠白癜风症状,其作用机制可能是提高TYR活性,降低机体的MDA和CHE水平,但二者的治疗效果及作用机制存在一定的差异。     

消白合剂对人A375黑素瘤细胞株黑素合成的影响

目的观察消白合剂对人A375黑素瘤细胞生长、酪氨酸酶活性及黑素含量的影响。方法设消白合剂水提液体0．01、0．1、1、10g／L浓度实验组和空白对照组,体外观察对人A375黑素瘤细胞的增殖、酪氨酸酶的活性以及黑素含量的调节作用。四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定消白合剂对细胞增殖的影响,酶学方法测定对酪氨酸酶活性的影响,比色法（490nm）测定对黑素含量的影响。结果消白合剂在0．01～0．1g／L浓度范围内对细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素的合成有促进作用,而随着浓度的继续增高反而起抑制作用。结论消白合剂对人A375黑素瘤细胞株黑素的合成具有双向调节作用,临床运用时应该考虑到药物的量的优化。