分析临床基因扩增检验实验室的质量控制

聚合酶链反应(PCR)是一种体外核酸扩增技术,模拟自然DNA复制过程,通过重复高温变性、低温退火、中温延伸等简单的3个温度循环,将靶DNA扩增百万倍,显示极高的敏感性,因此在临床检测和科研中有着广泛的运用.做好PCR质量控制是保证检测结果准确性的关键步骤,该文就临床基因扩增检验实验室在实验前、中、后期中涉及的质量控制问...     

两种结核杆菌基因扩增杂交方法的比较

聚合酶反应是一种新的体外基因扩增方法,其用于结核杆菌的检测已体现了快速、灵敏、特异的特点,但其在临床应用时,易出现假阴性和假阳性结果,故最近发展趋势是样本处理、基因扩增和产物分析三方面进行改进,其中传统的电泳方法鉴定产物蔽病尤为突出,其改进进展也最快...     

探讨不同PCR扩增试剂盒检验血样DNA的结果

目的：探讨不同PCR扩增试剂盒在血样DNA中的检验及对比结果。方法抽取320例血样DNA作为检测对象,并应用不同PCR扩增试剂盒进行检测,在此基础上,结合所得的血样检验结果进行分析比较。结果经研究,在样本相同的情况下,血样检验差异率为1．25％（4/320）。而且经检测,4例出现不同检验分型的样本均存在等位基因缺失。另外,Profiler PlusTM扩增不平衡发生率为0．9375％,IdentifilerTM扩增不平衡发生率为0．3125％, Powerplex 16HS扩增不平衡发生率为0．3125％。结论在血样DNA的检验过程中,通过应用不同 PCR扩增试剂盒进行检测,能够准确获取到不同位置的异常基因,减少基因缺失、扩增不平衡所带来的误差影响,具有较高的推广价值。     

广西HIV—1流行毒株膜蛋白基因的扩增与纯化

目的 扩增广西ＨＩＶ－１感染者的ＨＩＶ－１膜蛋白基因Ｃ２－Ｖ３区核酸片段并提纯回收,进行核苷酸序列测定与亚型分析。方法 用淋巴细胞分离液从ＨＩＶ－１感染者的静脉血中分离ＰＢＭＣｓ,然后用多组不同的内外侧引物进行Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ扩增ＨＩＶ－１膜蛋白基因Ｃ２－Ｖ３区核酸片段,后用琼脂糖电泳进行提纯,用荧光标记末端终止物循环测序试剂盒进行测序,反应物用自动ＤＮＡ序列分析仪进行序列测定和分析。结果 经     

临床基因扩增检验实验室信息管理系统的建立及应用

借助电子计算机强大的数据处理功能和文本编辑功能,建立一套监测、记录和分析测定前、中、后全过程中各个环节和步骤等一系列质量活动信息流的管理系统,以避免检测过程中假阳性和假阴性事件的发生,以及应对临床及病人抱怨的客观举证。     

东北地区恙虫病东方体分离株sta56基因片段的扩增及？…

为了解东北地区恙虫病东方体分离株与其参考析的同源关系。采用了ＰＣＲ技术扩增东北地区恙虫病东方体分离株ｓｔａ５６基因片段,测定ＨＣＡａ９２０２和ＨＣＭ９５０１株ｓｔａ５６基因片段的核苷酸序列,并与右列的参考株进行同源性比较。结果显示,东北地区恙虫病东方体分离株均可在３２０～３３２ｂｐ范围内见到特异性扩增带,但ＭＳＡａ９３０２株和ＭＳＡａ９３０４株在此范围内分别可见２条和３条扩增带。ＨＣＡａ９２０２株     

血液病念珠菌感染基因扩增检测技术建立及临床应用

目的 针对血液病真菌感染日益严重趋势，建立念珠菌基因扩增技术并应用于临床。方法 本研究应用Lyticase破真菌壁提取DNA，采用二对引物分别对白色念珠菌EO3 125bpDNA和念珠菌细胞色素P450 L1A1 243bpDNA进行基因扩增；并分别对白色念珠菌标准株、临床样本株、其他念珠菌和不同细菌菌株进行基因扩增特异性比较，同时应用该技术检测血液病患者痰液和血液中念珠菌。结果 基因扩增显示EO3 125bpDNA只有标准株和临床样本白色念珠菌阳性，细胞色素P450 L1A1 243bpDNA具有念珠菌种的特异性，临床血液和痰液标本检测阳性率显著提高，与临床病情一致。结论 血液病念珠菌感染基因扩增技术敏感性、特异性显著增强，而且耗时显著缩短，临床应用取得良好效果。     

肾癌 KI67基因扩增分析及其临床意义

目的分析肾癌患者KI67基因扩增情况及其临床意义。方法收集47例肾癌患者的石蜡包埋组织样本,应用实时定量PCR法检测KI67基因扩增情况,收集患者的临床病理资料进行统计分析。结果 KI67基因在47例样本中的扩增率为48.9%(23/47)。KI67基因扩增患者中肿瘤浸润厚度>4 mm比例为72.7%(8/11),明显高于无扩增患者的27.3%(3/12),差异有统计学意义(Fisher精确概率法,P=0.039)。结论肾癌患者KI67基因扩增率较高,且预示患者存在不良预后因素。     

酒精脱氢酶基因2的扩增参数探讨

酒精脱氢酶（ＡＤＨ）在人类酒精氧化代谢过程中发挥着重要作用。机体摄入的醇类超过８０％是依靠该酶作用。ＡＤＨ２具有很高的活性，被认为是最关键的酶。编码该酶的ＡＤＨ２基因与ＡＤＨ１和ＡＤＨ３基因在基因序列上有９４％是一致的。因而在扩增过程中存在相互干扰，进而影响基因多型的确定。为区别它们，我们在其３′端设计了３个不翻译的碱基使其有别于ＡＤＨ３基因。同时对该基因的扩增参数（复性温度、复性时间、引物浓度）进行优化，改善了运行条件，排除干扰，为利用限制性片段长度多态型进行基因多态型研究提供了较好的实验基础。     

临床基因扩增检验实验室文件起草及注意问题

临床基因扩增检验实验室近年来在我国发展很快,基因扩增检测技术的发展和应用,对临床疾病的预防、诊断、治疗起到了积极的作用.卫生部于2002年1月14日印发了<临床基因扩增检验实验室管理暂行办法>(卫医发[2002]10号)(以下简称<办法>)后,卫生部临床检验中心在2月20日也下发了<临床基因扩增检验实验室工作规范>(卫检字[2002]8号).这是我国第一个实验室质量保证方面的法规性文件,也是首次对特殊的检验技术进入临床实行准入.     

C-MYC基因扩增与不同宫颈病变中血管生成的关系

目的 探讨不同宫颈病变中C-MYC基因扩增与血管生成的关系.方法 应用免疫组织化学法检测30例宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ～Ⅱ（CIN Ⅰ～Ⅱ组）、30例CINⅢ（CINⅢ组）、45例宫颈鳞癌（宫颈鳞癌组）和10例正常者（对照组）的微血管密度（MVD）,荧光原位杂交技术检测C-MYC基因扩增情况.结果 对照组、CIN Ⅰ～Ⅱ组、CINⅢ组及宫颈鳞癌组C-MYC基因扩增阳性率分别为1/10、36.7％ （11/30）、66.7％ （20/30）、77.8％ （35/45）,MVD分别为10.22±2.05、16.32±4.43、24.35±6.12、35.25±5.32,各组间比较差异均有统计学意义（P＜0.05）.MVD在不同淋巴结转移、临床分期、组织学分级的表达差异均有统计学意义（P＜0.01）.C-MYC基因扩增与宫颈鳞癌的淋巴结转移情况有关（P＜0.05）.宫颈鳞癌组织中C-MYC基因扩增与MVD有相关性（P＜0.05）.结论 C-MYC基因扩增阳性率随病变程度增加而升高;C-MYC基因在促进血管生成中发挥重要作用.     

阴沟肠杆菌随机扩增多态性DNA法基因分型

目的建立阴沟肠杆菌(ECL)随机扩增多态性DNA(RAPD)法基因分型图谱.方法以优化的随机引物和反应体系对临床分离的159株ECL进行RAPD法基因分型,并按DNA条带数及片段大小绘制指纹图谱.结果 159株临床分离ECL共得121种RAPD指纹图谱.结论 RAPD技术可将临床分离ECL分型121种.     

PCR扩增SRY核心序列鉴定性别

本文应用聚合酶链反应(PCR)扩增Y染色体SRY核心序列,结合微量DNA提取,建立了一个特异而快速、简便鉴定性别的方法。应用这一方法检测了2例X—连锁隐性遗传病风险胎儿和3例性反转患者。     

物种特异性基因扩增鉴别掺假食用植物油

目的:建立特异的掺假食用植物油鉴定方法。方法:以掺假食用油中掺入的低价值食用油相应油料作物物种特异性基因为靶标,采用普通PCR(Polymerase Chain Reaction)方法鉴定掺入一种低价值食用油的混合油样,双重PCR技术鉴定掺入两种低价值食用油的混合油样。结果:在8个按2/3量掺入一种低价值食用油的混合油样中至少在一个平行样中检出低价值食用油相应的物种特异性基因,而按1/2比例掺入低价值食用油的8个油样中有5个检出混入的低价值食用油;3个按照1∶1∶1掺入两种低价值食用油的混合油样,其掺假检出率及平行样之间重现性均较差。结论:本研究选定的掺假植物油的检测靶标具有较强特异性,可有效鉴别大量掺入低价值食用植物油的掺假油品,但对于掺假量低于50%的油品,其掺假鉴别能力尚待提高。     

基因扩增技术中抗污染的研究

目的　了解残留UDG对dU -DNAPCR产物的影响及灭活UDG时对Taq -P的影响。方法　采用微孔板杂交技术检测dU -DNAPCR产物 3 7℃放置 2 0h杂交百分率 ;检测在 -2 0℃、4℃、室温、3 7℃时不同保存条件下的杂交百分率 ;94℃灭活 10min对Taq -P活性的影响。结果　加 0 2单位、1 0单位UDG组比不加UDG组杂交A值下降 13 2 81%～ 2 0 5 5 7%。t检验差异有显著性 (t=2 85 5 ,2 869,P <0 0 5 ) ;经 94℃灭活产物组 3 7℃杂交A值比 -2 0℃A值下降 5 5 47% ,未经 94℃灭活杂交A值下降 10 3 45 % ;94℃预变性 3 0s杂交A值为 98 714 %、10min 3 0s组杂交A值为 96 818%。结论　以上结果提示经 94℃加热灭活对PCR产物保存有重要作用 ,不仅对灭活UDG有作用而且还可灭活来源于UDG以外可破坏DNA的酶。表明含UDG组杂交A值比不加UDG组低13 2 81%～ 2 0 5 5 7%与UDG有关。     

乳腺癌扩增基因1与上皮细胞钙黏蛋白在卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的 检测乳腺癌扩增基因1(AIB1)与上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)在卵巢癌组织中的表达,并确定其表达与卵巢癌临床病理特征的关系.方法 采用免疫组织化学EnVision二步法染色检测50例卵巢癌组织和13例正常卵巢组织中AIB1、E-cadherin、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)与Ki-67等的表达.结果 卵巢癌组织中AIB1阳性表达率[68％(34/50)]显著高于正常卵巢组织[8％(1/13)](P＜0.01),E-cadherin表达下调率为60％(30/50).AIB1阳性表达率在国际妇产科联盟(FIGO)分期Ⅲ+Ⅳ期高于Ⅰ+Ⅱ期(P=0.036),有淋巴结转移高于无淋巴结转移(P=0.027),Silverberg分期G3期高于G1+G2期(P=0.003),浆液性腺癌高于非浆液性腺癌(P=0.049),ER阳性高于ER阴性(P=0.000),Ki-67阳性高于Ki-67阴性(P=0.009);E-cadherin表达下调率在FIGO分期Ⅲ+Ⅳ期高于Ⅰ+Ⅱ期(P=0.044),浆液性腺癌高于非浆液性腺癌(P=0.002),ER阳性高于ER阴性(P=0.021),Ki-67阳性高于Ki-67阴性(P=0.035).AIB1与E-cadherin表达呈负相关(P=0.026).结论 卵巢癌组织中AIB1与E-cadherin表达情况及临床分期密切相关,可能是参与卵巢癌发展的重要分子.     

不同PCR扩增试剂盒检验血样DNA的检验结果对比研究

目的：讨论研究Profiler PlusTM、IdentifilerTM以及Powerplex16扩增试剂盒用于检验血样DNA检验结果的差异,并研究其扩张不平衡和基因丢失现象的发生几率。方法：选取150例完全无血缘关系的个体作为研究对象并采集其血样,分别使用两种扩增试剂盒进行检验。对所得不同结果的同一对象再使用3种扩增试剂盒进行检验。将检验所得结果进行比较。结果：3种试剂盒检测的等位基因缺失率比较差异无统计学意义（P〉0.05）。Profiler PlusTM检测扩张不平衡率显著高于其余两种试剂盒（P〈0.05）。结论：使用PCR扩增试剂盒对血样DNA进行检测时,会出现不同位置的异常基因,可表现为基因缺失及扩增不平衡。但Profiler PlusTM检验扩增不平衡发生率显著高于其余两种试剂盒。在实际生活对血样DNA进行检测时,除需准备主要检测扩增试剂盒外,还需准备其他不同类备用试剂盒用于互相验证及对比,尽量降低基因等位缺失及扩张不平衡发生率。     

压电基因传感器在HCMV链置换扩增实时检测中的实验研究

目的探讨自行研发的压电基因传感器对链置换扩增(SDA)的实时检测. 方法以巨细胞病毒(HCMV)为检测对象,建立成熟的SDA反应系统;在自行研发的压电基因传感器检测仪上对巨细胞病毒SDA反应进行实时检测. 结果 SDA反应可引起压电基因传感器的频率持续下降;在一定范围内核酸杂交所引起的频率下降幅度与加入的靶序列浓度呈正相关;加样时温差等因素对早期频率变化曲线的影响不可忽视;实验温度是影响SDA压电基因传感器检测灵敏度的重要因素. 结论自行研发的压电基因传感器可成功实现对SDA反应的实时检测;该系统可直接检测基因组DNA并可广泛应用于病原微生物的临床检测.