树鼩实验性肝癌发生过程p53基因的变化

目的 探讨由人乙型肝炎病毒(HBV)和黄曲霉毒索B1(AFB1)诱发的树鼩肝细胞癌变过程,p53基因的表达及变化。方法 将树鼩分为四组:A组:HBV AFB1;B组:只感染HBV;c组:只摄入AFB1;D组:作空白对照。定期肝活检,用免疫组织化学、分子生物学等技术对实验树鼩肝及肿瘤组织进行检测。 结果 (1)接受HBV及AFB1双因素的A组,肝细胞癌(HCC)发生率(66.7％)明显高于只接受HBV的B组或AFB1的C组(30％),而且HCC的平均发生时间也明显早于C组,(120.0±16.6)周与(153.3±5.8)周,t=3.336,P<0.01。(2)在第75周前各组动物肝均未检出突变的p53蛋白。(3)105周时,A组p53蛋白表达率为78.6％,B组为60％,C组为71.4％,D组为10％(x2≥5.03,P<0.05)。在A、C组检出p53基因异常带。(4)树鼩肝癌p53基因突变点分别位于275、78及13密码子;其野生型p53基因的核苷酸及氨基酸序列与人的p53基因的核苷酸及氨基酸序列的同源性分别为91.7％、93.4％。 结论 再次证实HBV和AFB1有协同致肝癌作用;突变的p53蛋白出现于肝细胞发生癌变之前,p53基因的突变促进了肝癌的发生和演进。HBV可能协同AFB1致p53基因突变。     

HBV与AFB1诱发树鼩肝癌前病变过程中癌基因异常表达的实验研究

动态观察HBV与AFB1诱发树鼩肝细胞癌(HCC)病变过程肝癌前病变γ-谷氨酰转肽酶阳性肝细胞灶(GGT阳性灶)和胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)、p21及p53表达情况,探讨HCC发生的可能机制。实验动物分4组:A组血清HBV阳性和摄入AFB1;B组HBV阳性;C组摄入AFB1;D组空白对照。结果:(1)各实验组肝癌前病变GGT阳性灶数量、大小均明显高于空白对照组(P<0.05),A组明显大于B、C组(P<0.05);(2)实验第15周,即有IGF-Ⅱ阳性表达,在第45周阳性率明显高于第75周(P<0.05);(3)A、B两组动物肝组织中HBsAg阳性率高达92.1％,首次在树鼩肝组织中检出HBxAg,且阳性率达86.5％。提示:HBV与AFB1协同致树鼩HCC;HCC发生早期就有癌基因IGF-Ⅱ的异常表达。     

用树鼩cDNA芯片研究树鼩肝癌中参与信号传导的部分基因变化情况

目的利用树鼩cDNA芯片研究黄曲霉毒素B1（AFBl）和（或）乙型肝炎病毒（HBV）引起的树鼩肝细胞癌（HCC）发生过程中参与信号传导的部分基因表达变化情况，从而进一步探讨HCC发生的分子机制。方法实验树鼩分3组：A组（AFB1组）、B组（AFB1＋HBV组）、C组（正常对照组）。所有动物在实验过程中定期接受剖腹手术取肝组织检查，至肝癌形成时处死动物取肝癌和癌旁组织。用树鼩cDNA芯片检测实验第30、60、90周肝活检组织、肝癌组织及其癌旁组织中各基因的表达情况，并用实时逆转录聚合酶链反应（Real time RT-PCR）法验证cDNA芯片结果。结果在A组和B组从癌前到癌变过程中胰岛素样生长因子-Ⅱ（IGF-Ⅱ）、C-rel、核因子-κB2（NF—κB2）均显示有差异表达，同时bcl-2、细胞周期素A（cyclin A）、睫状神经营养因子（CNTF）仅在B组显示有差异表达。而C组这几个基因无差异表达。实验组与对照组比较，在诱癌的早、中期（30、60周）均出现CNTF及cyclin A的差异表达。realtime RT PCR结果与cDNA芯片检测结果基本一致。A组IGF-Ⅱ、C—rel基因及B组IGF-Ⅱ基因，在肝癌组织表达水平明显低于癌旁及实验30、60周组织，而癌旁与实验30、60周相比较则无明显差异；B组CNTF基因在癌旁、肝癌及60周之间比较无明显改变，但均明显高于30周；A组CNTF基因表达水平在癌旁、肝癌组织高于癌前组织，但差异无统计学意义；C组这3个基因不同时期比较亦无明显差异。结论树目自部分信号传导通路相关cDNA芯片应用于检测树目目HCC发生过程中信号传导通路中各基因表达的变化，对进一步了解树鼠甸HCC发生的机制有重要实用价值。IGF-Ⅱ、NF-κB2、C-rel、Bcl-2、cyclin A及CNTF这几个基因与树HCC的发生发展密切相关。     

肝细胞癌肿瘤抑制基因p53过度表达及点突变的研究

目的检测重庆地区肝细胞癌 p53突变发生率,并进一步探讨 p53突变与肝细胞癌临床病理及相关危险因素的关系.方法应用一种敏感的 ARF 免疫组化和 PCR、银染 PCR-SSCP 方法检测本地区38例肝细胞癌(HCC)组织中肿瘤抑制基因p53的过度表达及点突变.结果 16例有P53蛋白过度表达(41.2%),7例有 p53基因249位密码子点突变(18.4%),2例249位密码子外第7外显子点突变.9例 p53基因有突变的肝癌中8例 P53蛋白阳性,两者符合率为88.9%.p53基因蛋白过度表达和点突变与 HCC 分化和转移有关.本组 HCC p53基因突变率与该地区黄曲霉素(AFB1)含量及乙型肝炎病毒(HBV)感染分布一致.结论该结果提示 p53基因突变与 AFB1和 HBV 等环境因素的协同作用有关,其中 AFB1主要与 p53基因249位密码子特异型突变有关,而 HBV 可能在散发型突变中发挥重要作用.     

基于RNA-Seq技术的跨种属跨病因肝癌差异表达基因的筛选

目的:运用全转录组测序(RNA sequencing,RNA-Seq)技术和跨种属、跨病因筛选策略,定位出影响肝癌发生发展的关键因子.方法:运用RNA-Seq技术,对人肝癌、癌旁和正常肝组织,以及乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)和黄曲霉毒素B1(aflatoxins,AFB1)诱发的树鼩肝癌、癌旁和正常肝组织标本进行全转录组测序、基因表达水平分析和比较;分别筛选出人肝癌差异表达分子、HBV和AFB1致癌的树鼩肝癌差异表达因子,最后定位出跨人和树鼩两个物种、跨HBV和AFB1两种致癌因素的肝癌共同差异表达分子.结果:各标本总RNA提取质量合格,RNASeq测序数据质量合格,测序数据与参考基因对比匹配率合格,样品间基因表达相关性合格.人肝癌差异表达基因有68个,其中上调基因14个,下调基因54个;HBV诱发的树鼩肝癌差异表达基因有314个,AFB1诱发的树鼩肝癌差异表达基因有20个,HBV和AFB1诱发的树鼩肝癌共同差异表达基因11个,均为下调基因.人肝癌和树鼩肝癌共同差异表达基因为2个,分别是载脂蛋白F(apolipoprotein F,APOF)和人胰岛素样生长因子酸不稳定亚基(insulin-like growth factor binding protein,acid labile subunit,IGFALS),其mRNA表达水平在肝癌中均下调.结论:运用RNA-Seq技术,跨种属、跨病因筛选肝癌关键基因的研究策略有可能推动肝癌关键基因的定位;APOF和IGFALS有可能是影响肝癌发生发展的重要分子.     

HBV基因型及A1762T/G1764A双位点变异在肝癌患者中的临床意义

目的:研究肝细胞癌(HCC)患者乙型肝炎病毒(HBV)基因型与基本核心启动子(BCP)基因区A1762T/G1764A双位点变异(BCP区双突变)之间的关系,探讨HCC的发病机制。方法:选择40例HCC患者作为研究组,40例慢性乙型肝炎(CHB)患者作为对照组,采用多对型特异性引物PCR扩增法进行基因分型及HBV基因多态性芯片检测BCP区A1762T/G1764A双位点变异。结果:40例HCC患者中有30例HBV DNA定量阳性,平均对数值为(6·53±1·31)copy/ml,将30例HBV DNA定量阳性的HCC及40例CHB患者的血清进行HBV基因分型及基因变异检测,结果显示30例HCC中HBV B基因型5例(16·7%),C基因型25例(83·3%);BCP区双突变共有20例(67·7%),其中B基因型1例,C基因型19例,BCP双突变率在B基因型和C基因型中分别为20%(1/5)和76%(19/25);40例CHB患者中B基因型32例(80%),C基因型8例(20%);BCP区双突变共有13例,其中B基因型8例,C基因型5例,BCP双突率在B基因型和C基因型中分别是25%(8/32)和62·5%(5/8)。结论:肝细胞癌的发生与BCP区A1762T/G1764A双位点变异有关,多发生在HBV C基因型的患者。     

ras、p53基因表达与丙型肝炎病毒感染相关性的免疫组化研究

目的 探讨丙型肝炎病毒(HCV)感染与肝细胞癌(HCC)之间的关系以及HCV可能的致癌机理。方法 采用免疫组织化学方法检测72例肝细胞癌标本癌及癌周组织中的HCVNS3抗原、ras基因的P21及抑癌基因P53蛋白。结果 肝细胞癌及癌周肝组织中有HCVNS3抗原检出，支持HCV与HCC之间有关联。在HCC的癌及癌周组织中P21呈致密的过量表达，提示ras癌基因的激活在HCC的发生过程中起一定作用。P53的阳性率较P21低，但p53的突变似乎也是肝癌发生的协同因素之一。组织中P21的过量表达与HCVNS3抗原阳性检出呈正相关。结论 HCV感染作为HCC的密切相关因素之一，可能通过激活某些癌基因或使某些抑癌基因突变而致肝细胞癌变。     

HBV感染对原发性肝细胞癌生物学行为及p53蛋白的表达影响

探讨在原发性肝细胞癌(HCC)中乙型肝炎病毒(HBV)的感染对肿瘤生物学行为以及突变型p53蛋白的表达影响。利用血清学指标检测60例HCC的HBV感染情况,采用抗生蛋白链霉素-过氧化酶法(S-P)检测癌组织中突变p53蛋白的表达。38例HBV感染HCC中突变p53蛋白的表达率为73.68%(28/38),22例非HBV感染表达率为45.45%(10/22),两者有显著差异(P<0.05)。在HCC中,HBV感染与肿瘤的Edmondson分级、AFP值增高、门静脉癌栓形成、肝内转移以及转氨酶增高相关(P<0.05)。HBV的感染可能与p53基因的突变共同作用导致HCC的发生及发展。同时检测以上二种指标可以为认识HCC的生物学特性,制定合理的综合治疗方案提供依据。     

乙型肝炎病毒X区基因变异与原发性肝癌的关系研究

目的初步研究乙型肝炎病毒(HBV)X区基因变异与原发性肝癌的关系。方法收集39例HBV感染患者的肝(癌)石蜡组织标本,其中慢性乙型肝炎(CHB)14例、肝细胞癌(HCC)25例。采用聚合酶链式反应(PCR)方法扩增组织中HBV X区基因,并对PCR产物进行DNA测序,分析常见变异位点的变异情况。结果 1.HCC组与CHB组相比,在X区发生插入/缺失变异,联合变异的位点及例数增多,并且A1762T与G1764A常发生双突变。2.HBV X区变异频率较高位点依次是C1655T/G、A1605C/G、A1762T、G1764A、A1772B、A1645C、C1687A、G1776T。结论 HBV X区存在点突变、插入/缺失变异及联合变异,可能在HCC的发生和发展过程中起重要作用。     

Human hepatitis B virus and hepatocellular carcinoma II. Experimental induction of hepatocellular carcinoma in tree shrews exposed to hepatitis B virus and aflatoxin B1

On the basis of the successful establishment of an animal model in tree shrews experimentally infected with human hepatitis B virus (HBV), a study on the hepatocarcinogenic effects of HBV and/or aflatoxin B1 (AFB1) was conducted. The results showed that the incidence of hepatocellular carcinoma (HCC) was significantly higher in the animals both infected with HBV and exposed to AFB1 (52.94%) than in those solely infected with HBV (11.11%) or exposed to AFB1 (12.50%). No HCC of precancerous lesions were found in the controls that were neither HBV-infected nor AFB1-exposed. Precancerous lesions, including liver cell dysplasia and enzyme-altered hyperplastic hepatocyte foci, were observed before the occurrence of HCC, and the frequency of their appearance correlated well with the incidence of HCC. HBV DNA and the protein it encodes were detected in the cancer cells and/or the surrounding hepatocytes. Integration of HBV DNA inot the host liver genome was found during hepatocarcinogenesis among the animals infected by HBV. These results suggest that exposure to HBV and AFB1 may play a synergistic role in the development of HCC, and support the viewpoint of an aetiological relationship between HBV and HCC.Abbreviations HCC hepatocellular carcinoma - HBV human hepatitis B virus - AFB1 aflatoxin B1 - GGT foci hyperplastic hepatocyte foci positive for -glutamyltranspeptidase - LCD liver cell dysplasia     

Aflatoxin sufferer and p53 gene mutation in hepatocellular carcinoma

Ａｆｌａｔｏｘｉｎｓｕｆｅｒｅｒａｎｄｐ５３ｇｅｎｅｍｕｔａｔｉｏｎｉｎｈｅｐａｔｏｃｅｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａＤＥＮＧＺｈｕｏＬｉｎａｎｄＭＡＹｕｎＳｕｂｊｅｃｔｈｅａｄｉｎｇｓＡｆｌａｔｏｘｉｎＢ１;ｇｅｎｅｓ,ｐ５３;ｍｕｔａｔｉｏｎ;...     

Expression of IGF- II, p53, p21 and HBxAg in precancerous events of hepatocarcinogenesis induced by AFB1 and/or HBV in tree shrews

INTRODUCTION In order to study the relationship between oncogene expression and HCC generation, we observed the precancerous hepatic GGT foci, IGF-Ⅱ, p53 and p21 expression during hepatocarcinogenesis of tree shrew induced by hepatitis B virus (HBV) and/or aflatoxin B1 (AFB1).     

原发性肝细胞癌中HBV各基因片段整合与癌基因,抑癌基因表达？…

目的 研究肝细胞癌中ＨＢＶ各基因整合与癌基因、抑制基因表达的关系。方法 以随机引物法制备ＨＢＶ全基因及各基因探针,用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交测定ＨＢＶ ＤＮＡ的整合状态,以斑点杂交检查整合型ＨＣＣ中ＨＢＶ各基因的整合,以免疫组织细胞化学方法检查癌基因、抑癌基因的表达。结果 ３２例纯整合型ＨＣ中ＨＢＶ Ｘ．Ｓ．Ｐｅｒ－Ｓ和Ｃ的整合率分别为８７．５％（２８／３２）,６２．５％（２０／３２）,６２．５％（２     

Hepatic aflatoxin B1‐DNA adducts and TP53 mutations in patients with hepatocellular carcinoma despite low exposure to aflatoxin B1 in southern Japan

Background & aims: Hepatitis B or C virus infection is considered to be the main cause of hepatocellular carcinoma (HCC) in Japan. Aflatoxin B1 (AFB1) is a carcinogen associated with HCC in regions with high exposure. Mutations in codon 249, exon 7 are a hallmark of AFB1 exposure. Therefore, to clarify the role of AFB1 in hepatocarcinogenesis, we examined AFB1‐DNA in liver tissue and sequenced TP53 in Japanese patients with HCC. Methods: Hepatocyte AFB1‐DNA adducts were determined immunohistochemically and direct sequencing of TP53 was done to determine mutations in 188 of 279 patients who underwent hepatic resection for HCC. We assessed hepatitis C virus antibodies (HCV Ab) and HBSAg expression; patients without either were defined as having non‐B non‐C hepatocellular carcinoma (NBNC HCC). Results: AFB1‐DNA adducts were detected in hepatocyte nuclei in 18/279 patients (6%), including13/83 patients (16%) with NBNC HCC and 5/51 patients (10%) expressing hepatitis B surface antigen. None of the patients with HCV Ab (n=136) were positive for AFB1‐DNA. The incidence of the G–T transversion and mutations in exon 7 of TP53 in patients with AFB1‐DNA adducts were significantly higher in patients with than in patients without AFB1‐DNA adducts. All three patients with the codon 249 AGG–AGT mutation had AFB1‐DNA adducts. Conclusion: Although exposure to AFB1 is thought to be low in Japan, it is still associated with hepatocarcinogenesis, particularly in NBNC HCC and hepatitis B individuals.