氧化型低密度脂蛋白影响人脐静脉内皮细胞生存率和两种细胞因子的分泌

目的:研究氧化型低密度脂蛋白对体外培养的人脐静脉内皮细胞的影响及其可能机制。方法:采用人脐静脉内皮细胞原代培养,加氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共同孵育,用MTT法测细胞生存率、ELISA法测白介素(IL-6)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1),并设空白组进行对照。结果:ox-LDL能造成血管内皮细胞具有某些动脉粥样硬化(AS)特征的改变,如内皮损伤、IL-6、MCP-1水平升高,与对照组相比有显著差异(P<0.01)。结论:可用ox-LDL刺激体外培养的内皮细胞来进行动脉粥样硬化的研究。     

三七总皂苷对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞的细胞间黏附分子-1的影响

目的 研究三七总皂苷对氧化型低密度脂蛋白(ox LDL )损伤血管内皮细胞的保护作用,以探讨其治疗动脉硬化闭塞症 (ASO)的机制。方法 以培养原代人脐静脉内皮细胞（HUVEC）作为靶细胞, 用ox LDL造成HUVEC损伤模型,以三七总皂苷进行干预。光镜下观察细胞形态变化,MTT法检测细胞活性;采用蛋白定量法检测HUVEC与单核细胞的黏附率;用流式细胞仪测定HUVEC的细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的蛋白表达。结果 ox-LDL作用HUVEC后12、24 h时,HUVEC损伤明显,细胞活性显著降低,人单核细胞与HUVEC的黏附率显著升高, HUVEC的ICAM 1的蛋白表达水平也明显升高, 均明显高于正常对照组(P＜0.05,P＜0.01),而三七总皂苷能使ox-LDL损伤的HUVEC形态趋于正常,活性增强,并明显降低人单核细胞与HUVEC的黏附率,显著降低ICAM-1蛋白的表达水平,与ox-LDL组比较差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),这种作用随着剂量的增加而增强。结论 三七总皂苷能通过下调内皮细胞表面黏附分子的表达抑制单核－血管内皮细胞黏附,从而发挥对血管内皮细胞的保护作用,这可能是其治疗ASO的机制之一。     

氧化型低密度脂蛋白对培养人脐静脉内皮细胞生长的影响

动脉粥样硬化形成是一个多因素多途径协同作用的过程,发病机制复杂。在各独立危险因素中脂代谢异常是首要因素,尤其是低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)是AS的一个主要危险因子。研究发现,低密度脂蛋白经氧化修饰后其致AS作用大为加强[1]。本实验参考低温超速离心法提取LDL[2],用Cu2+氧化法制备ox-LDL,并以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为对象,观察ox-LDL对培养的HUVECs生长的影响,旨在为临床研究AS的发生、发展机制提供实验依据。     

氧化型低密度脂蛋白对内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对内皮细胞损伤的可能机制.方法 用不同质量浓度的ox-LDL处理体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)24h,观察HUVECs的形态学变化,评价细胞增殖,观察PI染色后细胞核的形态改变.使用流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 与对照组相比,100mg/L ox-LDL能够促进细胞增殖,200mg/L ox-LDL对细胞增殖无影响,400mg/L ox-LDL明显抑制细胞增殖并可明显引起细胞凋亡,与空白对照组比较差异有统计学意义.结论 ox-LDL能抑制内皮细胞增殖并引起细胞凋亡,这可能与其致动脉粥样硬化(AS)作用机制有关,可用ox-LDL刺激体外培养的内皮细胞进行AS研究.     

软脉煎对氧化低密度脂蛋白造成血管内皮细胞损伤的影响

目的：为了探讨具有补肾益气作用的中药复方软脉煎干预动脉硬化(AS)的机制，主要是对氧化低密度脂蛋白(OX—LDL)造成血管内皮细胞(VEC)损伤的影响。方法：采用人脐静脉内皮细胞原代培养，加OX—LDL共同孵育造成血管内皮细胞损伤模型，用中药血清药理学方法将药物血清作用于细胞模型。用M1vr法测细胞生存率，并设舒降之(辛伐他汀)组进行对照。结果：OX—LDL组内皮细胞生存率明显降低(P＜0．01)：软脉煎组和舒降之组均能显著提高细胞生存率(软脉煎组P＜0．01，舒降之组P＜0．05)；软脉煎组细胞生存率高于舒降之组(P＜0．01)。结论：软脉煎能改善OX—LDL对内皮细胞的毒性作用，且优于舒降之组。     

荷叶水提物抑制氧化低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1和血管细胞黏附分子1

目的:探讨荷叶水提物对氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和血管细胞黏附分子1(VCAM-1)的影响。方法:(1)分别用25mg/L、50mg/L、100mg/L的Ox-LDL刺激培养的HUVECs 24h,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定MCP-1和VCAM-1的mRNA表达,酶联免疫吸附法(ELISA)法测定细胞上清中MCP-1和VCAM-1的含量;(2)预先分别用10mg/L、20mg/L、40mg/L的荷叶水提物干预HUVECs,再用50mg/L的Ox-LDL刺激,半定量RT-PCR方法测定MCP-1和VCAM-1的mRNA表达,ELISA法测定细胞上清中MCP-1和VCAM-1的含量。结果:不同浓度的Ox-LDL刺激HUVECs后,MCP-1和VCAM-1 mRNA的表达及细胞上清中的含量呈浓度依赖性上调(P<0.01),且不同浓度的Ox-LDL组间差异亦有统计学意义(P<0.01)。荷叶水提物干预后,HUVECs的MCP-1 mRNA和VCAM-1 mRNA的表达及细胞上清MCP-1和VCAM-1含量呈浓度依赖性下降。结论:荷叶水提物能够抑制Ox-LDL诱导的HUVECs表达MCP-1和VCAM-1,可能通过这一机制有抗动脉粥样硬化的潜在作用。     

补肾益气方对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的保护作用

目的:探讨补肾益气方防治动脉粥样硬化(AS)的部分机理.方法:采用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)致血管内皮损伤为AS细胞病理模型,采用MTT法、3H-Tdr掺入法观察细胞增殖能力与生命活力,通过胞内丙二醛(MDA)含量及细胞培养液乳脱氢酶(LDH)活力的测定,分析比较细胞的受损程度.结果:ox-LDL损伤的血管内皮细胞内MDA含量明显增多,细胞培养液内LDH活力增强,细胞增殖能力及生命活力下降,DNA合成减慢,补肾益气方对此均有明显的改善作用.结论:抗氧化损伤、保护血管内皮细胞是补肾益气方防治AS的部分机理.     

银杏黄酮苷元对氧化型低密度脂蛋白诱导的人主动脉内皮细胞氧化损伤的影响

目的 观察银杏黄酮苷元（Ginkgo flavone aglycone,GA）对氧化型低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL）诱导的人主动脉内皮细胞（human aortic endothelial cells,HAECs）氧化应激损伤的保护作用及其机制。方法 体外培养HAECs,分为6组,即空白对照组、ox-LDL组、VitE组以及GA30、60、90 mg/L组。除空白对照组外,其余5组均加入ox-LDL 150 mg/L复制氧化损伤模型;GA30、60、90 mg/L组分别给予相应剂量GA干预;VitE组给予VitE 200 μmol/L干预。采用MTT法检测细胞存活率;CM-H2DCFDA荧光探针测定细胞内活性氧（ROS）含量;酶联免疫吸附法检测NADPH氧化酶含量;硫代巴比妥酸法检测丙二醛（MDA）水平;Griess reagent法测定一氧化氮（NO）含量;黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）的含量。结果 与空白对照组（100.00%）比较,ox-LDL组（70.68%）细胞存活率明显降低（P<0.05）;VitE组、GA30 mg/L组、GA60 mg/L组细胞存活率分别为88.95%、83.25%、94.93%,均明显高于ox-LDL组（P<0.05）,以60 mg/L GA作用更强。与空白对照组比较,ox-LDL组细胞内ROS、MDA及NADPH氧化酶水平增加,NO含量及SOD活性降低,差异均有统计学意义（P<0.05）;与ox-LDL组比较,GA30 mg/L组、GA60 mg/L组及VitE组细胞内ROS、MDA及NADPH氧化酶水平降低,NO含量及SOD活性增加,差异均有统计学意义（P<0.05）,以60 mg/L GA作用更强。结论 GA可明显抑制ox-LDL诱导的ROS合成,降低MDA水平,升高NO。其作用机制可能与SOD活性增加及NADPH氧化酶活性降低有关。     

软脉煎对氧化低密度脂蛋白造成血管内皮细胞损伤的影响

目的:为了探讨具有补肾益气作用的中药复方软脉煎干预动脉硬化(AS)的机制,主要是对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)造成血管内皮细胞(VEC)损伤的影响.方法:采用人脐静脉内皮细胞原代培养,加ox-LDL共同孵育造成血管内皮细胞损伤模型,用中药血清药理学方法将药物血清作用于细胞模型,用MTT法测细胞生存率,并设舒降之(辛伐他汀)组进行对照.结果:ox-LDL组内皮细胞生存率明显降低(P＜0.01);软脉煎组和舒降之组均能显著提高细胞生存率(软脉煎组P＜0.01,舒降之组P＜0.05);软脉煎组细胞生存率高于舒降之组(P＜0.01).结论:软脉煎能改善ox-LDL对内皮细胞的毒性作用,且优于舒降之组.     

沥水调脂胶囊对氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞凋亡的影响

目的：探讨沥水调脂胶囊血清对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导内皮细胞凋亡的影响。方法：复制氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导血管内皮细胞凋亡模型，采用流式细胞术、形态学观察、DNA片段琼脂糖凝胶电泳等方法，观察沥水调脂胶囊含药血清对氧化型低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡的作用。结果：200μg/ml ox-LDL作用于培养的人脐静脉内皮细胞24h后，凋亡率明显升高，Hoechst33342染色，荧光显微镜上可观察到早、中、晚期各种典型的凋亡细胞，DNA电泳可见细胞凋亡特有的梯形条带。沥水调脂胶囊血清使内皮细胞凋亡率明显下降，DNA凋亡带减弱。结论：沥水调脂胶囊对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡有一定的抑制作用。     

胡柚果肉不同极性提取物对3 T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取率、白细胞介素-6及游离脂肪酸的影响

目的：用不同极性的溶剂对胡柚果肉进行依次分离,得到5个不同极性组分,将不同极性组分进行促进3 T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗、降低白细胞介素-6和游离脂肪酸分泌的活性组分的筛选及其机制的研究。方法：采用溶剂法将胡柚果肉分离成5个不同极性的组分;诱导分化3 T3-L1脂肪细胞,成熟后添加不同浓度的提取组分作用48 h,检测细胞培养液中葡萄糖、细胞白介素-6和游离脂肪酸含量,比较加药培养前后的葡萄糖、细胞白介素-6和游离脂肪酸含量,筛选出具有促进3 T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗、降低白细胞介素-6和游离脂肪酸分泌的活性组分。结果：胡柚果肉中极性组分占（88.96±2．34）％,而非极性组分的含量较少,胡柚果肉石油醚组分、二氯甲烷组分、乙酸乙酯组分和水组分均能显著促进脂肪细胞对葡萄糖的摄取,二氯甲烷组分、乙酸乙酯组分、正丁醇组分和水组分能够显著降低脂肪细胞白介素-6和游离脂肪酸的水平。结论：胡柚果肉可通过促进3 T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的消耗,降低细胞因子白细胞介素-6和游离脂肪酸水平调节血糖。     

HG颗粒对CCl4复合因素致肝纤维化大鼠血清IL-1和IL-6含量的影响

目的研究HG颗粒对CCl4（四氯化碳）复合因素致肝纤维化大鼠血清IL-1（白介素1）和IL-6（白介素6）含量的影响。方法70只SD大鼠，除空白对照组10只外，其余各组大鼠皮下注射CCl4，同时予高脂饲料和20％乙醇喂养6周建立肝纤维化大鼠模型，存活大鼠按性别和体重随机分为5组，再加上空白对照组，动物共计6组，分别给予药物或蒸馏水。空白对照组：蒸馏水0．1ml／kg；模型对照组：蒸馏水0．1ml／kg；HG颗粒高、中、低3种剂量组：6，3，1．5g生药／kg；复方鳖甲软肝片组：1g／k，灌胃治疗，1次／d，连续4周。观察模型大鼠血清IL-1和IL-6含量的变化。结果模型大鼠血清IL-1和IL-6含量均明显增高。HG颗粒3种剂量组治疗后均能降低模型大鼠血清IL-1和IL-6含量。复方鳖甲软肝片亦可降低大鼠血清IL-1和IL-6含量。结论HG颗粒对CCl4复合因素致肝纤维化大鼠有显著的治疗作用。     

加味参芪地黄汤对大鼠系膜细胞分泌IL—1、IL—6的影响

目的：探讨加味参芪地黄汤对肾小球系膜细胞分泌细胞因子的作用。方法：应用血清药理学方法,观察加味参芪地黄汤对体外培养的大鼠系膜细胞分泌IL-1、IL-6的影响,并用雷公藤多甙作为对照。结果：加味参芪地黄汤能显著抑制经LPS刺激的大鼠系膜细胞对IL-1和IL-6的分泌,而雷公藤多甙仅对IL-1的分泌有抑制。结论：加味参芪地黄汤能干预活化的系膜细胞分泌炎病介质,具有免疫调节作用。     

滋阴补肾法对卵巢切除所致骨质疏松大鼠骨髓基质细胞IL-1和成骨细胞IL-6表达的影响

目的:通过观察滋阴补肾法对卵巢切除所致骨质疏松大鼠骨髓基质细胞IL-1和成骨细胞IL-6表达的影响,探讨其治疗骨质疏松症的机理.方法:将大鼠随机分为5组,即空白对照组、假手术组、模型组、雌激素组和补肾组.摘除大鼠双侧卵巢3个月后,灌胃给予左归丸,共给药3个月.采用骨组织形态计量学的方法对大鼠胫骨不脱钙骨切片进行形态计量;采用免疫组化和原位杂交的方法分别检测骨髓基质细胞IL-1和成骨细胞IL-6蛋白和mRNA的表达.结果:与模型组比较,补肾组大鼠胫骨TBV%显著增高,TRS%以及TFS%、MAR、OSW和mAR均明显降低;同时,其骨髓基质细胞IL-1和成骨细胞IL-6蛋白和mRNA的表达皆显著降低.结论:滋阴补肾法能使骨髓基质细胞IL-1和成骨细胞IL-6表达降低,是其能够治疗骨质疏松症的机理之一.     

原发性肾小球疾病湿热证和尿MCP-1、IL-6关系临床观察

目的:观察慢性原发性肾小球疾病的患者,湿热和非湿热组尿MCP-1、IL-6之间有无差异,从而探讨湿热证和MCP-1、IL-6的关系。方法:纳入50例患者,进行临床观察,留取尿液样本,ELISA方法测尿液IL-6、MCP-1水平,使用SPSS18.0统计软件包进行中医证候以及临床资料IL-6、MCP-1的数据分析。结果:(1)原发性肾小球疾病湿热证发病率为68%,湿浊证占18%(9/50),血瘀证占26%(13/50);(2)原发性肾小球疾病湿热证患者较非湿热证患者尿MCP-1、IL-6水平高(P<0.05);结论:(1)原发性肾小球疾病邪实证中湿热证的发病率最高,(2)湿热证和肾脏的免疫发病机制可能存在关系,不仅包括细胞因子,还包括趋化因子。     

益气除痰方对脾虚Lewis肺癌小鼠肿瘤生长、生存期及PRDX-1、PRDX-6表达的影响

目的 观察益气除痰方对脾虚C57BL/6J小鼠Lewis肺癌肿瘤生长、肺转移、生存期及肿瘤组织中过氧化物氧化还原酶PRDX-1、PRDX-6表达的影响。     

益气活血复方对慢性心力衰竭大鼠TNF—α及IL-6的影响

目的探讨中药益气活血复方对慢性心力衰竭大鼠血清中TNF-α及IL-6的影响。方法选用健康雄性Wistar大白鼠，采用冠状动脉结扎术配合饥饿、游泳等方法造成慢性心力衰竭的动物模型。将造模成功的大鼠随机分为4组：模型组、中药大剂量组、中药中剂量组和西药对照组，每组8只；另设一组正常大鼠作为对照组。喂药及正常喂养8周后，用彩色超声多普勒心动图测定大鼠心功能且采用放射免疫方法测定血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α），白介素6（IL-6）的含量。结果大鼠模型组心功能明显降低（P〈0．01）；血清中TNF-α和IL-6含量显著高于对照组（P均〈0．01）；中药组和西药组TNF-α及IL-6含量均低于模型组（P均〈0．01）。结论益气活血复方可以降低TNF-α、IL-6的水平，改善心脏功能。     

温补肾阳方对去卵巢所致骨质疏松大鼠IL-1和IL-6活性的影响

目的：探讨温补肾阳方防治骨质疏松症的机理。方法：以卵巢切除所致的骨质疏松大鼠为模型,采用骨组织形态计量学方法测定胫骨TBV％、TRS％和TFS％,分别采用小鼠胸腺细胞检测法和依赖株细胞增殖反应检测法测定IL-1和IL-6的活性。结果：温补肾阳方能使胫骨TBV％显著增高,使TRS％和TFS％均显著降低,并能使之降低到与正常大鼠相当的水平。大鼠切除卵巢后,IL-1和IL-6活性显著增高,而温补肾阳方时这两者均有明显的抑制作用。结论：温补肾阳方能够抑制IL-1、IL-6的活性是其防治绝经后骨质疏松症的机理之一。