16,16-二甲基前列腺素E2对大鼠肺纤维化成纤维细胞的作用

目的　探讨 16 ,16 二甲基前列腺素E2 (dmPGE2 )在博莱霉素诱导大鼠肺纤维化进程中对成纤维细胞胶原合成及分化作用的影响。方法　 4 5只Wistar大鼠随机分为 3组 ,每组 15只。模型组和干预组气管内灌注博莱霉素诱导肺纤维化 ,干预组于灌注后当天开始给予dmPGE2 肌肉注射。通过苏木素 伊红 (HE)染色及Ⅰ型胶原 (Col Ⅰ )、Ⅲ型胶原 (Col Ⅲ )、转化生长因子 β1(TGF β1)免疫组化染色来评价纤维化程度 ,用原位杂交方法检测结缔组织生长因子 (CTGF)的mRNA在肺内的表达水平 ,对肌成纤维细胞中特异表达的α 平滑肌动蛋白 (α SMA)进行免疫组化染色 ,观察成纤维细胞分化水平的变化。结果　①模型组中TGF β1、CTGFmRNA、Col Ⅰ、Col Ⅲ、α SMA表达水平较空白组明显增高 (P <0 .0 5 ) ;②干预组中CTGFmRNA和Col Ⅰ、Col Ⅲ水平与模型组比明显下降 ,α SMA阳性细胞减少。结论　PGE2 可减少博莱霉素诱导肺纤维化模型肌成纤维细胞数量 ,减轻肺纤维化程度 ,这种作用可能部分通过降低CTGFmRNA水平实现。     

结缔组织生长因子基因表达与肺纤维化关系初探

目的 :研究结缔组织生长因子 (connectivetissuegrowthfactor,CTGF)在大鼠肺纤维化模型中的基因表达与肺纤维化之间的关系。方法 :4 2只Wistar大鼠随机分为两组。模型组 (M组 )气管内灌注博莱霉素 ,对照组 (C组 )气管内用生理盐水。于给药后第 7,14 ,2 8d分别处死 7只。组织学处理后切片。用原位杂交及免疫组化SABC法分别检测CTGF、TGF β1、FN、Col Ⅰ和Col Ⅲ在肺内的表达。结果 :M组CTGF、TGF β1、FN、Col Ⅰ和Col Ⅲ在肺内的表达CTGF的mRNA在肺内的表达显著高于C组。结论 :CTGF作为TGFβ1的下游因子 ,其基因表达可能通过促进细胞外基质 (ECM)如FN和Col Ⅲ等合成而在博莱霉素诱导肺纤维化形成过程中起重要作用。     

转化生长因子β1诱导人肾小管上皮细胞表达结缔组织生长因子

目的　研究转化生长因子 β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)对人肾小管上皮细胞 (humanproximaltubularep ithelialcells ,HTECs)表达结缔组织生长因子 (connectivetissuegrowthfactor ,CTGF)的影响。方法　体外培养的HTEC被根据随机数字表分为 3组 :对照组 (C组 ) :无血清培养基 (freeserummedium ,FSM)培养 ;TGFβ1a和TGFβ1b组 (Ta 组和Tb 组 ) :分别用含不同浓度TGFβ1(Ta 组 :2 0ng/ml,Tb 组 :40ng/ml)的FSM培养 ,96h后 ,分别用RT PCR和免疫组化方法检测HTEC表达CT GFmRNA和蛋白。结果　①C组 :CTGFmRNA和蛋白表达为阴性 ;②Tb 组和Ta 组 :CTGFmRNA和蛋白表达皆呈阳性。Tb 组和Ta 组相比 ,CTGF的mRNA和蛋白表达量皆显著增加 (P <0 .0 1)。结论　TGFβ1能呈剂量依赖性地诱导HTEC合成CTGF。     

结缔组织生长因子与转化生长因子β1在肝纤维化组织中的表达

目的:研究结缔组织生长因子与转化生长因子β1在肝纤维化组织中的表达及其相关性。方法:用CCl4皮下注射法制备肝纤维化模型,用免疫组化方法动态检测结缔组织生长因子(CTGF)、转化生长因子β1(TGFβ1)、I、III型胶原在肝纤维化组织中的表达。将免疫组化结果行图像扫描半定量分析后进行统计学分析。结果:正常对照组CTGF不表达,TGFβ1微量表达,I、III型胶原主要分布在门静脉、中央静脉内皮下以及Disse间隙。随着CCl4注射时间的延长,肝纤维化程度的加深,上述4种蛋白质在肝纤维化组织中的表达逐渐增加,且CTGF与TGFβ1之间存在着显著的相关性。结论:结缔组织生长因子与转化生长因子β1相伴表达,且与肝纤维化的发生密切相关,可作为肝纤维化治疗的新靶点。     

针对CTGF的shRNA抑制TGFβ1诱导人肾小管上皮细胞合成胶原

目的研究针对结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对转化生长因子β1(TGFβ1)诱导人肾小管上皮细胞株(human renal tubular epithelial cell,HKC)合成胶原的抑制作用.方法设计和构建带有U6启动子的能产生针对CTGF的shRNA的RNA干扰表达质粒,转染至受TGF β1刺激的HKC,以RT-pCR和Western blot检测HKC转染前后CTGF表达,以3H脯氨酸掺入法检测总胶原合成量.结果和仅受TGFβ1刺激组相比,转染了RNA干扰表达质粒的受TGFβ1刺激的HKC CTGFmRNA和蛋白表达明显减弱,总胶原合成量下降(P＜0.01).结论针对CTGF的短发夹RNA能明显抑制TGF β1诱导HKC合成胶原.     

促纤维化细胞因子在纤维化胰腺组织中的表达

目的　揭示转化生长因子 (TGF) β1、结缔组织生长因子 (CTGF)在慢性胰腺炎的动物模型中的表达情况及其与胰腺纤维化的相关性。方法　采用Puig Divi等方法制备慢性胰腺炎大鼠模型 (模型组 ) ,制模后的 3、4、5和 6周取胰腺组织 ,对照组则在 4周取材。分别作苏木精 伊红染色、免疫组织化学 [纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原 (COL Ⅰ )、TGF β1、CTGF]和原位杂交染色 (TGF β1、CTGF)。结果　模型组于 3周后可见局部胰管扩张、胰腺间质纤维组织轻度增生、炎症细胞浸润和腺泡细胞空泡样变 ,小叶内腺泡细胞有局限性纤维化或无变化。 4周时胰管显著增生 ,胰管周围及小叶间和小叶内纤维化伴炎症细胞浸润 ,局部腺体萎缩代之以纤维瘢痕组织。而 5、6周时胰腺纤维化程度与 4周时比较并未见明显增强。免疫组织化学结果显示 ,TGF β1主要分布于间质区成纤维细胞细胞质、间质基质区和炎性细胞浸润区。CTGF分布于腺上皮细胞的细胞质和部分间质成纤维细胞中。原位杂交显示TGF β1mRNA及CTGFmRNA分布部位与免疫组织化学结果相吻合。此外 ,TGF β1、CTGF与代表纤维化严重程度的FN、COL Ⅰ的分布及表达基本相同并成正相关 (P <0 .0 5 )。对照组在4周时仅见脂肪组织浸润。所有结果 3、4两周的差异有显著性 (P <0 .0 1) ,4、     

水飞蓟宾对转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞中结缔组织生长因子及Ⅲ型胶原表达的影响

目的:了解水飞蓟宾(silibinin)对转化生长因子(TGF)-β_1诱导的人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)结缔组织生长因子(CTGF)表达及Ⅲ型胶原分泌的影响。方法:将体外培养的HK-2细胞分为3组:①对照组;②TGF-β_1组(TGF-β_1的终浓度为5 ng/ml);③TGF-pβ_1 水飞蓟宾组(TGF-β_1的终浓度为5 ng/ml,水飞蓟宾终浓度分别为5、10、20μg/m1)。48 h后,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内CTGFmRNA的水平,ELISA方法检测培养上清中胶原Ⅲ及CTGF的浓度。结果:与对照组比较,TGF-β_1刺激使HK-2细胞CTGF基因表达和蛋白分泌及Ⅲ型胶原分泌均显著增加(P<0.01)。与TGF-β_1组比较,加用5～20μg/ml水飞蓟宾可以抑制TGF-β_1刺激所诱导的CTGF基因表达和蛋白分泌及Ⅲ型胶原分泌(P<0.01),以20μg/ml水飞蓟宾效果最显著。结论:水飞蓟宾能部分抑制TGF-β_1诱导CTGF的基因和蛋白的表达及Ⅲ型胶原分泌,提示水飞蓟宾可能通过阻抑CTGF表达及减少细胞外基质的积聚,具有潜在的抗肾纤维化作用。     

慢性乙型肝病患者血清TGF-β1、CTGF和Col Ⅰ水平的检测及其意义

目的:观察慢性乙型肝病患者血清转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子（CTGF）和Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)水平变化,阐明CTGF水平与肝纤维化的关系。方法：采用ELISA法检测155例慢性乙型肝病患者（慢性乙型肝炎89例,活动性肝硬化35例,静止性肝硬化31例）和30例健康者(正常对照组)血清TGF-β1、CTGF和Col Ⅰ水平,对其中26例慢性乙型肝炎患者的肝穿活体组织经HE染色进行炎症分级和纤维化分期。结果： 慢性乙型肝炎、活动性肝硬化患者血清TGF-β1、CTGF和Col Ⅰ水平显著高于正常对照组（P<0.01）,静止性肝硬化血清CTGF及Col Ⅰ水平也高于正常对照组（P<0.05）;Spearman相关分析：慢性乙型肝炎肝组织炎症程度与血清TGF-β1水平呈正相关关系(r=0.721,P<0.05),血清CTGF与肝组织纤维化程度呈正相关关系（r=0.719,P<0.05)。结论:慢性乙型肝病患者血清CTGF水平升高且与患者肝纤维化程度呈正相关关系,血清CTGF水平的检测结果可作为判定慢性乙型肝病肝纤维化的生物学指标。     

雾化吸入布地奈德干预肺纤维化大鼠及其机制的实验研究

目的：探讨雾化吸入布地奈德对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化的影响及其可能机制。方法：45只SD雌性大鼠随机分为3组（各组15只）：对照组、模型组和干预组,肺纤维化模型行气管内滴入博莱霉素造模。干预组造模后第7天雾化吸入布地奈德,模型组和对照组雾化吸入等量生理盐水,雾化后第7天、第14天、第28天各组随机处死5只动物并分别保存肺组织,HE和Masson染色判断肺组织肺泡炎及肺纤维化程度;免疫组化染色测定肺组织转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）、结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）的表达水平;RT-PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达水平。结果：肺组织病理学观察显示对照组肺泡炎和肺纤维化程度明显轻于模型组和干预组,干预组较模型组有明显改善;模型组和干预组肺组织中TGF-β和CTGF水平较对照组均有明显增高（P<0.05）,但干预组较模型组表达减少（P<0.05）;模型组Ⅰ、Ⅲ型胶原表达明显高于对照组（P<0.05）,而干预组较模型组表达明显减少（P<0.05）。结论：布地奈德具有明显的抗纤维化作用,机制可能为通过抑制细胞因子的表达而减少肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原的生成,最终抑制肺纤维化。     

当归对大鼠肺纤维化间质成纤维细胞的干预作用

目的:观察浓当归对博莱霉素诱导大鼠肺纤维化程度的影响及对肺间质成纤维细胞的影响。方法:45只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组和当归组,经气管内灌注博来霉素后,当归组大鼠腹腔内注射浓当归注射液10 ml/(kg.d),空白组、模型组给予等量生理盐水处理,分别于第7,14和28天各处死5只大鼠。免疫组化法分析各组α-平滑肌动蛋白(-αSMA)、胶原蛋白Ⅰ(COL-Ⅰ)、胶原蛋白Ⅲ(COL-Ⅲ)表达水平,用原位杂交的方法检测结缔组织生长因子(CTGF)mRNA水平。结果:当归组大鼠肺组织中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ沉积较模型组明显降低(P<0.05);当归组间质中-αSMA阳性表达水平较模型组明显减低(P<0.05),当归组大鼠肺组织CTGF mRNA水平较模型组降低(P<0.05)。结论:当归可能通过降低纤维化肺组织中CTGF mRNA水平,间接抑制成纤维细胞增殖、分化作用,减轻纤维化程度。     

16,16-二甲基前列腺素E_2在大鼠肺纤维化发展各阶段中的作用

目的 :观察 1 6,1 6-二甲基前列腺素 E2 ( dm PGE2 )对博莱霉素诱导肺纤维化发展过程中各阶段的干预作用。方法 :通过免疫组化方法分析各组肿瘤坏死因子 -α( TNF-α)、胶原蛋白 ( Col- )、胶原蛋白 ( Col - )水平 ,运用原位杂交方法检测结缔组织生长因子( CTGF) m RNA转录水平。结果 :1实验组第 7天 TNF-α与模型组相比稍有下降 ,无明显差异 ;实验组后 3阶段 TNF-α水平较模型组明显下降 ( P<0 .0 5 )。 2实验组前 3阶段CTGFm RNA水平与模型组比较明显下降 ( P<0 .0 5 ) ,Col- ,Col- 水平较模型组明显下降 ( P<0 .0 5 ) ,而纤维化终末期 CTGFm RNA、Col- 、Col- 水平均较模型组稍减低 ,无显著性差异。结论 :在纤维化发生发展阶段 ,dm PGE2 可能通过调节炎症反应和抑制成纤维细胞胶原合成使慢性炎症和纤维化反应均减轻     

单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的机制

目的 :探讨单侧输尿管梗阻后肾间质纤维化的形成机制。方法 :将 2 0只大鼠采用单侧输尿管梗阻(UUO)模型 ,术后 1周、2周观察双肾组织病理改变 ,并应用免疫组织化学方法检测肾间质Ⅲ型胶原、转化生长因子β1(TGF β1)和核因子 κB(NF κB)的表达。结果 :随着梗阻时间延长 ,梗阻肾间质Ⅲ型胶原、TGF β1和NF κB的表达增加 ,对侧无明显变化 ,两组相比有显著差异 (P <0 .0 5 )。结论 :单侧输尿管梗阻肾间质TGF β1、NF κB的过度表达 ,可上调肾间质Ⅲ型胶原的表达 ,是形成间质纤维化的重要原因之一     

卡托普利对实验性肺间质纤维化的干预作用

目的 :观察血管紧张素转换酶 (ACE)活性在博莱霉素 (BLM)所致大鼠肺间质纤维化过程中的动态变化 ,了解ACE抑制剂卡托普利 (CPT)对大鼠肺纤维化模型的影响。方法 :4 5只SD大鼠随机分为 3组 :对照组、模型组和用药组。模型组和用药组经气管内注入BLM诱导肺纤维化 ,随即分别每日胃管内灌注生理盐水和CPT(6 0mg·kg- 1·d- 1 )进行干预 ;对照组气管和胃管内灌注均以生理盐水代替。各组动物均于气管内灌药后 7,14 ,2 8d分别处死 5只 ,测动物体重及肺湿重 ,取肺组织做HE染色 ,Ⅰ、Ⅲ型胶原的免疫组化 ,并行图像分析 ;心腔内取血测ACE的活性。结果 :血清ACE活性在气管内灌注BLM后迅速上升 ,第 7d达到高峰 (与对照组比P <0 .0 1) ,随后下降 ,到第2 8d基本恢复正常。CPT能显著降低血清中ACE的活性 ,减少肺内胶原的表达 ,减轻肺泡炎和肺纤维化的程度。结论 :CPT能减轻BLM诱导的大鼠肺泡炎和肺纤维化     

siRNA干预CTGF和TIMP-1对大鼠肝星状细胞胶原分泌的影响

目的研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默结缔组织生长因子(connective tissue growthfactor,CTGF)和组织金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinases,TIMP-1)对肝星状细胞(hepaticstellate cell,HSC)CTGF和TIMP-1基因表达以及对Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌的影响。方法根据已筛选出的对CTGF和TIMP-1基因最有效的RNA干扰靶位,将化学合成siRNA CTGF和siRNA TIMP-1以脂质体LipofectamineTM2000介导,瞬时转染HSC-T6细胞,分别设siRNA CTGF组、siRNA TIMP-1组、siRNA CTGF和siRNA TIMP-1联合组、脂质体组及非特异性(negative control,NC)siRNA组,抽提转染24、48h细胞mRNA和蛋白,并收集细胞上清液。应用RT-PCR鉴定CTGF和TIMP-1mRNA的表达;Western blot检测其蛋白表达;ELISA法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原的分泌。结果各干预组转染24、48h后分别与脂质体组和NC siRNA组比较,HSC-T6细胞CTGF及TIMP-1mRNA和蛋白表达均明显下调(均P<0.05),且干预组HSC-T6培养上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量明显减少(均P<0.05)。siRNA联合组分别与siRNA CTGF组和siRNA TIMP-1组比较,于转染48hsiRNA联合组较siRNA TIMP-1组抑制率高,细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原量比siRNA TIMP-1组少,且差异具有统计学意义(均P<0.05);而与siRNA CTGF组比较,其CTGF mR-NA和蛋白抑制率增高,细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原量较siRNA联合组减少,但差异无统计学意义(均P>0.05)。结论针对HSC-T6CTGF mRNA基因全长943位点和TIMP-1mRNA 304位点化学合成的siRNA,对靶基因mRNA和蛋白表达有较好的抑制效果,CTGF和TIMP-1沉默可显著减少细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量;CTGF和TIMP-1两种基因同时沉默,有增强抗肝纤维化效果的可能。     

Simvastatin attenuates bleomycin-induced pulmonary fibrosis in mice

Background Bleomycin-induced fibrosis is extensively used to model aspects of the pathogenesis of interstitial pulmonary fibrosis. This study aimed to determine the benefic effects and mechanisms of simvastatin on bleomycininduced pulmonary fibrosis in mice. Methods Bleomycin-induced pulmonary fibrosis mice were administered with simvastatin in different doses for 28 days. We measured inflammatory response, fibrogenic cytokines and profibrogenic markers in both bleomycin-stimulated and control lungs, and correlated these parameters with pulmonary fibrosis. Results Simvastatin attenuated the histopathological change of bleomycin-induced pulmonary fibrosis and prevented the increase of lung hydroxyproline content and collagen （Ⅰ and Ⅲ） mRNA expression induced by bleomycin. Moreover, simvastatin down-regulated the increased expression of transforming growth factor-β1 （TGF-β1） and connective tissue growth factor （CTGF） induced by bleomycin at both gene and protein levels. Simultaneously, the accumulation of neutrophils and lymphocytes and the increased production of tumor necrosis factor-a （TNF-α） in bronchial alveolar lavage fluid were inhibited by simvastatin in early inflammatory phase after bleomycin infusion. The higher dose of simvastatin was associated with a more significant reduction in these inflammatory and fibrotic parameters. Furthermore, the inactivation of p38, RhoA and Smad2/3 signaling pathways was observed during simvastatin administration. Conclusions Simvastatin attenuated bleomycin-induced pulmonary fibrosis, as indicated by decreases in Ashcroft score and lung collagen accumulation. The inhibitory effect of simvastatin on the progression of pulmonary fibrosis may be demonstrated by reducing inflammatory response and production of TGF-β1 and CTGR These findings indicate that simvastatin may be used in the treatment of pulmonary fibrosis.     

转化生长因子-β1及结缔组织生长因子在病毒性心肌炎中的表达

目的:探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)及结缔组织生长因子(CTGF)在病毒性心肌炎(VM)中的表达。方法:雄性Balb/c小鼠36只随机均分为对照组和模型组。模型组建立VM模型。分别于7、14、28 d每组随机抽取6只小鼠断颈处死。心脏称重后用4%多聚甲醛固定,苏木精-伊红染色,光镜下观察心肌组织形态学改变,半定量计算病理积分。免疫组织化学方法检测心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原的蛋白表达,并应用病理图像分析仪进行图像分析,分别计算Ⅰ型和Ⅲ型胶原的面积。心肌组织CTGF、TGF-β1同样采用免疫组织化学测定,免疫组织化学图像分析经标准灰度校正后测定阳性细胞的吸光度及面积,以两者乘积表示组织中该抗原相对含量。结果:与对照组比较,模型组病理积分、心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达、心肌组织中CTGF、TGF-β1的表达均显著增加(P0.01)。心肌Ⅲ型胶原蛋白的表达与CTGF、TGF-β1呈正相关关系(r=0.612,0.533,P0.05)。TGF-β1与CTGF表达也呈正相关关系(r=0.939 P0.05)。结论:TGF-β1及CTGF协同参与了VM心肌纤维化的发生、发展过程。     

海南血竭总黄酮对肝纤维化大鼠TGFβ1及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的:探讨海南血竭总黄酮对肝纤维化大鼠I、Ⅲ型胶原蛋白沉积及转化生长因子β1(TGFβ1)表达的影响.方法:采用CCl<,4>诱导的大鼠产生肝纤维化模型,设置模型组、空白组、秋水仙碱治疗组、海南血竭总黄酮治疗组,分别灌胃给药.实验末期,取肝,采用HE染色,观察肝脏组织的病理学变化.采用免疫组化(SP)法,RT-PCR法...     

水蛭宣痹化纤汤对博莱霉素大鼠特发性肺纤维化Ⅰ Ⅲ型胶原表达的影响

目的:探讨水蛭宣痹化纤汤对博莱霉素大鼠特发性肺纤维化Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响。方法:采用暴露气管注射博莱霉素法建立大鼠特发性肺纤维化模型,采用日本Olympus型光学显微镜进行扫描,并应用JD-801型号图象分析系统对I、Ⅲ型胶原蛋白表达进行定量分析。结果:水蛭宣痹化纤汤可以显著减少大鼠肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结论:水蛭宣痹化纤汤通过抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白细胞外基质的合成,从而起到抑制肺间质纤维化发展的作用。