上皮性卵巢癌多药耐药基因的表达及其临床意义

目的探讨上皮性卵巢癌多药耐药（ＭＤＲ１）基因的表达及其临床意义。②方法利用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测３３例初治上皮性卵巢癌病人肿瘤组织ＭＤＲ１基因表达情况，同时用ＭＴＴ比色法检测肿瘤细胞对抗癌药的敏感性。③结果１０例（３０．３％）卵巢癌病人ＭＤＲ１基因表达阳性。体外试验表明，ＭＤＲ１基因表达阳性卵巢癌细胞对多种抗癌药耐药，ＭＤＲ１基因的表达与卵巢癌细胞分化程度有关，但与病人的年龄、组织学类型及分期无关。④结论ＭＤＲ１基因的表达可作为判断卵巢癌病人预后的一个指标     

人乳头瘤病毒感染与上皮性卵巢癌关系的初步探讨

目的探讨人乳头瘤病毒１６例和１８型感染与 上皮性卵巢癌关系。方法选取１９９１－１９９３年存档的上皮性卵巢癌石蜡包埋组织４２例，良性上皮性卵巢肿瘤石蜡包埋组织２６例，正常卵巢石蜡包埋组织２０例。用聚合酶链反应技术测定了上述组织内ＨＰＶ１６－ＤＮＡ和ＨＰＶ１８－ＤＮＡ。结论ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８的感染可能与上皮性卵巢癌发生有关。     

上皮性卵巢癌DNA倍体的测定

目的：探讨ＤＮＡ倍体对上皮性细胞卵巢癌的临床意义。（２）方法：采用流式细胞仪对６０例上皮性卵巢肿瘤石蜡包埋组织进行ＤＮＡ倍体测定。（３）结果；４６例卵巢癌ＤＮＡ二倍体１６例（３５％）ＤＮＡ异倍体３０例（６５％）。４例交办性上皮性卵巢肿瘤有２例为ＤＮＡ异倍体，１０例良性上皮性卵巢肿瘤及８例正常卵巢组织均为ＤＮＡ二倍体。ＤＮＡ倍体与肿瘤组织分级，腹水及术后残余灶大小密切相关，而与组织学类型，分期和病人     

MDR_1基因表达与原发上皮性卵巢癌原代细胞体外抗药性关系的研究

目的　探讨 Ｍ Ｄ Ｒ１ 基因表达与原代细胞体外抗药性的关系,为原发上皮性卵巢癌合理化疗提供理论依据。方法　应用半定量逆转录———聚合酶链反应技术和 Ｍ Ｔ Ｔ 法体外药敏试验,检测了３７ 例原发上皮性卵巢癌原代细胞对临床常用抗癌药物的抗药性及其 Ｍ Ｄ Ｒ１基因表达情况。结果　原发上皮性卵巢癌 Ｍ Ｄ Ｒ１ 基因阳性表达率为３０ ％ 。 Ｍ Ｄ Ｒ１ 基因表达与 Ｍ Ｄ Ｒ 相关药物耐药有关,与非 Ｍ Ｄ Ｒ 相关药物耐药无关。结论　 Ｍ Ｄ Ｒ１ 基因表达是原发上皮性卵巢癌抗 Ｍ Ｄ Ｒ 相关药物的主要原因。     

KDR mRNA在卵巢上皮性浆液性肿瘤中的表达及临床意义

目的：检测上皮性卵巢浆液性肿瘤中KDR mRNA的表达及其临床意义。方法：采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增KDR基因．以β-actin基因作为内对照，结合凝胶图像扫描，以KDR／β-actin作为KDR相对表达量进行分析。分析卵巢上皮性浆液性肿瘤70例。结果：卵巢浆液性癌及卵巢交界性浆液性瘤中KDR mRNA的表达高于卵巢良性浆液性瘤及正常卵巢。在卵巢浆液性癌中，KDR mRNA的表达与FIGO分期、腹腔细胞学检查结果、有无淋巴结转移、有无盆腔粘连有关。结论：KDR在卵巢癌的发生、发展及转移中起重要的作用。     

XIAP、survivin、LPA及CA125在上皮性卵巢癌中的表达

目的：探讨上皮性卵巢癌患者的组织标本中survivin mRNA和XIAP mRNA及血浆LPA和血清CA125表达与卵巢癌患者临床病理学指标的关系。方法：采用逆转录－聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测50例上皮性卵巢癌及12例正常卵巢组织标本中survivin mRNA和XIAP mRNA的表达,检测50例卵巢癌、44例卵巢良性疾病患者及20例健康女性血浆LPA和血清CA125的表达情况。结果：在正常卵巢标本与卵巢癌标本中,XIAP mRNA的阳性表达率分别为2/12（16.7%）、37/50（74%）,差异有统计学意义（P<0.05）;survivin mRNA的阳性表达率分别为0、42/50（84%）,差异有统计学意义（P<0.05）。survivin mRNA与XIAP mRNA在卵巢癌组织中的表达呈正相关rs=0.03(P<0.05)。XIAP、survivin表达与肿瘤的病理分期、病理类型、淋巴结转移和腹水形成有关（P<0.05）。卵巢癌组血浆LPA均值为(7.67±3.02)μmol/L,阳性率为78.0%;卵巢良性疾病组LPA均值为(2.734±1.471)μmol/L,阳性率为27.3%,健康对照组LPA均值为(1.557±1.294)μmol/L,阳性率为5.0%,三者间的差异有统计学意义（P<0.05）。卵巢癌的诊断中LPA的特异度为75.0%,高于CA125;早期卵巢癌的诊断中二者联合检测的灵敏度最高,为85.7%;LPA的灵敏度为71.4%,高于CA125的28.6%,差异有统计学意义（P<0.05）。Ⅱ～Ⅳ期患者血浆LPA水平较Ⅰ期显著升（P<0.01）;Ⅱ～Ⅳ期各期之间无显著性差异（P>0.05）。3种病理类型中LPA阳性率的差异无显著性（P>0.05）。结论: survivin和XIAP基因系重要的肿瘤相关基因,与卵巢癌的发生发展有关;血浆LPA诊断早期卵巢癌的特异性和敏感性均高于CA125,联合检测有较高的临床价值。     

卵巢上皮性肿瘤MCP-1基因表达的研究

目的 研究趋化因子MCP-1在卵巢上皮性肿瘤中的表达,探讨MCP-1在卵巢肿瘤发生、发展中的作用及临床意义.方法 采用半定量RT-PCR方法检测12例良性肿瘤、6例交界性卵巢肿瘤、22例卵巢癌原发病灶组织、8例卵巢癌转移病灶组织及10例正常卵巢组织中MCP-1 mRNA的表达情况.结果 正常卵巢组织、卵巢良性、交界性、恶性原发病灶组织及转移病灶组织中MCP-1表达的阳性率依次为25.0%、25.0%、50.0%、95.5%、87.5%.相对表达强度依次为0.11±0.01、0.18±0.03、0.51±0.05、0.73±0.08、0.45±0.08.MCP-1的阳性表达率和相对表达强度在卵巢交界性肿瘤中明显高于良性肿瘤,在卵巢恶性肿瘤中又明显高于交界性肿瘤,差异有统计学意义.MCP-1的表达与卵巢上皮癌组织学类型、组织分化及淋巴结转移情况无关,临床分期为Ⅲ～Ⅳ期的病例MCP-1的阳性表达率和相对表达强度与Ⅰ～Ⅱ期者相比,虽无显著性差异,但呈下降趋势.卵巢癌原发病灶组织中MCP-1的表达强度明显高于卵巢癌转移病灶组织,差异有统计学意义.MCP-1表达水平与肿瘤组织巨噬细胞浸润程度成正相关.结论 MCP-1基因在卵巢肿瘤发生、发展过程中起重要作用.MCP-1可趋化和激活巨噬细胞而发挥抗肿瘤效应,因此MCP-1极可能成为卵巢恶性肿瘤治疗的效应分子.     

卵巢上皮性癌组织中PTEN mRNA的表达

①目的　探讨卵巢上皮性癌组织中PTEN基因的表达及其临床意义。②方法　应用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR) ,分别检测 4 9例卵巢上皮性癌组织和 2 0例正常卵巢组织中PTEN基因外显子 5 8和 1 8mRNA的表达 ,同时结合临床病理资料进行分析。③结果　 4 9例卵巢上皮性癌组织中PTENmRNA相对表达水平外显子 5 8为 0 .83± 0 .17,外显子 1 8为 0 .78± 0 .14 ;2 0例正常卵巢组织中PTENmRNA相对表达水平外显子5 8为 1.4 2± 0 .2 9,外显子 1 8为 1.37± 0 .2 4 ,两者比较差异有显著性 (t=10 .93、12 .73,P <0 .0 5 )。卵巢上皮性癌组织中PTENmRNA表达水平的降低与卵巢上皮性癌的组织类型、淋巴结有无转移无关 (t =1.32、1.14 ,F =1.14、1.0 4 ,P >0 .0 5 ) ;但随临床分期和组织学分级的增高其表达水平明显降低 (t=2 .5 3～ 2 .99,P <0 .0 5 )。④结论　PTEN基因转录水平的异常在卵巢上皮性癌的发生发展中具有一定的作用。     

卵巢上皮性癌组织中 WAF1基因的表达

【目的】探讨卵巢上皮性癌组织中WAF1表达情况及其与肿瘤临床病理参数的关系。【方法】用RT-PCR和免疫组化分别检测30例正常卵巢、32例良性卵巢上皮性肿瘤和55例卵巢上皮性癌组织中WAF1mRNA和WAF1蛋白表达情况,并结合临床病理进行探讨。【结果】正常卵巢、良性卵巢上皮性肿瘤、卵巢上皮性癌组织中WAF1mRNA阳性表达率分别为73%、56%、40%(P=0.012),WAF1蛋白阳性表达率分别为80%、56%、36%(P=0.001),卵巢上皮性癌WAF1mRNA及其蛋白表达均低于其它两组。卵巢上皮性癌中WAF1mRNA表达与其蛋白表达呈正相关。WAF1蛋白低表达与卵巢癌FIGO分期晚有关(P=0.032),与年龄、组织学类型、病理分级、残余肿瘤大小无关(P>0.05),而WAF1mRNA与上述各项临床病理参数均无关(P>0.05)。【结论】与正常卵巢和良性卵巢肿瘤相比较,卵巢上皮性癌存在WAF1基因转录抑制及蛋白表达低下,WAF1下调可能与上皮性卵巢癌发生有关;晚期卵巢上皮性癌较早期者WAF1蛋白表达低,提示WAF1蛋白低表达与卵巢上皮性癌的恶性生物学行为有关。     

上皮性卵巢癌预后因素分析

卵巢癌是妇科3大恶性肿瘤之一，5年生存率大约25％～30％，死亡率居妇科肿瘤之首。且近几年我国发病率明显上升，故制订合理的治疗方案、提高疗效及改善预后的研究势在必行。因此笔者采用COX模型对68例上皮性卵巢癌患者进行分析，以探讨影响预后的危险因素。     

端粒酶活性在诊断卵巢恶性肿瘤中的价值

目的　探讨端粒酶活性在妇科恶性肿瘤中的表达。方法　采用端粒酶重复序列扩增 -聚合酶链反应 (PCR-TRAP)方法分别检测 6 2例卵巢恶性肿瘤组织、4 5例腹水 /盆腔冲洗液 ;2 0例卵巢良性肿瘤组织、15例腹水 /盆腔冲洗液 ;2 0例卵巢正常组织、10例腹水 /盆腔冲洗液的端粒酶活性。结果　卵巢恶性肿瘤组织、腹水 /盆腔冲洗液的端粒酶阳性分别为 4 9例、2 7例。而卵巢良性肿瘤组织中只有 2例为阳性 ,腹水 /盆腔冲洗液者均为阴性 ,卵巢正常组织、腹水 /盆腔冲洗液中全部为阴性。结论　端粒酶活性与卵巢肿瘤病变的性质密切相关 ,卵巢肿瘤组织、腹水 /盆腔冲洗液中端粒酶活性的检测有助于卵巢恶性肿瘤的早期诊断和肿瘤性质的鉴别诊断     

上皮性钙粘附素及其mRNA在上皮性卵巢肿瘤中的表达

目的：检测E-钙粘附素(E-cd)蛋白及其mRNA在上皮性卵巢肿瘤中的表达，并研究它们与上皮性卵巢癌(EOC)临床分期、组织分化及转移、预后的关系。方法：以免疫组化SABC法及核酸原位杂交法检测44例EOC、8例交界性上皮性卵巢肿瘤及18例良性上皮性卵巢肿瘤石蜡切片中E-cd及其mRNA的表达，并用统计学方法分析它们在EOC不同临床病理参数组中表达水平的差异。结果：E-cd及E-cd mRNA在EOC中的表达明显低于它们在交界性及良性肿瘤中的表达，且与EOC的病理分级显著相关，E-cd与组织类型、有无腹水及预后显著相关。结论：检测E-cd的表达有助于了解上皮性卵巢肿瘤生物学行为，可作为评价EOC预后的重要指标。     

宫颈病变中FHIT基因微卫星不稳定性的研究

目的通过对宫颈病变中脆性组氨酸三联体(Fragile histidine traid,FHIT)基因上三个微卫星位点D3S1300、D3S1234和D3S1481的微卫星不稳定性(Microsatellite instability,MSI)分析,探讨其与宫颈癌的发生、发展的关系。方法采用聚合酶链反应-非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳-溴化乙锭染色技术检测FHIT基因中3个微卫星位点D3S1300、D3S1234和D3S1481的MSI。结果 MSI在宫颈上皮内瘤样病变(Cervical intraepithelial neoplasia,CIN)组与宫颈癌组检出率差异有统计学意义。在宫颈癌中I期与II期差异无统计学意义,与III^IV期比较差异有统计学意义,MSI的发生率与临床分期有相关,与病理分级无关。结论 MSI在宫颈癌中的检出率远远高于CIN,表明MSI在宫颈癌发展过程中起重要作用,是宫颈癌恶性进展中的早期事件。     

卵巢上皮性癌血管内皮生长因子mRNA异构体表达

目的：研究卵巢癌血管内皮生长因子（VEGF）mRNA异构体表达特征，探讨何种异构体在卵巢癌的发生发展中发挥优势作用。方法：采用RT－PCR、套式PCR和测序分析对30例卵巢癌组织VEGFmRNA异构体表达进行相对定量检测。结果：卵巢癌组织和卵巢正常组织表达VEGF121、VEGF145、VEGF165、VEGF189mRNA,VEGF121表达水平显著高于其它3种异构体（P均＜0.001）。4种异构体在癌组织的表达水平均显著高于正常卵巢组织（P均＜0.05）。结论：卵巢癌组织高表达VEGF121、VEGF145、VEGF165、VEGF189mRNA，以VEGF121为主，提示4种异构体均参与卵巢癌发生发展过程，VEGF121或能在其中发挥优势作用。     

晚期卵巢上皮性癌近20年的预后变化

目的总结近20年我院晚期卵巢上皮性癌的预后状况,并对改善预后的因素进行分析.方法回顾分析1980年1月至1999年12月治疗的180例晚期卵巢癌患者的临床资料,按治疗时间分为两组,1989年12月31日以前的58例为第Ⅰ组,以后的122例为第Ⅱ组,对两组的临床资料包括预后进行比较,并分析影响预后的因素.结果第Ⅰ组2年、5年生存率分别为18.9%、3.5%,第Ⅱ组分别为57.7%、31.9%,第Ⅱ组的预后明显好于第1组.单因素分析显示Ⅲa、Ⅲb期较Ⅲc期和Ⅳ期预后好;残余瘤≤2cm者比残余瘤＞2cm者预后好;术后联合化疗≥6个疗程者较＜6个疗程者预后好;TP方案或加用其他二线药物化疗者较CAP或CP方案化疗者预后好,两者均较未化疗或单一药物或非规范的联合化疗者预后好.COX逐步回归多因素分析显示,仅残余瘤大小及化疗疗程数对预后有影响.结论晚期卵巢上皮性癌的预后近10年来得到了明显改善,肿瘤细胞减灭术、CAP或TP方案6个或以上疗程的化疗有助于提高晚期卵巢癌患者的5年生存率.     

聚合酶链反应检测宫颈癌组织中HPV16DNA相关序列

从石蜡包埋的宫颈癌组织和宫颈上皮瘤样病变(CIN)组织中提取DNA,用聚合酶链反应体外扩增人乳头瘤病毒16型(HPV16)的E6区,然后检测组织DNA中HPV16相关序列,以探讨人乳头瘤病毒16型与宫颈癌发生的关系。共检测标本28份,阳性率为42.9%(12/28)。其中宫颈癌阳性率为47.8%(11/23),高于宫颈上皮瘤样病变的阳性率。表明人乳头瘤病毒16型与人宫颈癌的发生有十分密切的关系。     

胃肠道间质瘤60例中c-kit和PDGFRA基因突变的检测

目的:探讨c-kit基因和PDGFRA基因在我国胃肠道间质瘤(GIST)中的突变状况.方法:用PCR扩增和直接测序的方法,检测60例GIST c-kit基因9号、11号、13号和17号外显子突变以及PDGFRA基因12号和18外显子突变.结果:60例GIST中kit基因突变率为63.3%,绝大多数为杂合性突变,少数为纯合性突变.其中以编码近膜区的11号外显子突变最为常见(58.3%);其次为编码胞外区的9号外显子突变(3.3%);偶见编码胞内酪氨酸激酶结构域的13号外显子突变(1.7%),是一个新的突变位点L641P;未检出17号外显子突变.11号外显子的突变位点多集中在5'端的经典热点(42.9%),表现为密码子第557-560的点突变和框内缺失.第二个热点位于11号外显子的3'端,为框内串联重复.后者主要发生在胃部,女性患者多见.60例GIST中PDGFRA基因突变率为5%,表现为编码胞内酪氨酸激酶结构域的18号外显子D842V点突变,且均为CD117阴性.未见编码近膜区的12号外显子突变.结论:CD117阳性GIST主要表现为c-kit突变,分布在11号外显子经典热点和3'端热点,后者与老年女性胃GIST相关.PDGFRA基因突变主要见于CD117阴性GIST,多发生在后腹膜,具高度侵袭危险性.     

无精子症患者YRRM基因的研究

目的探索无精子症因子基因的候选基因之一ＹＲＲＭ基因在无精子症患者中的异常,了解中国人群的ＹＲＲＭ基因的形式。方法利用特异扩增ＹＲＲＭ基因的引物,进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）。用睾丸提取的总ＲＮＡ进行反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）。对部分ＹＲＲＭ基因的片段进行ＤＮＡ序列分析。结果７４例无精子症患者中,４例未扩增出ＹＲＲＭ基因片段（５．４４％）,ＲＴ－ＰＣＲ显示仅睾丸出现５００ｂｐ的ＤＮＡ条带,序列分析结果表明中国汉族人群的ＹＲＲＭ的核酸序列同ＹＲＲＭ１型。结论ＹＲＲＭ基因的异常与无精子症密切相关,ＹＲＲＭ基因为睾丸特异表达,中国人群ＹＲＲＭ的形式为ＹＲＲＭ１型,其ＤＮＡ序列组成完全同ＹＲＲＭ１型。     

乳腺癌线粒体DNA拷贝数改变的研究及意义

目的:用实时定量PCR对乳腺癌组织线粒体DNA的拷贝数进行检测,探讨线粒体DNA拷贝数改变与乳腺癌的关系。方法:对30例乳腺癌患者组织及其相应外周全血、30例健康献血员外周全血标本的线粒体DNAD-loop区克隆并制备标准品;用实时定量PCR检测标本线粒体DNA的拷贝数。结果:乳腺癌组织线粒体DNA的拷贝数平均值为7.75×1013copy/μgDNA,高于其相应外周血的平均值3.22×1011copy/μgDNA(P<0.05)和对照的平均值6.55×1010copy/μgDNA(P<0.05)。结论:线粒体DNA拷贝数改变与乳腺癌发生有关。