流行性出血热病毒Vero-E6细胞病变株的分离和鉴定

从EHF患者血清中分离到8株EHF病毒,在E 6细胞中传代适应过程中,发现有5株EHF病毒分别在第4～10代出现规律的细胞病变(CPE),对其中两个CPE株(HFN-04和-19)进行了一系列特异性鉴定试验。实验结果表明:(1)病毒的CPE发展与病毒增殖动态完全一致;(2)CPE株的主要生物学和理化性状均符合EHF病毒;(3)用CPE株病毒感染细胞抗原片检测EHF患者双份血清,其恢复期血清抗体均呈4倍以上增高反应;(4)病毒的CPE可被患者血清及EHF、KHF免疫血清所中和,不能被正常兔血清和Reo病毒1—3型多价血清所中和;(5)CPE株病毒感染的E_6细胞几乎能完全吸收EHF患者血清及EHF、KHF抗血清中的特异性抗体;(6)CPE株病毒感染鼠脑悬液与EHF病毒A9株McAb25-1致敏血球呈阳性血凝反应。据此,首次证实了EHF病毒至少有部分毒株能引起E_6细胞规律性CPE。EHF病毒CPE株的发现为EHF的诊断和防治工作提供了有利条件。     

人单克隆抗独特型抗体诱导动物产生有中和活性的抗HFRSV抗体

在建立稳定分泌具有肾综合征出血热病毒(HFRSV)抗原内影像的抗独特型(αId)人单抗(Ab_2β)的基础上,用纯化的αId人单抗免疫6只BALB/c小鼠和2只大耳白兔,均有效地诱导产生特异性的抗HFRSV抗体(Ab_3)(IFAT),抗体滴度随加强免疫次数的增加而增高。αId诱导的抗HFRSV抗体与HFRSV野鼠型76/118株和家鼠型L99株均起反应,其中免疫小鼠血清具有一定效价的血凝抑制活性和中和活性。从而进一     

亲和层析法纯化抗大肠肿瘤相关抗原的单克隆抗体

目的制备和纯化鼠源性抗人大肠肿瘤单克隆抗体(单抗),分析其相应抗原在大肠肿瘤细胞中的表达。方法常规方法免疫BALB/c小鼠制备腹水,应用G蛋白亲和层析柱对小鼠腹水样品进行分离纯化。采用SDS-PAGE、间接免疫荧光(IFA)、间接ELISA检测纯化后抗体的纯度、活性、效价和特异性。用免疫细胞化学、流式细胞术和免疫组织化学技术S-P法检测其相应抗原在大肠肿瘤细胞株和组织中的表达。结果还原性SDS-PAGE显示所获抗体为单一组分。应用间接ELISA检测抗体效价为1∶106,纯化后的抗体对大肠肿瘤细胞株具有特异结合活性,并在高分化大肠腺癌组织中表现出更高选择性(P<0.01)。结论G蛋白亲和层析法操作简便,所得单抗的纯度高,特异性强,生物学活性好。对临床上早期诊断大肠肿瘤将具有较大的意义。     

血凝抑制方法检测流行性出血热抗体

流行性出血热病毒感染乳鼠所得到的鼠脑抗原产生的特异性鹅红细胞凝集现象证实了其血凝素的存在。在80份流行性出血热病人及对照病人血清标本中,血凝抑制抗体(HI)和免疫荧光(IF)抗体的滴度间呈显著的相关。血凝抑制抗体可持续20年之久。轻型出血热病人血清中可检出抑制流行性出血热病毒血凝素的血凝抑制抗体。血凝素活性依赖于配制鹅红细胞悬液的pH值,这一发现有力地支持了该病毒属于本雅病毒科(Bunyaviridae)的假说。     

细胞培养制备的流行性出血热病毒血凝素在临床血清学中的应用

本文报告应用细胞培养来源的血凝素建立的血凝抑制试验,检测流行性出血热(EHF)病人血清中特异性抗体,并与常规间接免疫荧光技术进行比较,结果完全一致。EHF病人血凝抑制(HI)抗体滴度低于免疫荧光抗体滴度。作者等对EHF病人血清中HI抗体的动态变化也进行了初步研究,发现与免疫荧光抗体变化趋势相近似。     

从流行性出血热患者血清中分离病毒的研究

应用Vero—E_6细胞从流行性出血热(EHF)患者血清中分离出两株病毒,经初步鉴定表明:病毒不耐酸,对脂溶剂敏感,不被5—碘脱氧脲嘧啶核苷所抑制,属RNA病毒;所分离病毒与流行性出血热病毒(EHFV)抗血清和EHF患者血清做间接免疫荧光抗体法试验(IFA)均为阳性,其感染性可被EHF恢复期病人血清中和;将该病毒感染细胞做超薄切片在电镜下查到EHF病毒颗粒。     

人源抗H7N9血凝素中和抗体IgG的制备及鉴定

目的:将从全人源Fab噬菌体抗体库筛选获得的抗H7N9血凝素Fab抗体基因进行基因工程改造,以表达全分子抗H7N9血凝素中和抗体IgG,并验证其对H7N9型禽流感病毒的中和活性?方法:用H7N9型禽流感病毒血凝素筛选全人源Fab噬菌体抗体库,构建全分子IgG抗体重?轻链表达载体,共转染293 FreeStyle(293F)细胞,表达并纯化IgG抗体?应用ELISA及Western blot实验检测抗体免疫学活性,微量中和实验及鸡胚预防保护实验检测其中和活性,血凝抑制试验判断其结合血凝素亚基?结果:成功筛选出1株全人源抗H7N9血凝素Fab抗体基因并构建IgG真核表达载体?获得的全分子IgG抗体重?轻链序列正确,并可特异性结合H7N9血凝素?微量中和实验证明其对H7N9型禽流感病毒有良好中和活性,中和滴度为15.6 μg/mL?鸡胚预防保护实验显示抗体用量为200 μg时可达100%保护率?血凝抑制试验表明其结合血凝素HA2亚基?结论:制备的重组全人源全分子抗H7N9血凝素IgG抗体可特异性识别H7N9型禽流感病毒血凝素,对H7N9型禽流病毒有显著的中和作用,为进一步研发用于禽流感防治的抗体药物奠定基础?     

流行性出血热病毒血凝素的免疫原性初步研究

从我国不同地区(江苏、安徽、河南、吉林、江西、福建、四川、山东等省)和朝鲜分离到的10株流行性出血热(EHF)病毒,经适应乳鼠后,发现其中分离自黑线姬鼠(A_9、A_(216)、A_(537)、76/118)和急性期病人血液(陈株、H_(8206)、B_(75)的7株病毒,均具有不同程度的血凝活性,而分离自褐家鼠(R_(22)、R_(27))、罗赛鼠(L_(99))的3株病毒,未能直接检出     

应用疫区鼠肺抗原检测流行性出血热特异性抗体的初步报告

<正> 目前,诊断流行性出血热(EHF)的方法仍然仪凭临床资料。如能同时检测特异性抗体,无疑对EHE的确诊更为有利。国内外均报告可用感染出血热病毒的A_(549)细胞涂片检测特异性抗体。宋氏报告过用非疫区黑线姬鼠感染EHF病毒的传代鼠肺抗原检测特异性抗体的方法。但是将疫区野生鼠肺进行组织切片,用作血清学诊断尚未见报道。本文报道用此法检测30例经临床确诊的EHF病人血清结果,初步证明该方法有一定的实用价值。     

流行性出血热抗体四种方法检测比较

自免疫荧光法(IFA)用于流行性出血热(EHF)特异性诊断以来,目前检测EHF抗体的方法较多,血凝抑制法(HI)已广泛用于EHF的血清学分型研究,反向血凝抑制试验(RPHI)也逐步得到推广应用,免疫吸附试验(IAHA)仍在不断提高修正.为了进一步明确各种方法检测结果之间的关系,给临床诊断、流行病学调查提供参考依据,我们利用上述四种方法分析了125例EHF患者病后血清中的特异性抗体,现将结果报告如下.     

Efficacy of inactivated vaccine containing cyto-hemagglutinin against epidemic hemorrhagic fever in rabbits

Using the Z-10 strain of epidemic hemorrhagic fever virus (EHFV) as seed, and the primary cell of Meriones unguiculatus kidney tissue as incubation cell, a propiolactone inactivated epidemic hemorrhagic fever (EHF) vaccine was prepared, according to a similar procedure required for the production of biological products such as the Japanese B encephalitis vaccine. Besides the EHFV antigen detected by ELISA or reversed passive hemagglutination test (RPHA) as were used for the formalin inactivated vaccine, higher titres (1:128-1:1024) of EHFV hemagglutinin antigen was also detected in this EHFV vaccine. Immunization with twice intramuscular injection of this vaccine produced high titred (1:20-1:160) neutralizing antibody and low titred (1:10-1:20) hemagglutination antibody, in addition to the immunofluorescence (IF) and reversed passive hemagglutination inhibition (RPHI) antibodies. These results indicated an apparent difference in the immunogenicity between the beta-propiolactone and formalin inactivated EHF vaccines. With the approval of the Ministry of Health, human test is now underway in this laboratory.     

流行性出血热病毒血凝素单克隆抗体的研制与鉴定

用流行性出血热病毒(EHFV)陈株血凝素(HAN)免疫Balb/C小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,杂交瘤生长孔率为60％,阳性率为22％,三次克隆化培养阳性率达100％,通过筛选建立一株杂交瘤细胞1H8。其腹水单克隆抗体(McAb)的间接免疫荧光滴度为1:16×10~4,其血凝抑制滴度为1:5120。经染色体核型分析,1H8杂交细胞染色体为85—105条,每个细胞均含1—2条中着丝点标记染色体。经琼脂双扩散试验,1H8McAb属IgG2b亚类。该McAb与17株不同来源的EHFV都有免疫荧光反应,且对5株不同来源的EHFV—HAN具有血凝抑制活性。故1H8为血凝抑制抗体。这说明17株EHFV都具有血凝素抗原决定簇,但是1H8McAb对它们具有不同的活性。     

咸宁黑线姬鼠中流行性出血热病毒的分离与鉴定

从湖北咸宁黑线姬鼠中分离到一株 EHF 抗原因子,经系统的血清学鉴定,与多个单克隆抗体和抗血清起反应,排除了呼肠病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型的污染,证实为 EHFV,并命名为 A_(24)株。     

野兔自然感染流行性出血热的调查

70只湖北省流行性出血热疫区的草兔经间接免疫荧光法检查发现5只草兔的多个腔器中带有流行性出血热抗原,4只草兔血中有特异性抗体,证明野兔在自然界中可受到感染。这一发现使EHFV的自然宿主范围扩大到兔形目,为研究EHFV在不同动物宿主间的传播及今后如何采取预防措施提出了新课题。     

2013年3月江苏省禽流感职业暴露人群H5N1抗体水平及影响因素分析

目的:调查H7N9流行初始江苏省职业暴露人群H5N1禽流感抗体水平及其影响因素?方法:分别使用香港株?广东株与安徽株抗原,用血清凝集抑制法(hemagglutination inhibition,HI)测定血清样本抗体滴度,计算几何平均滴度(geometric mean titer,GMT),统计分析影响抗体水平的因素?结果:检测职业暴露人群血清标本416份,性别与抗原株对职业暴露人群抗体滴度有显著影响?结论:江苏省职业暴露人群H5N1禽流感抗体滴度普遍较低?男性抗体滴度低于女性,广东株抗原与禽流感病毒现有流行株较为接近?     

抗黄疸出血群70091株钩端螺旋体外膜抗原单克隆抗体的研制

本实验建立了一株分泌抗黄疸出血群钩端螺旋体外膜抗原的单克隆杂交瘤细胞株ZMA_3。ZMA_3单克隆抗体具有较高的群特异性,经鉴定该抗体属IgG2a亚类。该杂交瘤细胞株经体外持续培养7个月余,分泌抗体性能稳定。     

人内皮细胞体外培养及感染流行性出血热病毒的初步观察

用酶消化法自人脐带静脉分离内皮细胞,进行体外传代培养。观察EHI病毒在该细胞中的增殖和复制。结果表明,从第一代培养第7日起,在感染内皮细胞胞浆内可检出EHF病毒抗原;阳性细胞数及胞浆内病毒抗原含量随培养时间的延长和传代次数的增加而增多,而感染细胞未见明显病变。提示EHF病毒可侵入人血管内皮细胞增殖复制,参与EHF的发病过程。     

流行性出血热病毒感染对离体人脐带静脉血管内皮细胞分泌前列环素的影响

用两株流行性出血热病毒（EHF）感染体外培养的人脐带静脉血管内皮细胞（HUVEC），观察EHFV对HUVEC形态学和分泌前列环素（PGI2）的影响。结果发现：感染EHFV的HUVEC未出现明显的细胞病变，但PGI2的分泌显著增加。研究结果揭示：EHFV可直接刺激血管内皮细胞分泌PGI2，可能是引起流行性出血热患者病程初期血浆PGI2水平升高的重要原因。     

流行性出血热病毒结构蛋白的肽图分析

为了解EHFV的抗原结构、基因突变,为EHF临床分型和疫苗生产提供资料。作者将EHFV标准株A9,R22与鲁宁-84刘、鲁宁-84肖、R-36的结构蛋白经SDS-PAGE分离,按改良氯氨T法用~(125)I标记凝胶中的NP,G_2和G_1,酶解后进行肽图分析。分别比较姬鼠型和家鼠型EHFV的NP、G_2、G_1肽图。结果发现各型病毒间有显著不同,氨基酸组成有明显差别,说明不同型别EHFV的S,M基因片段之间存在着差异。