维拉帕米对裸鼠胶质瘤U251模型卡氮芥疗效的影响

目的探讨维拉帕米对裸鼠胶质瘤U251模型卡氮芥（BCNU）疗效的影响。方法制作裸鼠胶质瘤U251模型,分别给予BCNU和BCNU＋维拉帕米进行治疗,测量肿瘤大小,用免疫荧光染色检测肿瘤中P-糖蛋白（P-gp）,多药耐受蛋白1（MRP1）和肺耐药相关蛋白（LRP）的表达。结果 BCNU＋维拉帕米组中,肿瘤大小明显比BCNU组减小,尤其是第一至四周更加明显（P〈0.05）。肿瘤细胞中LRP,P-gp和MRP1均为阳性,主要在细胞膜表达,从形态学上两组差别并不明显。结论维拉帕米在体内有明显增加胶质瘤U251对BCNU的敏感性,逆转耐药的作用。     

检测肿瘤凋亡和p53再生化合物对不同p53状态人脑胶质瘤细胞的生长抑制作用

目的探讨p53靶向小分子RITA对不同p53状态人脑胶质瘤细胞的生长抑制作用。方法基因测序确定实验所用U251和U87细胞中p53基因状态;MTS法检测0μmol/L、1μmol/L、4μmol/L、10μmol/L RITA作用于U251和U87细胞0 h、24 h、72 h、120 h、168 h的增殖情况;qRT-PCR法和Western blot法分别检测抑癌基因p53、p21的mRNA和蛋白质表达水平;计算抑制率和IC50。结果基因测序结果表明实验所用U251细胞表达突变型p53基因而U87表达野生型;RITA对2种细胞的增殖均有显著抑制作用,且对U251的抑制作用更强;5μmol/L RITA作用下,U251中p53、p21表达均显著增加,U87中p21表达增加,p53 mRNA表达变化不明显,但p53蛋白累积显著增加;RITA作用于U251、U87细胞24 h和120 h的IC50分别为123.870μmol/L、776.682μmol/L和2.817μmol/L、7.147μmol/L。结论RITA能有效促进人脑胶质瘤细胞U251和U87中p53和p21基因表达,发挥高效生长抑制作用,且含突变型p53的U251比含野生型p53的U87效果显著。     

DHA复合物抗肿瘤作用的实验研究

[目的]观察DHA复合物(AT158)的抑癌作用。[方法]以H22肝癌细胞的荷瘤小鼠为体内实验模型做三批,以U251星形胶质瘤细胞、SKOV3卵巢癌细胞为体外培养实验模型,研究了AT158在体内和体外对各种癌细胞的抑制作用。[结果]在体内AT158低中高剂量组对22肝癌细胞抑瘤率分别为37.62%,48.55%,58.63%,在体外对U251星形胶质瘤细胞IC50为0.37μg/ml(0.33～0.41μg/ml)、对SKOV3卵巢癌细胞IC50为0.52μg/ml(0.50～0.52μg/ml)。[结论]AT158是具有抑癌作用,具有很高的开发价值。     

GSK-3β抑制剂对U251胶质瘤细胞的增殖抑制

目的探讨GSK-3β抑制剂(LiCl)对人脑胶质瘤U251细胞株增殖作用,为下一步治疗脑胶质瘤提供临床治疗靶点。方法应用MTT法,HE染色法以及免疫组化方法来观察LiCL对人胶质细胞瘤株U-251增值的抑制作用、量效关系。结果LiCL对人胶质瘤细胞有明显的抑制作用,其药物作用时间为24、48h的IC50分别为138.98mg/ml、53.15mg/ml,且呈良好的量效关系,抑制作用与浓度呈正相关。结论LiCL是有效的、能抑制胶质瘤细胞生长的药物。     

紫杉醇联合顺铂对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药性的逆转作用

目的:探讨紫杉醇联合顺铂对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药性的逆转作用。方法:取对数生长期SK-OV3/DDP细胞进行实验。实验分为顺铂组、紫杉醇组、联合组和空白对照组。顺铂组细胞给予顺铂15μg/ml;紫杉醇组细胞给予紫杉醇3.13μg/ml;联合组细胞给予顺铂15μg/ml+紫杉醇3.13μg/ml;空白对照组细胞不给予任何药品。所有细胞均培养48 h后进行实验。采用MTT法检测细胞的生长抑制率。采用流式细胞术检测各组细胞的细胞周期和凋亡率。结果:顺铂组细胞生长抑制率与空白对照组无明显增加(P<0.05),证实SKOV3/DDP对顺铂的耐药,紫杉醇组和联合组细胞生长抑制率较空白对照组和顺铂组明显增加(P﹤0.05),联合组细胞生长抑制率最高,较紫杉醇组增加更为明显(P﹤0.05)。顺铂组与空白对照组细胞多被阻滞于G1和S期,紫杉醇及联合组细胞多被阻滞于G2/M期,联合组作用较紫杉醇组更加明显(P﹤0.05)。顺铂组细胞凋亡率与空白对照组无明显差异(P>0.05),紫杉醇组和联合组细胞凋亡率较空白对照组和顺铂组明显增加(P﹤0.05),联合组细胞凋亡率最高,较紫杉醇组增加更为明显(P﹤0.05)。结论:紫杉醇联合顺铂可明显逆转卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP对顺铂的耐药性。     

姜黄素对HL60/ADR细胞多药耐药逆转作用的研究

目的:研究姜黄素对白血病耐药细胞HL60/ADR多药耐药的逆转作用.方法:用不同浓度姜黄素联合阿霉素处理HL60/ADR细胞,MTT法检测药物对细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞内阿霉素的浓度及bcl-2表达水平.结果:HL60/ADR细胞经0.4,0.8μg/rml姜黄素作用24 h后,阿霉素的IC50分别为3.79、2.58 μg/ml,耐药逆转倍数为1.37、2.02,细胞内ADR浓度增加,bcl-2蛋白的表达下降.结论:姜黄素能部分逆转HL60/ADR细胞的多药耐药.     

防己诺林碱联用紫杉醇对耐药卵巢癌SKOV3/ADM细胞作用机制的初步研究

目的评价防己诺林碱调控紫杉醇对耐药卵巢癌SKOV 3/ADM细胞多药耐药的作用。方法采用MTT法和细胞摄取研究防己诺林碱调控紫杉醇对SKOV 3/ADM细胞多药耐药的作用。结果细胞生长抑制试验表明,紫杉醇对SKOV 3/ADM细胞耐药明显。0.5、1和5μg·mL~(-1)浓度的防己诺林碱分别与紫杉醇联用后,紫杉醇对细胞的半数抑制浓度(IC_(50))降为(0.542±0.117)、(0.924±0.153)和(1.931±0.375)μg·mL~(-1),耐药逆转倍数If分别为16.1、9.4和4.5倍,与单用紫杉醇相比差异有统计学意义(P0.05)。细胞摄取试验研究表明,联用防己诺林碱浓度达到0.5μg·mL~(-1)及以上时,能够显著增加紫杉醇的细胞摄取(P0.05)。结论防己诺林碱是潜在的逆转紫杉醇对SKOV 3/ADM细胞多药耐药候选活性化合物。     

应用干扰RNA慢病毒技术抑制人脑胶质瘤细胞中红细胞生成素受体mRNA的表达

目的探讨重组红细胞生成素受体(EPOR)干扰RNA慢病毒抑制人脑胶质瘤细胞中EPOR mRNA的表达情况。 方法选择人脑胶质瘤U251细胞株和人胚肾293T细胞株为研究对象。利用RNA干扰技术构建重组EPOR干扰RNA慢病毒表达载体,进行病毒包装、病毒收集、病毒滴度检测后,感染人脑胶质瘤U251细胞,选择最佳MOI值;采用实时聚合酶链式反应(RT-PCR)检测U251细胞和感染重组EPOR干扰RNA慢病毒的U251细胞EPOR mRNA相对表达量,并计算重组EPOR干扰RNA慢病毒对于U251细胞EPOR mRNA表达的干扰效率。 结果①本研究成功构建重组EPOR干扰RNA慢病毒表达载体,并测定其病毒滴度为1×10¹⁴TU/L。②MOI值为100的重组EPOR干扰RNA慢病毒感染U251细胞的荧光蛋白表达量最高,MOI值为1的荧光蛋白表达量最低。③重组EPOR干扰RNA慢病毒对于U251细胞的干扰效率为69%,并使EPOR mRNA表达明显受到抑制。 结论成功构建重组EPOR干扰RNA慢病毒表达载体,使U251细胞的EPOR mRNA相对表达量明显降低,为后续EPOR转录水平变化的相关研究奠定实验基础。     

甲羟孕酮对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP耐药的逆转作用

目的:应用甲羟孕酮(Medroxyprogesterone Acetate,MPA)体外逆转人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP的耐顺铂(cisplatin,DDP)效应,并对其作用机制进行初步探讨。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测MPA对SKOV3/DDP的细胞毒作用,确定MPA对此细胞株的非细胞毒性剂量作为逆转剂量,同法测定非细胞毒性剂量MPA联合DDP作用后SKOV3/DDP对顺铂耐药性的变化,采用流式细胞技术(FCM)检测细胞周期及凋亡情况。结果:单用MPA浓度大于7.50 g/L时对SKOV3/DDP细胞有不同程度的抑制作用,且呈剂量依赖性。MPA浓度小于15.85 g/L时,其对细胞生长无明显抑制作用(细胞存活率均>90%),因此选用15.00 g/L作为逆转剂量。DDP联合15.00 g/L的MPA作用24、48、72 h后,顺铂的IC50分别下降至(57.72±0.48)g/L、(13.39±0.21)g/L、(7.93±0.18)g/L,逆转倍数分别为1.22,1.90,2.44倍。DDP与MPA联合作用于SKOV3/DDP细胞,使其细胞周期阻滞于G0/G1期,S期细胞比例下降,并可以增加耐药细胞的凋亡率。结论:MPA可以逆转DDP引发的卵巢癌耐药,其可能的逆转耐药机制为促进细胞的凋亡,阻滞细胞周期进程。     

二甲双胍拮抗STAT3信号通路在人乳腺癌顺铂耐药细胞凋亡中的作用

目的 分析二甲双胍拮抗信号传导与转录活化因子3(STAT3)信号通路在人乳腺癌顺铂耐药细胞凋亡中的作用。方法 MCF-7细胞株为A组,MCF-7/DDP细胞株为B组,MCF-7/DDP细胞株+DDP为C组,MCF-7/DDP细胞株+二甲双胍为D组,MCF-7/DDP细胞株+STAT3抑制剂STA-21为E组。A组和B组采用正常培养基培养,C组MCF-7/DDP细胞株加入1μg/ml DDP培养,D组MCF-7/DDP细胞株加入5 mmol/L二甲双胍培养,E组加入10μmoL/L的STAT3抑制剂STA-21培养。对MCF-7细胞株和MCF-7/DDP细胞株采用CCK-8法检测DDP的敏感性;采用平板克隆试验检测各组细胞增殖数目;采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;采用免疫荧光法检测各组受体相互作用蛋白(RIP)1和RIP 3蛋白表达水平;采用免疫印迹法检测各组细胞STAT3、p-STAT3、Caspase及p-Caspase蛋白表达水平。结果 浓度分别为0.01μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml及100μg/ml的DDP对MCF-7细胞IC50值均高于MCF-7...     

二氧化硅对人支气管上皮细胞上皮-间质转型的影响

目的 探讨SiO2能否在体外诱导人支气管上皮细胞(HBE)发生上皮-间质转型(EMT).方法 以HBE为研究对象,0、50、100、200、300 μg/ml SiO2处理HBE,倒置显微镜下观察细胞形态学改变,免疫印迹(Westen blot)法检测E-钙黏蛋白(E-cad)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及波纹蛋白(Vim)的表达,体外划痕试验检测细胞迁移能力.结果 SiO2处理HBE细胞后,细胞间隙增宽,形态上呈纺锤形、梭形成纤维细胞样改变.随着SiO2浓度的升高,E-cad表达逐渐降低,300μg/ml组E-cad表达最低,为对照组的-2.98倍,100、200、300 μg/ml组与对照组的差异均有统计学意义(P＜0.05).Vim表达逐渐上调,300μg/ml组Vim表达最高,是对照组的4.46倍,200、300 μg/ml组与对照组的差异有统计学意义(P＜0.05).在0～200μg/ml SiO2浓度范围内,随着SiO2浓度的升高,α-SMA表达逐渐上调,200 μg/ml时α-SMA表达最强,是对照组的3.55倍,在300μg/ml时α-SMA表达略有下降,为对照组的1.90倍,100、200、300 μg/ml组与对照组的差异均有统计学意义(P＜0.05).SiO2处理组细胞体外划痕愈合面积/划痕面积百分比明显大于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 SiO2可诱导HBE细胞发生上皮-间质转型.

Abstract：

Objective To investigate SiO2-induced EMT in human bronchial epithelial cells HBE in vitro. Methods HBE cells were cultured and then stimulated with indicated doses of SiO2 (0, 50, 100, 200,300 μg/ml ). The morphological changes were observed by microscope. In addition, Western blot was performed to detect the expression of E-cad, α-SMA and Vim. The changes of migration ability were examined by wound-healing assay in vitro. Results ( 1 )After exposure to SiO2, HBE cells lost contact with their neighbor and displayed a spindle-shape, fibroblast-like morphology. (2)Compared with the control, the E-cad (300 μg/ml group) expression downregulated 2.98 fold(P＜0.05 ), and the Vim(300 μg/ml group) and α-SMA (200 μg/mlgroup) expression upregulated 4.46 fold and 3.55 fold (P＜0.05). There were significant differences between 100, 200, 300 μg/ml groups and the control group (P＜0.05). (3) In the test group, the percentage of woundhealing areas/wound areas were larger than those in control group (P＜0.05). Conclusions SiO2 could induce EMT in human bronchial epithelial cells.     

ErbB2 RNAi对脑胶质瘤U251细胞活性氧含量和DNA损伤的影响

目的 探讨ErbB2 RNAi对脑胶质瘤U251细胞活性氧含量、DNA损伤以及细胞周期的影响。方法 利用构建好的ErbB2 RNAi载体(pSilencer2.1-ErbB2)转染U251细胞后,检测不同时间点细胞内活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)水平;同时利用单细胞凝胶电泳(SCGE)方法,检测不同时间点细胞内DNA损伤;利用PI单染检测不同时间点细胞周期分布情况。结果 U251细胞转染pSilencer2.1-ErbB2后,对细胞内ROS水平无显著性影响;U251细胞在转染psilencer2.1-ErbB2后24h时,MDA水平无显著变化,而在48h时显著性升高,72h时又恢复到正常水平;同时,U251细胞转染pSilencer2.1-ErbB2后发生DNA损伤并很快修复;ErbB2的表达抑制可引发细胞周期各时相发生紊乱。结论 U251细胞ErbB2 RNAi后,细胞内氧化还原状态发生改变,同时伴有DNA的损伤与修复以及细胞周期阻滞。     

脑胶质瘤治疗策略及其研究进展

目的 探讨多巴胺对胶质瘤细胞U251增殖、侵袭及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响及意义。 方法 将人胶质瘤细胞株U251分为5组,分别加入多巴胺0（对照）、10、25、50、100 μmol/L,分别于培养12、24、36、48 h时,采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪和Transwell实验检测培养48 h后细胞周期及侵袭能力变化,采用Western blot检测细胞中细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK-4）、CDK-6及VEGF、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、MMP-9表达。 结果 与对照组[（92.36 ± 1.37）%]比较,多巴胺培养48 h时,10、25、50和100 μmol/L组U251细胞增殖百分比[（46.82 ± 1.17）%、（41.96 ± 1.06）%、（37.52 ± 0.98）%、（30.57 ± 1.11）%]明显下降（P < 0.05）,呈剂量依赖性（P < 0.05）;与对照组比较,多巴胺10、25、50和100 μmol/L组U251细胞G0/G1期比例明显增多（P < 0.05）,S期细胞比例明显减少（P < 0.05）,具有剂量依赖性;与对照组[（1 099.82 ± 33.57）个]比较,多巴胺10、25、50和100 μmol/L组U251细胞侵袭数目[分别为（776.52 ± 25.16）、（555.43 ± 22.57）、（442.33 ± 12.03）、（336.82 ± 14.11）个]均明显减少（P < 0.05）,呈一定剂量依赖性（P < 0.05）;与对照组比较,多巴胺10、25、50和100 μmol/L组U251细胞中cyclin D1、CDK4、CDK6及VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达量均明显降低（P < 0.05）。     

单壁碳纳米管对血管外膜成纤维细胞的毒性作用

目的 探讨不同剂量单壁碳纳米管(SWCNTs)对原代培养大鼠血管外膜成纤维细胞(VAF)的毒性作用,为SWCNTs的毒理学及生物安全性研究提供参考.方法 将SWCNTs制成颗粒悬液,设9个剂量组(0.80、1.60、3.20、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、200.00μg/ml)对原代培养...     

Bcl-2家族蛋白在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡中的作用

目的:研究Bcl-2家族蛋白在维生素E琥珀酸酯(RRR-α-tocopheryl succinate,α-TOS;vitamin E succinate,VES)诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡线粒体途径中的作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)法测定VES对SGC-7901细胞的半数抑制浓度(IC50值);吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色观察细胞凋亡;Mito Tracker Red CMXRos染色观察线粒体膜电位(ΔΨm)的改变;Western Blot法检测不同剂量VES对人胃癌SGC-7901细胞Bid、Bax、Bcl-2蛋白表达和细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)蛋白表达与定位的影响。结果:VES对SGC-7901细胞的IC50值为101.45μg/ml;VES可引起SGC-7901细胞发生凋亡和线粒体膜电位下降;并引起Cyt C蛋白在细胞内重新定位、Bid蛋白剪切活化、Bax蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少。结论:VES可抑制SGC-7901细胞的生长,并通过线粒体途径诱导凋亡,其机制可能是通过剪切活化Bid蛋白、上调Bax/Bcl-2相对水平来实现的。     

中药体外防治甲型H1N1流感病毒实验研究

目的研究中药防治流感的体外效果。方法采用鸡红细胞凝集实验以及MTT法观察三种常见的代表性预防流感的方药("扶正"预防类-玉屏风制剂;祛邪预防类-银翘散制剂;外用芳香辟秽类制剂-冰香散)对流感病毒A/FM/1/47(H1N1)鼠肺适应株的预防作用。结果冰香散在最小无毒浓度15.6μg/ml时对流感病毒A/FM/1/47(H1N1)鼠肺适应株有良好的预防作用。银翘散和玉屏风散仅在毒性浓度下对流感有预防作用,无毒浓度下均不能抑制病毒。阳性对照药利巴韦林在0.25～2 mg/ml浓度内均有较好的抑制流感病毒作用。冰香散提前加药,冰香散对病毒的半数抑制浓度(IC50)为5.89μg/ml,治疗指数(TI)为3.28;冰香散与病毒同时加药,冰香散挥发油对流感病毒的直接抑制作用的IC50为9.56μg/ml,TI为2.02。而先加流感病毒吸附后再加冰香散,则未能对流感病毒有抑制作用,其治疗指数TI小于0.05。结论冰香散体外对甲型流感病毒FM1有预防作用。玉屏风散制剂和银翘散制剂仅在毒性浓度下对流感有预防作用,无毒浓度下均不能抑制病毒。其防治流感病毒的作用可能通过体内免疫机制而实现。     

In vitro antioxidant and hypoglycemic activities of Ethiopian spice blend Berbere

The metal chelating activity, antioxidant properties, and the effect on carbohydrate-hydrolyzing enzymes of Ethiopian spice blend Berbere have been investigated. Berbere contains a total amount of phenols corresponding to 71.3 mg chlorogenic acid equivalent per gram of extract and a total flavonoid content of 32.5 mg quercetin equivalent per gram of extract. An increase of the resistance towards forced oxidation was obtained when Berbere was added to sunflower oil. In order to evaluate the bioactivity of the non-polar constituents, an n-hexane extract was obtained from Berbere. The gas chromatography-mass spectrometry analysis revealed the presence of 19 fatty acids constituents (98.1% of the total oil content). Among them, linoleic acid was the major component (72.0% of the total lipids). The ethanolic extract had the highest ferric-reducing ability power (35.4 μM Fe(II)/g) and DPPH scavenging activity with a concentration giving 50% inhibition (IC(50)) value of 34.8 μg/ml. Moreover, this extract exhibited good hypoglycemic activity against α-amylase (IC(50) = 78.3 μg/ml). In conclusion, Ethiopian spice blend Berbere showed promising antioxidant and hypoglycemic activity via the inhibition of carbohydrate digestive enzymes. These activities may be of interest from functional point of view and for the revalorization of the spice blend in gastronomy also outside the African country.     

蛇毒解聚素抑制荷U87胶质瘤裸鼠移植瘤的实验研究

目的 研究蛇毒解聚素在可移植性人脑胶质瘤间质化疗的疗效并探讨其作用机制.方法 建立BALB/c裸鼠U87胶质瘤移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为两组,采用间质内注射给药方法.蛇毒解聚素组:蛇毒解聚素40μg/d;对照组:为空白对照组,瘤内接种0.9%NaCl溶液,不给药,每组各15只裸小鼠.持续3周.定期观察肿瘤生长情况并测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线图并计算抑瘤率.全部BALB/c裸鼠移植瘤石蜡标本用SP法免疫组化染色,检测移植瘤组织中的微血管密度(MVD)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达.结果 与对照组相比,蛇毒解聚素组均能抑制肿瘤生长(P＜0.05),其体积抑瘤率为50%,并能明显降低肿瘤MVD(14.16 4±2.49比38.01±6.07)和下调移植瘤组织中bFGF的蛋白表达(免疫反应积分为2.38±0.91比6.00±1.15).结论 蛇毒解聚索能明显抑制U87裸鼠移植瘤生长.