实时荧光PCR法、胶体金快速检测法及病毒分离培养法在甲型流感病毒检测中的临床应用分析

目的：探讨实时荧光PCR法、胶体金快速检测法及病毒分离培养法检测甲型流感病毒的临床应用。方法采用实时荧光PCR法、胶体金快速检测法及病毒分离培养法同时检测210份临床流感样标本是否有甲流感病毒阳性反应,统计分析其方法灵敏度、特异性。结果实时荧光PCR法检测其阳性率最高,病毒分离培养法阳性率最低,三者阳性率有显著差异（P 〈0.05）。结论三种检测方法对甲型流感病毒检测均显效,胶体金快速检测法可用于流感病毒早期筛选,实时荧光PCR法用于确诊,病毒分离培养法用于实验室分析与疫苗的研究。     

实时RT-PCR方法和快速抗原检测方法(Dot-Elisa)检测甲型流感的比较

目的探讨实时逆转录聚合酶链扩增反应（real-time RT-PCR）和快速抗原检测方法（Dot-Elisa）在检测甲型流感中的应用。方法随机选择2009年5～10月在我院门诊就诊的318例流感样症状病例,采集咽拭子标本。采用real-time RT-PCR和Dot-Elisa同时检测咽拭子标本的甲型流感病毒核酸或甲型流感病毒抗原。结果在318例流感样病例中,real-time RT-PCR方法检测152例（47.8%）为甲型流感患者,其中118例（37.1%）为甲型H1N1流感（2009）,34例（10.7%）为普通甲型流感。快速抗原检测方法检测113例患者为甲型流感患者。与real-time RT-PCR方法比较,快速抗原检测方法检测甲型流感的敏感性为61.8%,特异性为88.5%,阳性预测值PPV为83.2%,阴性预测值为71.7%,总符合率为75.8%,一致性KAPPA检验κ=0.509（P〈0.01）。采用两种不同方法检测甲型流感阳性率的差异不受患者病程、年龄的影响（P均﹥0.05）。Ct值≤35的标本其抗原阳性检测率大于Ct值在35～37之间的抗原阳性率（U=0.00,P〈0.01）。结论快速抗原检测方法检测甲型流感的敏感性低于real-timeRT-PCR方法,其敏感性可能受标本的病毒量影响。     

B型流感病毒抗原诊断试剂盒与咽拭子流感病毒分离诊断效果比较

目的 利用病毒抗原诊断试剂盒建立B型流感病毒快速诊断的方法.方法 对129例流感样病例的咽拭子病毒分离及B型流感病毒抗原诊断试剂盒检测,评价其灵敏度和特异性.结果 咽拭子病毒分离阳性率为13.9%,B型流感病毒抗原诊断试剂盒检测阳性率为8.5%,两法阳性检出率比较差异无显著性(P＞0.05).B型流感病毒抗原诊断试剂盒灵敏度为36.36%,特异度为79.72%,符合率为89.15%.结论 本试剂盒能鉴定流感型别,操作简便快速,若能进一步提高灵敏度和特异性,有助于临床对流感病毒的早期诊断.     

2012—2013年葫芦岛市流感病原学检测分析

目的通过对2012—2013年葫芦岛市流感病原学检测分析,了解当地流感毒株变异情况以及流感病原学的特征,为流感疫情防控提供科学依据。方法采集流感样病例（ILI）的咽拭子标本用狗肾细胞（MDCK）进行流感病毒检测,病毒分离后采用血凝试验方法（HA）判断是否有病毒存在,血凝抑制方法（HI）进行流感病毒型别鉴定。结果2012年4月-2013年3月共检测流感病例（ILI）咽拭子样本335份,分离到流感病毒107株,阳性率31．94％,其中新甲型H1N1共11株、H3N2型96株。结论葫芦岛市流感病毒在2012—2013年以H3N2型为主,与全国亚型吻合,未发现变异毒株。     

流感病毒抗原快速检测与real-time RT PCR的比较

目的介绍一种可同时检测甲型、乙型流感病毒的快速方法,便于及早确诊流感病原体。方法采用快速抗原法对2014年1月—2015年12月收集的632份流感样患者标本进行甲型、乙型流感病毒抗原检测,并对其中102份进行real-time RT PCR检测。结果快速抗原法检测到样本中甲型流感病毒阳性14例,乙型流感病毒阳性10例。real-time RT PCR法检测到甲型流感病毒阳性15例,乙型流感病毒阳性12例。快速抗原法针对甲型流感病毒诊断灵敏度93.3%,特异度100.0%;针对乙型流感病毒,诊断灵敏度83.3%,特异度100.0%,耗时15 min,明显少于real-time RTPCR法的3 h。结论采用快速抗原法可及早筛查甲型、乙型流感标本。     

安宁地区住院患儿呼吸道病原体七联检阳性检测结果分析

  目的  分析安宁地区住院患儿呼吸道感染病毒病原体阳性检测结果。  方法  选择2019年9月至2022年2月安宁地区住院患儿1 766例为研究对象,根据年龄分为 < 6月龄组、6月龄～4岁组、4～14岁组;根据新冠疫情防控,2019年9月至2020年2月前为公众防护前,2020年2月后公众防护后;采集所有患儿鼻咽拭子标本,采用直接免疫荧光法测定甲型流感病毒抗原、乙型流感病毒抗原、呼吸道合胞病毒抗原、腺病毒抗原、副流感病毒Ⅰ型抗原、副流感病毒Ⅱ型抗原、副流感病毒Ⅲ型抗原7种呼吸道病原体,统计分析患儿呼吸道病原体检出情况。  结果  1 766例患儿呼吸道感染病毒病原学检出阳性584例,阳性率为33.07%,呼吸道病毒病原体中检出主要以呼吸道合胞病毒（316例/17.89%）、腺病毒（90例/5.10%）、副流感病毒Ⅲ型（82例/4.64%）为主;患儿呼吸道感染病毒病原体阳性主要集中在 < 6月龄组、6月龄～4岁组,检出阳性率分别为111例（34.69%）、327例（34.31%）,不同年龄段呼吸道感染病原体检测阳性率,差异有统计学意义（χ2 = 8.392,P = 0.031）;公众防护后甲型流感病毒检出阳性率0.29%低于公众防护前5.94%,差异有统计学意义（P < 0.05）;公众防护前后乙型流感病毒抗原、腺病毒抗原、副流感病毒Ⅰ型、副流感病毒Ⅱ型、副流感病毒Ⅱ型检出率差异无统计学意义（P > 0.05）。  结论  安宁地区住院患儿呼吸道感染病毒病原学检出率较高,呼吸道合胞病毒是主要病原体,公众防护后甲型流感病毒检出阳性率明显下降,故继续做好公众防护对防范甲型流感亦有重要意义。     

流感样疾病患儿呼吸道病毒感染情况及流行病学特征

目的 探讨本地流感样疾病患儿感染不同呼吸道病毒的情况及多种呼吸道病毒的流行特征,为当地儿童预防和治疗流感样疾病提供依据。 方法 选取2022年2月至2023年1月于浙江省舟山市妇女儿童医院就诊流感样疾病患儿214例,根据患儿年龄和性别进行分组,分析患儿性别、年龄及季节分布情况。 结果 不同性别呼吸道病毒检出情况比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。单一种类病毒感染的病例中,男性患儿甲型流感病毒（FluA）抗原检测阳性率最高（91.8%）,乙型流感病毒（FluB）和和腺病毒（ADV）病毒抗原检测阳性率最低（0.9%）;女性患儿FluA病毒抗原检测阳性率最高（91.4%）,其他病毒抗原检测阳性率均为1.9%;年龄3～＜6岁患儿单纯FluA病毒抗原检测阳性率低于≥6岁患儿和0～＜3岁患儿,ADV病毒抗原检测阳性率和RSV病毒抗原检测阳性率高于≥6岁患儿和0～＜3岁患儿,差异有统计学意义（P＜0.05）。季节分布,患儿春季呼吸道病毒感染率最高,冬季次之,其次是秋季,夏季最低。 结论 呼吸道病毒抗原检测阳性率在近两年总体上增高, FluA是流感样疾病患儿感染的主要呼吸道病毒,RSV和FluA呈现季节性,流行主要季节为春季和冬季。不同年龄段的儿童都有可能感染不同的呼吸道病毒。     

直接免疫荧光法用于多种呼吸道病毒抗原的快速检测分析

目的研究分析直接免疫荧光法用于多种呼吸道病毒抗原的快速检测。方法该院接诊呼吸道感染患者230例,将其分为成人组（105例）和儿童组（125例）,均通过直接免疫荧光法对7种病毒抗原进行检测,其中包括流感病毒A、流感病毒B、副流感病毒1、副流感病毒2、副流感病毒3、呼吸道合胞病毒、腺病毒。结果 230例呼吸道感染的病毒检出呈阳性85例,检出率为37.0%,其中最高为呼吸道合胞病毒50例（21.7%）,其次为流感病毒A（16例,6.9%）、流感病毒B（14例、6.0%）。呼吸道病毒的阳性检出率随着年龄增长而下降,其中儿童组检出阳性55例,阳性率为44.0%,明显高于成人组（30例,28.6%）,差异有统计学意义（P〈0.05）,且两者的最高检出率均为呼吸道合胞病毒,分别为27.2%和15.2%。结论呼吸道感染与流感病毒A、流感病毒B、副流感病毒1、副流感病毒2、副流感病毒3、合胞病毒、腺病毒等7种病毒密切相关,直接免疫荧光法可对其进行快速检测,并且灵敏度及特异性均较高,易于标准化,能满足实验室对病毒检测要求,应在临床中推广应用。     

过敏性紫癜与呼吸道病毒的关系：病因学的探索

目的探讨呼吸道病毒感染在过敏性紫癜发病机制中的作用。方法采用酶联免疫吸附法观察40例过敏性紫癜血浆中呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒、副流感病毒IgM抗体,直接免疫荧光法观察该40例血液中单个核细胞及肾组织中呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒A、流感病毒B、副流感病毒1、2、3抗原,分别比较A组（外周血病毒抗原检测阳性）与B组（外周血病毒抗原检测阴性）,A1组（外周血病毒抗原检测阳性,肾组织中病毒抗原检测阳性）与A2组（外周血病毒抗原检测阳性,肾组织中病毒抗原检测阴性）的临床及病理特征。结果①过敏性紫癜组副流感病毒的检出率（12/40,30%）高于呼吸道感染组（1/42,2.4%）,差异有统计学意义（χ2=11.715,P〈0.05）,呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒的检出率两组之间差异无统计学意义（P〉0.05）。②肾组织,呼吸道病毒抗原13例阳性（13/40,32.5%）,其中副流感病毒12例（12/13）（副流感病毒Ⅱ10例,副流感病毒Ⅲ2例）,1例为呼吸道合胞病毒。抗原在肾小管的荧光强度及密度明显高于肾小球。结论呼吸道病毒,特别是副流感病毒感染可能与过敏性紫癜发病有关。     

2009～2010年深圳市福田区甲型H1N1流感病毒监测分析

目的检测深圳市福田区2009-2010年流感监测样本,分析甲型H1N1流感病毒的流行病学特点。方法采用实时荧光定量（Real Time RT-PCR）进行核酸检测和型别鉴定,同时进行病毒分离和血凝实验。结果 2009年8月-2010年12月共检测467份咽拭子样品,核酸检测阳性129份,阳性率为27.62%;病毒分离毒株101株,阳性率为21.63%。结论在2009年8月份甲型H1N1流感开始流行并成为流行的优势毒株,并持续到2010年3月份;5～59年龄人群甲型H1N1流感病毒分离率较高,而5岁以下及≥60岁年龄组分离率反而较低。     

海南省2004年流行性感冒的病原学监测

目的探讨海南省流行性感冒病例发生的病原学依据和流感毒株的型别分布、时间分布等特征,为流感的防治以及与SARS、禽流感的鉴别诊断提供科学的实验室依据. 方法采用MDCK细胞进行流感病毒的分离培养,血凝试验阳性标本采用血凝抑制试验进行流感病毒型别鉴定.结果海南省2004年共采集流感样病例咽拭子标本477份,流感病毒分离阳性率为13.21%(63/477).1～6月的病例标本中仅分离到H3型流感毒株,7～12月病例标本则分离到H3型和B型流感毒株.7～9月病例标本分离到19株H3型和21株B型流感毒株,病毒分离阳性率最高,为20.30%. 结论海南省2004年流感流行以H3型和B型流感病毒为主要病原,1～6月主要为H3型,7～12月则H3型和B型均有流行,7～9月的标本采集数和病毒分离阳性率均高于其它时间段,提示夏季是海南省的流感多发季节.今后需提高流感样病例标本采集的及时率、病毒分离阳性率和及时报告率,为海南省的急性呼吸道传染病的防治提供科学依据.     

2714例就诊者淋球菌和衣原体检测分析

目的：分析皮肤性病门诊就诊者淋病耐瑟菌（NG）和沙眼衣原体（CT）感染情况.方法：对2714例就诊者标本进行NG和CT检测,NG检测采用分离培养法,CT抗原检测利用快速免疫层析法.结果：CT阳性率为14.74%,NG阳性率11.26%,NG及CT同时阳性率为4.71%.结论：皮肤性病门诊就诊者同时进行NG和CT检测,可为临床治疗提供辅助诊断依据,有利于及时发现NG感染者、CT感染者以及合并感染者,以便给予有效治疗.     

流感样病例中肺炎支原体感染与耐药情况研究

背景流感与肺炎支原体感染均是我国北方地区冬季好发疾病，临床症状相似，而关于流感样病例（ILI）中肺炎支原体感染情况研究较少。目的研究ILI咽拭子标本中肺炎支原体（MP）的感染与耐药情况。方法收集2018—2020年冬季（2018年12月至2019年2月、2019年12月至2020年2月）潍坊、开封、哈尔滨、内蒙古、北京、天津、铜川、咸阳、秦皇岛、丹东、汉中、太原、本溪、漯河、南阳地区共17家三级甲等医院中ILI咽拭子标本915份，采用流感病毒抗原胶体金法检测流感病原，荧光定量聚合酶链式反应（PCR）及DNA测序法检测MP核酸及耐药基因。结果2018—2020年冬季915份ILI咽拭子标本中儿童标本（<18岁）578份，成人标本（≥18岁）337份。流感病毒抗原检测阳性率为45.25%（414/915），其中甲型流感病毒占91.06%（377/414）；儿童流感病毒抗原检测阳性率为44.29%（256/578），与成年人流感病毒抗原检测阳性率46.88%（158/337）比较，差异无统计学意义（χ2=0.577，P=0.447）。MP阳性率为11.91%（109/915），儿童MP阳性率低于成人〔4.34%（25/578） VS 24.93%（84/337），χ2=86.094，P<0.001〕。109份MP阳性标本中74.31%（81/109）存在A2063G位点突变，1.83%（2/109）存在A2064G位点突变，1.83%（2/109）存在A2063G位点和A2064G位点共同突变；儿童MP阳性标本中48.00%（12/25）存在A2063G位点突变，8.00%（2/25）存在A2064G位点突变，8.00%（2/25）存在A2063G位点和A2064G位点共同突变，36.00%（9/25）为敏感株；成人MP阳性标本中82.14%（69/84）存在A2063G位点突变，17.86%（15/84）为敏感株，未见A2064G位点突变；成人MP A2063G位点突变阳性率高于儿童（χ2=11.765，P=0.001）。915份ILI标本中流感病毒与MP混合感染阳性率为2.84%（26/915），儿童ILI标本中流感病毒与MP混合感染阳性率为1.73%（10/578），成人ILI标本中流感病毒与MP混合感染阳性率为4.75%（16/337），成人流感病毒与MP混合感染阳性率高于儿童（χ2=7.022，P=0.008）。结论2018—2020年我国北方地区冬季流感以甲型流感为主，ILI标本中MP感染并不少见，成人ILI样本中MP阳性率高于儿童，MP对大环内酯类抗生素的耐药率仍处于较高水平，并且以23SrRNA基因A2063G位点突变为主，部分患者可见流感病毒与MP混合感染。     

甲型和乙型流感病毒抗原检测新方法

目的寻找一种更加简便的方法来定性检测流感病毒抗原阳性细胞。方法设计流式的方法来检测甲型流感病毒(IA)和乙型流感病毒(IB)抗原阳性细胞。采用2种荧光素标记抗体进行流式标记鼻咽拭子的上皮细胞,对157份鼻咽拭子进行甲型和乙型流感病毒抗原检测。结果 157例样本中,直接免疫荧光法检测到甲型流感病毒阳性44例,乙型流感病毒阳性35例,流式法检测到甲型流感病毒阳性39例,乙型流感病毒阳性29例,两种方法检测甲型和乙型流感病毒的阳性率差异无统计学意义(P0.05)。两种方法检测IA的阳性与阴性总符合率为93.0%,阳性率差异无统计学意义(P0.05),一致性系数检验κ=0.820,提示两种检测方法一致性较强且有统计学意义(P0.05)。两种方法检测IB的阳性与阴性总符合率89.8%,阳性率差异无统计学意义(P0.05),一致性系数检验κ=0.687,两种检测方法一致性基本满意且有统计学意义(P0.05)。结论采用流式法可及早快速筛查甲型、乙型流感标本,操作步骤简便,只需不到2 h就可完成检测,可以推广应用。     

3种流感病毒检测方法的比较

目的对病毒分离培养法、实时荧光PCR法和鸡胚培养法3种检测流感病毒的方法和结果进行比较研究,筛选快速准确的检测方法,为流感监测与防控工作提供及时可靠的病原学依据。方法同时采用病毒分离培养法、实时荧光PCR法和鸡胚培养法对2014年10月~2015年3月牡丹江市流感监测哨点医院采集的流感样病例咽拭子样本进行检测,比较检测结果。结果实时荧光PCR法的流感病毒核酸检测阳性率为15.52%,其中169份为季节性H3N2流感病毒,73份为B型Yamagata株;病毒分离培养法的阳性率为6.29%,分离出63株季节性H3N2流感病毒,35株B型Yamagata株;鸡胚分离培养法检出率为0.64%。3种方法中,实时荧光PCR法的阳性率最高,病毒分离培养法次之,鸡胚分离培养法阳性率最低。结论实时荧光PCR法比病毒分离培养法和鸡胚培养法灵敏快捷、特异性强、敏感度高,适用于流感病毒的快速检测。     

慢性阻塞性肺疾病急性加重期病原学研究

目的观察慢性阻塞性肺疾病急性加重（AECOPD）患者下呼吸道细菌、真菌和病毒的感染情况。方法对32例AECOPD患者进行诱导痰的细菌、真菌培养,以痰中的下呼吸道病原菌浓度≥10^7CFU／ml作为诊断AECOPD病原菌感染的标准;同时应用间接免疫荧光法和细胞培养病毒分离法检测呼吸道常见的7种病毒：甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒I型、副流感病毒Ⅱ型、副流感病毒Ⅲ型、呼吸道合胞病毒和腺病毒。结果合格痰标本32份,痰培养检出40株菌,其中22株菌量≥10^7CFU／ml,来自16例患者,其中单一菌感染者8例,混合菌感染者8例。G^＋球菌占22.7％（5株）,G^＋球菌占13.6％（3株）,G^＋杆菌占50％（11株）,其中铜绿假单胞菌分离率最高,占22.7％（5株）,真菌占13.7％（3株）。32份痰标本经间接免疫荧光法检测呼吸道7种病毒,全部为阴性。对这32份痰标本进行细胞培养病毒分离,其中1份标本为副流感病毒Ⅲ型阳性,余均为阴性。痰细菌培养阳性率为50.0％,痰病毒检测阳性率为3.1％,细菌和病毒混合感染阳性率为3.1％。结论AECOPD的病原菌以G^＋菌为主,其中铜绿假单胞茵分离率最高。AECOPD的诱导痰病毒检出率较低。     

三种流感病毒检测方法的比较

目的对胶体金法、病毒分离培养法和荧光定量RT-PCR法等3种检测流感病毒方法和结果进行比较研究,筛选快速准确的检测方法,为流感监测与防控工作提供及时可靠的病原学依据。方法同时采用胶体金法、病毒分离培养法和荧光定量RT-PCR检测法对2012年深圳市龙岗区流感监测哨点医院采集的流感样病例样本进行检测,比较检测结果。结果荧光定量RT-PCR的流感病毒核酸检测阳性率为70.8%,其中98份为季节性H3N2流感病毒,51份为B型Victoria株,4份为B型Yamagata株;病毒分离培养法的阳性率为46.3%,分离出61株季节性H3N2流感病毒,35株B型Victoria株,4株B型Yamagata株;胶体金法检出率为3.7%。3种方法中,荧光定量RT-PCR的阳性率最高,病毒分离培养法次之,胶体金法阳性率最低。结论与病毒分离培养法和RT-PCR法相比,胶体金法并不适合单独用于诊断流感病毒感染,病毒分离培养法费时费力,荧光定量RT-PCR法有较高的敏感性和特异性,适用于流感疫情的病原学快速诊断。     

汕头市2003-2004年流感监测结果分析

目的 了解汕头市人群受流感病毒感染的情况及针对流感病毒的免疫状况.方法 2003年7月-2004年6月采集市区流感样病人的咽拭子标本406人份进行流感病毒分离,采集一般人群血清200人份,采用微量半加敏血凝抑制试验（HI）进行A（H1N1）型、A（H3N2）型、B（Victoria系）型、B（Yamagata系）型抗体水平测定,采集职业人群血清90人份进行H5N1抗体水平测定. 结果 406份共分离出流感病毒43株,分离率为10.70%,全部为A（H3N2）亚型.一般人群血清四型流感抗体阳性率分别是：27.0%、70.0%、37.0%、40.0 %.职业人群血H5N1抗体阳性率为零. 结论 流感流行优势株为A（H3N2）型,人群对A（H1N1）型流感病毒的免疫力较低,需引起注意,职业暴露人群未检出H5N1抗体.     

几种CMV相关物检测对诊断肾移植患者CMV感染的评价

目的 比较血中pp65抗原、DNA和IgM抗体检测对肾移植患者巨细胞病毒（CMV）活动性感染的诊断价值,为临床上对CMV感染的诊断和治疗提供参考.方法 收集83位肾移植患者的血标本（共302份）,分离血浆和多型核白细胞,血浆用于CMV-DNA（定性PCR）和IgM抗体（ELISA）检测,白细胞用于pp65抗原血症检测（荧光免疫法）.结果 CMV-DNA阳性率为36.1%,CMV IgM抗体阳性率20.2%,CMV pp65抗原阳性率为38.5%.pp65抗原阳性细胞数与病人的临床症状密切相关.结论 pp65抗原阳性细胞数能反应CMV的数量,可监测早期活动性CMV感染及疗效观察,检测方法特异,灵敏,操作简单,适合临床实验室应用.     

深圳市南山区2010~2013年流感病原学检测结果分析

目的分析2010~2013年深圳市南山区流感样病例中流感病毒的变异及流行趋势,为辖区流感防控工作提供依据。方法流感病毒分离采用狗肾传代细胞(MDCK)进行培养,培养液做血凝试验,血凝试验阳性标本做红细胞凝集抑制试验进行分型鉴定。结果 2010~2013年共收集1 028例疑似流感样病例标本,分离出流感病毒246株,分离阳性率为23.9%,其中2010年流感病毒分离阳性率为22.3%(59/264),各型分布H1N1亚型9株、H3N2亚型5株、甲型H1N1 35株、Bv 10株。2011年流感病毒分离阳性率为23.3%(57/245),各型分布甲型H1N1亚型20株、Bv35株、By2株。2012年流感病毒分离阳性率为20%(52/260),各型分布流感病毒H3N2亚型35株、甲型H1N1亚型1株、Bv 13株、By 3株。2013年流感病毒分离阳性率为30.1%(78/259),各型分布H3N2 27株、甲型H1N1 33株、By 18株。流感病毒分离阳性率各年之间差异有统计学意义(χ2=8.0725,P0.05)。结论 2013年流感病毒分离阳性率最高,2010~2013年流感的流行株主要为甲型H1N1、H3N2、B型,而且交替流行。B型流感病毒由Bv系转向By系。流行时间在冬春和夏秋季节。