胸髓横断大鼠减重平板步行训练后腰髓前角神经元超微结构的可塑性变化

目的：探索步行训练提高脊髓损伤(SCI)后运动功能的脊髓可塑性机制。方法：84只成年雌性Wistar大鼠随机分为假手术组(n=18)、胸髓横断模型组(n=33)、SCI后减重平板步行训练(BWSTT)治疗组(n=33),分别于术后第7天、15天、45天,通过光镜和电镜观察SCI大鼠脊髓腰膨大内前角神经元形态结构的变化。结果：胸髓横断大鼠BWSTT后,腰髓前角神经元超微结构出现代偿性改变。结论：BWSTT后胸髓横断大鼠可通过增强脊髓损伤平面以下腰髓前角神经元的可塑性,促进其后肢运动功能的恢复。     

坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰段脊髓运动神经元的超微结构变化

背景:高速弹丸致伤坐骨神经后,其远隔部位的腰段脊髓会发生何种组织损伤效应?目的:研究坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰段脊髓运动神经元的超微结构改变.设计:以实验动物为研究对象,随机对照的验证性研究.单位:一所军医大学医院的野战外科研究所.材料:实验于2001-05/2002-12在野战外科研究所靶道实验室完成.选择SPF日本大耳白兔65只,雌雄不拘,体质量2.5～3.0kg,由第三军医大学大坪医院动物医学实验中心提供.按随机数分为正常对照组5只、火器伤组30只、切割伤组30只,火器伤组和切割伤组观察时相点为伤后1,3 d,1,2,4,12周,每时相点5只动物.方法:火器伤组致伤弹丸为0.38 g钢珠,装药量0.65 g,致伤靶点为兔右后肢外侧坐骨神经体表投影线中点,切割伤组在同一水平切断右坐骨神经.主要结局观察:光电镜下观察伤后1,3 d,1,2,4,12周时腰段脊髓的病理改变.结果:火器伤组可见腰段脊髓有小出血灶、神经元水肿、空泡样变、运动神经元数量减少等变化,切割伤组则未见这些病理改变.结论:火器伤组腰段脊髓损伤较切割伤组重,运动神经元存活数量显著减少.     

坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰段脊髓运动神经元的超微结构变化

背景高速弹丸致伤坐骨神经后,其远隔部位的腰段脊髓会发生何种组织损伤效应?目的研究坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰段脊髓运动神经元的超微结构改变.设计以实验动物为研究对象,随机对照的验证性研究.单位一所军医大学医院的野战外科研究所.材料实验于2001-05/2002-12在野战外科研究所靶道实验室完成.选择SPF日本大耳白兔65只,雌雄不拘,体质量2.5～3.0kg,由第三军医大学大坪医院动物医学实验中心提供.按随机数分为正常对照组5只、火器伤组30只、切割伤组30只,火器伤组和切割伤组观察时相点为伤后1,3 d,1,2,4,12周,每时相点5只动物.方法火器伤组致伤弹丸为0.38 g钢珠,装药量0.65 g,致伤靶点为兔右后肢外侧坐骨神经体表投影线中点,切割伤组在同一水平切断右坐骨神经.主要结局观察光电镜下观察伤后1,3 d,1,2,4,12周时腰段脊髓的病理改变.结果火器伤组可见腰段脊髓有小出血灶、神经元水肿、空泡样变、运动神经元数量减少等变化,切割伤组则未见这些病理改变.结论火器伤组腰段脊髓损伤较切割伤组重,运动神经元存活数量显著减少.     

嗅神经鞘细胞移植修复成鼠半横断胸髓损伤

目的:观察嗅神经鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)移植对脊髓轴突再生及神经功能恢复的促进作用。方法:将分离、培养3W的SD大鼠OECs,移植于12只成年SD大鼠胸10水平左侧半横断脊髓两断端;12只对照动物只注入等量DMEM;移植后6个月行下肢功能评价、运动诱发电位(MEP)检测、组织学和免疫组化检查。结果:实验组及对照组动物存活率均为83.4％。实验组9只(9/10)动物下肢功能有不同程度的改善,其中3只可以主动攀登;上述9只动物左下肢可记录到MEP;组织学检查见宿主再生轴突长人断端间组织,周围有髓鞘碱性蛋白阳性物质存在。对照组中2只(2/10)下肢功能稍改善,并能记录到MEP;组织学检查见轴突变性,瘢痕形成,无轴突再生。结论:OECs日移植后可在脊髓中产生髓鞘样物质,促进宿主脊髓轴突再生及神经功能部分恢复。     

脊髓损伤大鼠远端运动神经元继发性损害的变化特点

目的探讨脊髓损伤大鼠远端运动神经元继发性损害的变化特点。 方法成年雌性SD大鼠40只,采用改良Allen’s撞击法制作T10不完全性脊髓损伤模型。分别在损伤前、损伤后第1周、2周、3周、4周、5周时采用斜板试验、改良Tarlov评分、BBB评分进行运动功能评定;在各时间点取5只大鼠用4%多聚甲醛心脏灌注,取损伤局部T10节段及损伤远端L5节段脊髓进行形态学检测。损伤前时间点检测结果作为正常对照。 结果①损伤远端运动神经元病理变化：损伤后第1周时,损伤远端前角运动神经元突起和尼氏体有所减少,胞核和核仁无明显改变;损伤后第2周时,损伤远端前角运动神经元突起和尼氏体进一步减少,核仁模糊、偏位;损伤后第3周时,损伤远端前角运动神经元突起和尼氏体较前无进一步减少,组织内可见萎缩及凋亡神经元;损伤后第4周时,损伤远端前角运动神经元突起和尼氏体较第3周时有所增加,仍可见少数凋亡神经元存留;损伤后第5周时,损伤远端前角运动神经元突起和尼氏体较前明显增多。②损伤局部病理变化：损伤后第1周时,损伤局部灰、白质界限不清,可见出血、炎症反应,灰质部分神经纤维及组织坏死、液化,白质空泡化;损伤后第2周时,损伤局部出血、血肿及炎症反应减退,可见胶质细胞、神经纤维增生和血管新生;损伤后第3周时,损伤局部胶质细胞增生显著,神经纤维增生较多;损伤后第4周、第5周时,损伤局部胶质细胞、神经纤维较前无明显增生。 ③运动功能变化：损伤后第1周、2周、3周、4周、5周时的斜板角度、改良Tarlov评分、BBB评分均较损伤前显著降低（P<0.05）;损伤后第2周、3周、4周、5周时各项评分均较第1周时显著增加（P<0.05）;损伤后第3周、4周、5周时呈增加趋势,但与第2周时比较差异无统计学意义（P&rt;0.05）。 结论脊髓损伤后早期远端脊髓运动神经元即会发生继发性损害,包括突起和尼氏体减少、细胞萎缩与凋亡,并且与损伤局部病理变化及损伤时程相关。     

假狂犬病毒跨突触示踪胸髓损伤后膀胱神经支配通路变化的研究

目的 利用假狂犬病毒（PRV）跨突触示踪技术,研究胸髓横断所致的急、慢性脊髓损伤（SCI）对膀胱脊髓神经支配通路的影响.方法 76只SD大鼠随机分为4组：non-SCI、SCIa、SCIb和SCIc组.SCIa、 SCIb 和 SCIc组大鼠完全横断脊髓,饲养不同时间后,膀胱壁内注射PRV;non-SCI组正常大鼠膀胱壁内注射PRV,一定时间点后心脏灌注固定取材.链霉卵白素-过氧化物酶（SP）免疫组织化学方法显示背根神经节（DRG）和脊髓切片中PRV阳性神经元.图像分析软件统计各组PRV阳性神经元数目和面积.结果 SCIb 和SCIc膀胱重量显著增加（P〈0.001）;Non-SCI和SCI大鼠PRV示踪的时限性和分布相似;SCI大鼠病毒标记的DRG细胞面积显著增加（P〈0.001）.慢性SCI大鼠在注射PRV后第3天L6和S1节段后角标记细胞数显著增加,注射后第4天L6和S1节段标记的运动神经元数也显著增加.结论 急性和慢性脊髓损伤不影响大鼠膀胱的PRV示踪特性.慢性SCI大鼠膀胱排尿反射通路出现显著重组.     

大鼠骨髓基质细胞移植对脊髓横断损伤的修复功能

目的：研究骨髓基质细胞修复脊髓损伤的可能性，探索治疗脊髓损伤的新方法。方法：实验于2002-04／2003—04在哈尔滨医科大学附属第一医院动物实验中心完成。取20只大鼠，制作椎体水平脊髓离断伤的大鼠动物模型，随机分为细胞移植组和单纯损伤组。前者将体外培养至第5代的大鼠骨髓基质细胞，用Brdu标记后，移植到大鼠脊髓离断处，后者仅注射等量生理盐水。饲养12周，定期观察动物体质量变化，进行功能评定，12周后处死动物，行病理，免疫组织化学和电镜检查。进行两组对比观察。结果：细胞移植组动物和单纯损伤组动物在脊髓损伤后12周后肢功能的Tarlov评分分别为(4．65&;#177;0．18)，(3．65&;#177;0．35)分，斜板试验结果分别为(74．82&;#177;7．04)&;#176;，(50．21&;#177;5．06)&;#176;，体质量变化分别为(127&;#177;15．96)．(123．9&;#177;16．5)g，差异均有显著性意义。骨髓基质细胞移植组大鼠脊髓功能恢复优于单纯损伤组，大体所见及病理，免疫组织化学，电镜检查证明该组离断脊髓有明显修复迹象。结论：体外培养的大鼠骨髓基质细胞移植在大鼠骨髓内能够至少存活12周，并在脊髓损伤处发挥一定的修复功能。     

稳定性大鼠脊髓全横断模型的建立

目的:建立SD大鼠稳定、易复制的脊髓完全横断动物模型,并摸索术后护理方法,探讨性别对动物模型的影响。方法:实验于2005-03/09在南方医科大学临床解剖学研究所和广东省组织构建与检测重点实验室完成。①取40只SD大鼠(雌雄各半),体制量220～250g,按性别分为两组。体积分数为0.15的水合氯醛腹腔注射麻醉(300mg/kg)大鼠,于T10节段处,用锐利刀片于硬膜外快速切割、完全横断脊髓,切除2mm脊髓节段,医用明胶海绵填充脊髓断端间隙。②术后,大鼠单笼饲养,皮下注射青霉素20万单位,1次/d、5mL生理盐水2次/d,持续1周;每日定时膀胱挤压排尿两三次,给与截瘫护理。③定期观察大鼠后肢运动情况,并进行BBB评分(0￣21分,得分越高后肢运动功能越好),动物存活8周以上。结果:①动物模型脊髓损伤程度完全一致,术后1周内所有大鼠BBB评分皆为0分。②术后8周内大鼠因膀胱破裂死亡5只(雌2雄3),雌、雄大鼠死亡率比较无差异(P>0.05)。③所有大鼠均可观察到不同程度的后肢自发性功能恢复,以第3,4周最为明显,至第8周BBB评分雌性为7.41±2.55,雄性为7.06±3.05。各时间点雌雄比较无差异(P>0.05)。结论:①建立的脊髓完全横断大鼠模型效果稳定,可复制性强,制作简便,护理方法有效。②大鼠在术后死亡率和术后后肢功能自发性恢复方面无性别上的差异。     

偏头痛大鼠颈髓中间神经元的变化及其对运动神经元的影响

目的:探讨偏头痛大鼠模型颈髓1~2中间神经元的变化及其对运动神经元的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为空白组、假手术组、致炎剂(inflammatory soup,IS)组(IS 3 d、6 d、10 d)、生理盐水组。采用IS刺激大鼠硬脑膜模型,应用Von Frey纤维丝测定大鼠眶周痛觉阈值,应用Western blot和免疫荧光法观察颈髓中间神经元、运动神经元的变化。结果:随着IS反复刺激,大鼠眶周痛阈逐渐下降;IS组大鼠运动神经元乙酰胆碱转移酶Ch AT和c-Fos表达量较对照组增多,平均吸光度值增加;谷氨酸能中间神经元表达增强,GABA能中间神经元表达减弱。结论:反复硬脑膜给予致炎剂能有效诱导大鼠反复发作偏头痛并出现痛觉超敏,颈髓前角运动神经元兴奋性增加,这可能与颈髓中间神经元"兴奋—抑制"稳态失调相关。     

大鼠骨髓基质细胞移植对脊髓横断损伤的修复功能

目的:研究骨髓基质细胞修复脊髓损伤的可能性,探索治疗脊髓损伤的新方法。方法:实验于2002-04/2003-04在哈尔滨医科大学附属第一医院动物实验中心完成。取20只大鼠,制作椎体水平脊髓离断伤的大鼠动物模型,随机分为细胞移植组和单纯损伤组。前者将体外培养至第5代的大鼠骨髓基质细胞,用Brdu标记后,移植到大鼠脊髓离断处,后者仅注射等量生理盐水。饲养12周,定期观察动物体质量变化,进行功能评定,12周后处死动物,行病理,免疫组织化学和电镜检查。进行两组对比观察。结果:细胞移植组动物和单纯损伤组动物在脊髓损伤后12周后肢功能的Tarlov评分分别为(4.65±0.18),(3.65±0.35)分,斜板试验结果分别为(74.82±7.04)°,(50.21±5.06)°,体质量变化分别为(127±15.96),(123.9±16.5)g,差异均有显著性意义。骨髓基质细胞移植组大鼠脊髓功能恢复优于单纯损伤组,大体所见及病理,免疫组织化学,电镜检查证明该组离断脊髓有明显修复迹象。结论:体外培养的大鼠骨髓基质细胞移植在大鼠骨髓内能够至少存活12周,并在脊髓损伤处发挥一定的修复功能。     

脊髓重建管对T8损伤大鼠后肢运动终板的调节与维持

目的观察大鼠脊髓损伤后及脊髓重建管诱导脊髓再生修复过程中后肢骨骼肌运动终板形态结构与不同类型肌纤维终板区乙酰胆碱酯酶(AChE)的变化情况。方法43只成年Wistar大鼠随机分为脊髓T₈单纯损伤组（Cx组）、脊髓T₈损伤+脊髓重建管移植修复组（CxTp组）和正常对照组（Co组）,术后2周、4周、3个月、6个月、12个月经灌注固定后取出大鼠双下肢腓肠肌、比目鱼肌和趾长伸肌,分别用氯化金染色（压片法）观察运动终板结构形态和Karnovsky-Roots直接法染色检测AChE的变化。结果Cx组和CxTp组大鼠术后运动终板结构形态与AChE活性均发生改变。Cx组终板自术后3个月起发生明显的退行性改变,AChE活性亦呈线性下降;CxTp组终板结构与形态相对稳定,没有退变迹象,术后3个月起AChE 活性显著高于同时间点Cx组。结论大鼠脊髓损伤后,运动终板发生进行性退变,脊髓重建管移植修复可以阻止终板的退行性变,使其向着利于神经康复的方向发生着AChE的复活与结构形态的可塑性变化。     

Spinal Cord Stimulation and Motor Disorders

Spinal cord stimulation has been investigated by us during the past 10 years in the treatment of various disorders of the motor system. The effectiveness was studied in 735 cases, including cerebral palsy (212), dystonia (129), torticollis (66), spinal cord injury (169), and degenerative diseases (159). Our resuits indicate that in properly selected patients, stimulating the spinal neural axis is therapeutically effective in the majority of the cases treated. Our data demonstrate that the level stimulated, the pattern and the polarity of the applied field, and the frequency of the stimulation are critical to achieve a satisfactory therapeutic result and must be individualized in each patient.     

原花青素对脊髓损伤大鼠运动功能的影响

目的观察原花青素对脊髓损伤大鼠运动功能恢复的影响。方法健康成年SD大鼠36 只,采用Allen 法(250 g·mm)在T9复制急性脊髓损伤模型,分为A、B、C 3 组,每组12 只。造模型成功后30 min,A组腹腔注射原花青素40 mg/kg,B 组腹腔注射甲基强的松龙30 mg/kg,C 组腹腔注射等体积生理盐水。于术后1 d、3 d、7 d 对各组进行后肢功能BBB 评分、斜板试验,血清丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)测定。结果BBB 评分和斜板试验结果均显示,术后3 d 和7 d,A、B 两组较C 组后肢运动功能恢复更好(P<0.05)。与C 组相比,A、B 两组术后1 d 和3 d SOD 活性升高,MDA 含量降低(均P<0.05);7 d 时,A 组较C 组SOD活性增高,MDA降低(P<0.05)。结论原花青素可有效抑制脂质过氧化反应,对脊髓损伤大鼠运动功能的恢复具有促进作用。     

颈髓损伤后的综合康复治疗

目的：观察颈髓损伤患者综合康复治疗的结局。方法：40例颈髓损伤患者予以综合康复治疗，包括上肢肌功能性电刺激、肌力训练、平衡转移训练、平衡膀胱等并配合传统疗法及矫形器的应用等。结果：经过60-215 d的治疗后ASIA运动、感觉评分及ADL评分与治疗前比较，颈髓部分损伤患者有明显提高（P〈0.01或0.05）；完全损伤患者ASIA运动评分有明显提高（P〈0.05），而ASIA感觉及ADL评分虽有改善，但差异无显著性意义。结论：综合康复治疗能显著改善和提高颈髓损伤患者的生存质量，其中部分损伤患者最为显著。     

依达拉奉治疗大鼠脊髓损伤的实验研究

目的:探讨依达拉奉(必存)对大鼠脊髓损伤细胞的保护作用。方法:采用Allen法将32只SD大鼠制成脊髓中度损伤模型,随机分为必存组和对照组各16只,分别给予必存及生理盐水治疗,比较治疗前及治疗后6周2组大鼠斜板最大角度和神经功能恢复率。结果:从伤后第2和3周起,必存组斜板最大角度和神经功能恢复率均较对照组明显提高(P<0.01)。结论:必存对大鼠脊髓损伤细胞具有保护作用。     

Effects of Epidural Spinal Cord Stimulation and Treadmill Training on Locomotion Function and Ultrastructure of Spinal Cord Anterior Horn after Moderate Spinal Cord Injury in Rats

Objective:To investigate the effects of epidural spinal cord stimulation (ESCS) and treadmill training on the locomotion function and ultrastructure of spinal cord anterior horn after moderate spinal cord injury in rats.Method:Nine adult female Sprague-Dawley rats were randomly distributed into three groups: ①spinal cord injury group (SI, n=3). ②spinal cord injury plus ESCS group (SE, n=3). ③spinal cord injury plus treadmill training group (TT, n=3). All rats received a moderate spinal cord injury surgery. Four weeks after surgery, rats in SE group received an electrode implantation procedure, with the electrode field covering spinal cord segments L2—S1. Four weeks after electrode implantation, rats received subthreshold ESCS for 30 min/d. Rats in TT group received 4cm/s treadmill training for 30min/d. Rats in SI group received no intervention, as a control group. All procedures in these three groups lasted four weeks.The open field Basso,Beattie and Bresnahan(BBB) scale was used before and after intervention to evaluate rats′ hindlimb motor function. Result:After four weeks intervention, rats in TT group improved their open field locomotion scores to 20. In contrast, no significant improvement was observed in groups SI and SE. The morphology of synapses and neurons were similar regardless of whether rats had undergone ESCS, treadmill training or not. Conclusion:ESCS alone was not sufficient to improve the walking ability of spinal cord injured rats. ESCS or treadmill training alone might not contribute to the changes of ultrastructure in anterior horn of spinal cord that underlie the recovery of walking ability. Further research is needed to understand the contributions of combination of ESCS and treadmill training to the rehabilitation of spinal cord injured rats.     

电子线照射促进大鼠脊髓损伤后运动功能恢复

目的:观察电子线照射对大鼠脊髓损伤(SCI)后运动功能恢复的影响。方法:36只SD雌性大鼠随机分为假手术组、损伤组和照射组,采用改良Allen’s法制作大鼠脊髓T7～T8损伤模型,照射组在损伤后1 d给予20 Gy电子线照射,损伤组不给予任何干预。采用BBB评分法评定后肢运动功能,免疫荧光组织化学方法观察损伤后4周损伤灶周GFAP表达情况,Western blot对GFAP和生长相关蛋白-43(GAP-43)进行半定量检测。结果:假手术组大鼠运动功能不受影响,损伤组大鼠BBB评分损伤后明显下降,以后逐渐恢复,到4周时达平台期,照射组BBB评分高于损伤组,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学结果显示损伤后4周损伤组的损伤灶周形成胶质瘢痕,照射组未形成明显的胶质瘢痕,GFAP表达较损伤组弱,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示SCI后4周损伤组和照射组的GFAP表达较假手术组明显增多,照射组较损伤组减低,差异有统计学意义(P<0.05);照射组的GAP-43表达较损伤组增强(P<0.05)。结论:电子线照射可以抑制脊髓损伤后胶质瘢痕的形成,促进运动功能恢复。     

脊髓损伤后并发下肢骨折10例分析

对1990年8月～1995年12月我科收治的10例脊髓损伤并发下肢骨折患者进行分析。结果表明，骨折多在脊髓损伤后1年左右发生，骨折部位多在股骨干并且与被动活动或主动体位转换时下肢骨干受到扭转暴力有关。造成骨折的潜在原因有骨质疏松、下肢痉挛等。强调预防和早期发现的重要性，指出骨折发生后切开复位内固定是快速的有利于康复的治疗方法。     

半定量和定性方法评价截瘫大鼠后肢运动功能恢复的比较

目的了解胸髓完全横断大鼠后肢运动功能恢复的特点；探讨评价截瘫大鼠后肢运动恢复的最佳方法。方法26只成年Wistar大鼠随机分为假手术组、脊髓横断损伤组和减重平板步行训练组，分别于术前和术后1d、7d、15d、30d和45d，采用BBB开放空间运动评分和ACOS（average combined scores）神经行为学评定观察大鼠后肢运动功能的恢复情况，并比较其异同点。结果术后1d大鼠后肢呈弛缓性瘫痪，BBB和ACOS评分均为0分；30d和45d时与损伤组比较，训练组大鼠后肢运动功能恢复明显，BBB和ACOS评分均存在显著性差异。术后15d与30d、45d，30d与45d相比，损伤组和训练组内ACOS评分均存在显著性差异。损伤组与训练组BBB和ACOS评分的Pearson相关系数分别为0．991与0．987。结论胸髓完全横断大鼠仍存在部分后肢运动功能自发恢复的征象，减重平板步行训练能促进截瘫大鼠后肢运动功能的恢复。半定量和定性方法的评价结果均能较好地体现损伤后运动功能的恢复情况，两者相关性高。其中半定量方法能更敏感地反映不同时间点不同组别问运动恢复的细微变化。     

脊髓损伤后大鼠行为学改变及早期腓肠肌的变化

目的探索脊髓损伤后大鼠行为学改变及早期腓肠肌变化。方法108 只Wistar 大鼠,其中38 只为假手术组(n=38),其余制作脊髓切除模型,分为损伤组(n=38)和康复训练组(n=32)。应用BBB 法评价大鼠脊髓损伤后不同时间点的行为学变化;通过免疫组织化学法观察腓肠肌的变化。结果康复训练组BBB 评分从术后3 周开始高于损伤组,但两组得分始终未超过10 分。Dystrophin 免疫荧光染色显示,脊髓损伤后损伤组和康复训练组腓肠肌肌纤维横截面积均减小,但康复训练组萎缩程度较轻。结论脊髓损伤后大鼠后肢运动功能可出现一定的自发性恢复,康复训练有利于脊髓损伤大鼠运动功能的恢复,并能减缓后肢肌肉萎缩。