碱性成纤维细胞生长因子诱导大鼠缺血心肌血管新生的作用

目的　探讨局部应用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对大鼠急、慢性缺血心肌血管新生的作用。　方法　健康雄性Wistar大鼠,采用开胸结扎左冠状动脉前降支法制备急、慢性心肌梗死模型,并随机分为bFGF组和对照组(n =8) ,bFGF组以0 .0 2mL(2 0 μg/kg ,0 .2 5mg/mL)造模时或造模1个月后于结扎处局部注射,对照组以等容积生现盐水处理。注射后1个月观察血流动力学参数、心肌梗死面积和侧支微血管数目的变化。　结果　bFGF组心率、左室舒张末压明显低于对照组(P <0 .0 1)、平均动脉压、左室收缩压、左室最大收缩速率明显高于对照组(P <0 .0 1) ;bFGF组心肌微血管数明显多于对照组(P <0 .0 1) ;急性心肌梗死模型bFGF组心肌梗死面积明显小于对照组(P <0 .0 1) ,慢性心肌梗死模型bFGF组心肌梗死面积与对照组比较差异无显著性(P >0 .0 5 )。　结论　局部应用bFGF能明显促进缺血心肌血管新生,缩小急性心肌梗死面积,改善血流动力学。     

碱性成纤维细胞生长因子的血管新生作用与应用

血管新生不同于血管形成 ,它是通过从已存在血管上发芽而实现的。涉及胚胎形成和个体生长发育等生理过程及伤口愈合、肿瘤发生、发展等病理过程。此现象的机制复杂 ,有许多细胞因子的参与 ,碱性成纤维细胞生长因子 (ｂＦＧＦ)就是其中之一。1　ｂＦＧＦ的生物学特征ｂＦＧＦ由 14 6个氨基酸组成 ,等电点 9 6 ,在体内分布广泛 ,血管内皮细胞 (ＥＣ)、成纤维细胞、平滑肌细胞(ＳＭＣ)、软骨细胞、视网膜上皮细胞等细胞中都可检测到ｂＦＧＦ的表达。ｂＦＧＦｍＲＮＡ的翻译产物无信号肽 ,故其主要通过细胞膜微小破裂或细胞死亡而释放。另外 ,通…     

牛磺酸抑制新生大鼠心肌成纤维细胞胶原合成及其机制的初步研究

目的研究牛磺酸对新生大鼠心肌成纤维细胞增殖、胶原合成及TGF—Bl蛋白表达的影响，初步探讨其抗纤维化的作用和机制。方法在培养的心肌成纤维细胞中加不同浓度的牛磺酸72h，用羟脯氨酸法及MTT比色法分别测胶原量和细胞增殖情况，ELISA法测TGF—β1，蛋白含量。结果牛磺酸能明显抑制心肌成纤维细胞的增殖及胶原的合成，并减少TGF—βl蛋白的表达。结论牛磺酸能通过下调TGF—β1蛋白的表达，抑制心肌成纤维细胞增殖和胶原合成，起到抗心肌纤维化的作用。     

重组人碱性成纤维细胞生长因子促冠状动脉血管新生的实验研究

目的:探讨重组人碱性成纤维细胞生长因子(rhbFGF)促冠状动脉血管新生的效果.方法:无菌条件下开胸结扎兔冠状动脉左前降支(LAD),建立急性心肌梗塞动物模型;将bFGF基因克隆于原核系统表达载体并转染大肠杆菌pBV220-bFGF)/DH5α,经诱导表达后超声破碎,上清液经过CM-Sepharose阳离子交换程序及Heparin-Sepharose亲和程序两步纯化,得到纯度高达99%的rhbFGF,透析出盐、滤菌后备用.将自制的rhbFGF蛋白,直接四点注入兔缺血心肌内,通过病理切片光镜观察、图像分析、电镜及冠脉造影观察缺血心肌内血管新生情况.结果:(1)术后不同时间描记的ECG变化及术后24 h,48 h心肌酶的改变均证实兔急性心肌梗塞(AMI)模型制作成功.(2)结扎LAD后6周(短期)及12周以上(长期),rhbFGF组与生理盐水(NS)对照组病理切片,随机观察10个高倍视野无平滑肌小血管计数分别为6周:41.13±10.04,30.33±3.21,P<0.01;12周以上:50.50±9.20,32.63±7.25,P<0.01;20周:52.44±6.59,32.00±3.06,P<0.01;有平滑肌血管计数分别为6周:16.25±5.23,10.75±4.25,P<0.01;12周以上:16.88±4.87,11.25±5.09,P<0.01;20周:16.25±2.22,11.00±3.35,P<0.01.(3)图像分析计算较大血管(管径≥100 μm)平均管壁厚度,rhbFGF组与NS对照组术后6周分别为:(19.70±9.94)μm,(18.88±9.65)μm,P>0.05;12周以上分别为:(29.87±12.96)μm,(24.13±11.33)μm,P<0.01;20周分别为:(28.48±12.13)μm,(23.25±10.02)μm,P<0.01;平均管壁厚度与管腔大小的比值rhbFGF组与NS对照组6周分别为:0.32±0.18,0.24±0.12,P<0.01;12周以上分别为:0.33±0.14,0.25±0.09,P<0.01.20周分别为:0.32±0.11,0.25±0.16,P<0.01;(4)电镜观察:与NS对照组相比rhbFGF组心肌细胞间可见大量毛细血管生长;(5)结扎LAD6周rhbFGF组冠脉造影可见侧枝血管形成.结论:rhbFGF有急性扩张冠脉及限制心肌梗塞面积的作用,缺血心肌内注射rhbFGF能促进冠状动脉血管新生,其有可能成为一种新的冠心病治疗方法.     

新生大鼠心肌细胞体外培养及其与心肌成纤维细胞形态比较

目的探索一种快速分离和培养新生大鼠心肌细胞的方法,比较心肌细胞和成纤维细胞的形态差异。方法胰蛋白酶消化法分离新生大鼠心肌细胞进行体外培养,差速贴壁法纯化心肌细胞,倒置显微镜跟踪观察心肌细胞的生长及搏动情况,台盼兰负染法检测心肌细胞活力,通过HE染色观察心肌细胞和成纤维细胞的形态学差异。结果接种24 h后细胞全部贴壁,部分细胞开始自发性搏动,48 h后,细胞体积增大,并伸出伪足,形状以三角形和梭形为主,3 d后细胞聚集成片并同步搏动且细胞活力均在90%以上。心肌细胞为梭形或三角形,胞质致密,多为单核细胞;心肌成纤维细胞呈泡状,双核和三核细胞较多,培养过程中不发生搏动。结论胰蛋白酶消化法培养新生大鼠心肌细胞快速有效,差速贴壁法纯化的心肌细胞可用于实验研究。     

心肌注射碱性成纤维细胞生长因子促进犬侧支血管形成的实验研究

目的评价在犬急性心肌梗死模型中,心肌内注射碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对心肌局部血流量及侧支血管形成的影响。方法17条种犬,结扎第一、第二对角支和第一、第二纯缘支造成急性心肌梗死模型。冠状动脉结扎20而n后,治疗组(n=9)在梗死边缘区心机5点注射200陀bFGF,对照组(n=8)以相同的方法注射生理盐水200拌L。在冠状动脉结扎之前、结扎即刻、结扎后3h·7“及““d便用非放射性彩色微粒子测量心肌局部血流量。试验终点观察侧支血管密度变化。结果与对照组相比,治疗组心肌注射200陀bFGF后,梗死区心外膜心肌局部血流量明显增加:冠状动脉结扎3h治疗组心肌血流量为(36.40士20.04)%,对照组为(32.32土3.07)%,P(0.05;7d后治疗组为(56.30土3.49)%,对照组为(35.68士1.62)%,尸<0.01;28d分别为(70.62土3.17)%,(46.20士2.58)%,尸<0.01。与之相似,治疗组梗死边缘区心外膜心肌血流量也明显增加;冠状动脉结扎7d治疗组为(68.06士2.69)%,对照组为(53.94土2.27)%,P(0.01:28d治疗组为(79.74土4.61)%,对照组为(61.84土4.52)%,尸<0.01。与对照组相比,治疗组梗死区血管密度:治疗组为(7.24士1.89)根南卫1挤,对照组为(4.07土1.89)根介阴尹,尸<0.05;梗死边缘区血管密度:治疗组为(14.48士4.69)根南甘矛,对照组为(8.15士3.43)     

血管钠肽抑制低氧诱导的心肌成纤维细胞的增殖和胶原合成

目的　观察血管钠肽 (Vasonatrin peptide,VNP)对低氧状态下大鼠心肌成纤维细胞 (CFs)增殖及胶原合成的影响 ,探讨其防治低氧所致心肌间质结构重建的作用机制 .方法　培养新生大鼠 CFs,应用流式细胞仪分析细胞周期 ,以 3H- proline掺入率反映胶原合成速率 .结果　单纯低氧不改变 CFs的细胞周期 ,但增加低浓度血清 (2 5 m L· L- 1 )作用基础上的细胞增殖指数 PI(S+G2 / M) / (S+G2 / M+G0 / G1 )(P<0 .0 1) ,10 - 6 m ol· L- 1的 VNP抑制低氧诱导的 PI增加(P<0 .0 1) .低氧可以增加基础胶原合成 (增加 19.6 % ,P<0 .0 5 ) ,也增加低浓度血清 (2 5 m L· L- 1 )诱导的胶原合成速率 (增加 37.2 % ,P<0 .0 1) . 10 - 8～ 10 - 6 mol· L- 1 的 VNP浓度依赖性抑制低氧诱导的胶原合成速率 (P<0 .0 1) .结论　低氧增加胶原合成以及血清刺激的 CFs的增殖反应 ,VNP抑制上述作用 ,从而抑制低氧引起的心肌纤维化     

Notch1在TGF-β1诱导心肌成纤维细胞向肌成纤维细胞转化中的作用

目的：研究转化生长因子β1（TGF-β1）诱导心肌成纤维细胞（CFs）向肌成纤维细胞（MFB）转分化过程中Notch1的变化情况,探讨在此转分化过程中Notch1的可能作用.方法：体外分离培养CFs,以10μg/LTGF-β1诱导CFs向MFB转分化.实验分为对照组,TGF-β1作用24,48,72h组,采用消化法测定羟脯氨酸（HYP）含量;免疫荧光、免疫印迹法测定α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达;实时定量PCR、免疫印迹法测定Notch1 mRNA及蛋白表达.利用γ分泌酶抑制剂DAPT（75μmol/L）阻断Notch1受体活化.实验分对照组,DAPT作用24,48,72h组,检测SMA及胶原的表达变化.结果：TGF-β1作用后,与对照组相比较α-SMA,HYP表达量随TGF-β1诱导时间的增加呈上升趋势,而Notch1则呈下降趋势,均以72h最显著（P〈0.01）;加入DAPT后,与对照组相比较α-SMA,HYP表达量随DAPT作用时间增加呈上升趋势,以72h最显著（P〈0.01）.结论：TGF-β1可以诱导CFs向MFB转分化,Notch1在此过程中的表达呈下降趋势,而DAPT阻断Notch1活化后可以促进CFs向MFB转分化.     

新生小鼠皮肤成纤维细胞的分离培养与鉴定

目的：建立一种简单易行的自新生小鼠皮肤分离培养成纤维细胞的方法,并对分离细胞进行鉴定。方法：无菌取新生Balb/c小鼠背部皮肤,剪碎呈1 mm2大小,组织块均匀放置于培养皿并以DMEM（含10%胎牛血清）培养基对组织块进行培养;以胰蛋白酶消化分离细胞-重新贴壁法对分离培养细胞进行纯化;以NIH3T3细胞为对照,免疫荧光、流式细胞术、Western blot检测波形蛋白表达情况以对培养的成纤维细胞进行鉴定。结果：新生小鼠背部皮肤组织培养3 d时可见细胞呈细长梭形或呈多角形,组织培养5 d后可见大量细胞自组织块游离生长,组织培养7 d后可见细胞呈单层漩涡状排列或纵横交错,贴壁细胞团呈放射状生长。免疫荧光、流式细胞术、Western blot检测发现分离细胞和NIH3T3细胞均表达波形蛋白;流式细胞术证实分离的成纤维细胞波形蛋白表达阳性率和平均荧光密度分别为13.33%和9.89,而NIH3T3细胞波形蛋白阳性率和平均荧光密度分别为28.11%和14.16。结论：分离培养的细胞具有成纤维细胞的形态学特征,并表达成纤维细胞的特征分子波形蛋白。以组织块直接培养法成功自新生小鼠皮肤分离培养成纤维细胞,为建立肿瘤体外模拟微环境提供实验材料和研究基础。     

凝固治疗离体实验的研究

目的：研究微波电极凝固实验范围和改善凝固形状的效率。方法：采用微波电极对离体牛心肌进行凝固实验。凝固结束后,代表剖面测量凝固体的长径、宽径及充血带的宽度。标本拍照,利用专门的计算软件对凝固体形状、凝固体积、碳化体积进行评估。结果：微波电极对离体牛心肌的凝固形状呈椭球形。相同作用时间（600s）,凝固体积随着功率的增大而增加,50W-70W之间增加较快,随功率继续增大,形状退化。相同功率（60W）,凝固体积随着时间的延长成非线性增加,420s-720s之间体积增大明显,900s后出现饱和现象;凝固形状随时间的延长更接近球形,功率60W作用时间720s可获得较大的凝固体积和较佳的凝固形状。结论：作用功率和时间对凝固体积和形状有不同的影响。时间420—720s,功率50-70w可高效凝固肌组织,获得较大的凝固范围和较佳的凝固形状。     

EXPERIMENTAL STUDY ON INDUCTION OF OSTEOGENETIC POTENTIAL OF DERMAL FIBROBLASTS

R6sume0bjectiILebutestd,dluciderlerOleinducteurdbstdogdnesejoudparles/ibroblastesdermiques.WthodesLes/ibroblastesetlescellulesdPithdlialesprovenantdeslaPinsetdelapeauhumaineontdteisoldset4tudtdsparlesmdthodeshisto-chimiques,immuno-histo-chimiquesetbiochimiques.RdsuItatsDesnodulesosseuxontdtdtrouvdsdanslesculturesmixtesdefibroblastesetdecellulesdPithdliales.DurantlapdriodeprolofdrativedefOrmationdesnodulesosseux,onconstateaussiplusdecellulesdcolorationkdratiniquepositive(cellulesiPithdliale…     

盐酸异丙嗪体外杀精子作用的实验研究

３０例健康育龄男性精液的体外杀精试验显示：盐酸异丙嗪具有快速强力杀精作用,当药物浓度在１８６ｍｍｏ·Ｌ－１（０６ｍｇ／ｍｌ）以上时,在１０ｓ内死亡;在００７５～１２４ｍｍｏｌ·Ｌ－１（０．２５～０．４ｍｇ／ｍｌ）浓度范围内,其杀精作用随药物浓度增加和作用时间延长而增强。当浓度为０３１ｍｍｏｌ·Ｌ－１（０．１ｍｇ／ｍｌ）作用时间为３０ｍｉｎ时,杀精作用可接近或达到１００％;而浓度为１２ｍｍｏｌ．Ｌ－１（０．４ｍｇ／ｍｌ）时,５ｍｉｎ内即可杀灭全部精子     

白矾及其炮制品枯矾体外抑菌作用研究

目的：探讨白矾及枯矾体外抑菌作用。方法：用杯碟法，1％白矾及枯矾溶液对大肠杆菌、痢疾杆菌、白色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌、炭疽杆菌、甲副伤寒沙门氏菌、伤寒杆菌的抑菌作用进行了研究。结果：白矾及枯矾对以上细菌均有明显的抑菌作用。结论：白矾及枯矾在体外有明显的抑菌作用。     

人类体外受精和胚胎移植中促排卵药物临床应用的初步观察

14例输卵管性不孕症患者,采用克罗米酚—绝经期促性腺激素—绒毛膜促性腺激素诱发排卵,在12例中抽吸卵泡86个,回收卵母细胞53个,卵母细胞回收率61.6％,受精率66％,卵裂率56.6％,此种诱发周期排卵期易于掌握,能回收多个卵母细胞,适用于人类体外受精和胚胎移殖之研究。     

克拉霉素干混悬剂体外抗菌活性的研究

目的：探讨克拉霉素新剂型－－干混悬剂的体外抗菌作用。方法：应用稀释法及临床分离所得的２８５株致病菌对克拉霉素干 阳性对照药红霉素进行外抗菌活性的测定,并考查了细菌接种量,血清浓度和培养基Ｐ至克拉霉素干混悬剂最小抑菌浓度（ＭＩＣ）的影响,同时测出受度药克 霉素干混悬剂的     

体外诱导LAK细胞活性方法及其意义

目的：比较不同诱导方法对LAN细胞杀伤活性的影响。方法：外周血单个核细胞（PBMC）用重组白细胞介素-2（rIL-2）体外诱导LAK细胞，采用3H－TdR释放法测定LAK活性。结果；（1）PBMC诱导3h后，LAK活性高于或至少不低于24～72h者；（2）PBMC诱导3h后洗去游离的rIL-2，并不影响继续诱导LAN细胞活性；（3）PBMC分离后以清洗2次为佳；（4）PBMC用正常人血浆培养比用肝炎病人自体血浆培养诱导的LAK活性高。结论：在本试验系统中，PBMC分离后，清洗2次，以正常人血浆经IL-2诱导3h为最佳回输条件。     

应用改进的GLC法研究扑尔敏控释微丸的体内外相关性

本文改进了扑尔敏血药浓度的气相测定法。选用安定为内标,在异辛烷一次提取全血后用N~(63)电子捕获器检测。结果表明,在0.5～12ng/ml范围内,扑尔敏及安定的色谱峰面积之比(Ac/Ad)与血液中两者浓度之比(Cc Cd)有良好的线性关系(r=0.996),回收率在90％以上(平均偏差4％)。应用此法测定了人口服扑尔敏微丸及速释微丸的血药浓度,并由此计算得出控释微丸的体内吸收百分数(Pi)与体外溶出百分数(Po)间的相关方程式为Po=0.9597Pi 3.3225(r=0.916)     

莪术体外抑制成纤维细胞生长的初步研究

应用体外培养的人发结膜成纤维细胞，观察中药莪术在休外对细胞增殖的影响。结果：１０％莪术液对细胞生长有极显著的抑制作用（Ｐ〈０．０１），而５％莪术液和对照组则对细胞生长无抑制作用（Ｐ〉０．０５），提示莪术可作为抗青光眼滤过性手术的辅助用药，预防成纤维细胞增殖导致的手术失败。     

交感神经节培养的形态学观察

目的：观察交感神经节在体外培养中的生长和形态学特点。方法：无菌，取新生大鼠椎旁交感神经节，用Ｍａｘｉｍｏｗ培养法在相差显微镜下动态观察７天。终止２后，用Ｈｏｌｍｅｓ还原银染色法显示神经纤维。结果：交感神经节在壁后１２－１８ｈ开始生长，２４－４８ｈ由交感神经节长出的纤维长约０．５ｍｍ，７２－９６ｈ可见神经纤维伸长到１－２ｍｍ以上，并呈放射状向四周延伸。Ｈｏｌｍｅｓ还原银染色的标本中可见大量银染的神经