恒磁场对金属离子钴、铬作用下人单核细胞分泌肿瘤坏死因子和细胞凋亡的影响

目的探讨恒磁场对金属离子钴、铬作用下人外周血单核细胞分泌肿瘤坏死因子的影响,并探讨其对细胞凋亡的动态变化与Caspase-3活性的影响。方法将CoCl2粉末与CrCl3粉末溶于无菌注射用水配制成CoCl2溶液和CrCl3溶液,从健康人外周血提取单核细胞,将金属离子Co^2＋、Cr^3＋分别与人单核细胞在不同的磁场强度（10Gs、100Gs、1000Gs）下共培养。实验分8组：Co^2＋、Cr^3＋组（对照组）、Co^2＋、Cr^3＋分别＋不同磁场强度（10Gs、100Gs、1000Gs）组,各组细胞于培养12、24、48小时用ELISA法检测上清液中肿瘤坏死因子（TNF-α）的含量;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡情况,比色法测定Caspase-3酶活性。结果经磁场暴露12h之后,各磁场处理组TNF-α量均低于非磁场处理组（P〈0．05）,并呈现强度时间依赖性。在100Gs和1000Gs磁场处理组,细胞凋亡率显著高于对照组（P〈0．05）,并随着磁场强度的逐渐增大,Caspase-3酶活性逐渐增强。而10Gs磁场组对细胞凋亡及Caspase-3酶活性的改变无明显影响（P〉0．05）。结论一定强度的恒磁场可拮抗金属离子钴、铬刺激人外周血单核细胞分泌TNF-α并且促进其凋亡,为磁场疗法防治假体周围骨溶解提供了理论依据。     

金属离子诱导人单核细胞凋亡并释放肿瘤坏死因子的实验研究

目的 探讨人工关节磨损产物金属离子钴(Co2 )、铬(Cr3 )对人工关节无菌性松动的影响.方法 将金属离子Co2 、Cr3 分别与人单核细胞共培养,分别于12、24、48小时取细胞上清液,用ELISA法检测上清液中肿瘤坏死因子(TNF-α)含量,并测定细胞悬液中细胞凋亡情况.结果 Co2 、Cr3 均能刺激人单核细胞产生TNF-α且TNF-α量随时间上升,一定时间后达到峰值,随后缓慢下降.而随时间发展,人单核细胞凋亡率逐步升高.结论 金属离子Co2 、Cr3 能通过刺激人单核细胞合成和释放肿瘤坏死因子,诱发人单核细胞凋亡从而引起假体周围骨溶解,进而引起假体松动.     

利拉鲁肽对缺氧诱导的心肌细胞凋亡蛋白Caspase-3和Bcl-2表达的影响

目的 检测胰高血糖素样肽-利拉鲁肽对氯化钴(cobalt chloride, CoCl2)诱导缺氧条件下的心肌细胞中凋亡蛋白Caspase-3和Bcl-2表达量的影响.方法 将原代培养的心肌细胞分为6组:空白对照组,CoCl2诱导化学缺氧组,缺氧+不同剂量利拉鲁肽处理组(1、10、100、1000nmol/L利拉鲁肽).结果 缺氧能诱导心肌细胞中凋亡蛋白Bcl-2表达的增高并抑制Caspase-3蛋白的表达(P<0.05);利拉鲁肽能抑制缺氧诱导的心肌细胞中凋亡蛋白Caspase-3的表达并增加Bcl-2的表达,且利拉鲁肽对凋亡蛋白的影响具有剂量依赖性.结论 利拉鲁肽抑制缺氧诱导的心肌细胞中凋亡蛋白Caspase-3的表达,并促进凋亡蛋白Bcl-2的表达.     

恒磁场对内皮细胞凋亡、黏附分子表达及其与单核细胞黏附率的影响

目的： 初步观察恒磁场对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用下人脐静脉内皮细胞(HUVEC) 凋亡、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和血管细胞粘附分子-1（VCAM-1）的分泌与表达及HUVEC与人单核细胞株THP-1黏附率的影响。方法： 采用体外培养第3代的HUVEC，实验分为6组：对照组、AngⅡ（10^-6 mol/L）组及AngⅡ+不同磁感应强度（1 Gs、5 Gs、10 Gs、20 Gs）的恒磁场组。各组细胞于单纯培养或磁场作用24 h后收集样品，用末端脱氧核糖核酸酶介导的dUTP末端标记法 (TUNEL)和流式细胞仪碘化丙锭染色法检测细胞凋亡，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测培养液中ICAM-1、VCAM-1的含量，免疫细胞化学检测ICAM-1、VCAM-1的蛋白表达，计数法观察HUVEC与THP-1的黏附率。 结果： AngⅡ10-6 mol/L可诱导HUVEC凋亡（P<0.05 vs 对照组），而1 Gs、5 Gs、10 Gs和20 Gs恒磁场组细胞凋亡率显著低于AngⅡ组（P<0.05）。AngⅡ(10^-6 mol/L)组HUVEC的ICAM-1和VCAM-1含量和表达量显著高于对照组（P<0.05），而1 Gs、5 Gs、10 Gs和20 Gs恒磁场组细胞ICAM-1的含量和表达量显著低于AngⅡ组（P<0.05）。AngⅡ (10^-6 mol/L)组HUVEC与THP-1的黏附率显著高于对照组（P<0.05），而1 Gs、5 Gs、10 Gs和20 Gs恒磁场组HUVEC与THP-1的黏附率显著低于AngⅡ组（P<0.05）。 结论： 恒磁场可拮抗AngⅡ的作用，抑制HUVEC凋亡、HUVEC的ICAM-1和VCAM-1分泌与表达及HUVEC与单核细胞的黏附率。     

静磁场作用下金属离子对成骨细胞的毒性

背景：体内体外实验研究证明,静磁场具有促进成骨细胞分化及骨形成的作用。 目的：观察静磁场作用下金属离子对成骨细胞毒性的影响。 方法：将CoCl₂粉末与CrCl₃粉末溶于无菌注射用水配制成CoCl₂溶液和CrCl₃溶液,将金属离子Co²⁺、Cr³⁺分别与小鼠颅骨成骨细胞(MC3T3-E1)在不同的磁场强度(1,10,100 mT)下共培养。实验分4组：设Co²⁺+Cr³⁺组(对照组)和Co²⁺+Cr³⁺组分别+1,10,100 mT组。 结果与结论：恒磁场作用下的成骨细胞呈现更加成熟的形态学特征,Co²⁺、Cr³⁺金属离子对成骨细胞MC3T3的毒性明显降低;同时G2M(分裂期)分布比例明显增加,细胞停滞在G0G1(休眠期)的比率明显减少;与对照组相比,不同场强磁场加载后,成骨细胞碱性磷酸酶活性明显增强(P < 0.05)。提示一定强度的静磁场可拮抗Co²⁺、Cr³⁺金属离子对成骨细胞的毒性作用。     

交变磁场作用下磁性Fe3O4纳米粒子诱导肝癌细胞凋亡机制

目的:观察磁性四氧化三铁纳米粒子(Fe3O4)在交变磁场(EMF)作用下对肝癌细胞凋亡相关因子的影响。方法:培养大鼠肝癌CBRH-7919细胞,分为正常对照组、交变磁场照射组、100μg/m L Fe3O4纳米粒子组、交变磁场+100μg/m L纳米Fe3O4组。酶生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;Western Blot检测Bax、Bcl-2表达及细胞色素C从线粒体至胞浆的释放;荧光酶标仪测定Caspase-3活性。结果:交变磁场协同磁性Fe3O4纳米粒子作用于CBRH-7919细胞能使Bax表达上调,而凋亡抑制基因Bcl-2表达下调,促进细胞色素C从线粒体释放至胞浆,增加Caspase-3活性。交变磁场、磁性Fe3O4纳米粒子单独作用组对结果无影响。结论:在交变磁场作用下,Fe3O4纳米粒子诱导CBRH-7919细胞凋亡的机制与Bax表达增加、Bcl-2表达减少、细胞色素C的释放及Caspase-3活性增加有关。     

金属离子对单核/巨噬细胞细胞活性及其膜上RANK表达的影响

背景:与其他配伍的假体一样,金属-金属假体在使用过程中也会产生大量的磨损颗粒和金属离子,其中金属离子以钴和铬离子较为常见,可导致假体周围骨溶解,引起假体无菌性松动。目的:观察Co2+、Cr3+离子对体外培养小鼠单核/巨噬细胞(RAW264.7)的细胞活性及其膜上RANK表达的影响。方法:体外培养单核/巨噬细胞(RAW264.7),采用金属钴铬离子对单核/巨噬细胞进行干预,不同时间点用四唑盐比色方法检测细胞活性并以半定量反转录-聚合酶链反应方法测定RANKmRNA的表达量。结果与结论:四唑盐比色实验结果显示,与对照组相比,Co2+、Cr3+可使单核/巨噬细胞的细胞活性明显下降。单核/巨噬细胞暴露在钴铬离子下,与对照组相比,钴铬离子组单核/巨噬细胞RANKmRNA在12h表达增强(P0.05),24h达到高峰(P0.05),48h较24h表达下降(P0.05)。结果提示,金属离子对单核/巨噬细胞有细胞毒性,且能够刺激单核/巨噬细胞RANKmRNA的表达,为单核/巨噬细胞向具有骨质吸收功能的破骨样细胞转化提供必要的前提条件。     

大鼠骨髓间充质干细胞来源HGF对肝星状细胞DR5及Caspase-8表达的影响*

 目的:观察大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源的肝细胞生长因子（HGF）对原代肝星状细胞(HSCs)死亡受体-5(DR5)及Caspase-8的影响,初步探讨BMSCs来源HGF在促进HSCs凋亡中的部分作用机制。方法:贴壁法培养及纯化SD大鼠BMSCs,使用第3-4代细胞进行实验;复苏大鼠原代HSCs及传代,应用6孔培养板,每孔使用(Transwell insert)半透膜建立双层细胞共培养体系,常规培养24h、48h、72h。实验分为4组:A组:空白对照组; B组:BMSCs+HSCs共培养组; C组: TNF-a预处理组及D组:HGF-ShRNA干扰组。酶联免疫吸附法（Elisa）检测各组上清液中HGF及TRAIL的浓度;用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;分别使用荧光定量PCR(FQ-PCR)、Western blot检测各组HSCs内DR5、Caspase-8mRNA和蛋白的表达。结果：1. Elisa法检测结果示:TNF-a预处理组的HGF浓度明显高于BMSCs组及空白对照组（P<0.01）;BMSCs组中TRAIL的浓度明显高于空白对照组及TNF-a预处理组（P<0.01）;2. Annexin-V-FITC/PI双染法检测凋亡结果示：TNF-a预处理组HSCs的凋亡率明显高于其它3组（P<0.01）且呈时间依赖性;HGF-ShRNA干扰组中HSCs的凋亡率低于共培养组,较空白对照组高二者比较有统计学意义（P<0.05）。3. FQ-PCR、Western blotting结果示共培养组及TNF-a预处理组HSCs的DR5、Caspase-8mRNA及蛋白表达量明显高于空白对照组及HGF-ShRNA干扰组（P<0.01）。 结论： BMSCs与HSCs共培养后促进HSCs的凋亡,其可能与BMSCs来源HGF能上调HSCs的DR5及Caspase-8的表达有关。     

丹参酮ⅡA对Adriam诱导的人肾小球系膜细胞凋亡的保护作用

目的探究丹参酮ⅡA (TSⅡA)对阿霉素(Adriam)诱导的肾小球系膜细胞HMCL凋亡的作用。方法用不同浓度的TSⅡA处理HMCL细胞,确定安全用药范围;将细胞随机分为HMCL组、Adriamycin组、Adriam+TSⅡA(5μM)组、Adriam+TSⅡA(10μM)组和Adriam+TSⅡA(20μM)组。除HMCL组外,其余组均用Adriamycin处理细胞,Adriam+TSⅡA(5,10,20μM)组同时加入5、10、20μM的TSⅡA处理细胞,用CCK8法检测细胞增殖,流式和Hoechst染色检测细胞凋亡,Western blot检测Caspase-3和Caspase-9的表达。结果与HMCL组比较,Adriamycin组细胞增殖速度明显降低;与Adriamycin组比较,Adriam+TSⅡA (5,10,20μM)组细胞增殖速度明显升高;同时,Adriamycin组细胞凋亡率与HMCL组比较明显升高,Adriam+TSⅡA (5,10,20μM)组细胞凋亡率明显低于Adriamycin组;此外,Adriam能显著促进HMCL细胞Caspase-3和Caspase-9表达,TSⅡA能显著减弱Adriam促进Caspase-3和Caspase-9表达的作用。结论 TSⅡA能通过抑制凋亡相关蛋白的表达抑制Adriam诱导的肾小管系膜细胞凋亡。     

60Co照射法饲养细胞的制备

目的 :选择合适的60 钴 (60 Co)照射剂量制备饲养细胞。方法 :采用 0Gy、2Gy、5Gy、1 0Gy、2 0Gy、30Gy的60钴 (60 Co)照射人的外周血单个核细胞 (PBMC) ,然后将其继续培养 ,加入CD3 单克隆抗体 (OKT3 )、白细胞介素 - 2(IL - 2 )、植物血球凝集素 (PHA)等 ,观察照射后第 1天、第 7天及第 1 5天细胞的凋亡情况及活细胞的细胞周期分布情况。结果 :γ射线照射剂量的加大会导致PBMC增殖能力的下降、存活细胞 (Annexin -V-/PI-)的减少、凋亡 (Annexin -V /PT-)与死亡 (Annexin -V /PT )的细胞数增加。结论 :采用60 Co照射法制备饲养细胞时 ,1 0Gy的照射剂量可能是最佳照射剂量