姜黄素影响Caspase 8和Caspase 9诱导淋巴瘤Raji细胞凋亡的研究

姜黄素（curcumin）是中药姜黄的主要成分，能选择性地抑制肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡，本研究旨在探讨姜黄素抗癌作用的分子机制。选择淋巴瘤细胞系Raji为研究对象，用正常健康人静脉血作为对照，应用淋巴细胞分层法分离获得外周血单个核细胞（PBMNC）并进行培养。用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测姜黄素不同浓度、不同时间作用于Rajj细胞、PBMNC后细胞的抑制率，并进行比较。用Western blot检测25μmol／L（IC50）姜黄素作用24小时Raji细胞胱冬蛋白酶Caspase 8和9的表达。结果表明：姜黄素可呈时间及剂量依赖性抑制Raji细胞增殖，可显著促进Raji细胞凋亡（P〈0．01），且呈浓度依赖性及时间选择性；一定浓度范围内的姜黄素对PBMNC无显著抑制作用，提示姜黄素抑制增殖具有选择性作用。Raji细胞胱冬蛋白酶8和9的表达明显增高（P〈0．05）。结论：胱冬蛋白酶8和9在Raji细胞增殖和凋亡中起重要的作用，姜黄素在不同浓度、不同时间条件下抑制Raji细胞增殖并促进其凋亡．     

蛋白酶体抑制剂MG132对姜黄素诱导K562和Raji细胞HDAC1、P300表达的研究

近年来的研究显示泛素-蛋白酶体通路在细胞组蛋白乙酰化、去乙酰化的调控中发挥了重要的作用.有研究报道姜黄素可抑制肿瘤细胞增殖,影响细胞周期,姜黄素可通过调节组蛋白乙酰化、去乙酰化而发挥其作用.我们通过探讨姜黄素和蛋白酶抑制剂MG132联含姜黄素作用K562细胞、Raji细胞对组蛋白乙酰化酶（HDAC1）、P300蛋白的影响进一步明确了姜黄素发挥作用是否是通过泛素-蛋白酶体通路.     

姜黄素调节NB4细胞P53和组蛋白H3乙酰化抑制细胞增殖的研究

目的 研究姜黄素对NB4细胞组蛋白H3和非组蛋白P53的乙酰化和细胞增殖的作用，探讨姜黄素抗白血病机制。方法 应用小同浓度（50，25，12．5，6．25，3．125μmol／L）的姜黄素作用NB4细胞不同时间（0，4，8，12，24h），MTT法测定姜黄素对NB4细胞增殖的影响，Western blot法检测乙酰化组蛋白H3和乙酰化P53的水平。结果 姜黄素以时间和剂量依赖方式抑制NB4细胞增殖，在24h和36h的IC值分别为40μmol／L和25μmol／L；能明显上调组蛋白H3的乙酰化水平，促进P53的表达和P53的乙酰化。结论 姜黄素具有去乙酰化酶抑制剂作用，能上调组蛋白H3乙酰化水平，促进肿瘤抑制凶子P53表达和活化，抑制白血病细胞增殖。     

丙戊酸钠抑制人多发性骨髓瘤U266细胞增殖及组蛋白乙酰化调控的研究

本研究探讨丙戊酸钠（valproic acid sodium,VPA）对U266细胞增殖的抑制作用及对组蛋白乙酰化修饰调控的影响。采用CCK-8法检测VPA对U266细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测VPA作用前后U266细胞周期的变化,半定量RT—PCR检测VPA作用后U266细胞中组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）mRNA的表达变化,Western blot方法检测VPA作用后HDAC1及组蛋白H3、H4乙酰化蛋白水平的变化。结果表明,VPA对U266细胞增殖的抑制作用呈时间一浓度依赖性;2．5mmol／L的VPA处理细胞48小时后,细胞周期检测显示G0／G1期细胞比例增高,S期细胞比例下降,细胞被阻滞在G0／G1期（P〈0．05）;RT—PCR证实VPA能够抑制HDAC1mRNA的表达水平;Western blot方法证实不同浓度VPA作用细胞48小时后HDAC1蛋白水平降低,组蛋白H3、H4乙酰化表达水平提高。结论：VPA能够抑制U266细胞增殖,使细胞阻滞于G0／G1期,这可能与VPA抑制HDAC1表达,上调组蛋白H3、H4乙酰化水平有关。     

RNA干扰HDAC1提高人宫颈癌HeLa细胞化疗敏感性研究

目的探讨体外应用RNA干扰技术抑制组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)表达,提高人宫颈癌HeLa细胞对顺铂敏感性的作用及机制。方法体外合成针对HDAC1的小干扰RNA(siRNA),脂质体法转染HeLa细胞,将其分为正常对照组(无干预措施)、阴性对照组(转染阴性对照siRNA)及siRNA干扰组(转染HDAC1基因siRNA)。采用Western blot法检测各组细胞HDAC1蛋白和乙酰化组蛋白H4(Ac-H4)的表达,采用聚合酶链反应(PCR)法检测HDAC1基因和NF-κB基因mRNA表达。HeLa细胞经不同浓度顺铂作用后,采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测对顺铂的敏感性,以及采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果与正常对照组及阴性对照组比较,siRNA干扰组HeLa细胞HDAC1基因mRNA和蛋白表达均降低(P0.05或P0.01),细胞内Ac-H4表达增加(P0.05),同时NF-κB基因mRNA表达降低(P0.05)。经不同浓度顺铂作用后,与正常对照组及阴性对照组比较,siRNA干扰组HeLa细胞对顺铂的50%抑制浓度降低(P0.05或P=0.01),细胞凋亡率增加(P0.01)。结论 HDAC1基因siRNA能够提高宫颈癌HeLa细胞对顺铂的敏感性,增加组蛋白乙酰化水平、抑制HDAC1基因及NF-κB基因表达可能是其作用机制。     

姜黄素对人多发性骨髓瘤细胞表达Survivin、Bcl-2、Bax的影响

为探讨姜黄素对人多发性骨髓瘤细胞RPMI8226的抑制生长和诱导凋亡的作用机制,应用MTT法检测姜黄素对肿瘤细胞的杀伤效应;用流式细胞术（FCM）分析姜黄素作用后肿瘤细胞凋亡及细胞周期的变化;用RT-PCR方法检测Survivin、Bcl-2、Bax mRNA水平的变化。结果表明：姜黄素明显抑制RPMI8226细胞的增殖,并表现为时间、剂量依赖性,24、48小时IC50值分别为12.15μmol/L、4.9μmol/L;凋亡率由10.6%增加到36.9%（p〈0.05）,细胞发生G2/M期阻滞;RPMI8226细胞细胞强表达Survivin、Bcl-2,弱表达Bax。RPMI8226细胞经10μmol/L姜黄素处理24小时后,survivin、Bcl-2 mRNA表达下调,而Bax表达上调。结论：姜黄素抑制多发性骨髓瘤细胞RPMI8226增殖,并诱导凋亡。姜黄素的抗瘤机制可能与凋亡相关蛋白survivin、bcl-2、bax在转录水平的调节有关。     

姜黄素对人急性髓系白血病细胞株K562增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的：探讨姜黄素对人急性髓系白血病细胞株K562增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法：取对数生长期人急性髓系白血病K562细胞,用MTT法测定细胞增殖抑制情况,流式细胞术检测细胞周期,Annexin V-FITC检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR法和Western blot分别检测Bax、BCL-2和Caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果：姜黄素10、20和40μmol/L组培养24 h和48 h细胞增殖抑制率均高于对照组（姜黄素0μmol/L）,且细胞增殖抑制率呈浓度-时间依赖性（r=0.879,r=0.914）。姜黄素10、20和40μmol/L组G0/G1细胞比例和细胞凋亡率均高于对照组,且呈药物浓度依赖性（r=0.856,r=0.782）。姜黄素10、20和40μmol/L组Bax和Caspase-3 mRNA表达高于对照组,而BCL-2 mRNA表达低于对照组,且呈药物浓度依赖性（r=0.861,r=0.748,r=-0.817）。姜黄素10、20和40μmol/L组Bax蛋白表达灰度值高于对照组,而BCL-2和Caspase-3蛋白表达灰度值低于对照组,且呈药物浓度依赖...     

RNA 干扰 HDAC1对人宫颈癌SiHa细胞迁移及侵袭影响

目的 观察应用RNA干扰技术沉默组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）对人宫颈癌SiHa细胞迁移和侵袭的影响,并探讨其可能机制。方法 体外合成针对HDAC1的小干扰RNA（siRNA）,采用脂质体法转染人宫颈癌SiHa细胞。采用Western blot法检测细胞HDAC1蛋白和乙酰化组蛋白H4的表达,荧光定量PCR方法检测HDAC1、核因子-κB （NF-κB）和尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）基因mRNA表达,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果 经转染HDAC1基因siRNA后,宫颈癌SiHa细胞HDAC1 mRNA和蛋白表达降低,NF-κB和uPA基因mRNA表达也降低,细胞内组蛋白H4乙酰化水平增加。SiHa细胞迁移速度降低,穿过Transwell滤膜的细胞数量减少。结论 HDAC1基因siRNA能够通过抑制宫颈癌SiHa细胞HDAC1基因表达,抑制人宫颈癌SiHa细胞迁移和侵袭能力。提高组蛋白乙酰化水平,下调NF-κB和uPA基因表达可能是其作用机制。     

脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠体外诱导Kasumi-1细胞分化和凋亡作用

目的 探讨组蛋白脱乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠(PB)体外阻断AML1-ETO的生物学功能，消除AML1-ETO的转录抑制，诱导Kasumi-1细胞生长抑制、分化和凋亡作用。方法 应用MTT比色法观察PB对细胞的生长抑制作用，普通光学显微镜和透射电镜观察细胞形态和结构改变，流式细胞术分析细胞周期和检测髓系分化抗原的表达，Annexin V标记、DNA凝胶电泳和流式细胞术分析细胞凋亡。结果 ①PB明显抑制Kasumi—1细胞的生长，半数抑制浓度(IC50)约为2．3mmol/L；②经PB作用后细胞阻滞于G0／G1期，伴有S期细胞减少；③PB可诱导Kasumi—1细胞髓系分化抗原CD11b和CD13表达增加，并呈剂量和时间依赖性；④PB诱导Kasumi-1细胞凋亡，呈时间剂量依赖性，PB3mmol/L培养2d早期凋亡细胞增加，培养3d晚期凋亡细胞增加，培养5d出现明显DNA梯形条带；⑤处理后的细胞出现单核细胞样分化和凋亡细胞形态改变。结论 脱乙酰化酶抑制剂PB抑制Kasumi—1细胞生长，使细胞阻滞于G0／Gl期；诱导细胞部分分化和凋亡。     

组蛋白去乙酰化酶1对肝癌细胞增殖凋亡的影响

目的探讨组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)对肝癌细胞增殖凋亡的影响。方法肝癌细胞SNU-449转染HDAC1小干扰RNA(HDAC1 siRNA)和小干扰RNA阴性对照(siRNA control),同时设置不转染的细胞为对照。采用RT-PCR检测细胞中HDAC1mRNA的表达水平,Western blot检测细胞中HDAC1、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果肝癌细胞转染siRNA control后,细胞存活率、凋亡率及细胞中HDAC1、Cleaved Caspase-3、STAT3、p-STAT3表达水平与对照细胞相比无显著差异(P0.05)。肝癌细胞转染HDAC1 siRNA后,细胞中HDAC1mRNA和蛋白表达水平与对照细胞相比均受到抑制,并且细胞存活率只有(63.74±8.37)%,而细胞凋亡率升高为(32.84±6.92)%,细胞中Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,p-STAT3蛋白水平降低。结论干扰HDAC1表达能够促进肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞增殖,作用机制可能与STAT3信号通有关。     

体外Rituximab增敏吉西他滨/长春瑞宾细胞毒作用的实验研究

本研究探讨抗CD20单抗利妥昔(Rituximab,RTX)对Gemcitabine和Navelbine的化疗增敏作用及其可能的作用机制。体外培养Daudi、Ramos、Namalwa和Raji细胞,采用XTT法测定细胞增殖抑制率,计算出各自的IC50;比较Gemcitabine或Navelbine单药及Gemcitabine或Navelbine分别与RTX两药协同作用的IC50;用Western blot测定Daudi、Ramos、Raji和Namlwa细胞经RTX20μg/ml作用24小时后抗凋亡蛋白BCL-2的表达情况。结果表明:单药抗CD20单克隆抗体对4株细胞无明显诱导凋亡作用,抑制率在3%-10%之间波动。RTX可使Gemcitabine或Navelbine对Daudi、Namalwa和Raji细胞株的细胞毒作用有明显增强;在Namalwa和Raji细胞株经RTX作用24小时后,BCL-2蛋白表达下调。结论:RTX对新一代细胞毒药物Gemcitabine或Navelbine有明显的细胞毒增敏作用。Namalwa和Raji细胞株经RTX作用24小时后BCL-2表达下调,这可能是RTX增敏细胞毒药物的机制之一。     

热休克蛋白90抑制剂诱导Kasumi-1细胞凋亡和分化的机制探讨

目的探讨热休克蛋白90（HSP 90）抑制剂17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素（17AAG）诱导白血病细胞生长抑制、分化和凋亡作用.方法应用MTT比色法观察17AAG对白血病细胞系Kasumi-1细胞的生长抑制作用,用流式细胞术分析细胞周期和分化抗原的表达,用Annexin V标记、DNA凝胶电泳和流式细胞术分析细胞凋亡,Western blot检测干细胞因子受体（KIT）蛋白水平,RT-PCR测定c-kit mRNA水平.结果17AAG明显抑制Kasumi-l细胞的生长,半数抑制浓度（IC50）为0.62 μmol/L;17AAG诱导Kasumi-1细胞凋亡呈时间、剂量依赖性,17AAG处理24 h早期凋亡细胞增加,48 h晚期凋亡细胞增加,早期凋亡细胞减少.17AAG可诱导Kasumi-1细胞髓系分化抗原CD11b及CD15表达增加,并呈剂量和时间依赖性.经17AAG作用后细胞阻滞于G0/G1期,伴有S期细胞减少.Western blot检测发现17AAG可降低KIT水平,处理2 h开始减少,处理20 h后KIT基本消失,但c-kit mRNA水平并未受影响.结论HSP 90抑制剂17AAG通过降解KIT蛋白抑制Kasumi-1细胞生长,使细胞阻滞于G0/G1期,诱导其发生凋亡及部分分化.     

大黄素衍生物对伯基特淋巴瘤细胞株周期、凋亡、NF-κB通路的作用研究

目的:探讨新型大黄素衍生物YX-18对伯基特淋巴瘤(BL)细胞的作用和机制。方法:不同浓度YX-18分别作用BL细胞株CA46和Raji细胞,MTT法检测YX-18对BL细胞株CA46和Raji增殖的影响,Annexin V-PE/7-AAD双染法检测YX-18对CA46和Raji细胞凋亡的影响,PI/RNase染色法检测YX-18对CA46和Raji细胞周期的影响,JC-1法检测YX-18作用后细胞线粒体膜电位的变化及DAPI染色检测细胞凋亡形态,Western blot检测YX-18对NF-κB通路蛋白(P65、P-P65、IκB、P-IκB)在胞浆和胞细胞核中的分布变化,细胞周期相关蛋白P21、CDK2、P-CDK2、Cycling D1、Cycling E1以及凋亡、增殖相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、C-MYC、BCL-2的表达变化,实时荧光定量PCR技术检测YX-18对CA46、Raji细胞的C-MYC、Ki-67的m RNA和Raji(EBV⁺)细胞EBV的EBEA-1、EBER的m RNA表达的影响。结果:大黄素衍生物YX-18能有效抑制BL细胞株CA46和Raji的增殖并呈时间依赖效应(24,48和72 h分别r_CA46=0.89、0.75和0.75,r_Raji=0.87、0.73和0.64)。作用两种细胞24 h的IC50分别为1.77±0.04和1.97±0.22μmol/L。YX-182.0、4.0μmol/L分别作用两种细胞24 h均出现明显凋亡,与药物浓度呈正相关(r_CA46=0.99,r_Raji=0.92),且两种细胞Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9不同程度被活化。YX-181.0、2.0μmol/L作用CA46细胞24 h及0.5、1μmol/L作用Raji细胞24 h后,两种细胞均明显阻滞在G0/G1期(P<0.01);经过不同浓度YX-18处理两种细胞的周期相关蛋白Cyclin D1、Cyclin E1、CDK2、P-CDK2表达水平均下降,p21^Waf1/Cip1与对照组相比,表达水平上升。以YX-182.0、4.0μmol/L分别作用两种细胞24 h后,线粒体膜电位下降(r_CA46=-0.96,r_Raji=-0.99);且DAPI染色可见经YX-18处理后的CA46细胞核固缩、裂解。YX-181.0、2.0、4.0μmol/L分别作用两种细胞24 h后,随着该药物作用浓度的增高,2株细胞内胞浆和胞核P65均明显降低,细胞内IκB升高,P-IκB、P-P65均明显降低,肿瘤增殖蛋白C-MYC、BCL-2表达水平明显降低。YX-181.0、2.0、4.0μmol/L分别作用两种细胞24 h,细胞内C-MYC、Ki-67基因m RNA表达水平均明显降低,Raji(EBV⁺)细胞EBNA-1基因m RNA表达水平也明显降低。结论:新型大黄素衍生物YX-18可以显著抑制BL细胞的增殖,同时诱导细胞凋亡并引起细胞周期阻滞。YX-18的作用可能与影响Caspase-分子和C-MYC、Ki-67等增殖凋亡相关分子,抑制NF-κB通路等有关。     

c-myc在大黄素抑制HL-60细胞增殖及诱导凋亡中的作用

目的研究中药大黄素(emodin)对人髓系白血病细胞株HL-60细胞的影响及探讨c—myc基因在其中的作用。方法应用MTT法绘制细胞生长曲线；细胞集落培养观察大黄素对HL-60细胞增殖的影响；DNA倍体分析、线粒体细胞凋亡检测法、末端缺失原位标记(TUNEL)法及DNA凝胶电泳分析细胞凋亡；RT—PCR及Western blot检测大黄素作用前后c—myc基因mRNA及蛋白表达水平的变化。结果大黄素能明显抑制HL-60细胞增殖，半数抑制浓度(IC50)约为20μmol／L；DNA片段化、亚G1峰(凋亡峰)的检出及线粒体细胞凋亡检测等证实大黄素能有效诱导HL-60细胞凋亡，细胞凋亡率与药物作用浓度呈正相关。大黄素与HL-60细胞作用后c—myc基因mRNA及蛋白的表达水平与作用时间呈负相关。结论大黄素能有效抑制HL-60细胞增殖，诱导其凋亡；c—myc基因可能参与了大黄素抑制HL-60细胞增殖和诱导凋亡的过程。     

As2O3抑制人淋巴瘤Raji细胞增殖及VEGF表达

本研究探讨在As2O3作用下人淋巴瘤Raji细胞的增殖及VEGF mRNA表达的变化.采用改良MTT方法观察As2O3对Raji细胞的增殖抑制效应;采用半定量RT-PCR方法检测As2O3对Raji细胞VEGF121和VEGF165 mRNA表达的影响.结果表明As2O3对Raji细胞的作用表现时间、剂量依赖性的增殖抑制效应,建立回归方程为IR＝0.531dose+0.481time(P＜0.05).半定量RT-PCR方法检测显示,Raji细胞同时表达VEGF121和VEGF165两种剪切变异体,二者的表达水平相当(VEGF1211.17±0.14;VEGF1651.31±0.19,P＞0.05).VEGF121和VEGF165 mRNA表达量与As2O3作用时间呈负相关关系(rsv121=-0.547,P＜0.05;rsv165=-0.632,P＜0.05),且VEGF的各异构体对药物的反应具有差异性,VEGF165 mRNA表达下调早且有持续性.但在所选浓度组中未发现类似的相关关系(P＞0.05).结论As2O3既可抑制Raji细胞生长增殖,亦可通过下调VEGF mRNA表达而产生抗血管新生效应,且小剂量、长时程给药时结果亦然.     

survivin反义寡核苷酸诱导淋巴瘤细胞凋亡及对化疗药的增敏作用

目的　观察survivin反义寡核苷酸 (ASODN)对淋巴瘤细胞的增殖、凋亡及对化疗药物敏感性的影响。方法　人工合成survivin硫代ASODN ,通过脂质体转染淋巴瘤细胞株Raji后 ,用MTT法检测细胞毒作用 ;用荧光染色、流式细胞术检测细胞凋亡 ;RT PCR、Westernblot检测survivinmRNA及蛋白的表达。结果　①survivinASODN抑制Raji细胞增殖呈时间和剂量依赖性 ;②survivinASODN处理组Raji细胞凋亡率为 33.0 % ,正义寡核苷酸 (SODN)组为 11.5 % ,两组相比 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;③survivinASODN处理组Raji细胞survivin蛋白及mRNA的表达水平显著下降 ;④survivinASODN和Vm2 6联合处理组Raji细胞增殖受抑率为 5 6 .5 % ,显著高于单用survivinASODN组的 2 9.2 % (P <0 0 5 )和单用Vm2 6处理组的 2 6 .9% (P <0 .0 5 )。结论　survivinASODN能够抑制Raji细胞增殖、诱导凋亡 ,并能增加Raji细胞对化疗药物的敏感性 ,推测可能通过下调survivinmRNA及蛋白表达而起作用。