粉尘螨滴剂舌下特异性免疫治疗对调节性T淋巴细胞水平的影响

目的:探讨粉尘螨滴剂舌下特异性免疫治疗(SLIT)对调节性T淋巴细胞水平的影响和意义。方法:选择粉尘螨滴剂舌下特异性免疫治疗满1年的轻度支气管哮喘患儿30例作为实验组(SLIT组),同时选择未经SLIT治疗的对粉尘螨过敏的轻度支气管哮喘患儿30例作为对照组(非SLIT组)。分离所有入选患儿的外周血淋巴细胞(PBMC),给予粉尘螨浸出液刺激后检测CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞百分比和可分泌IL-10的CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞百分比的变化。结果:①SLIT组和非SLIT组患儿调节性T淋巴细胞的数量无统计学差异;②SLIT组患儿调节性T淋巴细胞的功能显著高于非SLIT组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:舌下特异性免疫治疗有可能通过上调诱导性调节性T淋巴细胞的功能来诱导免疫耐受;诱导性调节性T淋巴细胞在舌下特异性免疫治疗中可能发挥着重要作用。     

CD4+CD25+Foxp3+细胞在哮喘大鼠发病的作用

目的观察在哮喘大鼠中CD4+CD25+调节性T细胞Foxp3表达的变化,分析支气管哮喘的发病机制,并为临床的治疗提供新方向。方法随机将16只雄性的Wistar大鼠分为正常对照组和哮喘组,每组各8只。哮喘组:用卵白蛋白(OVA)使大鼠致敏,并予以雾化吸入刺激;正常对照组:等量生理盐水处理。最后一次激发后,采用HE染色评价大鼠肺组织病理形态学改变;免疫组化染色分析Foxp3表达量;ELISA法测定肺泡灌洗液(BALF)IL-4及IFN-γ水平。结果哮喘组BALF中细胞因子IL-4明显高于盐水对照组,IFN-γ含量也升高,但IFN-γ/IL-4水平下降,即IFN-γ相对不足;哮喘组肺组织内Foxp3明显增高,说明体内CD4+CD25+调节性T细胞在哮喘发作时出现异常分布的现象。结论 CD4、CD25和Foxp3+三者共同调节性T细胞,与支气管哮喘的发病机制密切相关,并打破Th1/Th2原有的平衡机制。     

益气固本胶囊对哮喘小鼠CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞数量及IL-33、TNF-α表达水平的影响

目的观察不同剂量益气固本胶囊对哮喘小鼠CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞数量及白细胞介素-33 (IL-33)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平的影响。方法将32只雄性SPF级Balb/c小鼠随机分成正常对照组、模型组、益气固本胶囊低剂量组和益气固本胶囊高剂量组,每组8只。除正常对照组外将其他组中小鼠应用卵白蛋白和氢氧化铝混合液腹腔致敏和激发复制哮喘模型,于第21天开始,在每次激发前1 h分别对正常对照组和模型组小鼠给予生理盐水灌胃,用药各组小鼠给予药物灌胃,连续10 d。应用ELISA双抗体夹心法测定血清中IL-33、TNF-α水平,流式细胞仪检测脾淋巴细胞中CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg/CD4+T比例。结果模型组小鼠血清中IL-33水平较正常对照组水平低(P0. 05),而血清中TNF-α水平较正常对照组明显增高(P0. 01)。益气固本胶囊低剂量组和高剂量组血清中的IL-33水平高于模型组(P0. 05),血清中的TNF-α水平低于模型组(P0. 05)。模型组脾淋巴细胞中的CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg/CD4+T细胞比例与正常组比较明显减少,而益气固本胶囊高剂量组明显高于模型组(P0. 05)。结论 CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg参与哮喘的发病过程,益气固本胶囊可能通过上调CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞数量及降低TNF-α水平及升高IL-33水平,调节免疫失衡,减轻哮喘炎症。     

非酒精性脂肪性肝病患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞的变化及意义

目的观察非酒精性脂肪性肝病患者外周血单个核细胞(PBMC)CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的变化及与胰岛素抵抗的关系,初步探讨其意义。方法 46例非酒精性脂肪性肝病患者根据体质指数分为肥胖组(21例)及非肥胖组(25例),42名健康医务工作者作为健康对照。检测空腹胰岛素及空腹血糖水平,计算胰岛素抵抗指数;采用流式细胞术检测患者外周血PBMC CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数目,并计算CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞占CD4+T淋巴细胞的百分比;分析CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞与胰岛素抵抗间的关系。结果与健康对照组相比,非酒精性脂肪性肝病患者外周血PBMC CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数及其占CD4+T淋巴细胞的百分比均显著下降(P<0.01,P<0.05),但在肥胖组与非肥胖组间差异均无统计学意义(P>0.05);肥胖者胰岛素抵抗指数较非肥胖者显著升高(P<0.01);肥胖组内PBMC CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数值及其占CD4+T淋巴细胞的百分比均与胰岛素抵抗指数呈明显负相关(r=-0.989,P<0.01)。结论非酒精性脂肪性肝病患者PBMC CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数目和比例减少,可能存在自身免疫调节功能的紊乱;PBMC CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞可能通过调节胰岛素抵抗参与非酒精性脂肪性肝病的形成和发展。     

CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞在儿童哮喘中的作用研究

目的探讨CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Treg)在儿童支气管哮喘发病中的作用。方法选取2015年8月-2017年7月在该院儿科诊断为哮喘的患儿80例,分为急性发作期(急性组)、缓解期(缓解组)的哮喘儿童,各40例,另选取年龄、性别匹配的健康儿童(对照组) 40例,应用流式细胞术检测CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+T百分比,实时荧光定量PCR检测功能基因Foxp3相对表达量。结果急性组CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+T百分比(0. 98±0. 92)和Foxp3基因相对表达量(2. 55±1. 37)最低,其次为缓解组(3. 46±1. 53,6. 82±2. 66)和对照组(5. 30±2. 56,15. 33±6. 81),3组比较差异均有统计学意义(均P0. 05)。结论 CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg降低是儿童哮喘的发病机制之一。     

CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞抑制耐药肺结核患者机体细胞免疫研究

目的了解耐药肺结核患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞及其分泌的细胞因子转化生长因子β1（TGF β1）、白细胞介素-10（IL 10）的表达水平与非耐药肺结核患者和健康对照者的差异,并探讨其在抑制特异细胞免疫反应中的作用。方法应用流式细胞技术分别对30例健康成人（健康对照组）、39例非耐药肺结核患者（普通肺结核组）及35例耐药肺结核患者（耐药肺结核组）的外周血CD4+CD25+T淋巴细胞和CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞表达水平进行检测;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测不同组别人群外周血血清中TGF β1、IL 10水平。结果健康对照组成人外周血中CD4+CD25+T淋巴细胞和CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞分别占CD4+细胞总数的(17.09±5.43)%和(0.78±0.88)%;普通肺结核组外周血中上述两种细胞分别占CD4+细胞总数的(22.12±3.43)%和(2.79±1.65)%;耐药肺结核组外周血上述两种细胞分别占CD4+细胞总数的(24.01±5.65)%和(4.51±1.47)%。耐药肺结核组外周血中CD4+CD25+T淋巴细胞所占CD4+T淋巴细胞的比例较普通肺结核组高,但差异无统计学意义(P＞0.05);耐药肺结核组CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞的比例明显高于健康对照组及普通肺结核组 (P＜0.05),并且耐药肺结核组TGF β1［（4.15±1.39）ρ/ng·L-1］、IL 10［（872.17±269.75）μg/L］明显高于普通肺结核组［分别为（3.03±1.42）ρ/ng·L-1、（266.83±57.09）μg/L］和健康对照组［分别为（2.12±0.77）ρ/ng·L-1、（105.21±23.56）μg/L］ (P＜0.05)。结论CD4+CD25+Foxp3+T淋巴细胞可能削弱结核病患者机体免疫系统对感染结核分枝杆菌的清除作用,是导致结核病感染慢性化且出现耐药的原因之一; TGF β1、IL 10可能参与抑制机体细胞免疫,与耐药结核病的形成和严重程度有一定相关性。     

支气管哮喘患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞水平及Foxp3 mRNA表达的分析

目的 观察支气管哮喘(哮喘)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg)水平及叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)mRNA表达的变化,探讨CD4+ CD25+ Treg在哮喘发病中的作用.方法采用流式细胞仪检测78例哮喘患者(急性发作期组30例,慢性持续期组25例,缓解期组23例)和29例健康志愿者(正常对照组)PBMCs中CD4+ CD25+ Treg的比例;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测PBMCs中Foxp3 mRNA的表达.结果 急性发作期组和慢性持续期组PBMCs中CD4+ CD25+ Treg的比例及Foxp3 mRNA的表达明显低于缓解期组和正常对照组(P＜0.05);缓解期组CD4+ CD25+ Treg的比例及Foxp3 mRNA的表达虽亦低于正常对照组,但差异无统计学意义(P＞0.05);急性发作期组CD4+ CD25+ Treg的比例及Foxp3 mRNA的表达低于慢性持续期组(P＜0.05).结论 哮喘患者外周血中具有免疫抑制活性的CD4+ CD25+ Treg数量减少,功能下降,可能参与哮喘的发生和发展.     

CD4~+ CD25~+调节性T细胞在上皮性卵巢癌患者外周血中的表达及临床意义

目的:研究上皮性卵巢癌患者外周血中CD4+ CD25+调节性T细胞数量及其相关基因Foxp3 mRNA的表达特点,探讨CD4+CD25+调节性T细胞在诱导肿瘤免疫耐受中的作用。方法:采用流式细胞术检测卵巢浆液性囊腺癌和粘液性囊腺癌患者外周血中CD4+ CD25+调节性T细胞数量变化;采用半定量RT-PCR方法检测卵巢浆液性囊腺癌和粘液性囊腺癌患者外周血PBMC中Foxp3 mRNA表达水平。结果:卵巢浆液性囊腺癌和粘液性囊腺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞数量均明显升高(P<0.05);Foxp3 mRNA在卵巢浆液性囊腺癌和粘液性囊腺癌患者外周血PBMC中表达明显增高(P<0.05)。结论:CD4+ CD25+调节性T细胞可能在卵巢癌免疫耐受中发挥重要作用。     

卵巢癌患者外周血CD4~+ CD25~(high)调节性T细胞及Foxp3的检测及临床意义

目的:检测CD4+CD25high调节性T细胞(Treg)及Foxp3在卵巢癌患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达,探讨其在抗肿瘤免疫调节中的作用及临床意义。方法:采用流式细胞术检测75例卵巢癌患者PBMC中CD4+CD25+/CD4+、CD4+CD25high/CD4+T细胞百分比以及CD4+CD25+及CD4+CD25highT细胞中Foxp3+T细胞的表达,并与73例正常对照组进行比较。结果:卵巢癌患者治疗前PBMC中CD4+CD25+/CD4+、CD4+CD25high/CD4+T细胞百分比及Foxp3表达水平均较正常对照组增高(P<0.05),治疗后上述指标较治疗前减低(P<0.05)。结论:卵巢癌患者外周血调节性T细胞增高可能是其免疫异常的主要原因之一,定期检测外周血中上述指标的变化有助于了解卵巢癌患者的病情变化及判断预后。     

吸毒人员外周血CD4~+ CD25~+ Foxp3调节性T细胞表达

目的:探讨外周血CD4+CD25+Foxp3调节性T细胞与吸毒人员机体免疫的关系。方法:采集114名吸毒人员外周血,根据不同吸毒方式和吸毒年限进行分组,应用流式细胞仪检测外周血中CD4+CD25+Foxp3调节性T细胞表达。结果:不同吸毒方式的吸毒人员外周血CD4+CD25+Foxp3调节性T细胞表达,以口吸、静脉注射、混合吸顺序递减(49.07%±14.88%、34.96%±13.41%、26.72%±8.49%),各组间两两比较,差别有统计学意义(P<0.01);同一吸毒方式不同吸毒年限的吸毒人员CD4+CD25+Foxp3调节性T细胞表达相比较,≤10年的口吸组(51.79%±10.44%)较>10年口吸组(37.14%±12.29%)明显降低(P<0.01),而混合吸毒组明显升高(27.06%±8.99%到35.47%±11.02%,P<0.05),静脉注射组变化不明显(P>0.05)。结论:通过检测吸毒人员外周血CD4+CD25+Foxp3调节性T细胞的表达,反映了不同吸毒方式和吸毒年限的吸毒人员机体免疫功能损伤程度,不仅可作为一项准确、可靠监测指标,也将为吸毒人员的免疫功能的检测提供新的思路。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞对哮喘大鼠气道炎症的影响

目的观察CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Treg）对哮喘大鼠气道炎症的影响。方法将卵白蛋白（OVA）免疫耐受大鼠CD4^＋CD25^＋Treg细胞过继转移给哮喘大鼠,然后观察支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞计数及分类,ELISA检测BALF中IL-4、IL-5和IFN-1及血清OVA特异性IgE含量,HE染色观察肺组织的病理改变。结果与哮喘组比较,过继转移CD4^＋CD25^＋Treg细胞后哮喘大鼠BALF中细胞总数、中性粒细胞和淋巴细胞百分率降低（P〈0．05）,嗜酸性粒细胞（Eos）百分率明显降低（P〈0．01）;BALF中IL4和IL-5含量明显降低,IFN-1含量明显升高,血清OVA特异性IgE含量明显降低（P〈0．05）;气道炎症明显减轻。结论过继转移OVA免疫耐受大鼠CD4^＋CD25^＋Treg细胞可以明显抑制哮喘的慢性气道炎症。     

丹参注射液联合地塞米松对哮喘大鼠CD4+CD25+调节性T细胞的影响

目的 探讨丹参注射液联合地塞米松(DXM)抑制哮喘气道炎症的免疫学机制.方法 50只Wistar大鼠随机分成正常对照(NC)组、哮喘组、丹参组、DXM组、联合用药组,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数并分类,HE染色行肺组织病理学检查,流式细胞仪检测外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)比例,ELISA检测BALF中IL-4、IL-5含量.结果 与哮喘组比较,药物干预组细胞总数、中性粒细胞(Neu)、淋巴细胞(Lym)、嗜酸性粒细胞(Eos)百分率下降(P<0.05,P<0.01),联合用药组下降程度大于丹参组、DXM组(P<0.05).哮喘组呈显著炎症变化,丹参组呈中度炎症变化,DXM组呈轻度炎症变化,联合用药组无炎症改变.与哮喘组比较,药物干预组CD4+CD25+Treg/CD4+T升高(P<0.05),IL4、IL-5含量下降(P<0.05),联合用药组CD4+CD25+ Tree/CD4+T升高程度和IL-4、IL-5下降程度大于丹参组和DXM组(P<0.05).结论 丹参注射液具有抑制哮喘大鼠气道炎症的作用,和DXM联合应用后,抑制作用更加明显,该作用可能和促进CD4+CD25+Treg产生,进而抑制IL-4、IL-5产生,纠正Th1/Th2失衡,最终减轻气道炎症有关.     

标准化屋尘螨变应原提取液治疗儿童支气管哮喘不良反应评估

[目的]观察标准化屋尘螨变应原提取液特异性免疫治疗儿童支气管哮喘的不良反应发生情况,评估其安全性. [方法] 97例临床诊断为屋尘螨过敏的支气管哮喘患儿接受了33周皮下注射标准化屋尘螨变应原提取液特异性免疫治疗,观察剂量递增阶段及维持治疗阶段每次注射后速发及迟发不良反应发生情况、临床表现并予相应处理,总结不良反应发生的规律. [结果] 97例患儿共注射了2 431次,共37例287人次发生不良反应(11.8％).其中速发不良反应25例230人次(9.46％),迟发不良反应19例57人次(2.34％);局部不良反应和全身不良反应分别为234人次(9.62％)和53人次(2.18％).局部不良反应主要表现为红肿,20例出现哮喘相关症状,无1例发生严重过敏反应.剂量递增阶段和维持治疗阶段分别有214人次及73人次发生不良反应. [结论]标准化屋尘螨变应原提取液特异性免疫治疗儿童支气管哮喘不良反应发生少、程度轻、耐受性好,严格掌握指征及执行操作规范可减少不良反应发生.     

吸毒人群外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞和免疫功能变化及意义

目的通过测定不同吸毒方式的吸毒人群外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(regulatoryTcell,Treg)的变化,从免疫调节方面探讨吸毒对人体免疫功能的影响以及机体的调节功能改变。方法清晨空腹抽取静脉血,采用流式细胞仪同期测定吸毒组和正常对照组人群CD4+CD25+Treg细胞和CD4+CD25+Foxp3Treg细胞及CD8+T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞的表达。结果口吸组和静脉注射组调节性T细胞与正常对照组比较,差异有统计学意义(LSD-t=2.34,4.35,P﹤0.05),静脉注射组和口吸组CD4+CD25+、CD4+CD25+Foxp3Treg细胞相比差异有统计学意义(LSD-t=3.37,4.07,P﹤0.05);不同吸毒途径淋巴细胞CD4+、CD8+表达不同,与对照组比较口吸组、静脉注射组CD4+和CD8+T淋巴细胞差异有统计学意义(LSD-t=5.18,4.94,2.17,2.23,P﹤0.05)。结论吸毒人群CD4+CD25+调节性T细胞功能代偿升高和不同吸毒方式导致机体免疫功能受损程度也不同。     

Peptide induces CD4(+)CD25+ and IL-10+ T cells and protection in airway allergy models

The purpose of this study was to evaluate whether a single peptide containing a major T cell epitope might induce peripheral tolerance in a complex allergen model. C57BL/6 mice were sensitized by intraperitoneal injection of house dust mite extract (HDM), and exposed to antigen via trachea instillation. Der p 1 peptide was administered by i.v. before or after sensitization. Lung lavage fluids were analyzed for cellular infiltration. Respiratory exposure of sensitized mice to antigen results in airway inflammation and eosinophilia. Intravenous administration of a single peptide protected sensitized mice from these changes. Further, the emergence of antigen-specific CD25(+)CD4+ and IL-10 secreting cell populations in DO11.10 mice was demonstrated after peptide administration. Thus, intravenous delivery of a single peptide epitope is capable of inducing peripheral tolerance and protection in a complex allergy model, possibly through regulatory T cells and bystander suppression.     

转染Foxp3的CD4+CD25-T细胞对NK细胞免疫活性影响的研究

目的:利用载有Foxp3基因的腺病毒载体转染,使小鼠CD4+CD25-T细胞强制性高表达Foxp3,并研究体外诱导获得的Foxp3高表达T细胞对NK细胞免疫活性的调节作用及其机制。方法:将载有Foxp3基因的逆转录病毒转染CD4+CD25-T细胞获得持续性高表达Foxp3的CD4+T细胞。CD4+Foxp3+T细胞与NK细胞共培养后,通过51Cr标记法检测NK细胞的杀伤毒性。在Transwell共培养实验体系中,通过TGF-β阻断实验来检测NK细胞杀伤毒性。结果:通过逆转录病毒转染幼稚CD4+CD25-T细胞获得了表达Foxp3的CD4+T细胞模型。CD4+Foxp3+T细胞在与NK细胞共培养后,能显著抑制NK细胞毒性杀伤作用。在共培养体系中加入抗TGF-β抗体后,其抑制率显著降低。与NK细胞直接接触的CD4+Foxp3+T细胞可以诱导NK细胞免疫抑制。结论:强制性表达Foxp3的CD4+CD25-T细胞可以在体外发挥免疫抑制作用,能抑制NK细胞的细胞毒性杀伤作用。转染Foxp3的CD4+CD25-T细胞对NK细胞发挥作用依赖于细胞之间的直接接触,与转染后T细胞表面表达TGF-β有关。     

地塞米松对哮喘大鼠气道炎症及CD4+ CD25+ 调节性T细胞的影响

目的 观察地塞米松对支气管哮喘(哮喘)大鼠气道炎症和CD4+ CD25+调节性T细胞(CD4+ CD25+ Tr)的影响,探讨地塞米松治疗哮喘的机制.方法 30只Wistar大鼠随机分成正常对照组,哮喘组,地塞米松组.计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数并分类,应用HE染色行肺组织病理学检查,流式细胞仪检测外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4+ CD25+ Tr的比例.结果 地塞米松组BALF细胞总数及淋巴细胞(Lym)、中性粒细胞(Neu)和嗜酸性粒细胞(Eos)百分率较哮喘组明显减少(P＜0.05,P＜0.01),与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).病理组织学显示:地塞米松组较哮喘组肺组织炎性细胞浸润明显减少.哮喘组PBMCs中CD4+ CD25+ Tr比例较正常对照组明显减少(P＜0.05),地塞米松组CD4+ CD25+ Tr比例较哮喘组明显增加(P＜0.05).结论 地塞米松可减轻哮喘大鼠气道炎症反应,其机制可能与促进CD4+ CD25+ Tr产生有关.     

子痫前期患者蜕膜中CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性 T细胞及NK细胞的相关研究

目的:对子痫前期(PE)患者蜕膜中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(CD4+CD25+Foxp3+Treg)和NK细胞进行相关研究,探讨子痫前期发病机制中相关的免疫学变化。方法:选择子痫前期患者30例(轻度13例、重度17例)、正常晚期妊娠妇女30例。采用免疫组织化学法检测胎盘蜕膜CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞和NK细胞后计数并检测其平均灰度值。结果:①子痫前期患者蜕膜CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞阳性表达率均明显低于正常晚期妊娠者(P均<0.05);②子痫前期患者蜕膜NK细胞数高于正常孕妇(P均<0.05)且NK细胞CD56组化染色平均灰度值高于正常孕妇(P均<0.05)。结论:子痫前期患者蜕膜的CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞均低于正常孕妇;蜕膜的NK细胞数均高于正常孕妇,这一结果造成母胎免疫耐受失衡且NK细胞呈激活状态,杀伤活性增强,导致子痫前期。