GFP修饰的骨髓基质干细胞在移植癫痫大鼠脑中存活及迁移

目的探讨骨髓基质干细胞定向移植后在脑中存活时间,为进一步的细胞治疗提供实验基础。方法腹腔注射青霉索建立癫痫模型。24只健康Sprague-DawleySD大鼠,用立体定向仪进行移植。移植骨髓基质干细胞后,分为7d组（8只）,14d组（8只）,28d组（8只）。分别于移植后7d,14d,28d天脑灌注取材,通过荧光观察比较骨髓基质干细胞移植后,7d,14d及28d组的细胞存活数。结果骨髓基质干细胞移植后14d组细胞数少于7d组（P〈0.01）,28d组少于14d组（P〈0.01）。结论移植于癫痫鼠海马内的骨髓基质干细胞移植可以存活,部分细胞会发生迁移,但随时间延长,细胞数逐渐减少。     

Wnt7a在红藻氨酸致痫大鼠颞叶癫痫形成过程中的变化

目的探讨Wnt7a mRNA和蛋白在红藻氨酸(KA)致痫大鼠颞叶癫痫形成过程中的时间变化过程,明确Wnt7a是否参与颞叶癫痫海马神经发生。方法利用生后30天的雄性SD大鼠(哈尔滨医科大学附属第二医院动物室提供),经皮下注射KA制成颞叶癫痫动物模型后,应用Real-time PCR和Western blot技术检测KA后不同时期(急性期、自发性反复癫痫形成初期和慢性癫痫稳定形成期)实验组和生理盐水(NS)对照组(每组动物各六只)大鼠海马组织中Wnt7amRNA和蛋白的表达。结果 KA致痫后在颞叶癫痫形成过程中,各时期KA组动物海马组织Wnt7a mRNA的表达同相应时期NS组相比,在急性期显著下降(NS组:1.000±0.000,KA组:0.304±0.113,P0.001),在自发性反复癫痫形成初期增高且差异有统计学意义(NS组:1.000±0.000,KA组:3.369±1.455,P=0.010),在慢性癫痫稳定形成期增高且差异有统计学意义(NS组:1.000±0.000,KA组:5.845±3.524,P=0.020)。KA组各时期的动物海马组织Wnt7a mRNA的表达相比较,癫痫形成初期及慢性期均较急性期显著增高(P0.05),慢性期较癫痫形成初期增高但差异无统计学意义(P0.05)。大鼠海马组织中Wnt7a蛋白的表达无论在时间上还是在组别间差异均无统计学意义。结论 Wnt7a可能调控KA点燃颞叶癫痫大鼠的海马神经发生,参与颞叶癫痫的形成。     

维甲酸对宫内缺氧幼年大鼠神经干细胞增殖及学习记忆能力的影响

[目的]探讨维甲酸对宫内缺氧幼年大鼠神经干细胞增殖及学习记忆能力的影响.[方法]孕SD大鼠制作宫内缺氧性脑损伤新生鼠模型.新生鼠随机分为对照组及维甲酸治疗组(治疗组)各10只.治疗组每只每天给予腹腔注射维甲酸500 μg/kg,容积0.2 mL/次.对照组注射生理盐水0.2 mL,共10 d.30 d后进行Morris水迷宫实验,水迷宫实验结束的当天取脑组织、固定,常规石蜡切片(经海马),Nestin免疫组织化学染色神经干细胞.显微镜下观察其海马回Nestin阳性神经干细胞.[结果]治疗组大鼠海马回Nestin阳性细胞数(11.67±2.10)较对照组(4.82±0.52)明显增加(t=8.58,P＜0.01),在目标象限,对照组大鼠搜索时间[(18.27±3.38)s,(10.78±2.20)s]均较治疗组[(23.12±2.16)s,(18.05±2.24)s]明显缩短(t=3.26,6.02,P均＜0.01).[结论]维甲酸可刺激宫内缺氧幼年大鼠海马神经干细胞的增殖,因此有效地改善大鼠远期的学习记忆功能.     

脑源性神经营养因子基因修饰骨髓间质干细胞移植对痴呆大鼠大脑皮层及海马胆碱乙酰转移酶、胆碱酯酶的影响

目的观察脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间质干细胞(MSCs)移植对阿尔茨海默病鼠大脑皮层及海马胆碱乙酰转移酶、胆碱酯酶的影响。方法采用侧脑室立体定向注射β-淀粉样肽建立阿尔茨海默病动物模型,取单纯或经脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间质干细胞移植,1月后采用比色法检测大脑皮层及海马组织的胆碱乙酰转移酶、胆碱酯酶含量。结果①损伤模型组大脑皮层及海马胆碱乙酰转移酶含量降低,脑源性神经营养因子修饰的骨髓间质干细胞能够增加其表达,与损伤模型组相比有显著性差异(P<0.05),与正常对照组、骨髓间质干细胞未修饰组相比无显著性差异(P>0.05)。②损伤模型组大脑皮层及海马胆碱酯酶明显升高,脑源性神经营养因子修饰的骨髓间质干细胞能够降低其表达,与损伤模型组相比有显著性差异(P<0.05),与正常对照组、骨髓间质干细胞未修饰组相比无显著性差异(P>0.05)。结论脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间质干细胞可以增加阿尔茨海默病模型鼠大脑皮层及海马组织胆碱乙酰转移酶的含量、降低胆碱酯酶的含量,从而达到改善学习记忆的作用。     

骨髓基质细胞经侧脑室移植对缺氧缺血性大鼠学习记忆能力的影响

目的探讨骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)移植治疗对缺氧缺血性大鼠学习记忆能力的影响及相关机制。方法取SD大鼠BMSCs进行培养,BrdU标记,经侧脑室植入7日龄缺氧缺血性大鼠模型中,8周后进行Morris水迷宫实验,水迷宫实验后取大鼠脑组织进行固定、脱水、包埋、切片;免疫组化行海马区神经元特异烯醇化酶标记及BrdU检测。结果 Morris水迷宫实验显示模型组大鼠T1和T2分别较假手术组大鼠缩短(P0.05);细胞组大鼠T1和T2分别较模型组大鼠延长(P0.05)。NSE免疫组化显示模型组大鼠海马阳性细胞积分光密度值(integral optical density,IOD)较假手术组IOD值减小(P0.05),细胞组IOD值较模型组明显增加(P0.05),细胞组BrdU免疫组化结果未见阳性细胞。结论 BMSCs经侧脑室植入可改善大鼠的学习记忆能力;其机制可能为注入侧脑室的BMSCs及相关物质促进自体神经元的再生。     

自体骨髓基质干细胞移植联合EPO治疗脊髓损伤的研究

目的：探讨自体骨髓基质干细胞（MSCs）移植联合促红细胞生成素（EPO）对大鼠脊髓损伤（SCI）治疗的效果。方法：培养与纯化骨髓基质干细胞。80只SD大鼠制备脊髓损伤模型,随机分为4组：干细胞移植组、EPO组、联合组和对照组。采用BBB法进行运动能力评分和组织切片观察来评定修复情况。结果：三个实验组与对照组相比,差异具有统计学意义（P〈0.05）,三个实验组均可明显促进大鼠运动功能和损伤后组织结构的恢复,其中联合组效果更显著。结论：骨髓基质干细胞移植联合EPO具有促进大鼠脊髓损伤后神经功能的修复。     

BMSCs移植改善老年性痴呆大鼠空间记忆能力的实验研究

目的 探讨BMSCs移植对老年痴呆大鼠空间记忆能力的改善情况,为细胞移植治疗老年痴呆实验依据.方法 海马注射Aβ1-40蛋白制备AD动物模型,模型成功后移植BMSCs.Morris水迷宫检测大鼠行为学变化,采用BrdU、NSE和GFAP的免疫荧光双标技术观察移植的细胞生存及分化.结果 AD组大鼠逃避潜伏期较对照组明显延长(P＜0.05),移植BMSCs治疗后大鼠逃避潜伏期明显缩短(P＜0.01)；移植细胞后大鼠海马周围可见分化为NSE或GFAP阳性的细胞.结论 BMSCs移植AD大鼠后能在局部存活并分化,并且能够改善AD大鼠空间学习记忆能力.     

神经生长因子和神经节苷脂对新生鼠脑损伤后学习记忆能力的影响

【目的】观察联用神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和神经节甘脂(GM1)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后远期学习记忆能力的改善作用,并探讨其神经保护的可能机制。【方法】150只新生鼠随机分为假手术组、缺氧缺血(hypoxia-ischemia brain damage,HIBD)组、NGF治疗组、GM1治疗组和NGF+GM1治疗组。给药后观察各组近期(6 h,24 h,72 h,7 d)海马形态组织学变化(海马细胞结构和CA1区细胞凋亡数),并评价各组动物远期学习记忆功能(Morris水迷宫实验),以判断药物的干预效果。【结果】HIBD组海马区病理变化较假手术组显著,动物学习记忆能力亦较假手术组显著降低;分别应用NGF、GM1治疗后HIBD组海马区病理变化均有明显改善,其动物远期学习记忆能力亦得到明显改善;而合用组在上述方面的改善作用最为显著。【结论】联用NGF和GM1对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后远期学习记忆能力的改善作用,可能与其协同作用显著减少海马区神经细胞的凋亡有关。     

阿胶对染铅大鼠海马损害的拮抗作用

目的：观察和探讨阿胶对铅所致大鼠学习记忆损害的拮抗作用。方法：选用36只Wistar雄性大鼠随机分为对照组、铅组、阿胶铅组,每组12只。大鼠经口染铅并给予阿胶灌胃。每月用Y型迷宫试验测试学习记忆1次。3个月后处死大鼠,分别测定海马组织一氧化氮（NO）和总抗氧化能力（TAOC）并做病理检查。结果：（1）在Y型迷宫试验中,铅组大鼠学习记忆达标前所受电击次数（错误次数）显著高于对照组（P＜0．01）;阿胶铅组大鼠所受电击次数显著低于铅组（P＜0．05;2、3月P＜0．01）。（2）铅组大鼠海马NO和TAOC显著低于对照组（P＜0．01）,阿胶铅组大鼠海马NO和TAOC显著高于铅组（P＜0．05或P＜0．01）。（3）病理检查,铅组大鼠海马显著萎缩,细胞形态不规则、排列紊乱,细胞变性、脱失显著,轴突溶解、消失、阿胶铅组海马病理变化不明显。结论：铅可损害海马细胞结构和功能,降低海马组织NO和TAOC水平,降低学习记忆能力;阿胶对铅所海马损害和学习记忆障碍具有拮抗作用。     

中药二仙汤对骨髓干细胞增值和迁移能力的影响

目的:观察二仙汤对骨髓间充质干细胞增殖能力和迁移能力的影响,为二仙汤协同骨髓间充质干细胞治疗卵巢早衰提供基础实验依据。方法:分别将20只SD雌性大鼠制备含二仙汤的药物血清(含药组)和无药物血清(对照组),取10只大鼠体外分离骨髓间充质干细胞进行培养,通过对照法对细胞形态学观察、MTT法测定、细胞周期及细胞迁移能力进行检测并分析。结果:与对照组相比,含药组细胞增殖能力和迁移能力均明显增强。结论:二仙汤协同骨髓干细胞自体移植治疗卵巢早衰疾病具有可行性。     

自体骨髓基质干细胞移植对大鼠脊髓损伤的疗效

[目的]观察自体骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)移植对大鼠脊髓损伤(SCI)的治疗效果。[方法]体外分离纯化大鼠骨髓基质干细胞,取46例Wistar大鼠采用改良的Allen’s装置在T11水平制成大鼠脊髓损伤模型,随机分成基质干细胞(MSCs)移植组(n=23)和对照组(n=23),分别于术后1、4周通过BBB评分观察大鼠SCI后功能的恢复情况。[结果]术前所有大鼠BBB评分均为21分,脊髓损伤后为0分,所有大鼠神经功能缺损症状随着时间的推移都有不同程度的减轻。两组术后4周时BBB评分均较术后1周时高,差异有统计学意义(P﹤0.05)。移植组术后1、4周时BBB评分均高于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]BMSCs移植有助于大鼠脊髓损伤后的修复重建和功能恢复。     

神经干细胞共移植体对MCAO模型大鼠新生血管密度表达的影响

目的探讨神经干细胞共移植体移植对局灶性腩缺血模型大鼠新生血管密度的影响。方法同一基因背景Wistar大鼠48只,随机分成两组：A对照组（单纯神经干细胞移植）,B神经干细胞共移植体移植组。采用线栓法建立大脑中动脉缺血模型,3d后应用立体定向法将神经干细胞、神经干细胞共移植体分别移植到大脑中动脉缺血模型大鼠的纹状体缺血半暗带区,各组分别于3、7、14、60d腹腔麻醉取脑,制作石蜡切片,采用免疫组化方法观察缺血区新生血管的生成情况。结果（1）A组：在局灶性脑缺血区,3d有新生血管生成,7d新生血管生成达高峰,14d新生血管生成开始逐渐减少,60d几乎没有新生血管生成;（2）B组：3d新生血管生成明显增加,7d新生血管生成达高峰,14d新生血管生成开始减少,60d仍有新生血管的生成。在各时间点B组与A组进行比较,新生血管的密度明显增加,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论神经干细胞共移植体移植能够促进大鼠局灶性脑缺血区新生血管的生成。     

Transplantation of dermal multipotent cells promotes the hematopoietic recovery in sublethally irradiated rats

Our previous study indicated that dermal multipotent cells with the differentiation capacity to form cells with the phenotypic properties of osteocytes, adipocytes, chondrocytes, and neurons in specific inducing media could be isolated from the enzymatically dissociated dermal cells of newborn rats by their adherence to culture dish plastic. We have also observed that the systemic transplantation of dermal multipotent cells could not repopulate the hematopoietic system in lethally irradiated rats. In this paper, we found that a transplantation of plastic-adherent dermal multipotent cells into sublethally irradiated rats led to a significant increase of white blood cells in peripheral blood, nucleated cells, CFU-GM, and CFU-F colonies in bone marrow. FISH analysis, using a Y-chromosome specific probe, showed that dermal multipotent cells could engraft into bone marrow in recipients. Flow cytometry (FACS) analysis also showed that the proportion of CD2 and CD25 positive lymphocytes in peripheral blood did not change significantly in two weeks after transplantation. By these results, we infer that dermal multipotent cells may represent an alternative origin of mesenchymal stem cells to restore marrow microenvironment and promote the survival, engraftment, and proliferation of hematopoietic cells.     

自体骨髓基质细胞蛛网膜下腔移植治疗帕金森叠加综合征

目的：探讨帕金森叠加综合征经自体骨髓基质细胞蛛网膜下腔移植临床治疗效果。方法：对照组仅给予常规临床治疗,研究组在常规治疗基础上加用自体骨髓基质细胞蛛网膜下腔移植,记录两组帕金森叠加综合征患者治疗前后生活能力变化情况。结果：两组治疗前生活能力对比结果P>0.05;经不同治疗后两组Barthel指数评分均较之前显著提高,研究组生活能力改善效果优于对照组,数据对比P<0.05。结论：应用自体骨髓基质细胞蛛网膜下腔移植治疗帕金森叠加综合征可获得较为理想的临床疗效,有利于保障患者生活质量。     

自体骨髓干细胞移植治疗早期脊髓损伤疗效观察

目的 观察自体骨髓干细胞移植治疗早期脊髓损伤的近期有效性和安全性.方法 2007年11月至2009年8月间山东聊城市脑科医院神经外科收治早期脊髓损伤患者51例.移植组24例患者通过蛛网膜下腔注射方式行自体骨髓干细胞移植,选择同时期入院但未行干细胞移植患者作为对照组.分别于移植前、移植后1、3、6月对两组患者进行运动、感觉功能评定（AISA评分）.同期随访血常规、凝血机制、生化全项、肿瘤标记物.结果 51例患者进入结果分析.移植后1个月,两组患者均有不同程度的运动、感觉功能回复;移植后3个月,移植组感觉功能恢复与对照组差异有统计学意义（P〈0.05）;移植后6个月,移植组运动、感觉功能恢复均与对照组差异有统计学意义（P〈0.05）.随访各项血液检查结果未出现明显异常.结论 自体骨髓干细胞移植治疗早期脊髓损伤安全且近期内疗效确定,远期疗效尚待进一步观察.     

静脉移植BMSCs对大鼠脑梗死治疗及抑制凋亡作用

目的 观察静脉移植骨髓间充质干细胞(BMSCs)对大鼠脑梗死的治疗作用并探讨其对凋亡蛋白的影响。方法 全骨髓培养法分离纯化大鼠BMSCs。改良Longa线栓法成功建立大鼠脑梗死模型45只, 随机分为空白组、对照组和实验组, 建模1d后, 空白组无处理因素, 对照组尾静脉注射1mL生理盐水, 实验组注射1mL BMSCs悬液。在建模后当日、BMSCs移植后第3、7d进行神经功能评分测试(mNSS), 移植后第7d 进行TTC法检测各组脑梗死体积, 同时检测脑区BrdU阳性细胞, 用免疫组化及Western blot检测Bcl-2、caspase-3蛋白表达。结果 mNSS显示, 移植前3组得分差异无统计学意义, 移植后细胞移植组得分较对照组及空白组明显降低(P<0.01), 且空白组与对照组差异无统计学意义(P>0.05);TTC检测显示, 细胞移植组较其他2组梗死体积明显减小(P<0.05), 空白组与对照组梗死体积差异无统计学意义(P>0.05);移植组梗死脑区有BrdU阳性细胞;免疫组化显示, 细胞移植组较其他2组Bcl-2阳性细胞明显增高(P<0.01), caspase-3阳性细胞明显降低(P<0.05), 且空白组与对照组差异无统计学意义(P>0.05);western显示, 细胞移植组较其他2组Bcl-2蛋白表达明显增加(P<0.01), caspase-3蛋白表达明显降低(P<0.05), 且空白组与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 静脉移植BMSCs可改善梗死大鼠的神经功能, 其对脑梗死的治疗作用与其抑制凋亡作用有关。     

骨髓间充质干细胞移植在肺气肿大鼠模型肺组织内定植研究

目的：观察骨髓间充质干细胞移植在肺气肿大鼠模型肺组织内的定植情况。方法：选择健康SD大鼠34只,按随机数字表法分为MSCs干预组（A组,10只,慢阻肺大鼠,尾静脉输注MSC 1×106个/mL）,肺气肿模型组（B组,10只,慢阻肺大鼠,尾静脉输注等体积PBS）及MSC对照组（C组,10只,正常大鼠,尾静脉输注MSCs 1×106个/mL）,正常对照组（D组,4只,正常大鼠,尾静脉输注等体积PBS）,采用烟熏法复制大鼠肺气肿模型。全骨髓培养法体外培养扩增雄性SD大鼠来源的MSCs,经GFP标记细胞后将其经尾静脉注入肺气肿模型SD大鼠体内,24 h内处死大鼠,取肺组织迅速冰冻切片,共聚焦激光显微镜下观察观察转染GPF的间充质干细胞在大鼠肺内定植情况。结果：成功培养具有分化潜能的骨髓间充质干细胞,MSCs传至第4代时有99.5%表达CD44、99.6%表达CD29等间充质干细胞表面标志,仅有0.4%表达CD34、1.0%表达CD45单核细胞以及造血干细胞表型;成功复制大鼠肺气肿模型,香烟烟雾暴露组（A、B组）平均肺泡间隔为（119.0±26.2）μm,高于对照组（C、D组）的（89.8±17.3）μm,差异有统计学意义（P〈0.05）;平均肺泡数为（173.9±68.3）个/mm2低于对照组的（280.3±104.0）个/mm2,差异有统计学意义（P〈0.05）;显微共聚焦发现MSCs经尾静脉注入大鼠体内24 h后可见A组大鼠肺组织内转染绿色荧光蛋白质粒的MSCs,而B组、C组及D组均未见转染荧光。结论：骨髓间充质干细胞经尾静脉输注入后可在肺气肿模型大鼠肺内定植,为MSCs治疗慢阻肺可能提供理论依据。     

刺梨多糖对神经干细胞谷氨酸损伤的保护作用

目的:研究刺梨多糖(RoseroxburghiiTrattpolysaccharide,RRTP)对神经干细胞谷氨酸损伤的保护作用。方法:采用离子交换柱层析和凝胶柱层析纯化得到RRTP;取出大鼠胚胎的纹状体进行神经干细胞培养,神经干细胞谷氨酸损伤模型模拟神经元的缺血缺氧性损伤。实验分正常对照组,谷氨酸损伤组和RRTP不同浓度试验组。观察谷氨酸损伤后各组神经干细胞死亡率和乳酸脱氢酶漏出率。结果:不同浓度RRTP的试验组神经干细胞损伤有不同程度的减轻。高浓度RRTP试验组神经干细胞死亡率和乳酸脱氢酶漏出率较低,与谷氨酸损伤组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:RRTP对神经干细胞损伤有明显的保护作用。     

Enrichment of blood from embryonic stem cells in vitro

Murine embryonic stem (ES) cells are pluripotent. When injected into blastocysts they can give rise to every cell type of a derived chimeric mouse including germ cells. Embryonic stem cells also possess remarkable in vitro differentiation potential. When removed from stromal support and leukaemia inhibitory factor (LIF), ES cells differentiate into structures known as embryoid bodies (EBs), in which all three germ layers develop and interact. As ES cells from humans become available there is increasing interest in the potential for EBs to provide an unlimited supply of stem cells for somatic transplantation therapies. Realisation of this potential will require greater understanding of the molecular determinants of cell fate within EBs. Also, culture techniques for selective expansion of cell lineages of interest will reduce the risks associated with transplantation of EB-derived cells. In this paper the kinetics of expression of mRNA and protein for early mesoderm markers within EBs is reported. In addition, a three-step culture system incorporating co-cultivation on the bone marrow derived stromal cell line, MC3T3-G2/PA6 (PA6), is explored as a way to select for haematopoietic progenitor cells (HPCs) and against undifferentiated ES cells. A system like this could enhance purification of haematopoietic stem cells (HSCs) from ES cells for bone marrow transplantation.