人肺癌细胞原代培养药敏检测及4种耐药相关蛋白表达的研究

目的 采用MTT法对人肺癌细胞药物敏感性进行研究。方法 对26例外科手术标本进行原代细胞培养，用MTT法对培养成功者进行阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)、长春新碱(VCR)和足叶乙甙(VPl6)4种化疗药的药敏实验，并应用免疫组化法检测其中10例肺癌组织TOPOⅡ、p53、bcl-2和GST—π的表达。结果 21例培养成功者药敏检测表明ADM、DDP、VCR和VPl64种化疗药的有效率分别为19．0％、38．1％、23．8％和23．8％。10例对上述4种化疗药有不同程度耐药的肺癌组织有不同程度TOPOⅡ、p53、bcl-2和GST—π的表达。结论 用手术切除的肺癌组织进行肿瘤细胞原代培养和MTT法检测细胞对化疗药物的反应性是可行的，药敏实验的结果对临床用药具有提示作用。检测手术肺癌组织的TOPOⅡ、p53、bcl—2和SGT—π表达，对判定耐药具有一定的提示意义。     

p53及耐药相关基因的表达与非小细胞肺癌化疗耐药性的研究

目的探讨p53突变与耐药相关基因表达的相关性及其与肺癌化疗耐药的关系。方法免疫组化检测60例非小细胞肺癌组织的p53和耐药相关蛋白P-gp、MRP、LRP、GST-π的表达并分析其相关性及其与肺癌化疗耐药的关系。结果 P-gp、MRP、LRP、GST-π、p53阳性率分别为53.3%、50.0%、75.0%、73.3%、68.3%。LRP在腺癌中表达最高,p53在鳞癌中表达最高。p53的表达与肿瘤细胞分化程度、有无淋巴结转移和TNM分期密切相关,其余4种耐药相关蛋白表达差异均无统计学意义（P〉0.05）。p53和一种或一种以上耐药相关蛋白共表达率达94.8%,且p53与P-gp、GST-π的表达存在正相关性（P均〈0.05）。p53蛋白的表达与化疗疗效显著相关,p53阴性化疗有效率（60.5%）明显高于p53阳性者（28.3%,P〈0.05）。结论肺癌组织p53突变与耐药相关蛋白的表达有相关性,p53结合耐药相关蛋白检测可以预示患者的化疗耐药性,对个体化化疗方案的制定具有指导意义。     

mdr1、MRP和GST-π在非小细胞肺癌多药耐药机制中的作用

目的探讨非小细胞肺癌的化疗耐药性和参与介导多药耐药的相关基因和蛋白mdrl、MRP、GST-π的表达，对比分析非小细胞肺癌的化疗耐药性与耐药相关基因表达的关系，明确各耐药相关基因在介导非小细胞肺癌耐药机制中的作用。方法应用肿瘤细胞体外培养和MTT法对91例未经化疗的非小细胞肺癌进行体外化疗药物敏感性测试，观察非小细胞肺癌分别对环磷酰胺、阿霉素、顺铂＋氟尿嘧啶3种单药和联合用药方案耐药情况和总的耐药情况，并用免疫组织化学方法对其进行3种耐药相关基因（mdr1、MRP以及GST-π）表达的检测，并将其表达情况与对应的化疗耐药性进行相关分析。结果91例NSCLC化疗敏感性检测结果显示：53例（58．2％）对环磷酰胺耐药，51例（56．0％）对阿霉素耐药，42例（46．2％）对顺铂＋氟尿嘧啶耐药。其中，19例（20．9％）对3种用药均敏感，27例（29．8％）对3种用药均耐药，其耐药性与组织学类型和分化程度无关（P〉0．05）。P—gp、MRP和GST-π在91例非小细胞肺癌中总的阳性表达率分别为：58．2％、73．6％和64．8％。鳞癌和腺癌相比P—gP、MRP、和GST-π的表达差异无显著性（P〉0．05）。P—gP、MRP和GST-π的表达与对3种化疗用药的耐药性均呈显著正相关（P〈0．05），并且不同表达程度问差异也有显著性（P〈0．05）。结论P—gp、MRP和GST-π在非小细胞肺癌中均有较高的阳性表达并共同介导参与了非小细胞肺癌固有化疗耐药的机制。     

耐药相关基因在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达与其个体化药物治疗方法的探讨

目的 探讨p53、P-gp、GST-π、TopoⅡ基因在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中的表达与其个体化药物治疗的方法.方法 用免疫组织化学S-P法检测68例DLBCL初治患者、21例难治/复发患者p53、P-gp、GST-π、TopoⅡ蛋白表达,体外进行MTT试验筛选针对DLBCL患者敏感化疗药物,分析其表达与DLBCL难治/复发、化疗药物选择的合理性及其预后相关因素之间的关系.结果 难治/复发组患者其p53、P-gp、GST-π表达明显高于初治组患者,二者差异有统计学意义(P＜0.01),而TopoⅡ表达差异无统计学意义(P＞0.05);初治患者中具有P-gp、GST-π、p53、TopoⅡ呈阳性表达者化疗后发生难治/复发的比例分别为72%、53%、41%、35%;5例p53、P-gp、GST-π均呈阳性表达者化疗后全部出现难治/复发.通过分析相关耐药基因的联合表达及参照MTT药物敏感试验选择相应的化疗药物,发现初治DLBCL患者化疗方案中非适配选择的药物占的比例越多,疗效越差,难治复发病例越多;p53蛋白表达与P-gp、 TopoⅡ表达相关外,还与患者结外侵犯部位、临床分期相关.结论 p53、P-gp、GST-π、TopoⅡ蛋白表达的联合检测可作为DLBCL患者难治/复发的预测指标,同时,结合体外MTT药物敏感试验选择相应的化疗药物,有利于减少化疗耐药和克服经验性选择化疗方案,从而指导DLBCL患者的个体化治疗.     

GST-π、TOPO-Ⅱ在非小细胞肺癌化疗前的表达及其临床意义

目的：探讨谷胱甘肽S转移酶-π（GST-π）、DNA拓扑异构酶-Ⅱ（TOPO-Ⅱ）在非小细胞肺癌（NSCLC）化疗前的表达及其临床意义。方法：采用免疫组化双染色法检测97例肺癌组织及21例癌旁组织中GST-π、TOPO-Ⅱ的表达水平。结果：肺癌组织中GST-π、TOPO-Ⅱ的阳性表达率分别为64.95%、60.83%,其表达与性别、年龄、TNM分期及淋巴结转移无显著相关性（P〉0.05）。GST-π的阳性表达率则随着分化程度的降低而降低,而TOPO-Ⅱ的阳性表达率随着分化程度的降低而升高,两者的阳性表达率在高分化与低分化组间均有显著性差异（P〈0.05）。GST-π的阳性表达率与组织类型无关,而TOPO-Ⅱ的阳性表达率在鳞状细胞癌中明显高于腺癌（P〈0.05）。结论：在NSCLC中存在原发耐药。联合检测化疗前NSCLC中耐药蛋白GST-π、TOPO-Ⅱ的表达,为临床治疗方案的选择提供有益的信息。     

18种人肿瘤细胞株药物敏感性与基因表达的关系

目的 探讨18种人肿瘤细胞对化疗药物的敏感性与基因表达的关系。方法 采用MTT法检测细胞株对阿霉素（ADM）、顺铂（DDP）、丝裂霉素（MMC）、5-氟尿嘧啶（5-Fu）和卡氮芥（BCNU）的敏感性。流式细胞术检测P-糖蛋白（P-gP）、谷胱甘肽-s-转移酶-π（GSTπ）、肺耐药蛋白（LRP）、多药耐药相关蛋白（MRP）和甲基鸟嘌呤甲基转移酶（MGMT）等耐药相关基因和Fas、bcl-2、p53和p16等凋亡调控基因的表达。结果 不同细胞株对同一药物敏感性有较大差异。相关分析表明，细胞株对DDP的敏感性与p53表达呈负相关（P=0．041），对其余药物的敏感性与所检基因的表达水平无关（P〉0．05）。结论 细胞株对DDP的敏感性与p53表达有关。     

胃癌细胞P53、P16蛋白表达与化疗药物敏感性的关系

目的探讨胃癌对化疗药物的耐药性及其与P53和P16蛋白表达的关系。方法收集75例新鲜胃癌标本,制备单细胞悬液,分别加入HCPT、CDDP、ADM、5-FU和MMC培养48h,用MTT比色法检测胃癌细胞对化疗药物的敏感性;免疫组化技术检测P53和P16 蛋白在胃癌组织中的表达。结果胃癌细胞对不同化疗药物敏感性不同：5-FU（43.4±9.2）、CDDP（41.9±8.7）和HCPT（40.6±8.3）对胃癌细胞的抑制率与ADM（31.6±7.8）和MMC（28.7±7.3）比较有统计学意义（P〈0.05）。胃癌组织中P53和P16 蛋白的阳性率分别为81.33%（61/75）和38.67%（32/75）。P53阳性者显示对5-FU、ADM、HCPT有明显的体外耐药性（P〈0.05）,P16在5-FU和CDDP耐药组阳性率低于敏感组（P〈0.05）。结论P53和P16蛋白参与了胃癌对化疗药物原发性耐药的产生。MTT药敏检测有助于筛选有效化疗药物。     

非小细胞肺癌体外化疗药物敏感性与GRP94表达的相关性

[目的]探讨非小细胞肺癌(NSCLC)对8种化疗药物的体外敏感性与GRP94表达的相关性。[方法]用四噻唑蓝(MTT)法检测52例手术切除新鲜NSCLC组织8种化疗药物体外敏感性;免疫组织化学方法检测肺癌组织GRP94表达。采用Spearman法进行相关性分析。[结果]NSCLC52例对紫杉醇(PTX)、阿霉素(ADM)、卡铂(CBP)、拓扑替康(TPT)、长春瑞滨(NVB)、长春新碱(VCR)、顺铂(DDP)和鬼臼乙叉苷(VP-16)8种化疗药物的耐药率分别为42.31%、57.69%、63.46%、65.38%、67.31%、73.08%、78.85%和90.38%。其中,14例表现为完全耐药;且其高表达与肺癌细胞对VP-16的耐药明显相关(P<0.05)。[结论]检测GRP94表达对推测NSCLC对VP-16的耐药性具有参考意义。     

MTT法检测乳腺癌细胞对化疗药物敏感性的研究

目的：探讨3-（4,5）-2-噻唑-（2,5）-二苯基溴化四氮唑蓝（MTT）药敏试验在指导临床乳腺癌化疗中的作用。方法：应用MTT法检测50例乳腺癌新鲜标本肿瘤细胞对10种化疗药物的敏感度。结果：对乳腺癌细胞抑制率强的药物为PTX、NVB、VP-16、5-FU、DDP,对乳腺癌细胞抑制率较弱的化疗药物为VCR、ADM、MTX、MMC、HCPT。结论：MTT体外药敏试验对指导临床乳腺癌个体化治疗具有重要意义。     

非小细胞肺癌体外药敏试验研究

目的通过体外药敏试验,检测目前常用化疗药物对体外培养的非小细胞肺癌细胞的敏感性,为临床对化疗药物的选择提供参考,从而减少临床对化疗药物选择的盲目性,更好地实行个体化治疗。方法通过改良四氮唑盐（tetrazolium salt,MTT）比色法进行肺癌细胞体外药敏试验,对41例肺癌患者的新鲜肿瘤标本进行体外培养和化疗药物敏感性检测,并对其结果进行比较。结果 PTX、NVB、DDP、L-OHP的敏感率均在40%以上,提示非小细胞肺癌对以上药物敏感,而CPT-11、VCR、THP、ADM、EPI、IFO、CBP的敏感率均低于30%,提示在非小细胞肺癌化疗过程中应用以上药物可能存在耐药,非小细胞肺癌中腺癌和鳞癌对16种化疗药物的敏感性也有一定的差异性。结论术后肺腺癌的辅助化疗中应首选PTX、5-FU、DDP、L-OHP、CPT、VP-16、Docetaxel;肺鳞癌的辅助化疗中应首选PTX、DDP、L-OHP、NVB,VCR、THP、ADM均100%耐药,临床应用中应注意避免应用这些药物。     

乳腺癌3种耐药基因、p53蛋白、雌和孕激素受体的表达及相关性研究

目的研究多药耐药基因P-糖蛋白（P-gp）、谷胱甘肽-S-转移酶π（GST-π）和DNA拓扑异构酶Ⅱ（TopoⅡ）、p53蛋白、雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）在乳腺癌的表达及其相关性。方法采用免疫组织化学SABC法,检测119例乳腺癌标本P-gp、GST-π、TopoⅡ、p53、ER和PR的表达。结果P-gp、GST-π、TopoⅡ的表达率分别为52.1%、66.4%和66.4%,p53、ER、PR的表达率分别为56.3%、42.0%和41.2%;乳腺癌中有淋巴结转移组的p53表达率高于无淋巴结转移组（P〈0.05）,淋巴结转移组的GST-π、ER表达率低于无淋巴结转移组（P〈0.05）;GST-π、TopoⅡ与p53间表达呈正相关（P〈0.05）;P-gp、GST-π与ER间表达呈负相关（P〈0.05）。结论p53基因与GST-π、TopoⅡ存在协同表达的关系,GST-π、ER阴性是某些乳腺癌对化疗药物不敏感,导致内分泌治疗失败及影响预后的因素。     

抗癌药物对乳腺癌细胞Bcl—2、p53、Ki—67表达的影响及相互关系

目的 研究抗癌药物对乳腺癌细胞Bcl-2、p53、Ki-67表达的影响及相互关系。方法 取病理诊断为乳腺癌的手术切除标本,体外分离细胞作培养,应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法分析多柔比星（ADM）、丝裂毒素（MMC）、5－氟脲嘧啶（5－FU）、顺铂（DDP）、长春新碱（VCR）5种化疗药物对乳腺癌细胞的相对抑制率,通过免疫细胞化学染色法和图像定量法分析乳腺细胞Bcl-2、p53、Ki-67的表达改变。结果 乳腺癌细胞在0.1XPPC药物浓度体外处理24h后出现形态改变,化疗药物对乳腺癌细胞的相对抑制率依次为VCR＞5－FU＞ADM＞MMC＞DDP,各用药组乳腺癌细胞Bcl-2、p53、Ki-67表达均有不同程度改变,与未用药组比较P＜0.001,等级相关分析P＜0.01和P＜0.05。结论 化疗药物主要通过诱导乳腺癌细胞凋亡、抑制细胞增殖等作用,而选择性地抑制和调控过度激活表达的癌基因。     

GST-π,C-erbB2,P53,ER,PR在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的 探讨GST-π,C—erbB2,p53,ER,PR在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法 采用S—P免疫组化方法检测332例乳腺癌组织GST,C—erbB2,p53,ER,PR的表达情况,并与年龄、临床分期及淋巴结转移情况进行比较研究。结果 332例乳腺浸润性导管癌组织中,GST-π高表达率为32．83％,在≤45岁与〉45岁阳性表达率分别为25．41％,37．14％,两组间差异有显著性（P〈0．05）。在p53（-）与p53（＋）患者中高表达率分别为27．14％,41．35％,两者间差异有显著性（P〈0．05）;而在C—erbB2,ER,PR,临床分期、淋巴结转移对应的不同组别间GST-π表达均差异无显著性（P〉0．05）。结论 GST-π高表达可能与老年乳腺癌对化疗不敏感的特点有关,而与患者内分泌治疗敏感性关系不大。GST-π与p53可能存在协同表达的关系,p53调控GST-π表达可能是p53高表达患者对化疗不敏感的重要机制之一,而C—erbB2介导的乳腺癌化疗耐药与GST-π表达无关。GST-π表达情况与乳腺癌的预后关系不大。     

非小细胞肺癌耐药机制新进展

肿瘤细胞的多药耐药(multidrug resistant,MDR)是导致非小细胞肺癌(non-sm all cell lung cancer NSCLC)化疗失败的主要原因。耐药相关分子P糖蛋白(P-g P)、谷胱苷肽-S-转移酶(GST-π)、拓扑异构酶Ⅱ(To Po-Ⅱ)、原癌基因p53以及凋亡基因bcl-2家族等基因参与了调控NSCLC细胞对化疗药物的耐药性。研究肺癌细胞的相关耐药机制、寻找逆转多药耐药的药物已经成为肿瘤研究的热点。     

化疗耐药相关基因在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及其临床意义

目的 探讨p53、bcl-2、P-gp、GST-π、TopoⅡ耐药相关基因在弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)中的表达及其临床意义.方法 用免疫组织化学S-P法对34例DLBCL患者p53、bcl-2、P-gp、GST-π、TopoⅡ蛋白表达进行检测,分析其表达与DLBCL治疗效果及生存期的关系.结果 p53、bcl-2、P-gp、GST-π、TopoⅡ蛋白在DL-BCL中表达阳性率分别为32.4%、47.0%、25.2%、52.9%、64.7%,p53、bcl-2、P-gp、GST-π蛋白表达阳性患者化疗有效率、3年生存率低于阴性患者,TopoⅡ蛋白表达阳性患者化疗有效率高于阴性表达患者,但3年生存率却较低.结论 p53、bcl-2、P-gp、GST-π、TopoⅡ蛋白可作为DLBCL患者化疗效果和预后的预测指标,指导DLBCL患者的个体化治疗.     

非小细胞肺癌中5种耐药因子的表达

目的:探讨P-gp、GST-π、TOPOⅡ、Bc1-2、P53在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达的意义.方法:取自本院1998～2002年73例术前未经治疗,经病理证实为非小细胞肺癌组织标本,采用免疫组化S-P方法,检测P-gp、GST-π、TOPOⅡ、Bc1-2、P53的表达.结果:P-gp、GST-π、Bc1-2、P53的阳性率和TOPOⅡ的缺失率分别为63%、77%、53%、59%和21%.且TOPOⅡ的缺失率与P-gp、GST-π、Bc1-2、P53的阳性率有显著性差异(P<0.05);P-gp/GST-π、Bc1-2/P53呈显著性正相关(P<0.05).结论:NSCLC的耐药性与肿瘤的原发性耐药有关.     

膀胱移行细胞癌多种耐药因子与凋亡相关因子的表达

目的 探讨多种耐药因子P糖蛋白（Pgp)，谷胱甘肽S转移酶－π（GST-π），DNA拓扑异构酶Ⅱ-α（Topop Ⅱ-α)与调亡蛋白突变p53,bcl-2在原发性膀胱移行细胞癌多药耐药现象形成中的作用。方法 采用免疫组织化学SP法，检测107例原发性膀胱移行细胞癌中Pgp,GST-π，TpopⅡ-α，p53,bcl-2的表达情况。结果 Pgp,GST-π，p53,bcl-2总阳性表达率分别为63.6%,72.9%,72.9%,54.2%,TopoⅡ-α指数Ⅰ-Ⅳ级分别占45.0%,36.3%,12.5%,6.3%;除TopoⅡ-α指数仅与病理分级有关外，其余各指标均与病理分级，临床分期和术后腔内化疗复发密切相关。Pgp表达与p53,bcl-2密切相关，GST－π与p53,bcl-2无相关，TopoⅡ-α指数与p53相关，而与bcl-2无相关。结论 原发性膀胱移行细胞癌多药耐药的形成是多种因素共同作用的结果。     

体外肿瘤细胞培养法对非小细胞肺癌化疗药物敏感性的研究

[目的]通过常见非小细胞肺癌对不同抗癌药物敏感性作比较,以期寻找各自的合理的化疗用药方案,从而指导不同肺癌的化疗。[方法]通过肿瘤细胞体外药敏试验(即四甲基偶氮唑盐着色法,MTT),对35例非小细胞肺癌(腺癌23例、磷癌12例)新鲜瘤组织原代培养进行顺铂(DDP)、卡铂(CBP)、足叶乙甙(VP-16)、阿霉素(ADM)、长春新碱(VCR)、环磷酰胺(CTX)、紫杉醇(PTX)、长春瑞滨(NVB)、金喜素(TPT)9种化疗药物敏感检测,其结果作以比较。[结果]非小细胞肺癌对PTX、TPT、ADM、CBP、NVB的高度敏感率分别为51.43%、42.86%、40.00%、37.14%、31.4%,提示肺癌对上述药物敏感,其余DDP、VCR、VP-16三种药物高度敏感率不足30%,提示治疗效果差。而CTX高度敏感率为0.00%,提示CTX治疗非小细胞肺癌不敏感。[结论]非小细胞肺癌对化疗药物的反应虽有一定的共性,但不同个体间差异有显著性意义。不同类型非小细胞肺癌对不同化疗药物的敏感性也有差别。     

非小细胞肺癌中肺耐药蛋白、酸性谷胱甘肽-S-转移酶的协同表达及其临床意义

目的探讨肺耐药蛋白(LRP)和酸性谷胱甘肽-S-转移酶(GST-π)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的协同表达及其临床意义。方法用SP免疫组化方法检测62例术前均未进行化疗的NSCLC组织中LRP、GST-π蛋白的表达情况。结果在NSCLC中LRP、GST-π蛋白表达的阳性率分别为75．8％(47／62)；66．1％(41／62)。LRP蛋白表达与肿瘤分化程度相关。GST-π蛋白表达与肿瘤组织类型、分化程度、有无淋巴结转移相关。LRP与GST-π阳性表达之间存在正相关关系。结论LRP、GST-π在不同类型的NSCLC中均可表达，但水平不同。     

膀胱移行细胞癌中P-gp、p53、GST-π、Bcl-2的表达与多药耐药性

目的：探讨膀胱移行细胞癌中P-箔蛋白（P-gp）、p53、Bcl-2、谷胱甘肽S-转移酶-π（GST-π）的表达，了解多药耐药性与膀胱移行细胞癌细胞凋亡的相关性。方法：采用链霉素-生物素（SP）免疫组化技术检测75例膀胱移行细胞癌和10例无病变膀胱（正常对照组）坏率P-gp、p53、GST-π、Bcl-2的表达。结果：膀胱移行细胞癌中P-gp、p53、GST-π、Bcl-2的阳性表达牢分别为81．66％、69．33％、80．00％、65．33％；不同病理分级膀胱移行细胞癌中P—gp、GST-π、Bcl-2的阳性表达差异有统计学意义（P〈0．05～0．01），不同病理分期膀胱移行细胞癌中P—gp、GST-π、p53、Bcl-2阳性表达差异有统计学意义（P均〈0．05）；复发病例中P—gp、GST-π表达异常与p53、Bcl-2之间存在联系。结论：P—gp、p53、Bcl-2、GST-π等表达与膀胱移行细胞癌的分期有关；P—gp、GST-π高表达在膀胱移行细胞癌中是一种常见现象；耐药指标P-gp、GST-π与凋亡指标p53、Bcl-2影响因素有一定的内在联系。